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Mise au point et validation d'un procédé miniaturisé pour le criblage à haut débit du potentiel de saccharification de biomasses lignocellulosiques : Application sur des clones de peupliers.. 11es Journées du Réseau Français des Parois

co-encadrant: Brigitte Chabbert,Nicolas Lopes-Ferreira

Consumer's concerns about the quality and environmental impact of the products as well as the industrial requirements regarding the risk assessment and the environmental and health repercussions of the solvent extraction of rapeseed oil using hexane led us to work on the optimisation of the aqueous enzymatic extraction of this oil. The study has been carried out to determine the best combination of enzymes able to achieve the disruption of the vegetal adipose tissue, and to characterize the emulsion obtained after centrifugation. The final objective was to maximize the yields of the oil extraction and to obtain adequate nutritional properties of the cake. After the physicochemical characterization of the rapeseed raw material, several proteases and polysaccharide hydrolases have been tested individually and in combination in order to optimize the removal of free oil and the emulsion oil yield occurring during the aqueous extraction process. The physicochemical properties of the emulsion have been determined: rheological properties, pH, conductivity, spectroscopy by Short Angles Light Scattering). Thereafter some physicochemical and thermo-mechanical treatments have been carried out to destabilize the oil-in-water emulsion obtained after the centrifugation, which contained a large part of the total oil of the reaction mixture. Three destabilization processes appeared particularly interesting to increase the free oil removal from the emulsion: talc addition before centrifugation, phase inversion by addition of exogenous oil in presence of NaCl in the aqueous phase, and freezing/thawing cycles. Finally, an optimisation trial of the freezing/thawing process using a Doehlert experimental design has been done as an example; En réponse aux attentes actuelles des consommateurs pour des produits de haute qualité nutritionnelle et environnementale, et face aux impératifs industriels conduisant à minimiser les risques et l'impact environnemental lors de l'extraction à l'hexane de l'huile de la graine de colza, l'étude de l'extraction aqueuse avec assistance enzymatique de cette huile a été reprise avec 2 objectifs principaux : déterminer les enzymes et mélanges d'enzymes adaptés à la meilleure déstructuration du tissu adipeux végétal, et d'autre part étudier les propriétés et la déstabilisation de l'émulsion formée. De l'optimisation de ces 2 séquences du process dépendent les rendements finaux en huile de l'extraction et les propriétés du tourteau, qui constituent les clés économiques de l'émergence de cette nouvelle technologie. Pour cela, après caractérisation physicochimique des constituants de la graine, protéases et polysaccharides hydrolases ont été testées seules ou en combinaison afin d'optimiser le rendement en huile libre et en huile contenue dans l'émulsion engendrée lors de l'extraction et obtenue par centrifugation. Après caractérisation de l'émulsion (rhéologie, diffusion statique de la lumière, pH, conductivité), des tests de déstabilisation physicochimiques ou thermo-mécaniques ont été mis en oeuvre afin de séparer les constituants de l'émulsion formée, et obtenir ainsi la libération de l'huile. Les tests réalisés ont permis de retenir trois procédés de déstabilisation: l'addition de talcs, l'inversion de phase par addition d'huile exogène en présence de NaCl dans la phase aqueuse, et les cycles de congélation/décongélation. Afin d'apporter les premiers éléments de l'optimisation de ce dernier procédé, une étude par planification expérimentale a été mise en oeuvre

