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Thèse de doctorat présentée et soutenue le 26/11/2015 par Pierre Marie pour obtenir le Doctorat de l’Université de Caen Basse-Normandie Spécialité : Histoire et Civilisations, Histoire du Monde Contemporain préparée dans le cadre d’une cotutelle internationale de thèse entre l’Université de Caen Basse-Normandie et l’Université de Coimbra La Révolution des œillets du 25 avril 1974 a ouvert la voie à un processus révolutionnaire de grande ampleur au Portugal, avec la chute du régime salazariste. Cette période est marquée par le surgissement d'organes de pouvoir populaire, fruit de la mobilisation des populations afin de transformer le pays. Durant deux années des expériences démocratiques permettent de penser un nouveau régime politique au Portugal. Les forts taux d'analphabétisme et la volonté de réaliser un régime conjuguant démocratie et socialisme renforcent l'urgence de nouvelles politiques culturelles et éducatives. Le mouvement associatif connaît une forte croissance et met en place des cours d'alphabétisation et des activités culturelles auprès des populations locales. Un nouveau projet d'éducation populaire émerge afin de permettre la réalisation d'une démocratie participative. Les associations d'éducation populaire représentent un des piliers de ce nouveau projet politique et culturel. Avec la normalisation de la situation portugaise en 1976 et l'orientation vers une démocratie parlementaire à économie de marché, les associations perdent le soutien de la puissance publique et demeurent isolées. Ces associations apparaissent comme un élément de continuité du projet d'éducation populaire, en accord avec l'héritage révolutionnaire. Cette recherche a pour objet d'analyser l'évolution de ce projet d'éducation populaire jusqu'à 1986, date de l'adhésion à la Communauté économique européenne, en prenant appui sur les associations actives dans le district de Coimbra. A Revolução portuguesa de 25 de Abril de 1974 permitiu um processo revolucionário de grande escala em Portugal, após a queda do regime salazarista. O período foi marcado pelo surgimento de órgãos de poder popular, frutos da mobilização das populações. Durante dois anos, experiências democráticas permitiram pensar um novo regime político em Portugal. As altas taxas de analfabetismo e a vontade de concretizar a democracia e o socialismo tiveram como consequência novas políticas culturais e educativas. O movimento associativo conheceu um forte crescimento com aulas de alfabetização e atividades culturais. Um novo projeto de educação popular emergiu como meio de concretização e uma democracia participativa. As associações de educação popular foram na base deste novo projeto político e cultural. A tese tem como objetivo estudar a evolução deste projeto de educação popular até 1986, data da adesão portuguesa na Comunidade Económica Europeia. As associações de educação popular do distrito de Coimbra estão no centro da investigação. On the 25th of April, 1974, the Carnation Revolution opened the way to an intense revolutionary process, with the fall of the salazarist regime. Democratic councils emerged during this periode, through popular mobilization, in order to transform the country. During two years, democratic experimentations expressed a new political regime in Portugal. The high rate of iliteracy and the will to develop both socialism and democracy forstered the emergence of new cultural and educational policies. The associative movement grew rapidly and organized literacy's and cultural animation activities for local populations. A new popular education project emerged in order to build a participative democracy. The popular education association represented one of the main pillars in this new political and cultural project. With the end of the revolutionary process in 1976 and the evolution toward a representative democracy with a market-based economy, the associations lost support for the State and remained isolated. These associations appeared as an element of continuity of this popular education project, following the legacy of the revolutionary periode. This research analyze the evolution of this popular education project until 1986, when the country entered into the European Economic Community. This research will be based on the associations of the district of Coimbra.

