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En el presente trabajo se realiza la estandarización del procedimiento espectrofotométrico de determinación de polisacárido capsular e intermedios de Neisseria meningitidis serogrupo X, mediante la determinación de los grupos fosfodiéster presentes en su estructura, por el método de Chen. Se realizó un análisis de los siguientes criterios para la estandarización: linealidad, precisión (repetibilidad y precisión intermedia) y exactitud. Se demostró mediante el diseño experimental y los procedimientos estadísticos empleados que el método es lineal (r > 0,99), el coeficiente de variación del factor respuesta < 5%, la desviación estándar relativa de la pendiente < 2%, no existiendo diferencia estadísticamente significativa entre el intercepto de la ecuación con respecto a cero; exacto, porque no existe diferencia estadísticamente significativa entre la concentración determinada en un material de trabajo y su concentración nominal; también demostró ser repetible, pues el coeficiente de variación de las concentraciones de la muestra evaluada (2,44; 2,43; 0,88% para las concentraciones bajas, medias y altas, respectivamente) es inferior al 3% y no existen diferencias estadísticamente significativas entre las medias de los resultados obtenidos por dos analistas, evaluados durante cuatro días a tres niveles de concentración. La precisión intermedia es satisfactoria.

Las vacunas conjugadas que consisten en polisacáridos bacterianos unidos a través de un enlace covalente a una proteína portadora, han tenido un gran impacto en los esquemas de vacunación infantil, disminuyendo de forma dramática la incidencia de infecciones bacterianas. En el caso de Streptococcus pneumoniae, a pesar de que se han descrito más de 90 serotipos basados en la estructura de las cápsulas polisacarídicas y que al menos 23 tienen una importancia clínica demostrada, solo un número limitado de siete, o más recientemente 10 y 13, están incluidos en las vacunas conjugadas licenciadas. Por otra parte, la necesidad creciente de estas vacunas en el mundo requiere la incorporación de nuevos productores que se enfrentan a una elevada complejidad tecnológica, pues en todo el procedimiento de conjugación no se pueden afectar las características estructurales por las que el polisacárido es reconocido inmunológicamente. Este trabajo implementó un procedimiento de conjugación para el polisacárido de la cápsula de Streptococcus pneumoniae serotipo 14. El procedimiento comprendió la fragmentación, oxidación peryódica y posterior conjugación del polisacárido a anatoxina tetánica o diftérica. Cada intermedio fue caracterizado por métodos físico-químicos. En todas las reacciones se obtuvieron rendimientos superiores al 50%. Los conjugados generaron altos títulos de anticuerpos específicos de tipo IgG y memoria inmunológica. Se concluyó que el procedimiento permitió la obtención de conjugados inmunogénicos de serotipo 14.

En la actualidad, las vacunas conjugadas constituyen un gran hito en el desarrollo de fármacos que protegen contra las enfermedades infecciosas. Estas vacunas no solo disminuyen drásticamente la mortalidad y morbilidad de diferentes enfermedades causadas por bacterias en la población infantil; sino que también repercuten sobre la población no vacunada. Las vacunas conjugadas se basan en establecer una unión covalente entre un polisacárido y una proteína portadora para lo cual existen diferentes procedimientos químicos. Todos los procedimientos de conjugación requieren la presencia de grupos reactivos complementarios que muchas veces son generados en ambas macromoléculas. Este trabajo se enfoca en el estudio de la reacción de fragmentación y de la oxidación peryódica sobre el polisacárido capsular serotipo 23F de Streptococcus pneumoniae para su uso como antígeno vacunal. Se estableció la fragmentación del polisacárido mediante hidrólisis con ácido acético y trifluoroácetico. En el caso de la reacción de oxidación se encontró que la cantidad de moles de peryodato de sodio y la temperatura influyen de manera directamente proporcional sobre la generación de grupos carbonilos. Adicionalmente se demostró que el sustituyente glicerol-fosfatos presente en la estructura del serotipo 23F es relevante para conservar la antigenicidad. El procedimiento descrito permite obtener conjugados inmunogénicos a partir del polisacárido capsular de Streptococcus pneumoniae serotipo 23F en el modelo de conejos.