Consumer's concerns about the quality and environmental impact of the products as well as the industrial requirements regarding the risk assessment and the environmental and health repercussions of the solvent extraction of rapeseed oil using hexane led us to work on the optimisation of the aqueous enzymatic extraction of this oil. The study has been carried out to determine the best combination of enzymes able to achieve the disruption of the vegetal adipose tissue, and to characterize the emulsion obtained after centrifugation. The final objective was to maximize the yields of the oil extraction and to obtain adequate nutritional properties of the cake. After the physicochemical characterization of the rapeseed raw material, several proteases and polysaccharide hydrolases have been tested individually and in combination in order to optimize the removal of free oil and the emulsion oil yield occurring during the aqueous extraction process. The physicochemical properties of the emulsion have been determined: rheological properties, pH, conductivity, spectroscopy by Short Angles Light Scattering). Thereafter some physicochemical and thermo-mechanical treatments have been carried out to destabilize the oil-in-water emulsion obtained after the centrifugation, which contained a large part of the total oil of the reaction mixture. Three destabilization processes appeared particularly interesting to increase the free oil removal from the emulsion: talc addition before centrifugation, phase inversion by addition of exogenous oil in presence of NaCl in the aqueous phase, and freezing/thawing cycles. Finally, an optimisation trial of the freezing/thawing process using a Doehlert experimental design has been done as an example; En réponse aux attentes actuelles des consommateurs pour des produits de haute qualité nutritionnelle et environnementale, et face aux impératifs industriels conduisant à minimiser les risques et l'impact environnemental lors de l'extraction à l'hexane de l'huile de la graine de colza, l'étude de l'extraction aqueuse avec assistance enzymatique de cette huile a été reprise avec 2 objectifs principaux : déterminer les enzymes et mélanges d'enzymes adaptés à la meilleure déstructuration du tissu adipeux végétal, et d'autre part étudier les propriétés et la déstabilisation de l'émulsion formée. De l'optimisation de ces 2 séquences du process dépendent les rendements finaux en huile de l'extraction et les propriétés du tourteau, qui constituent les clés économiques de l'émergence de cette nouvelle technologie. Pour cela, après caractérisation physicochimique des constituants de la graine, protéases et polysaccharides hydrolases ont été testées seules ou en combinaison afin d'optimiser le rendement en huile libre et en huile contenue dans l'émulsion engendrée lors de l'extraction et obtenue par centrifugation. Après caractérisation de l'émulsion (rhéologie, diffusion statique de la lumière, pH, conductivité), des tests de déstabilisation physicochimiques ou thermo-mécaniques ont été mis en oeuvre afin de séparer les constituants de l'émulsion formée, et obtenir ainsi la libération de l'huile. Les tests réalisés ont permis de retenir trois procédés de déstabilisation: l'addition de talcs, l'inversion de phase par addition d'huile exogène en présence de NaCl dans la phase aqueuse, et les cycles de congélation/décongélation. Afin d'apporter les premiers éléments de l'optimisation de ce dernier procédé, une étude par planification expérimentale a été mise en oeuvre

The human protein EED belongs to the Polycomb Group. It acts as a transcriptional repressor and as a gene silencer. EED seems also to be important during the HIV-1 replication cycle, participating in the trafficking of preintegration complex and favouring the IN-mediated DNA integration reaction. EED has been overexpressed and purified in order to be crystallized alone or in complex with its viral partners IN, MA and Nef. A 3D structure model of EED has been obtained by homology modelling. Interaction regions determined by phage-display are localized on loops of the model.The psychrophilic P. haloplanktis produces the cellulase Cel5G. Its crystallographic structure was solved alone and in complex with cellobiose by molecular replacement at 1.4 Å and 1.6 Å resolution, respectively. Cellulase Cel5A from the mesophilic E. chrysanthemi has been used as a search model. Structural details and comparisons give new insights into the understanding of aspects governing the cold adaptation of the enzyme at a molecular level., La protéine humaine EED appartient à la famille des «Polycomb». Elle intervient dans la régulation génique. Elle jouerait aussi un rôle dans le cycle du virus de l'immunodéficience humaine (VIH-1) en participant au transport du complexe de préintégration et en facilitant la réaction d'intégration. EED a été surproduite afin d'être cristallisée seule et en complexe avec les protéines virales IN, MA et Nef. Un modèle de EED a été construit par homologie structurale. D'après nos expériences de « phage display », les régions susceptibles d'interagir avec les partenaires viraux se situent sur des boucles de ce modèle.La bactérie psychrophile P. haloplanktis produit la cellulase Cel5G. Les structures de cette cellulase seule et en complexe avec le cellobiose, ont été déterminées à haute résolution par remplacement moléculaire. La cellulase Cel5A de la bactérie mésophile E. chrysanthemi a été utilisée comme modèle. Nos résultats permettent de mieux comprendre les déterminants structuraux responsables de l'adaptation des enzymes aux basses températures.

