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Condensed tannins in forage legumes improve the nutrition of sheep by reducing ruminal degradation of plant protein and increasing crude protein flow to the intestine. However, the effects of condensed tannins in forage legumes on rumen bacterial populations in vivo are poorly understood. The aim of this study was to investigate the specific effects of condensed tannins from Lotus corniculatus on four proteolytic rumen bacteria in sheep during and after transition from a ryegrass (Lolium perenne) – white clover (Trifolium repens) diet (i.e., low condensed tannins) to a Lotus corniculatus diet (i.e., higher condensed tannins). The bacterial populations were quantified using a competitive polymerase chain reaction. Lotus corniculatus was fed with or without ruminal infusions of polyethylene glycol (PEG), which binds to and inactivates condensed tannins, enabling the effect of condensed tannins on bacterial populations to be examined. When sheep fed on ryegrass – white clover, populations of Clostridium proteoclasticum B316[sup T] , Butyrivibrio fibrisolvens C211a, Eubacterium sp. C12b, and Streptococcus bovis B315 were 1.5 × 10[sup 8] , 1.1 × 10[sup 6] , 4.6 × 10[sup 8] , and 7.1 × 10[sup 6] mL[sup –1] , respectively. When the diet was changed to Lotus corniculatus, the average populations (after 8–120 h) of C. proteoclasticum, B. fibrisolvens, Eubacterium sp., and S. bovis decreased (P < 0.001) to 2.4 × 10[sup 7] , 1.1 × 10[sup 5] , 1.1 × 10[sup 8] , and 2.5 × 10[sup 5] mL[sup –1] , respectively. When PEG was infused into the rumen of sheep fed Lotus corniculatus, the populations of C. proteoclasticum, B. fibrisolvens, Eubacterium sp., and S. bovis were higher (P < 0.01–0.001) than in sheep fed Lotus corniculatus without the PEG infusion, with average populations (after 8–120 h) of 4.9 × 10[sup 7] , 3.8 × 10[sup 5] , 1.9 ×10[sup 8] , and 1.0 ×10[sup 6] , respectively. Sheep fed the Lotus corniculatus diet had lower rumen proteinase activity, ammonia, and soluble nitrogen (P < 0.05–0.001) than sheep that were fed Lotus corniculatus plus PEG. The Lotus corniculatus diet reduced rumen nitrogen digestibility (P < 0.05) and ammonia pool size and increased the flow of undegraded feed nitrogen to the abomasum. The nitrogen intake, rumen non-ammonia nitrogen pool size, rumen microbial non-ammonia nitrogen pool size, and abomasal microbial non-ammonia nitrogen fluxes were similar both in sheep fed only Lotus corniculatus and in sheep fed Lotus corniculatus plus PEG, but nonmicrobial non-ammonia nitrogen flux to the abomasum was higher (P < 0.01) for the sheep fed only Lotus corniculatus. Although condensed tannins in Lotus corniculatus reduced the populations of some proteolytic bacteria, total ruminal microbial protein and microbial protein outflow to the abomasum were unchanged, suggesting a species-specific effect of condensed tannins on bacteria in the rumen. Key words: condensed, tannin, rumen, bacteria, PCR.Les tannins condensés de légumineuses fourragères améliorent la nutrition des moutons en diminuant la dégradation de protéines végétales dans le rumen et en augmentant le débit de protéines brutes vers les intestins. Toutefois, l'influence des tannins condensés dans les légumineuses fourragères sur les populations bactériennes du rumen in vivo est peu connue. Le but de cette étude fut d'analyser les effets spécifiques des tannins condensés de Lotus corniculatus sur quatre bactéries ruminales protéolytiques du mouton pendant et après une transition d'un régime à base de fromental (Lolium perenne) – trèfle blanc (Trifolium repense) renfermant peu de tannins condensés à un régime à base de Lotus corniculatus contenant des tannins condensés. Les populations bactériennes ont été quantifiées par réaction de polymérase en chaîne compétitive. Le Lotus corniculatus a été donné avec ou sans infusions ruminales de polyéthylène glycol (PEG), qui se lie et inactive les tannins condensés, permettant ainsi d'évaluer l'impact des tannins condensés sur les populations bactériennes. Lorsque le fromental – trèfle blanc ont été donnés