During this study, pristinamycins production showed variability and reproduction troubles. When a culture was made following the previous experimental procedures but using a different bioreactor, no pristinamycins production was observed. After experimentations on agitation speed, medium composition and inoculum age effect, a new procedure for batch reactor cultures was set. Surprisingly, in these conditions, pristinamycins production occurred during growth phase and without apparent nutritional limitation. Glucose consumption is high, and organic acids as succinic acid and lactic acid were poorly excreted. During these cultures, the redox potential decreased while the pristinamycins production occurred. This could be useful for cultures monitoring. Enzymatic activities of the central metabolism and intracellular pH (pHi) were also assayed during these cultures. Taking into account the pHi for the specific activities led to few differences from the assayed values. The pentoses-phosphate pathway seemed to be important for pristinamycins synthesis. This is in accordance with its reduced co-factors regeneration activity, such as NADPH, which are necessary for the pristinamycins production pathway, Au cours de ce travail, il est apparu que la production des pristinamycines par S. pristinaespiralis présentait une grande variabilité ainsi que des problèmes de reproductibilité. En effet, lors de la réalisation d'une culture selon un protocole précédemment établi, mais dans un réacteur de géométrie différente, la production de pristinamycines n'était plus observée. Suite à des études sur l'influence de la vitesse d'agitation, de la composition du milieu synthétique et de l'état physiologique de l'inoculum, un nouveau procédé de production en réacteur en mode discontinu a été mis au point. De façon surprenante, au cours de celui-ci, la production des pristinamycines se déclenche lors de la phase de croissance et en absence de limitations nutritionnelles apparentes. La vitesse de consommation du glucose est plus élevée que lors des cultures antérieures à ces travaux, et les acides organiques tels que le lactate et le succinate sont excrétés en très faibles quantités. Lors de ces cultures, le potentiel d'oxydoréduction du milieu chute brutalement lors du déclenchement de la production, ce qui peut constituer un indicateur utile pour le suivi des cultures. Une étude des variations des activités enzymatiques du métabolisme central ainsi qu'un suivi des variations du pH intracellulaire (pHi) au cours de la culture ont également été réalisés. Les activités enzymatiques mesurées ont été corrigées selon les variations du pHi. Il ressort de cette étude microcinétique que la voie des pentoses-phosphate semble être une voie importante pour la synthèse des pristinamycines. Cette observation est en accord avec son activité régénératrice de co-facteurs réduits (NADPH) utilisés lors de la biosynthèse de ces antibiotiques

Non disponible - Not available, L'objectif général de ce travail est l'étude de la cinétique et du métabolisme de Corynebacterium glutamicum 2262 lors de la fermentation glutamique. L'excrétion de glutamate est induite par une élévation de la température de culture de 33 à 39°C qui permet d'orienter du métabolisme vers la synthèse et l'excrétion de glutamate au détriment de la croissance. En procédé continu à 39°C, D = 0,05 h-1, une production de glutamate sur une période de 150 h a été réalisée ; après cette période, les cellules ne sont plus capables de produire du glutamate mais capables de croître rapidement. Lorsque les cellules produisent du glutamate, les activités pyruvate déshydrogénase et alpha-cétoglutarate déshydrogénase sont respectivement réduite et absente. Les effets du choc de température à 39°C sur le métabolisme de l'oléate et du palmitate ainsi que sur la fluidité de la paroi cellulaire de cette bactérie ont également été étudiés pendant la fermentation glutamique.

Non disponible - Not available; L'objectif général de ce travail est l'étude de la cinétique et du métabolisme de Corynebacterium glutamicum 2262 lors de la fermentation glutamique. L'excrétion de glutamate est induite par une élévation de la température de culture de 33 à 39°C qui permet d'orienter du métabolisme vers la synthèse et l'excrétion de glutamate au détriment de la croissance. En procédé continu à 39°C, D = 0,05 h-1, une production de glutamate sur une période de 150 h a été réalisée ; après cette période, les cellules ne sont plus capables de produire du glutamate mais capables de croître rapidement. Lorsque les cellules produisent du glutamate, les activités pyruvate déshydrogénase et alpha-cétoglutarate déshydrogénase sont respectivement réduite et absente. Les effets du choc de température à 39°C sur le métabolisme de l'oléate et du palmitate ainsi que sur la fluidité de la paroi cellulaire de cette bactérie ont également été étudiés pendant la fermentation glutamique.

