Search

【目的】探讨中国人肝豆状核变性(WD)的分子发病机制和基因诊断的方法。【方法】应用基因工程技术对WD 进行了10 年的分子生物学研究。【结果】①WD 的基因定位研究:通过RFLP 及微卫星多态性分析, 应用两位点及多位点连 锁软件, 建立了中国人WD 基因在D13q14 .2 -3区域的精细遗传连锁图谱, 从而首次对中国人WD 基因进行了精确定位;②WD 基因突变研究:应用PCR-SSCP 及DNA 测序技术, 对39 个家系45 名WD 患者进行该致病基因的21 个外显子突变筛选, 发现 WD 基因5 号外显子存在新的T 插入突变, 并证实中国人WD 基因的突变热点为8 号外显子, 突变形式为Arg778Leu, 其频率 为22.8 %;③WD 的症状前诊断和杂合子检出:应用DNA 重组技术对79 个家系进行基因诊断, 成功地进行了WD 的症状前 诊断和杂合子检出, 并建立了WD 的基因筛选的PC R- Msp 1 酶切方法。【结论】中国人WD 基因定位与白种人基本相同, 但 基因突变热点不同, 其发病机制存在差异, 从而基因诊断的方法也不同。

目的: 筛选中国人肝豆状核变性的高频突变点。方法: 对中国人肝豆状核变性 39 个家系 45 个患者的 8 号、14 号外显子进行 PCR-SSCP 筛选,对有异常者进行序列分析(放射自显影) , 并通过该突变点的酶切再次筛选。结果: Exon 8 发 现有 3个泳动异常,两个为多态现象, 对 1 例明显异常者序列分析表明: ①患者的序列发现同义突变 C2250※G , 错义突变 G2273 ※T 发生 Arg778 Leu,引起功能缺失。患者上述两个突变同时存在。②患者父亲在 2250 位点 C 及 G 碱基同时存在, 在 2273 位点 G 及 T 碱基同时存在。 ③发现患者为纯合子, 其父为杂合子,母亲为正常序列。针对 Arg778 Leu 突变在所有病人中进 行酶切,发现 2 例纯合子占病人总数 4. 4%,11例杂合子占 24. 4%。酶切的阳性率为 28. 8%。结论: 本结果支持 8 号外显子 778 密码子作为中国人肝豆状核变性的高频突变点。本研究中出现类似杂合性丢失( LOH)现象, 提示 LOH 现象可能发生在 除肿瘤之外的其他遗传疾病中。Exon 14 未见异常,与欧洲人明显不同。