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INTRODUÇÃO: O ensaio do cometa ou técnica da eletroforese de células isoladas é largamente empregado para avaliação de danos e reparo do DNA em células individuais. O material pode ser corado por técnicas de fluorescência ou por sal de prata. Este último apresenta vantagens técnicas, como o tipo de microscópio utilizado e a possibilidade de armazenamento das lâminas. A análise dos cometas pode ser feita de modo visual, porém há a desvantagem da subjetividade dos resultados, que pode ser minimizada por análise digital automatizada. OBJETIVOS: Desenvolvimento e validação de método de análise digital de cometas corados por sal de prata. MÉTODOS: Cinquenta cometas foram fotografados de maneira padronizada e impressos em papel. Além de medidas manualmente, essas imagens foram classificadas em cinco categorias por três avaliadores, antes e depois de pré-processadas automaticamente pelo software ImageJ 1.38x. As estimativas geradas pelos avaliadores foram comparadas quanto sua correlação e reprodutibilidade. Em seguida, foram desenvolvidos algoritmos de análise digital das medidas, com base em filtros estatísticos de mediana e de mínimo. Os valores obtidos foram comparados com os estimados manual e visualmente após o pré-processamento. RESULTADOS: As medidas manuais das imagens pré-processadas apresentaram maior correlação intraclasse do que as imagens preliminares. Os parâmetros automatizados apresentaram alta correlação com as medidas manuais pré-processadas, sugerindo que este sistema aumenta a objetividade da análise, podendo ser utilizado na estimativa dos parâmetros dos cometas. CONCLUSÃO: A presente análise digital proposta para o teste do cometa corado pela prata mostrou-se factível e de melhor reprodutibilidade que a análise visual.BACKGROUND: Comet assay or single cell gel electrophoresis is a useful and widely applied technique for the assessment of DNA damage and repair in individual cells. Nuclei can be stained with fluorescence methods or silver salts. The latter has technical advantages such as the type of microscope used and the possibility of slide storage. Comet analysis may be performed visually, however, there is the disadvantage of subjective results, which can be minimized by automated digital analysis. OBJECTIVES: Development and validation of digital analysis method for silver stained comet assays. METHODS: Fifty comets were photographed in a standardized way and printed on paper. Before and after being automatically preprocessed by ImageJ 1.38x software, the images were manually measured and classified into five categories by three evaluators. Their estimates were compared as to their correlation and reproducibility. Afterwards, an algorithm for automated digital analysis of the comet measurements was developed based on statistical filters of median and minimum. These results were compared with those manually and visually estimated after preprocessing. RESULTS: Manual measurements of preprocessed images showed higher intraclass correlation than the original ones. Automated results had high correlation with the pre-processed manual measurements, suggesting that this system increases objectivity and can be used in the estimation of comet parameters. CONCLUSIONS: Digital analysis of silver stained comet assay proved to be feasible and better reproducible than the visual analysis.

The present study aims to evaluate, through lectin histochemistry, the alterations in the expression of cell surface carbohydrate between benign and malignant lesions of skin using computer image analysis. Skin fragments were obtained through biopsies and diagnosed as basal cell carcinoma (BCC), epidermoid carcinoma (EpC), trichoepithelioma (TE), keratoacanthoma (KA), seborrheic keratosis (SK) and actinic keratosis (AK). Lectins Con A, WGA, PNA, UEA-I and LTA were used in histochemistry study. Image analysis was carried out in a workstation using OPTIMAS TM software system. PNA strong binding pattern to studied tumours evidenced the high expression of D-galactose residues in the epidermal neoplasms when compared to other sugars recognized by the other lectins. Among benign neoplasms, KA presented a high expression of glucose/mannose, alpha-fucose and D-galactose residues evidenced by the intense staining of Con A (94.7%), LTA (84.2%) and PNA (89.4%), respectively. Malignant tumours showed distinct binding patterns. EpC presented significant binding only by PNA lectin. BCC was differentially stained in comparison to the staining pattern observed in benign lesions such as TE. Qualitative (lectin histochemistry) and quantitative (digital image analysis) data obtained in this study evidenced those lectins are potential markers to biochemical alterations in skin neoplasms.O presente estudo objetivou avaliar, através da histoquímica com lectinas, as alterações na expressão dos carboidratos da superfície celular entre lesões benignas e malignas da pele usando análise de imagens computadorizadas. Fragmentos de pele foram obtidos através de biópsias e diagnosticados como carcinoma basocelular (CBC), carcinoma epidermóide (EpC), tricoepitelioma (TE), cerato acantoma (KA), ceratose seborreica (CS) e ceratose actínica (CA). As lectinas Con A, WGA, PNA, UEA-I e LTA foram usadas no estudo histoquímico. A análise de imagens foi realizada numa estação de análise usando o sistema OPTIMAS TM de análises. A PNA tem sido largamente utilizada no estudo de tumores, evidenciando a expressão de D-galactose nas neoplasias epidérmicas; esse açúcar apresenta alta expressão quando comparado com os outros reconhecidos pelas demais lectinas. Entre as neoplasias benignas, KA apresentou alta expressão glucose/manose; resíduos de alfa-fucose e D-galactose apresentaram intensa marcação com ConA (94,7%) LTA (84,2%) e PNA (89,4%), respectivamente. Os tumores malignos mostraram marcações distintas: EpC apresentou marcação significativa somente com a lectina PNA; CBC apresentou diferente padrão de marcação quando comparado ao observado nas lesões benignas assim como no TE. Os resultados qualitativos (análise de imagens) e quantitativos (histoquímica com lectinas) desse estudo evidenciaram que as lectinas têm grande potencial como marcadores de alterações bioquímicas nas neoplasias da pele.