In order to determine the origin of cellulases in the gut of the earthworm Eisenia fetida andrei, the wall tissues of the different parts of the disinfected gut are cultured in vitro. Enzymatic activities (FPase: filter paper activity; CMCase: carboxymethycellulase, cellobiase) were measured both in the tissues and in the culture medium: the following activities were found, carboxymethycellulase (CMCase), filter paper activity (FPase). The first located in the crop, gizzard and midgut wall, the second in the foregut and midgut wall. The cellobiase was detected only in the crop and gizzard tissues, whereas it is present in each part of the gut of holoxenic worms. This fact indicates that this enzyme is mainly produced by microorganisms ingested. These results allow us to propose the hypothesis of the existence of synergy, for the cellulose hydrolysis between tissular enzymes and cellulolytic microorganisms.

L'obtention de l'huile de coco par la voie humide n'est pas, à l'heure actuelle, satisfaisante, notamment en terme de rendement; il est donc nécessaire d'améliorer certaines étapes du procédé. Les enzymes peuvent contribuer à l'augmentation de la quantité d'huile extraite par destruction des structures cellulaires. Des observations faites sur le terrain ont montré que l'albumen abandonné une nuit donne, à l'extraction, plus d'huile que celui traité le jour même. Ce phénomène que l'on croyait d'origine microbienne est en fait dû à des enzymes endogènes diverses; celles-ci sont à ce jour pour la plupart identifiées. A l'échelle du laboratoire, les résultats obtenus sont très significatifs puisque, en utilisant une presse de laboratoire, on passe de 50 % d'huile extraite sur un échantillon témoin à 68 % sur de l'albumen ayant subi le traitement de macération. L'étude au laboratoire d'un phénomène existant mais mal exploité montre que la simple maîtrise de certains paramètres (pH, température, agitation permet une amélioration très nette de la quantité d'huile extraite, sans pour autant modifier radicalement le procédé habituellement utilisé

Ce travail traite de l'extraction de noix de coco sur l'amande fraîche et de son optimisation. La première partie s'intéresse à la structure de l'albumen de noix de coco. L'observation microscopique met en évidence sa relative homogénéité et permet de visualiser l'huile sous forme de gouttelettes libres à l'intérieur du cytoplasme. L'extraction chimique des composés de l'endosperme permet de vérifier la nature cellulosique et hémicellulosique des constituants de la paroi. La seconde partie, consacrée à l'enzymologie permet de montrer que la noix de coco peut réaliser l'hydrolyse de ses propres parois grâce à la présence de cellulase et bêta-mannanases. La troisième partie correspond à un rapide inventaire des contaminants bactériens naturels de la noix de coco et leur action sur celle-ci. L'analyse des divers résultats obtenus permet donc de mettre au point un procédé d'extraction conduisant à améliorer fortement le rendement en huile sans en altérer la qualité. Des quantités intéressantes d'huile vierge sont ainsi obtenues en utilisant des noix de coco fraîches ce qui supprime les problèmes épineux de raffinage d'huile et de séchage de copra, source de perte d'huile. Ce procédé simple, peu onéreux, s'avère donc utilisable tant au niveau villageois qu'industriel.

Not available, L'adhésion des clostridia cellulolytiques mésophiles à la cellulose est un phénomène complexe, mettant en jeu des interactions spécifiques bactérie-cellulose et des interactions bactérie-bactérie qui permettent la formation d'agrégats cellulaires. L'étude de la croissance de clostridium cellulolyticum et de clostridium c401 a permis de proposer un modèle résumant le processus de colonisation de la cellulose par ces micro-organismes. Celui-ci comprendrait 4 étapes: 1) adhésion à un site spécifique; 2) colonisation de la cellulose; 3) relargage de bactéries carencées en carbone du à la saturation du site d'adhésion; 4) réadhésion des bactéries à un nouveau site. L'étude de la régulation par le cellobiose de la colonisation de la cellulose par clostridium c401 a montré que cet effecteur peut intervenir à différents niveaux, notamment sur l'adhésion cellulaire et sur la synthèse des activités cellulasiques

