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Introduction La réaction du greffon contre l’hôte transfusionnelle (TA GVHD) est causée par les lymphocytes T contaminants présents dans les produits sanguins. L’irradiation gamma (IRRG) avec 2500 cGy est utilisée pour prévenir la TA GVHD. Pour les concentrés de plaquettes (CP) et le plasma, une méthode alternative à IRRG est le traitement photochimique (PCT) avec amotosalen/UVA (Intercept™ Blood System [IBS]) utilisé en Europe depuis plus de 10 ans. Une autre méthode en développement pour les concentrés de globules (CGR) est le procédé IBS avec amustaline et GSH. Dans cette étude, nous avons évalué la capacité de l’amustaline/GSH d’inactiver les lymphocytes T dans les CGR pour prévenir la TA GVHD. Méthodes L’inactivation de lymphocytes T isolés de CGR traités par amustaline/GSH (0,2 mM/20 mM) avec incubation à température ambiante pendant 18–24 h suivie d’une centrifugation et de l’échange du surnageant avec la solution additive AS-5 a été testée. Une méthode de dilution limite (LDA) comportant l’incorporation d’un analogue éthinyl désoxyuridine (EDU) fluorescent de thymidine en présence de cellules allostimulatrices (Click-iT ® ) et identification des cellules viables en cytométrie de flux a été utilisée. Résultats L’analyse a montré un signal fort (1–8 × 10 4 cellules) associé à l’analyse des cellules viables non traitées qui ne pouvait être observé que lorsque les cellules allostimulatrices, l’EDU et le marquage fluorescent étaient utilisés ; tandis que le signal obtenu était négligeable lorsque l’un des réactifs manquait. Pas de signal (1–7 cellules) n’a été observé avec les échantillons tests (traités amustaline/GSH), ce qui indique que les cellules ont été incapables de proliférer. Il est prévu que si l’incubation des cellules est prolongée pendant 14 jours, une plage dynamique plus grande sera atteinte. Conclusions Le traitement des cellules T avec amustaline/GSH résulte dans l’inactivation de ≥ 4 log 10 de cellules T vs contrôle GSH seul. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Contexte Les procédés d’inactivation des agents pathogènes (IP) ont pour but l’inactivation des agents infectieux (bactériens, viraux et parasitaires) dans les produits sanguins labiles (PSL). En ce qui concerne les arbovirus, l’IP par procédé photochimique avec amotosalen (S-59) et ultraviolets A (UVA) a été démontrée, entre autres, pour les virus de la dengue (DENV) et du chikungunya (CHIKV) dans le plasma et les plaquettes et pour le virus Zika (ZIKV) dans le plasma ; l’IP par traitement chimique utilisant l’amustaline et le glutathion (S-303/GSH) a été démontrée pour le ZIKV dans les concentrés de globules rouges (CGR). Objectifs Pour compléter ces travaux, nous avons étudié l’inactivation du ZIKV dans les plaquettes par S-59/UVA ; et celles du DENV et du CHIKV dans les CGR par S-303/GSH. Méthodes Les unités plaquettaires ont été inoculées avec des titres élevés de ZIKV et les CGR avec des titres élevés de DENV et CHIKV. Les niveaux d’infectiosité (log 10 TCID 50 /mL) et les quantités d’ARN (log 10 Geq/mL) ont été mesurés avant et après IP. Résultats S-59/UVA inactive > 4,4 log 10 ZIKV TCID 50 /mL (7,5 log 10 Geq/mL) à la limite de détection dans les plaquettes ; S-303/GSH inactive > 6,61 log 10 DENV TCID 50 /mL (8,42 log 10 Geq/mL) et > 5,81 log 10 CHIKV TCID 50 /mL (10,49 log 10 Geq/mL) à la limite de détection dans les CGR. Conclusion Ces résultats combinés à ceux d’études antérieures montrent que les procédés d’inactivation utilisant S-59/UVA et S-303/GSH inactivent ZIKV, DENV et CHIKV dans le plasma, les plaquettes et les CGR. Ces données sont particulièrement importantes car, la plupart du temps, ces arbovirus co-circulent. