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Resume Les pneumopathies d'hypersensibilite (PHS) sont des maladies pulmonaires dues principalement a l'inhalation de moisissures ou d'actinomycetes presents dans l'environnement. La plupart des PHS sont d'origine professionnelle, surtout agricole, bien que des cas lies a une exposition domestique aient ete decrits. Ces dernieres annees, l'evolution des criteres diagnostiques tend a prendre davantage en compte la preuve d'une exposition aux micro-organismes par l'interrogatoire ou par la recherche des precipitines seriques. En effet, les facteurs d'exposition sont essentiels dans ce type de maladie. Le laboratoire de mycologie peut contribuer au diagnostic et a la prise en charge des PHS en realisant un bilan microbiologique de l'environnement qui permettra d'evaluer le risque de l'exposition aux micro-organismes en identifiant les circonstances de l'exposition et les sources impliquees. Une recherche de precipitines seriques peut alors etre pratiquee, soit a l'aide d'un panel d'antigenes classiques (poumon de fermier, poumon d'eleveur d'oiseaux, de fromagers…), soit lorsque les circonstances sont particulieres, avec des antigenes realises « a la carte » a partir des materiaux bruts de l'exposition ou en utilisant les antigenes issus des micro-organismes isoles de ceux-ci. Il devient alors possible de distinguer la part qui revient aux differentes sources d'exposition. En definitive, en dehors des tests de provocation, seule l'eviction de la source antigenique apportera la confirmation d'une etiologie, et permettra d'ameliorer l'etat clinique du patient.

Resume Depuis la fin de la seconde guerre mondiale, une augmentation sans precedent des maladies allergiques atopiques a ete observee. Jusqu'a la fin du XX e siecle, chaque decennie a vu doubler le nombre de patients atteints des principales manifestations cliniques de l'atopie, asthme, rhinite allergique et dermatite atopique. Depuis la decennie 1990, de tres nombreuses etudes epidemiologiques transversales ont ete realisees. Elles ont montre que les manifestations de l'atopie sont effectivement plus frequentes : 1) dans les pays industriellement developpes que dans les pays pauvres ; 2) dans les villes que dans les campagnes ; 3) dans les villes relativement protegees de la pollution industrielle mais touchees par la pollution automobile ; 4) dans les familles a enfant unique que dans les familles nombreuses ; 5) chez les enfants qui ont eu moins de maladies infectieuses en raison de leur mode de vie et/ou d'une vaccination et/ou de la prise frequente d'antibiotiques ; 6) paradoxalement, dans les populations epargnees par les infections parasitaires. Par ailleurs, au sein des populations rurales, les enfants nes dans des familles vivant dans des fermes sont significativement proteges contre les maladies et/ou la sensibilisation atopiques. La combinaison des resultats epidemiologiques a fait naitre une hypothese explicative commune, l'hypothese de l'« hygiene » capable de rendre compte des observations en les resituant dans les concepts immunologiques de l'equilibre Th1–Th2. Le cas particulier de la protection contre les allergies par l'environnement de la ferme est particulierement interessant, car il integre de nombreux facteurs possibles de prevention, susceptibles d'interferer avec l'immunite innee pour moduler l'orientation des reponses immunitaires. Parmi ces facteurs, les endotoxines bacteriennes sont les premiers candidats, mais d'autres substances d'origine bacterienne et mycobacterienne, des substances d'origine fongique et peut-etre egalement parasitaire, ainsi que des allergenes (des animaux, du pollen) presents dans les fermes sont susceptibles, dans les premiers mois de la vie et meme des la periode de gestation, de reguler l'equilibre cytokinique et/ou les mecanismes effecteurs de l'immunite qui sont a l'origine des maladies allergiques. L'etude europeenne PASTURE se propose de tester dans une etude prospective de cohorte comportant 1000 enfants europeens vivant ou non a la ferme les hypotheses issues des etudes transversales anterieures afin d'identifier les facteurs en cause.