Pour estimer la biodégradabilité des matériaux d'emballage, une démarche scientifique et méthodologique est proposée, s'appuyant sur les résultats obtenus avec des matériaux cellulosiques choisis comme modèles. Leur dégradation a été évaluée par des méthodes microbiologiques et par l'utilisation directe d'enzymes cellulolytiques. Aspergillus niger, Trichoderma viride et Pseudomonas fluorescens ont été utilisées en tant que souches pures. Parallèlement, un mélange de bactéries réputé pour son action cellulolytique a été employé. Un test d'orientation, basé sur une observation visuelle de la croissance microbienne sur les éprouvettes de matériaux a été préalablement mis en oeuvre. La biodégradation des substrats est évaluée à partir d'une méthode respirométrique en milieu confiné. Le pourcentage de conversion en dioxyde de carbone est le paramètre comparatif permettant de classer les substrats selon l'importance de leur biodégradation. La biofragmentation des matériaux est estimée à partir de leur perte de poids. Pour compléter l'approche méthodologique, une méthode basée sur l'utilisation d'enzymes cellulolytiques de Trichoderma viride a été entreprise. Le pourcentage de liaisons glycisidiques hydrolysées semble le plus adapté pour estimer et comparer la dégradation enzymatique des matériaux d'emballage

Non disponible / Not available; Cl. Cellulolyticum est une bactérie cellulolytique mésophile isolée au laboratoire à partir d'herbes en décomposition. Cette bactérie est capable de dégrader la cellulose en une seule étape en acides organiques et en éthanol. Mais l'activité cellulolytique de la souche reste faible. Pour arriver à une possibilité d'utilisation industrielle de la bactérie, les performances cellulolytiques de la souche doivent être améliorées. L'amélioration de la production de cellulases par cl. Cellulolyticum passe à la fois par l'amélioration de ses conditions de culture et l'amélioration de la souche. Ainsi nous avons montré qu'une culture en fermenteur avec régulation de ph à 7,2 par une solution d'ammoniac 4n conduit à une plus forte production de cellulases. Par l'emploi du rayonnement ultraviolet comme agent mutagène et de cellobiose comme crible de sélection, nous avons isolé le mutant 42 qui produit deux fois plus de cellulases que la souche parent. Nous avons également montré que la cellulose avicel est meilleure inductrice de l'endo et de l'exoglucanase aussi bien chez cl. Cellulolyticum que chez le mutant. L'étude de l'association de cl. Cellulolyticum et du mutant 42 a permis de produire 4,7 fois plus d'activité xylanasique.

Non disponible / Not available, Cl. Cellulolyticum est une bactérie cellulolytique mésophile isolée au laboratoire à partir d'herbes en décomposition. Cette bactérie est capable de dégrader la cellulose en une seule étape en acides organiques et en éthanol. Mais l'activité cellulolytique de la souche reste faible. Pour arriver à une possibilité d'utilisation industrielle de la bactérie, les performances cellulolytiques de la souche doivent être améliorées. L'amélioration de la production de cellulases par cl. Cellulolyticum passe à la fois par l'amélioration de ses conditions de culture et l'amélioration de la souche. Ainsi nous avons montré qu'une culture en fermenteur avec régulation de ph à 7,2 par une solution d'ammoniac 4n conduit à une plus forte production de cellulases. Par l'emploi du rayonnement ultraviolet comme agent mutagène et de cellobiose comme crible de sélection, nous avons isolé le mutant 42 qui produit deux fois plus de cellulases que la souche parent. Nous avons également montré que la cellulose avicel est meilleure inductrice de l'endo et de l'exoglucanase aussi bien chez cl. Cellulolyticum que chez le mutant. L'étude de l'association de cl. Cellulolyticum et du mutant 42 a permis de produire 4,7 fois plus d'activité xylanasique.