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Introduction Intercept™ Blood System pour les globules rouges (non approuvé commercialement) utilise une petite molécule d’amustaline pour former des adduits covalents au sein des acides nucléiques des leucocytes et des agents pathogènes contaminants pour empêcher leur réplication. Avant incubation de 18–24 h à température ambiante, 0,2 mM d’amustaline et 20 mM de glutathion (GSH) sont ajoutés. L’inactivation est complète au bout de 3 h. Le temps supplémentaire assure une décomposition complète de l’amustaline. Une centrifugation et l’échange du surnageant avec une solution additive (SAG-M) fournissent un concentré de globules rouges (CGR) inactivé. L’objectif de cette étude était d’évaluer l’inactivation du Calicivirus félin (CVF) pour des CGR en Optisol (AS-5). CVF est un virus à ARN simple brin sens positif, genre Vesivirus , famille Caliciviridae et sert de modèle pour les petits virus non enveloppés tels que le virus de l’hépatite E. Méthodes Pour chaque expérience, un CGR a été contaminé avec du CVF à une concentration finale de ∼10 8,0 pfu/mL. Les CGR contaminés ont été mélangés avec le GSH et des échantillons de contrôle (T = 0) pris pour déterminer les titres pré-amustaline. L’amustaline a été mélangée aux CGR et des échantillons tests (T = 3) ont été prélevés pour déterminer les niveaux d’inactivation. Les échantillons contrôles et tests ont été dilués en série et inoculés sur des cellules CrFK. Les plaques ont été incubées 3 jours à 37 °C, colorées avec du cristal violet avant numération. La réduction Log a été calculée sur base de la différence entre le titre moyen dans des échantillons pré et post-amustaline à 3 h. Résultats Une inactivation robuste de CVF a été obtenue comme résumé dans le Tableau 1 . Conclusion Le Calicivirus félin non enveloppé a été inactivé à la limite de détection dans les CGR après traitement avec le GSH et l’amustaline. Une inactivation de > 5,8 log de CVF a été obtenue dans le modèle d’infectivité CrFK. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Introduction Depuis 2015, l’épidémie de virus ZIKA (ZIKV) s’est étendue. Les infections asymptomatiques fréquentes ainsi que le risque de transmission sexuelle soulèvent la possibilité de transmission par transfusion. Ce risque peut être limité par la réduction des agents pathogènes (RP) avec le procédé Intercept™ Blood System . La technologie a été démontrée efficace sur d’autres arbovirus ainsi que capable d’inactiver > 6,57 log ZIKV dans le plasma humain (Aubry M et al.). Le mode d’action (MDA) est basé sur la formation d’adduits covalents irréversibles avec les acides nucléiques. Une technologie avec le même MDA utilisant l’Amustaline et le Glutathion (GSH) est en développement pour les concentrés de globules rouges (CGR). Nous rapportons ici l’inactivation de ZIKV dans les CGR et les concentrés de plaquettes (CP) quel que soit le milieu de suspension. Méthodes Des CP soit dans 65 % de solution additive plaquettaire (PAS) ou 100 % de plasma, ou des CGR préparés en AS-5 ( n = 3), ont été inoculés avec ZIKV (souche CDC PRVABC59 ; ∼ 10 7 pfu/mL). Les CP ont été traités avec Amotosalen et UVA (3j/cm 2 ). Les CGR ont été traités avec Amustaline/GSH (0,2 mM/20 mM) à température ambiante pendant 18–24 h. L’inactivation a été déterminée en comparant les titres infectieux (log 10 ) avant et après le traitement. Résultats Les titres initiaux dans les CP en 65 % PAS ou 100 % de plasma étaient de 4,0 et 4,3 log pfu/mL respectivement. Après inactivation, aucune infectivité n’a été observée, soit une inactivation moyenne > 4,6 log pfu, ou > 4,1 log pfu/mL. Les titres moyens initiaux dans les hématies AS-5 étaient de 4,3 log pfu/mL, sans infectivité après, soit une inactivation moyenne de > 5,0 log pfu, ou > 4,3 log pfu/mL. Dans tous les cas, l’étendue de l’inactivation a été limitée par l’inoculum initial. Conclusions Les technologies de réduction des pathogènes avec Amotosalen/UVA et Amustaline/GSH inactivent efficacement ZIKV dans les plaquettes, le plasma et les CGR. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Le traitement photochimique avec amotosalen et UVA (INTERCEPT Blood System) permet d’inactiver des agents pathogènes dans les plaquettes et le plasma. La compatibilité du procédé avec divers types de plasma a été testée. Méthodes Sept publications étudiant la fonction coagulante de 6 types de plasma ont été identifiées : plasma congelé dans les 8 ou dans les 24 heures, collecté par aphérèse ou à partir de sang total, fabriqué à partir de plasma frais ou préalablement congelé, liquide, lyophilisé ou appauvri en cryoprécipité. Les mesures d’une sélection de paramètres représentant la qualité du plasma ont été rassemblées : facteur VIII, fibrinogène, protéine C, protéine S, alpha 2-antiplasmine et génération de thrombine (ETP) à 5 pM de facteur tissulaire (FT). Résultats Le Tableau 1 montre les valeurs rapportées pour les 6 paramètres de qualité du plasma choisis (quand testés). Le facteur VIII et le fibrinogène sont maintenus dans les valeurs de référence pour tous les types de plasma sauf le plasma appauvri en cryo et le plasma stocké liquide (FVIII) comme attendu. Les valeurs de protéine C, protéine S et d’alpha 2-antiplasmine sont dans les références. La capacité de génération de thrombine des différents produits est conservée ou peu modifiée après traitement. Conclusion Le procédé d’inactivation des agents pathogènes INTERCEPT peut être appliqué avec succès aux produits plasmatiques de différentes sources ou formes, provenant de sang total ou d’aphérèse, congelé, liquide, lyophilisé ou appauvri en cryoprécipité. Les marqueurs de la fonction de coagulation du plasma sont conservés à des niveaux satisfaisants et la capacité de génération de thrombine n’est pas affectée. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Contexte Le traitement photochimique (PCT) de concentrés de plaquettes avec amotosalen/UVA (INTERCEPT™ Blood System) remplace l’irradiation gamma (IRRG) dans des pays Européens depuis > 10 ans pour réduire le risque de maladie du greffon contre l’hôte liée à la transfusion. Objectif L’inactivation des cellules T par PCT et IRRG a été comparée à l’aide d’un dosage par dilution limite sensible (DDL). Méthode Des cellules mononuclées de sang périphérique (CMN) ont été inoculées (10 6 /mL) dans des unités de plasma et inactivées en utilisant soit PCT ou IRRG, soit laissées non traitées. Les cellules traitées par PCT ou IRRG ont été incubées (10 7 /mL) pendant 14 jours avec des CMN allo-stimulatrices mélangées de 10 donneurs (5 × 10 6 traitées avec 7500 cGy) et des facteurs de croissance (PHA, IL-2). L’inactivation des cellules T par PCT (10 7 CMN/puits) a été comparée à celle par IRRG (10 5 ou 10 6 CMN/puits) et à un contrôle non traité. La prolifération a été évaluée par incorporation de 3H-thymidine (3H-Thy ; 6,7 Ci/mmol) dans les CMN (score sous microscope). Douze puits ont été utilisés pour chaque dilution et le protocole a été effectué avec 6 réplicats. Résultats Aucune croissance de cellules T pour les CMN inactivées par PCT n’a été détectée avec 10 7 cellules cultivées/puits. Cependant, l’incorporation de 3H-Thy au-dessus du seuil de détection a été observée avec 10 6 CMN IRRG/puits. Aucune incorporation n’a été observée avec10 5 CMN IRRG/puits alors que 4/6 réplicats ont montré une prolifération avec 10 6 CMN IRRG/puits. Conclusion L’inactivation des cellules T avec PCT (traitement amotosalen/UVA) est plus robuste (> 6,2 log 10 ) qu’avec 2500 cGy IRRG (> 4,2 log 10 – ≤ 5,2 log 10 ). [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Introduction Le procédé Intercept™ Blood System (IBS) plaquettes est utilisé pour la préparation ex vivo de concentrés plaquettaires d’aphérèse (CP) inactivés pour un large