Not available, Revue Le catabolisme microbien des stérols passe par deux voies distinctes. L'une concerne la dégradation du noyau stéroïde, tandis que l'autre concerne le clivage de la chaîne latérale. Ce clivage est effectué par oxydation. Les actinomycètes sont généralement actifs dans le catabolisme des stérols. Le clivage sélectif de la chaîne latérale des stérols, qui fournit le noyau stéroïde est d'un intérêt économique remarquable. La cholestérol oxydase (COX), première enzyme du catabolisme des stérols, transforme la structure 5-ène-3[bêta]-ol en 4-ène-3-one. Les COXs microbiennes sont produites sous forme sécrétée et/ou sous forme cellulaire. Elles sont monomériques (54-62 kDa) et polymorphes. Le gène de l'enzyme et son opéron ont été identifiés chez une espèce de Streptomyces. Ce gène a été aussi étudié chez Brevibacterium sterolicum. Les COXs sont utilisées dans plusieurs applications. Resultats Deux isolats du sol (GK1, GK3), actifs dans le catabolisme des stérols, ont été identifiés comme appartenant au genre Rhodococcus. La souche GK1 (CIP 105335) produit la COX sous formes extracellulaire et cellulaire. La COX cellulaire est localisée à l'extérieur de la membrane cytoplasmique. Un essai calorimétrique a été mis au point pour doser l'activité de la COX. Il permet de doser l'enzyme acellulaire, et aussi l'enzyme liée aux cellules sans qu'elle soit extraite. L'induction de la COX de Rhodococcus sp. GK1 est liée à la chaîne latérale des stérols. La structure 3[bêta]-ol-5-ène ne suffit pas pour l'induire. La culture de cette souche sur stérols, comme seules sources de carbone et d'énergie, est marquée par la production de la COX cellulaire uniquement. Cette forme est extractible par traitement des cellules avec des détergents non ioniques. La croissance de GKl sur une source de carbone différente des stérols, ou sur un stérol plus un autre composé carboné, est marquée par une sécrétion importante de la COX. Les formes de la COX de GK1 ont la même spécificité de substrats. La double liaison en C-5 n'est pas nécessaire pour l'oxydation de la fonction alcool. La longueur de la chaîne latérale des stérols influence le niveau de l'activité. Ces formes possèdent un certain caractère hydrophobe. Le Triton X-100 ou le Lubrol PX (0,1- 0,2 %, p/v) stimulent leur activité. La COX de GK1 est relativement stable à des températures allant jusqu'à 50°C. La COX extracellulaire et cellulaire de cette souche ont été purifiées. Leur masse moléculaire est environ 59 kDa. La séquence en aminoacides du ségment N-terminal de la COX extracellulaire est: H2N-Ala-Pro-Pro-Val-Ala-Ser-XArg- Tyr-X-(Phe)-. Le pl de cette forme est de l'ordre de 9,0. Une cholestérol ester hydrolase (estérase) a été mise en évidence dans les cellules de GKl. Une alcool secondaire déshydrogénase NAD-dépendante a été obtenue de cette souche et caractérisée. Sa masse moléculaire apparente est 60 kDa. Elle catalyse la réduction des monocétones et des dicétones comme le 2-pentanone et le diacétyle. Elle oxyde des alcools secondaires comme l'isopropanol et le 2-octanol.