On compare les avantages et les inconvénients de quatre méthodes d’appréciation de l’aptitude à la compétition saprophytique de 20 clones de Trichoderma. La détermination de l’activité cellulasique, qui correspond à un caractère pour lequel on sait que des travaux de sélection sont possibles, ne rend que partiellement compte du comportement saprophytique des clones. La colonisation de fragments de paille dans le sol constitue un modèle proche des conditions naturelles, mais la forte variabilité des résultats rend son emploi peu aisé. La méthode des pastilles gélosées, assez artificielle, est facile à mettre en oeuvre et sa reproductibilité est satisfaisante. Elle permet une bonne discrimination entre les clones. La méthode des pièges de papier filtre est bien adaptée à des études de dynamique des populations. Les résultats de ces quatre méthodes d’appréciation sont convergents et permettent de distinguer des clones très compétitifs et des clones pourvus d’une faible aptitude à la compétition saprophytique dans les conditions de cette étude., Four methods of appraising saprophytic competitive ability of 20 clones of Trichoderma were critically compared : determination of carboxymethyl cellulase activity (1), colonization of straw fragments buried in soil (2), agar disk method (3), viz. substrate colonization from gelled disks of inoculated soil, filter paper trap method (4). The 20 clones were classified according to the data obtained by each of these methods : methods 2, 3 and 4 gave classifications in good agreement (correlation coefficient r = 0.84 for 2-3 and r = 0.73 for 3-4), and allowed a very clear distinction between highly competitive and poorly competitive strains in the conditions of these trials. There was also a significant correlation (r = 0.45) between classifications given by methods 1 and 2. Method 1 was interesting for genetic studies but only partly accounted for the saprophytic behaviour of Trichoderma strains. Method 2 was a model rather closely related to natural conditions but results were very variable, so replication must be increased. Method 3 was furthest from natural conditions but was easy to use and reproducible ; differentiation between clones obtained by this way was good. Method 4 did not disturb soil and could be adapted to long-term studies of population dynamics.

Le complexe viral du riz dénommé « Rice tungro virus complex » (RTV-C) localisé aux cellules du phloème, transmis principalement par les cicadelles du genre Nephotettix sur le mode semi-persistant, a été purifié suivant un protocole mettant en jeu l’action d’enzymes pectino-cellulolytiques. Les enzymes et les complexes enzymatiques (driselase, pectolyase Y-23, macérozyme R-10 ou cellulase « Onazuka » R-10) ont été utilisés seuls ou successivement sur les résidus fibreux obtenus après broyage et filtration de pousses de riz de la variété « Taichung Native 1 ». Les résidus fibreux sont homogénéisés dans un tampon citrate pH 6 en présence des enzymes pectino-cellulolytiques puis incubés en milieu agité pendant 2 h à 28 ± 1 °C. La fraction soluble est amenée à pH 7 et la purification des particules virales s’effectue de la façon suivante : après clarification de l’extrait par le chloroforme, deux ultra-centrifugations différentielles sont réalisées, la première est effectuée en présence d’un coussin de sucre. Pour les différentes conditions expérimentales, les quantités de virus obtenues sont comparées par la mesure de la surface des zones d’absorption à 260 nm des particules virales après leur migration dans un gradient de saccharose. Avec les différents systèmes enzymatiques utilisés pour les résidus fibreux, des accroissements notables (1,39 à 3,11) des rendements d’extraction du complexe viral sont obtenus à partir de ces résidus. L’action des trois systèmes enzymatiques suggère des effets complémentaires qui sont discutés. Ce type d’extraction enzymatique réservé aux résidus fibreux, décrit ici sur le RTV-C et antérieurement pour certains lutéovirus, devrait être applicable aux autres groupes de virus à localisation phloémique., Rice tungro virus complex (RTV-C), consisting of tungro spherical and tungro bacilliform viruses, is phloemlimited and transmitted principally by leafhoppers Nephotettix spp. in a semi-persistent manner ; it has been successfully purified using pectino-cellulolytic enzymes. The enzymes (driselase, pectolyase Y-23, macerozyme R-10 and cellulase "Onazuka" R-10) were used alone or in different combinations on the fibrous residue obtained from the first grinding and filtration of RTV-C infected shoots of rice cultivar "Taichung Native-I". The fibrous residue was homogenized once or successively in citrate buffer pH 6 along with enzyme or a mixture of enzymes and incubated with shaking. The filtrate was adjusted to pH 7 and the virus particles were purified by clarifying extracts with chloroform, precipitation of virus by differential centrifugation and sucrose density gradients. The quantity of the virus-complex obtained from different experimental conditions was compared by the measurement of the surface of the absorption at 260 nm in sucrose density gradients. In the presence of the three enzyme systems utilized, a major increase (1.39 to 3.12 times) in the virus yield was obtained from the treatment of fibrous residue. The action of the enzymes utilized in these systems appears to be additive, and this point is discussed. The enzyme method described here and earlier for some luteoviruses may be useful for extraction and purification of other phloem-limited viruses.