spectre de virus enveloppés/non enveloppés, bactéries, spirochètes, parasites et leucocytes. Le mécanisme d’action se fait par génération d’adduits aux acides nucléiques qui inhibent la réplication, la traduction et la transcription. Basé sur ce mécanisme, nous émettons l’hypothèse que l’inactivation des bactéries ne dépend pas du profil de sensibilité aux antibiotiques, déterminé par des variations génomiques. Objectif Comparer l’inactivation de 2 souches de Klebsiella pneumoniae , génétiquement différentes, isolées chez des donneurs, avec des profils de sensibilité différents pour au moins 10 antibiotiques, dans des CP en solution PAS-3. Méthodes Les dispositifs Intercept™ petit volume ont été utilisés, 150 μM d’amotosalen et illumination UVA (3 J/cm 2 ). Deux souches de K. pneumoniae ont été sélectionnées basées sur des profils de sensibilité différents aux antibiotiques. La PCR ADNr 16s et l’analyse de la membrane de Klebsiella pneumoniae confirment le genre et l’espèce. Les tests de sensibilité aux antibiotiques montrent une différence de phénotype entre les souches. Les souches ont été cultivées jusqu’à des titres très élevés (9–10 log 10 /mL) et diluées au 1/100 dans les CP. Un échantillon de contrôle a été prélevé avant l’illumination et la viabilité bactérienne a été déterminée sur plaque de culture en milieu agar en parallèle avec différentes dilutions des échantillons tests obtenus après traitement. L’inactivation a été calculée en comparant les titres des contrôles et des tests. Résultats Les profils de sensibilité aux antibiotiques de K. pneumoniae sont présentés dans le Tableau 1 , les résultats d’inactivation dans le Tableau 2 . Conclusions L’inactivation de K. pneumoniae par Intercept™ Blood System pour plaquettes est robuste et ne dépend pas du profil de sensibilité aux antibiotiques. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Introduction Le procédé par traitement photochimique utilisant l’amotosalen et les rayons ultraviolets (UVA), développé pour inactiver les pathogènes et les leucocytes résiduels dans les plasmas et les concentrés plaquettaires (CP), est le premier système de réduction des pathogènes approuvé par la FDA aux États-Unis. Initialement, ce procédé était approuvé pour des CP préparés dans 65 % de solution additive (PAS). L’objectif de cette étude était d’évaluer l’inactivation du Plasmodium falciparum (Pf) dans les CP suspendus dans 100 % de plasma pour étendre l’approbation. Pf est une des espèces du parasite intracellulaire Plasmodium qui affecte spécifiquement les globules rouges (GR) et provoque le paludisme. Méthodes Pour chaque expérience, un CP d’aphérèse dans 100 % plasma (∼ 365 mL) a été inoculé avec des GR humains infectés par du Pf (GRi), stade en anneau, à une concentration finale de ∼10 6 GRi/mL. Un échantillon contrôle de 80 mL a été prélevé, puis l’amotosalen ajouté, l’unité illuminée et un échantillon post-traitement a été prélevé. Pour les échantillons de contrôle et de test, les GRi ont été isolés par séparation Ficoll, resuspendus et dilués en série, à 10 −8 pour le contrôle et à 10 −3 pour le test, dans des flacons contenant un milieu avec 5 % de GR frais. Les échantillons dilués étaient utilisés pour inoculer les flacons en quatre exemplaires. La parasitémie était contrôlée par comptage des GRi sur frottis sanguins et cytométrie de flux. Les cultures étaient terminées quand parasitémie > 1 %. La réduction en log correspond à la différence entre le titre moyen des échantillons avant et après UVA. Résultats Le niveau d’inactivation du P. falciparum obtenu dans les plaquettes prélevées dans 100 % de plasma ( n = 4) est robuste ( Tableau 1 ). Conclusion Le traitement photochimique de CP dans 100 % plasma avec amotosalen et UVA inactive > 7,9 log de P. falciparum . Ces résultats sont comparables avec les ≥ 6,0 log obtenus dans les plaquettes avec 65 % de PAS. