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espanolObjetivo: analizar los conocimientos sobre higiene de manos demostrados por las enfermeras que han acreditado sus competencias con el Programa de Acreditacion de la Agencia de Calidad Sanitaria de Andalucia (ACSA) y determinar si existen diferencias en funcion a las caracteristicas individuales de dichos profesionales. Metodo: estudio descriptivo transversal basado en el Hand Hygiene Knowledge Questionnaire for Health-Care Workers de la OMS (traducido y validado para el entorno espanol) realizado sobre 2.136 pruebas aportadas por las enfermeras durante sus procesos de acreditacion, desde julio de 2011 hasta enero de 2016. La recogida de datos se realizo a traves de la aplicacion informatica ME_jora P. Para los analisis se utilizaron el software SPSS v.13 y R Package. Resultados: las enfermeras mostraron un alto nivel de conocimientos respecto a la higiene de manos, presentandose diferencias significativas en cuanto al numero de respuestas correctas en funcion del sexo, la edad, el puesto de trabajo y el nivel de acreditacion conseguido. Conclusiones: el conocimiento sobre aspectos criticos de la higiene de las manos del conjunto de enfermeras analizadas fue notable. Las enfermeras con mayor nivel de acreditacion (experto y excelente) son las que presentaron mayor media de respuestas correctas, teniendo mas probabilidades de ser referentes en higiene de manos. EnglishObjective: to analyze the knowledge about hand hygiene demonstrated by nurses with their competence accredited through the Accreditation Program by the Agency for Healthcare Quality from Andalusia (ACSA), and to determine if there are differences according to the individual characteristics of said professionals. Method: a descriptive transversal study based on the Hand Hygiene Knowledge Questionnaire for Health-Care Workers by the WHO (translated and validated for the Spanish setting), conducted on 2,136 tests provided by nurses during their accreditation processes, from July, 2011 to January, 2016. Data collection was conducted through the computer application ME_jora P. The SPSS v.13 software and R Package were used for analysis. Results: nurses showed a high level of knowledge regarding hand hygiene; there were significant differences in terms of correct answers according to gender, age, position, and the level of accreditation achieved. Conclusions: there was a remarkable level of knowledge on essential aspects of hand hygiene among the nurses tested. Those nurses with the highest level of accreditation (Expert and Excellent) presented the highest mean level of correct answers, and had more probabilities to become leaders in terms of hand hygiene.