Objet de l’etude Le diagnostic de l’ABPA chez les patients atteints de mucoviscidose est delicat et repose sur un ensemble d’arguments cliniques, serologiques et radiographiques (Stevens, 2003). De nombreuses etudes tentent d’ameliorer le serodiagnostic en identifiant les proteines immunoreactives avec les IgE et/ou les IgG et en les synthetisant en antigenes recombinants (AgR). Mais leurs efficacites sont variables selon les etudes. Notre laboratoire a produit 5 AgR issus d’Aspergillus (Millon, 2012) dans le cadre de recherches sur la maladie du poumon de fermier. Quatre d’entre eux ont egalement ete reveles en Western blot puis identifies par spectrometrie de masse avec des serums de patients ABPA par l’equipe de Singh (2010). L’objectif de l’etude etait de developper la technique DELFIA® pour mesurer le taux d’IgE specifiques, d’Ag somatiques purifies (AgS) d’A. fumigatus et d’AgR afin d’evaluer les performances diagnostiques de ce nouveau test chez les patients atteints de mucoviscidose et d’ABPA. Methodes Pour la validation de la technique DELFIA®, 53 serums de patients anonymes ont ete utilises. Et 26 patients atteints de mucoviscidose ont ete collectes, dont 5 ont une ABPA. Les resultats obtenus ont ete compares aux resultats d’immunoCAP M3 (Thermo Scientific) utilise en routine pour la mesure du taux d’IgE specifiques d’A. fumigatus. Un extrait d’AgS et 5 AgR : NAD-dependant formate deshydrogenase, Glucose-6-phosphate isomerase (G6Pi), Glu/Leu/Phe/Val deshydrogenase, Mannitol-1-phosphate deshydrogenase (Man1P) et Enolase ont ete testes. La technique DELFIA® est realisee en plaque de 96 puits ou sont fixes les Ag puis par incubations successives : le serum, l’anticorps secondaire liee a une biotine puis la streptavidine couplee a l’Europium. La mesure de la fluorescence est obtenue apres une excitation a 340 nm. Resultats Le test realise avec des AgS d’A. fumigatus montre une bonne reproductibilite et une bonne correlation avec le resultat d’immunoCAP M3 (Spearman, p-value Conclusions L’utilisation de la Man1P pour le serodiagnostic de l’ABPA peut apporter l’avantage de la standardisation, cependant l’efficacite du test est amelioree uniquement avec l’utilisation simultanee d’AgS d’A. fumigatus. Le DELFIA® est un outil prometteur pour le dosage d’IgE specifiques et apporte l’avantage de pouvoir utiliser de nombreux Ag non disponibles dans le commerce. Recemment nous l’avons utilise afin de mettre en evidence un eventuel role de l’exposition professionnelle dans la survenue d’allergies d’ouvriers travaillant dans des plate-formes de compostage (n = 179/6 Ag) et de travailleurs agricoles exposes a de la poussiere de ble (n = 291/14Ag).

Objet de l’etude L’objectif de cette etude etait d’evaluer la contamination fongique de logements de patients atteints de mucoviscidose, notamment de mesurer par PCR quantitative la contamination par Aspergillus fumigatus , et de relier ces donnees au risque de survenue d’ABPA chez ces patients. Methodes Des prelevements environnementaux ont ete realises a l’aide de capteur electrostatique de poussiere dans 16 logements de patients atteints de mucoviscidose. Ces capteurs ont analyse par culture, et par qPCR specifique ciblant A. fumigatus comme decrit precedemment (Scherer et al., 2014). Quatre sur 16 patients presentaient une ABPA selon les criteres de Stevens (Stevens et al., 2003), 7/16 presentaient une sensibilisation fongique (presence de precipitines contre les antigenes d’ A. fumigatus ) et 5/16 patients ne presentaient ni ABPA ni sensibilisation fongique. Resultats A. fumigatus a ete detecte en culture dans 5 des 16 logements (4 logements de patients sensibilises et un logement de patient ABPA). Les autres especes isolees etaient A. flavus et A. nidulans . Les quantites d’ADN d’ A. fumigatus les plus elevees (3,4 a 6,5 fg/μL) ont ete mesurees dans les logements des 4 patients presentant une ABPA et de 2 patients avec des antecedents d’ABPA, en remission au moment de l’etude. Tous les autres patients avaient des concentrations d’ADN d’ A. fumigatus dans leur logement inferieures a 2,5 fg/μL. Ainsi les concentrations d’ADN d’ A. fumigatus etaient significativement plus elevees dans les logements de patients avec ABPA ( p Conclusion Nos resultats indiquent que la contamination fongique de l’environnement interieur pourrait etre un facteur favorisant l’ABPA et suggerent l’interet de faire des enquetes environnementales au domicile des patients atteints de mucoviscidose, pour prevenir le risque d’ABPA. Cette etude montre egalement que la technique de qPCR, qui mesure les spores viables et non viables, permet, mieux que la culture, d’evaluer le risque environnemental dans le cadre des maladies allergiques.