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Introduction Le virus du chikungunya (CHIKV) est un arbovirus à ARN, genre Alphavirus , famille Togaviridae . La transmission d’une infection à CHIKV par transfusion est un problème de santé dans les régions endémiques bien que non encore démontrée. L’objectif de l’étude était d’évaluer l’inactivation du CHIKV par le procédé Intercept TM Blood System (IBS) pour les concentrés de globules rouges (CGR) préparés en Optisol (AS-5). IBS pour CGR (en développement) utilise une molécule d’amustaline pour former des liaisons covalentes au sein des acides nucléiques des leucocytes et agents pathogènes contaminants pour empêcher leur réplication. Avant incubation 18–24 h à température ambiante, 0,2 mM amustaline/20 mM glutathion (GSH) sont ajoutés, centrifugation et échange du surnageant avec une solution additive (SAG-M). L’inactivation est complète au bout de 3 h. Le temps additionnel assure une décomposition complète de l’amustaline. Méthodes Pour chaque expérience, un CGR a été contaminé par le CHIKV à une concentration finale de ∼10 7,0 pfu/mL et traité avec l’amustaline. L’échantillon contrôle était prélevé avant addition de l’amustaline et dilué en série jusqu’à 10 −7 . Les dilutions ont été inoculées sur des cellules Vero76 pour déterminer le titre initial. L’amustaline a été ensuite ajoutée et un échantillon prélevé après 3 heures pour déterminer le niveau d’inactivation. Les échantillons tests ont été dilués de 10 −1 à 10 −3 et inoculés sur cellules Vero76. Les plaques ont été incubées 5 jours à 37 °C, colorées avec du cristal violet avant numération. La réduction Log a été calculée soit la différence entre le titre moyen dans les échantillons pré- et post-amustaline à 3 heures. Résultats Une inhibition robuste de l’infectivité au CHIKV a été atteinte ( Tableau 1 ). Conclusions Le CHIKV a été inactivé à la limite de détection dans les CGR après traitement avec l’amustaline et le GSH. L’inactivation > 7,1 log du CHIKV a été obtenue dans le modèle d’infectivité Vero76. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Le procédé Intercept™ Blood System pour le plasma, utilisant l’amotosalen et les UVA, inactive un large spectre d’agents pathogènes et les leucocytes. En Suède, le plasma réfrigéré est utilisé jusqu’à 7 jours en service d’urgence et est considéré comme cliniquement équivalent au PFC. Cette étude a examiné l’impact du procédé Intercept sur le plasma liquide stocké ensuite à 4 °C pendant 2 semaines. Méthodes Quatre unités de plasma de sang total de même groupe ABO ont été regroupées dans les 18 h suivant la collecte ( n = 10). Les mélanges ont été divisés en un plasma contrôle non traité (C ; 300 mL) et un plasma liquide traité par Intercept (PL-IA ; 600 mL). PL-IA et C ont été stockés à 4 °C et échantillonnés jusqu’à j14. Les tests étaient : taux de prothrombine (INR), temps de céphaline activée (TCA), fibrinogène (Fg), FV, FVII, FVIII et génération de thrombine. Résultats Une légère prolongation du TQ et du TCA (11–12 %) est observée après le traitement. Le Fg, FV, FVII et le FVIII sont maintenus à 82 %, 93 %, 78 % et 73 % des valeurs prétraitement. Les facteurs dans PL-IA ont une stabilité similaire à C lors du stockage. Au jour 14, l’activité dans PL-IA de ces facteurs est encore à 81 % (Fg), 92 % (FV), 80 % (FVII) et 69 % (FVIII) des valeurs de C. Les tests de génération de thrombine (Tableau 1, facteur tissulaire 5pM) montrent des résultats similaires pour les paramètres du thrombogramme dans PL-IA et C. Conclusion Le plasma traité PL-IA conserve des propriétés coagulantes et une stabilité lors du stockage similaire à celles dans le plasma liquide de contrôle. Le PL-IA combine capacité hémostatique adéquate avec inactivation des agents pathogènes en situation d’urgence. [ABSTRACT FROM AUTHOR]