1. L’hème, un nouveau ligand du récepteur des produits de glycation avancée (RAGE)
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Alina Ghinet, M. Billamboz, Jordan D. Dimitrov, Nicolas S. Merle, Marie Frimat, Eric Boulanger, Olivia May, Lubka T. Roumenina, Florian Delguste, Laure Yatime, Hôpital Claude Huriez [Lille], CHU Lille, Lille Inflammation Research International Center - U 995 (LIRIC), Institut Pasteur de Lille, Réseau International des Instituts Pasteur (RIIP)-Réseau International des Instituts Pasteur (RIIP)-Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM)-Université de Lille-Centre Hospitalier Régional Universitaire [Lille] (CHRU Lille), Laboratory of Pathogen and Host Immunity [Montpellier] (LPHI), Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS)-Université de Montpellier (UM), Centre de Recherche des Cordeliers (CRC (UMR_S_1138 / U1138)), École Pratique des Hautes Études (EPHE), Université Paris sciences et lettres (PSL)-Université Paris sciences et lettres (PSL)-Université Paris Diderot - Paris 7 (UPD7)-Université Paris Descartes - Paris 5 (UPD5)-Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM)-Sorbonne Université (SU), Centre Hospitalier Régional Universitaire [Lille] (CHRU Lille)-Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM)-Université de Lille-Institut Pasteur de Lille, Réseau International des Instituts Pasteur (RIIP)-Réseau International des Instituts Pasteur (RIIP), Dynamique des interactions membranaires normales et pathologiques (DIMNP), Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS)-Université de Montpellier (UM)-Université Montpellier 2 - Sciences et Techniques (UM2)-Université Montpellier 1 (UM1), École pratique des hautes études (EPHE), Hôpital Claude Huriez, Lille Inflammation Research International Center (LIRIC), Université Montpellier 1 (UM1)-Université Montpellier 2 - Sciences et Techniques (UM2)-Université de Montpellier (UM)-Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS), École pratique des hautes études (EPHE)-Université Paris Diderot - Paris 7 (UPD7)-Université Paris Descartes - Paris 5 (UPD5)-Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM)-Sorbonne Université (SU), and Université de Lille, Droit et Santé-Centre Hospitalier Régional Universitaire [Lille] (CHRU Lille)
- Subjects
03 medical and health sciences ,0302 clinical medicine ,Nephrology ,030232 urology & nephrology ,[SDV.MHEP.HEM]Life Sciences [q-bio]/Human health and pathology/Hematology ,030204 cardiovascular system & hematology ,16. Peace & justice ,[SDV.IMM.II]Life Sciences [q-bio]/Immunology/Innate immunity ,ComputingMilieux_MISCELLANEOUS ,3. Good health - Abstract
Introduction Le syndrome hemolytique et uremique atypique (SHUa) est une microangiopathie thrombotique renale caracterisee par une hemolyse mecanique et une suractivation du complement. Il est demontre que l’heme, derive de l’hemolyse, lie C3a, amplifiant ainsi l’activation du complement. Les mecanismes d’action du complexe heme-C3a sont inconnus. Une interaction du C3a avec le Recepteur aux produits de glycation avancee (RAGE) est rapportee. RAGE, recepteur multi-ligands ubiquitaire, est implique dans differentes pathologies a tropisme renal (nephropathie diabetique, lupique, polykystose) mais aucun role dans le SHUa n’est decrit a ce jour. Notre objectif etait ainsi d’analyser l’interaction C3a-RAGE en conditions hemolytiques. Patients/Materiels et methodes Les interactions entre RAGE, l’heme et C3a etaient etudiees en resonance plasmonique de surface (SPR), spectrophotometrie et chromatographie d’exclusion serique. Pour analyser in vivo l’impact de RAGE en conditions hemolytiques, des souris C57Bl/6 RAGE−/− et leurs controles +/ + littermates recevaient ± une injection intraperitoneale d’heme (50, 100, 200 μmol/kg) avant sacrifice a 16 h. L’expression renale des genes de RAGE et de marqueurs inflammatoires (IL1β, IL6, TNFα) etait etudiee par RTqPCR. Observation/Resultats En SPR, le RAGE recombinant liait la carboxymethyllysine, son principal ligand connu, mais l’interaction RAGE-C3a restait indetectable. A contrario, C3a expose a l’heme liait le RAGE avec une haute affinite. Cette interaction etait donc mediee par l’heme, qui liait RAGE de facon dose-dependante. L’immobilisation des differents domaines de RAGE permettait d’identifier le site de liaison de l’heme sur le domaine V. L’interaction domaine V-heme etait tres affine et specifique, alors que l’heme ne se liait pas aux domaines C1 et C2. Cette liaison etait confirmee en spectroscopie et chromatographie d’exclusion. In vivo, l’injection d’heme a des souris induisait une augmentation dose-dependante de l’expression de RAGE ainsi que l’activation du complement au niveau renal, menant au clivage du C3 et la generation de fragments d’activation du C3 sur l’endothelium glomerulaire. Nous observions egalement une augmentation dose-dependante de l’expression renale des marqueurs de l’inflammation, quantifiee a la condition heme 200 μM/kg autour de × 4, × 200 et × 3,5 pour IL1β, IL6 et TNFα respectivement par rapport au controle (PBS). Les analyses preliminaires montraient une elevation moindre de l’expression de ces genes chez les souris RAGE−/−, dans les memes conditions : × 1,5, × 50 et × 2 respectivement. Discussion/Conclusion Ce travail revele RAGE comme un nouveau recepteur de l’heme. En conditions hemolytiques, les souris RAGE−/− semblent en partie protegees de l’inflammation au niveau renal, ouvrant des perspectives therapeutiques dans les maladies hemolytiques via les molecules anti-RAGE.
- Published
- 2018