Non disponible / Not available, Streptomyces ambofaciens est soumis au phénomène d'instabilité génétique qui induit des réarrangements génomiques aux extrémités de son chromosome. Une séquence d'ADN amplifiée (ads205) incluant une orf (orfPS), est responsable de la perte réversible de la production de spiramycine chez le mutant NSA205. Le produit d'orfPS surexprimé chez le mutant nsa205 présente de fortes similarités avec les protéines ery a et raps composant les systèmes polycétones synthétases (PKS) responsables de la biosynthèse d'érythromycine et de rapamycine. Comme les PKS et les acides gras synthétases (fass) utilisent des précurseurs communs (acides gras actives) situés à l'interface du métabolisme primaire et secondaire, et présentent des activités enzymatiques similaires, nous avons teste l'influence de la surexpression d'orfPS sur le métabolisme lipidique du mutant nsa205. Cette étude traite de la comparaison du métabolisme lipidique de la souche parentale RP181110, du mutant NSA205 et d'une souche dérivée NSA228. Le mutant NSA205 est caractérisé par une réduction de son contenu lipidique en phase stationnaire qui affecte quantitativement les phospholipides et les triacylglycerols dont la synthèse dépend directement des acides gras à longues chaînes. Le contenu lipidique du mutant NSA228 est globalement restaure. L?interférence entre l'orfPS surexprimée et la biosynthèse des acides gras à longues chaînes se traduirait par une déviation des précurseurs carbones des acides gras a longues chaines vers un compose polycétonique pigmente. Les analyses de la composition phospholipidique (groupements polaires et acides gras à longues) révèlent des différences qualitatives concernant le mutant NSA228 et qui pourraient être associées à son phénotype surproducteur de spiramycine.

Not available, aLn. mesenteroides subsp. mesenteroides FR52, bactérie lactique isolée de lait cru, produit une activité antibactérienne due à deux bactériocines distinctes : les mésentérocines 52A et 52B, purifiées par une étape d'adsorption/désorption suivie d'une CLHP puis séquencée. La mésentérocine 52A (37 a.a. ; 3868 Da), bactériocine de classe IIa identique à la mésentéricine Y105, possède un large spectre d'activité dirigé notamment contre le genre Listeria. La mésentérocine 52B (32 a.a. ; 3446 Da) possède un spectre étroit d'activité dirigé contre les seuls genres Leuconostoc et Weissela. Ces deux bactériocines ont un mode d'action bactéricide et synergique vis-à-vis de W. paramesenteroides LMA 19 et leur adsorption est souche-dépendante. En culture batch et continue, les températures optimales de production des mésentérocines 52A et 52B sont respectivement 20 et 25°C. En fonction du pH, la production maximale de mésentérocine 52A en culture batch et continue est observée à pH 5,5 et pour la mésentérocine 52B, les productions maximales en culture batch et continue sont respectivement observées à pH 5,0 et à pH 5,5. Des coupures enzymatiques de la mésentérocine 52B montrent que la perte de deux acides amines à l'extrémité N- ou C-terminale de la bactériocine n'entrainent pas de perte d'activité de celle-ci. La leucocine TA33a-B, produite par Ln. mesenteroides TA33a, purifiée et séquencée (31 a.a. ; 3466 Da), présente 55% d'identité de séquence avec la mésentérocine 52B. Ces deux bactériocines présentent des CMI et des effets lytiques différents en fonction des souches cibles. L’effet bactéricide de la leucocine TA33a-B est plus marqué que celui de la mésentérocine 52B. La purification partielle des bactériocines par adsorption/désorption utilisant des cellules encapsulées peut être envisagée.

Not available, Streptomyces ambofaciens, bactérie filamenteuse du sol aérobie stricte, est utilisée industriellement pour la production d'un antibiotique macrolide à 16 membres, la spiramycine. Celle-ci peut se présenter sous trois formes structurales appelées I, II ou III. Les proportions de ces formes ne sont pas constantes et varient fortement selon les conditions de fermentation. Les cinétiques de croissance, de production d'antibiotique et de consommation des différents substrats pour cette espèce de streptomycète sont connues dans les milieux complexes de type industriel. Les paramètres donnés par ces cinétiques constituent autant d'informations exploitables et adaptables lors d'un changement de condition de fermentation. Il a pu être ainsi déterminé les paramètres quantitatifs et qualitatifs nécessaires à l'incorporation du glycérol dans le procédé de fermentation productrice de spiramycine. La substitution de celui-ci aux autres sources de carbone et d'énergie a permis de mettre en évidence des relations fines entre les productions de spiramycine I, II et III. Des corrélations ont pu être établies entre les vitesses spécifiques maximales de production de ces trois formes. Ces relations permettent de mieux comprendre les mécanismes de régulations des différentes voies de biosynthèse de cet antibiotique. Les streptomyces sont bien connus pour leur particularité à se différencier. Le glycérol a montré une influence quant au comportement de la souche vis-à-vis d'un paramètre de différenciation, les septations. De nouvelles relations ont pu être trouvées entre la production maximale de spiramycine, la durée de la phase de production et la densité maximale de septation. Ces relations ont été mises en évidence grâce à l'utilisation de l'outil analyse d'images et à la mise au point d'un algorithme permettant de quantifier ces phénomènes. La substitution du glycérol n'est pas sans intérêt pratique. En effet cette étude contribue à une possible valorisation industrielle. Une fois les conditions d'utilisation du glycérol bien définies, le procédé de production de spiramycine pourrait être adapté à l'utilisation des eaux glycérineuses, sous produits de la filière diester, car celles-ci contiennent de 30 à 64% de glycérol après la fabrication du biocarburant.