Trichoderma harzianum was selected from 30 strains of cellulolytic fungi with the aim of producing cellulases by solid state fermentation of lignocellulosic substrates. Special attention was paid to cellulase production (i.e. carboxymethylcellulase and filter paper activity), apical growth and conidia production. Under the conditions of our experiments, T. harzianum exhibited the highest cellulasic activities with 1,315 IU/l of carboxymethyl cellulose and 80 IU/l of filter paper activity. Apical growth (1 mm/h) and yield of conidial production (3.25 x 10(10) conidia/g of substrate dry weight) were also valuable characteristics of this strain in the use of solid state fermentation.

Microcristalline cellulose (cellulose Avicel, Merck) supported growth of Trichoderma harzianum and induced production of cellulases in liquid cultures. After 50 h growth, the total cellulasic activities present in both the supernatant and the mycelium were 3,000 IU/l of carboxymethyl cellulose, 400 IU/l of filter paper activity, and 4 IU/l of cotton activity corresponding to 1.7 g/l of proteins. Cellulase production could be increased by a preliminary treatment of cellulose, and pH regulation during growth. The influence of inoculum concentration was studied and an optimum of 3 x 10(7) conidia/g dry weight of substrate was demonstrated. Using a synthetic culture medium, a soluble factor of germination was demonstrated which could be leached out by 3 successive washings of conidia.

L'étape limitante pour les applications possibles de valorisation biotechnologiques des substrats agricoles cellulosiques (pailles de céréales, pulpes de betteraves, bagasse...) est l'hydrolyse chimique ou enzymatique de la cellulose en sucres simples. Nos recherches ont été orientées vers la production de cellulases d'un champignon filamenteux cellulolytique #Trichoderma harzianum$ cultivé sur différents substrats lignocellulosiques par fermentation en milieu solide. L'étude de la physiologie de la croissance et de la sporulation de #T. harzianum$ nous a permis de définir des conditions et des milieux de culture optima pour ce microorganisme. De même l'utilisation d'un dispositif d'incubation simple nous a permis de suivre le développement de #T. harzianum$ et d'étudier au laboratoire la production de cellulases sur divers substrats lignocellulosiques (paille et son de blé, pulpe de betterave, bagasse) en milieu solide. Pour l'extrapolation des résultats au niveau pilote expérimental nous avons mis au point deux nouveaux fermenteurs pour la culture en milieu solide : un fermenteur à disques de 4,4 litres pour la production d'inoculum ; un fermenteur statique de 100 litres pour la production de cellulases. Ce travail a permis d'élaborer un nouveau procédé de production et d'extraction de cellulases de #T. harzianum$ par culture en milieu solide statique. De plus trois brevets d'invention ont été déposés à l'ANVAR. (Résumé d'auteur)

Polysaccharases release microorganisms from their natural seat, marine sediments for example. The enzymatic activity works both on the microbial adherence polysaccharides and on the support surfaces (cellulose, pectine, etc.). Dosages of glucose confirm polysaccharase activity. An association of bacitracine, thiophenicol and a few enzymes: cellulase, pectinase, amyloglucosidase, alpha amylase, hyaluronidase, release a considerable number of bacteria. The culture on specific mediums confirm the specificity of this release. E. coli polyresistant strain where isolated by amylo-glucosidase, glucuronidase association in a mixture of thiophenicol and bacitracine. Bacillus and other Gram positive bacteria are frequently isolated by this method. The number of colonizer microorganisms on solid media are considerably higher with sediments treated by enzymes, or by enzyme, antibiotic mixtures, than with untreated ones.