à manger, les populations de Clostridium proteoclasticum B316[sup T] , Butyrivibrio fibrisolvens C211a, Eubacterium sp. C12b, et Streptococcus bovis B315 étaient de 1,5 × 10[sup 8] , 1,1 × 10[sup 6] , 4,6 × 10[sup 8] , et 7,1 × 10[sup 6] mL[sup –1] respectivement. Lorsque le régime est passé à Lotus corniculatus, les populations moyennes (8–120 h) de C. proteoclasticum, B. fibrisolvens, Eubacterium sp., et S. bovis ont baissé (P < 0,001) jusqu'à 2,4 × 10[sup 7] , 1,1 × 10[sup 5] , 1,1 × 10[sup 8] , et 2,5 × 10[sup 5] mL[sup –1] respectivement. Lorsque du PEG a été infusé dans le rumen de moutons auxquels on avait donné du Lotus corniculatus, les populations de C. proteoclasticum, B. fibrisolvens, Eubacterium sp., et S. bovis étaient supérieures (P < 0,01–0,001) à celles du groupe nourri au Lotus corniculatus, avec des populations moyennes (8–120 h) de 4,9 × 10[sup 7] , 3,8 × 10[sup 5] , 1,9 ×10[sup 8] et 1,0 ×10[sup 6] respectivement. Les moutons qui ont été nourris au Lotus corniculatus démontraient une plus faible activité protéinase du rumen inférieur ainsi que des taux d'ammoniac et d'azote solubles inférieurs (P < 0,05–0,001) au groupe ayant reçu du Lotus corniculatus + PEG. Le régime à base de Lotus corniculatus a diminué la digestibilité de l'azote du rumen (P < 0,05) et la taille de la masse commune d'ammoniac, et a augmenté le débit d'azote absorbé et non dégradé vers la caillette. L'apport en azote, la masse ruminal commune d'azote sans ammoniac, la masse microbienne commune d'azote ruminal sans ammoniac et les flux d'azote microbien abomasal sans ammoniac étaient semblables entre les moutons nourris au Lotus corniculatus et ceux nourris auLotus corniculatus + PEG. Cependant, le flux d'azote non-microbien sans ammoniac vers la caillete était plus élevé (P < 0,01) chez les moutons nourris au Lotus corniculatus. Bien que les tannins condensés de Lotus corniculatus ont fait baissé les populations de certaines bactéries protéolytiques, les quantités de protéines ruminales totales et le débit de protéines microbiennes vers la caillette sont demeurés inchangés, ce qui indique que les tannins condensés ont un effet spécifique à l'espèce chez les bactérie du rumen. Mots clés : condensés, tannins, rumen, bactéries, PCR. [Traduit par la Rédaction] [ABSTRACT FROM AUTHOR]

A genomic library of Ruminococcus albus 8 DNA was constructed in Escherichia coli using bacteriophage lambda ZapII. This library was screened for cellulase components and several Ostazin brilliant red/carboxymethyl cellulose positive clones were isolated. All of these clones contained a common 3.4-kb insert, which was recovered as a plasmid by helper phage excision. The carboxymethyl cellulase coding region was localized to a 1.4-kb region of DNA by nested deletions, and a clone containing the entire celA gene was sequenced. Analysis of the sequence revealed a 1231-bp open reading frame, coding for a protein of 411 amino acids with a predicted molecular weight of 45 747. This protein, designated CelA, showed extensive homology with family 5 endoglucanases by both primary amino acid sequence alignment and hydrophobic cluster analysis. Cell-free extracts of E. coli containing the celA clone demonstrated activity against carboxymethyl cellulose and acid swollen cellulose but not against any of the p-nitrophenol glycosides tested, indicating an endo-beta-1,4-glucanase type of activity. In vitro transcription-translation experiments showed that three proteins of 48,000, 44,000, and 23,000 molecular weight were produced by clones containing the celA gene. Northern analysis of RNA extracted from R. albus 8 grown on cellulose indicated a celA transcript of approximately 2700 bases, whereas when R. albus 8 was grown on cellobiose, celA transcripts of approximately 3000 and 600 bases were detected. Primer extension analysis of these RNAs revealed different transcription initiation sites for the celA gene when cells were grown with cellulose or cellobiose as the carbon source. These two sites differed by 370 bases in distance. A model, based on transcription and sequence data, is proposed for celA regulation.