1. Determination of gossypol effects on the estrous cycle, folliculogenesis and early embryonic development of rodent and chickens
- Author
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Lelis, Ivana Cristina Nunes Gadelha, Blanco, Benito Soto, Cordeiro, Luiz Augusto Vieira, Macedo, Michelly Fernandes de, and Dantas, Antonio Flavio Medeiros
- Subjects
Gossypium ,Anti-nutritional factor ,Fator Anti-nutricional ,CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA [CNPQ] ,Algodão ,Cotton - Abstract
Made available in DSpace on 2016-08-15T20:27:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 IvanaCNGL_TESE.pdf: 14299009 bytes, checksum: 5bf2d46500f8d157d958429f1dc7dad5 (MD5) Previous issue date: 2015-04-16 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Gossypol is a phenolic compound produced by pigment glands in cotton stems, leaves, seeds and flower buds (Gossypium spp). Cottonseed meal is a by-product of cotton that is used for animal feeding because it is rich in oil and proteins. However, gossypol toxicity limits cottonseed use in animal feed. High concentrations of free gossypol may be responsible for acute clinical signs of gossypol poisoning, the most common toxic effect is a reduction in reproduction of males and females. The objective of this study was to evaluate the effects of gossypol in the estrous cycle, folliculogenesis in vivo and in vitro and in developing embryos in vitro rodent and chickens. For the first experiment were used 24 Wistar rats divided into two groups: a control group (saline injection, subcutaneously) and the other treated with gossypol (25 mg/kg/day subcutaneously) for 15 days. The rats were euthanized after the last day of treatment for blood and fragments of ovaries, uterus and thyroid. Blood was collected for hormone analysis by ELISA and the ovaries were collected for histological study for qualitative and quantitative evaluation of ovarian follicles. For the second experiment, it took 32 ovaries of female rats and mice and four chickens. The ovaries of rats and mice, chickens and fragments ovary cells were grown in 24-well culture plates containing 1 ml of culture medium specific. We tested four concentrations of gossypol: 0 (control), 5, 10 and 20 µg / ml. All plates were incubated at 39 ° C and 5% CO2 for 24 hours and seven days. After incubation, the ovaries were fixed and processed for histological analysis. For the third experiment, nulliparous female Balb-C mice were superovulated and then allocated to males. Next day, harvest embryos was performed in 2-8 cell stage. Sequential washes the tubes were performed to remove the embryos on modified HTF. Lots 5 - 8 are selected embryos collected and transferred to new culture HTF medium without HEPES supplemented with 10% FBS. Subsequently they were collected and deposited into microdroplets (30 µ L) medium supplemented in 35x10 mm plates. The embryos were cultured in medium without addition of gossypol (control group) or with concentrations of 5, 10 and 20 µg / ml of gossypol added to each drop. These droplets were immersed in mineral oil and grown in a glasshouse with 5% CO2 at 37 ° C for 24 hours. After the cultivation, the embryos were stained for the detection of ruptured membranes and cells in cell death. It can be seen that gossypol promotes degeneration of ovarian follicles and embryolethality and this toxicity occurs by direct action of gossypol and not a product of its biotransformation Gossipol é um composto fenólico produzido pelas glândulas de pigmento presente nas raízes, caules, folhas, sementes e botões de flores do algodão (Gossypium spp). O farelo e a torta de algodão são subprodutos do algodão utilizados para a alimentação animal, pois são ricos em óleo e proteínas. No entanto, o gossipol limita a utilização do algodão na alimentação animal, pois altas concentrações desta substância podem ser responsáveis por sinais clínicos agudos de intoxicação, sendo o efeito tóxico mais comum é a redução na reprodução de machos e fêmeas. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do gossipol no ciclo estral, na foliculogênese in vivo e in vitro e no desenvolvimento de embriões in vitro de roedores e galinhas. Para o primeiro experimento, foram utilizadas 24 ratas Wistar, distribuídas em dois grupos iguais: um grupo controle (injeção de solução salina, por via subcutânea) e o outro tratado com gossipol (25 mg/kg/dia, por via subcutânea) durante 15 dias. As ratas sofreram eutanásia após o último dia do tratamento para coleta de sangue e de fragmentos de ovários, útero e tireoide. Foi coletado sangue para análise hormonal por ELISA e os ovários foram coletados para estudo histológico para avaliação qualitativa e quantitativa dos folículos ovarianos. Para o segundo experimento, foram necessários 32 ovários de ratas e camundongas e quatro de galinhas. Os ovários das ratas e de camundongas, e fragmentos dos ovários de galinhas foram cultivadas em placas de 24 poços de cultura de células contendo 1 ml de meio de cultura específico. Foram testadas quatro concentrações de gossipol: 0 (controle), 5, 10 e 20 ug/mL. Todas as placas foram incubadas a 39 °C e 5% de CO2 durante 24 horas e sete dias. Após a incubação, os ovários foram fixados e processados para análise histológica. Para o terceiro experimento, fêmeas nulíparas de camundongos Balb-C foram superovuladas e em seguida, alocadas com machos. No dia seguinte, foi realizada a colheita de embriões na fase de 2-8 células. Foram realizadas lavagens sequenciais das tubas para remoção dos embriões com meio HTF modificado. Lotes de 5 8 embriões coletados e selecionados foram transferidos para novo meio de cultivo HTF sem HEPES suplementado com 10% de SFB. Posteriormente foram recolhidos e depositados em microgotas (30 µl) de meio suplementado em placas de 35x10 mm. Os embriões foram cultivados em meio sem a adição de gossipol (grupo controle) ou com concentrações de 5, 10 e 20 µg/ml de gossipol, adicionadas em cada gota. Estas gotas foram imersas em óleo mineral e cultivadas em estufa com 5% de CO2 a 37 °C, por 24 horas. Após o cultivo, os embriões foram corados para a detecção de membranas rompidas e de células em processo de morte celular. Pode-se observar que o gossipol promove degeneração de folículos ovarianos e embrioletalidade, e esta toxicidade ocorre por meio de ação direta do gossipol e não por algum produto de sua biotransformação
- Published
- 2015