Three bacterial species of different origin, Citrobacter freundii, Proteus mirabilis and Planococcus sp., formed glycocalyx in vitro and thereby showed that the phenomena does not only occur in vivo contrary to the opinion of many authors. The glycocalyx was produced in the attachment processes used or both extra- and intercellular attachment. The aggregates formed caused large errors in bacterial counts and led to questioning of the very principle of the counting procedures. The glycocalyx was not destroyed by the polyosidases utilized nor by ultrasound treatment. The glycocalyx structure differed only according to the bacterial species of origin and was unchanged by culture media or nutrient deprivation.

The extracellular endo-beta-1.4-glucanase activity of Bacteroides succinogenes S85, grown on filter paper, was poorly stimulated by cysteine, slightly inhibited by cellobiose, but strongly inhibited by ethylthiomercuribenzoate. Active fractions against hydroxy-ethylcellulose and milled filter paper were eluted from a polyacrylamide gel filtration column with an apparent molecular weight of 60,000 daltons.

Summary. The voluntary dry matter intake of 75 hays was measured on sheep and related to crude fiber (CB), lignocellulose (ADF) and total fiber (NDF) contents and to cellulase degradability. ADF was the best prediction criterion for pure grasses and NDF for natural grassland. However, for mixtures of grasses and grasses + lucernes, NDF was the best.

No english abstract, Depuis longtemps, le bois est utilisé comme combustible, matériau de construction et dans la fabrication de pâtes à papier. Actuellement des procédés thermochimiques, biochimiques et microbiologiques permettent une valorisation du bois conduisant à l'obtention d'intermédiaires chimiques directement utilisables dans l'industrie. L'hydrolyse enzymatique de la cellulose est l'une de ces méthodes. Elle conduit à l'obtention du glucose, point de départ de nombreuses synthèses chimiques dans l'industrie chimique. L'immobilisation de l'enzyme sur support insoluble permet une utilisation répétée de l'enzyme. Cette étude met en évidence le comportement de la cellulase immobilisée vis-à-vis de son substrat. La cellulose est rendue amorphe et soluble par un traitement chimique préalable. Ensuite les différents paramètres influençant l'activité de l'enzyme immobilisée sont étudiés afin de déterminer les conditions optimales de fonctionnement d'un tel système

Un test enzymatique de digestibilité des fourrages à partir d’enzymes (amylase, pepsine, cellulase) a été mis au point ; son protocole est détaillé. Sur maïs ensilage, ce test est assez bien corrélé avec la méthode classique qui utilise du jus de rumen et il est plus précis et plus fidèle. D’autres essais ont montré que ces résultats étaient également valables sur des fourrages pauvres en amidon comme le sorgho ou la fétuque élevée. Sur maïs, ce test permet de mettre en évidence des différences nettes de digestibilité, également mises en évidence par des mesures avec moutons, alors que la corrélation entre ces deux mesures n’est pas bonne quand les différences variétales ne sont pas significatives. Il semble directement utilisable pour la sélection des fourrages pour la qualité si l’on souhaite soit faire des gains notables de qualité, soit éliminer des génotypes à trop faible digestibilité, soit vérifier que l’on ne perd pas en qualité au cours de cycles d’amélioration du rendement ou de la précocité., An in vitro enzymatic test of forage digestibility is described, using amylolytic, proteinolytic and cellulolytic enzymes. The detailed method is given in an appendix. With maize silage, this APC method gave results correlated with those of the classic rumen juice method, and was more precise and reproducible. Other trials showed that this method also gave good results with low starch-content forages such as tall fescue or sudangrass or sorghum x sudangrass hybrids. With maize, correlations between the APC test of digestibility and digestibility measured by sheep were not good if the variability between test varieties was not significant. The test could be used in breeding programmes if the aim is either to increase digestibility significantly, or to discard low digestibility genotypes or to test that there is no decrease in digestibility during breeding cycles for yield or earliness.