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OBJETIVO: verificar a avaliação da cultura de segurança do paciente, de acordo com o cargo e tempo de trabalho das equipes de enfermagem e médica de Unidades de Terapia Intensiva Neonatal. METODOLOGIA: estudo quantitativo, tipo survey, realizado em quatro Unidades de Terapia Intensiva Neonatal de Florianópolis, Brasil. A amostra foi composta por 141 sujeitos. A coleta de dados ocorreu de fevereiro a abril de 2013, com aplicação do instrumento Hospital Survey on Patient Safety Culture. Utilizou-se para análise os testes Kruskal-Wallis, qui-quadrado e alpha de Cronbach. O projeto de pesquisa recebeu aprovação do Comitê de Ética, CAAE: 05274612.7.0000.0121. RESULTADOS: verificou-se a diferença do número de respostas positivas do Hospital Survey on Patient Safety Culture, nota de segurança e número de eventos comunicados, conforme as características profissionais. Houve diferença significava do menor tempo de trabalho no hospital e tempo de trabalho na unidade com maior número de respostas positivas; maior tempo de trabalho na profissão representou melhores notas e menos eventos comunicados. Os médicos e técnicos de enfermagem avaliaram mais positivamente a cultura de segurança do paciente. O alpha de Cronbach demonstrou confiabilidade do instrumento. CONCLUSÃO: as diferenças encontradas nos remetem a uma possível relação da avaliação da cultura de segurança com as características profissionais dos sujeitos das Unidades de Terapia Intensiva Neonatal. OBJECTIVE: to verify the assessment of the patient safety culture according to the function and length of experience of the nursing and medical teams at Neonatal Intensive Care Units. METHOD: quantitative survey undertaken at four Neonatal Intensive Care Units in Florianópolis, Brazil. The sample totaled 141 subjects. The data were collected between February and April 2013 through the application of the Hospital Survey on Patient Safety Culture. For analysis, the Kruskal-Wallis and Chi-Square tests and Cronbach's Alpha coefficient were used. Approval for the research project was obtained from the Ethics Committee, CAAE: 05274612.7.0000.0121. RESULTS: differences in the number of positive answers to the Hospital Survey on Patient Safety Culture, the safety grade and the number of reported events were found according to the professional characteristics. A significant association was found between a shorter Length of work at the hospital and Length of work at the unit and a larger number of positive answers; longer length of experience in the profession represented higher grades and less reported events. The physicians and nursing technicians assessed the patient safety culture more positively. Cronbach's alpha demonstrated the reliability of the instrument. CONCLUSION: the differences found reveal a possible relation between the assessment of the safety culture and the subjects' professional characteristics at the Neonatal Intensive Care Units. OBJETIVO: verificar la evaluación de la cultura de seguridad del paciente según el cargo y tiempo de trabajo de los equipes enfermero y médico de Unidades de Terapia Intensiva Neonatal. METODOLOGÍA: estudio cuantitativo, tipo survey, desarrollado en cuatro Unidades de Terapia Intensiva Neonatal de Florianópolis, Brasil. La muestra totalizó 141 sujetos. Los datos fueron recolectados de febrero a abril de 2013, con aplicación del instrumento Hospital Survey on Patient Safety Culture. Fueron utilizadas para análisis las pruebas Kruskal-Wallis, Ji-Cuadrado y Alfa de Cronbach. El proyecto de investigación recibió aprobación del Comité de Ética, CAAE: 05274612.7.0000.0121. RESULTADOS: se verificó la diferencia del número de respuestas positivas al Hospital Survey on Patient Safety Culture, nota de seguridad y número de eventos comunicados, según las características profesionales. Fue encontrada diferencia significativa del menor Tiempo de trabajo en el hospital y Tiempo de trabajo en la unidad con mayor número de respuestas positivas; mayor Tiempo de trabajo en la profesión representó mejores puntuaciones y menos eventos comunicados. Los médicos y técnicos de enfermería evaluaron más positivamente la cultura de seguridad del paciente. El Alfa de Cronbach demostró confiabilidad del instrumento. CONCLUSIÓN: las diferencias encontradas nos remiten a una posible relación de la evaluación de la cultura de seguridad con las características profesionales de los sujetos de las Unidades de Terapia Intensiva Neonatal.