Not available, L’objectif de ce travail est la recherche de nouveaux antifongiques nonpolyéniques produits par des actinomycètes, en vue d'applications dans les domaines agricoles, agro-alimentaires et médicaux. Un criblage de souches d'actinomycètes isolés du sol, produisant des activités inhibant la croissance de levures et de moisissures a été effectué. Les souches productrices d'antifongiques polyéniques ont été écartées. Deux souches, A217 et A221, ont été retenues, et identifiées. Elles appartiennent au genre Streptomyces. Des milieux de culture liquides ont été mis au point pour permettre une production satisfaisante des activités antilevuriennes et antifongiques. Ils n'ont pas été autrement optimisés. Des méthodes d'extraction par solvants, de séparation et de purification des composés actifs par chromatographie sur gel de silice, chromatographie sur colonne d'acide silicique et chromatographie liquide à haute performance ont été mises au point. Les spectres d'activités antimicrobiennes des composés obtenus ont été établis : activités contre des bactéries Gram (-) et Gram (+), contre des levures, contre des moisissures. Les composés purifiés obtenus ont été caractérisés par leurs propriétés de solubilité dans différents solvants, leurs spectres d'absorption dans l'ultraviolet et le visible, et par diverses réactions chromogéniques. Les études spectroscopiques en infrarouge, ainsi que l'analyse par spectrométrie de masse et de RMN (1H et 13C), de deux des composés obtenus, A217-B et A221-A, ont été réalisées. Ces spectres, ainsi que la composition élémentaire de ces composés ont permis de déterminer leurs structures. Le composé A217-B appartient à la classe des antibiotiques ionophores et au groupe des macrotétrolides. Le composé A221-A s'est révélé être l'acide phénylacétique.

Not available, L’objectif de ce travail est la recherche de nouveaux antifongiques nonpolyéniques produits par des actinomycètes, en vue d'applications dans les domaines agricoles, agro-alimentaires et médicaux. Un criblage de souches d'actinomycètes isolés du sol, produisant des activités inhibant la croissance de levures et de moisissures a été effectué. Les souches productrices d'antifongiques polyéniques ont été écartées. Deux souches, A217 et A221, ont été retenues, et identifiées. Elles appartiennent au genre Streptomyces. Des milieux de culture liquides ont été mis au point pour permettre une production satisfaisante des activités antilevuriennes et antifongiques. Ils n'ont pas été autrement optimisés. Des méthodes d'extraction par solvants, de séparation et de purification des composés actifs par chromatographie sur gel de silice, chromatographie sur colonne d'acide silicique et chromatographie liquide à haute performance ont été mises au point. Les spectres d'activités antimicrobiennes des composés obtenus ont été établis : activités contre des bactéries Gram (-) et Gram (+), contre des levures, contre des moisissures. Les composés purifiés obtenus ont été caractérisés par leurs propriétés de solubilité dans différents solvants, leurs spectres d'absorption dans l'ultraviolet et le visible, et par diverses réactions chromogéniques. Les études spectroscopiques en infrarouge, ainsi que l'analyse par spectrométrie de masse et de RMN (1H et 13C), de deux des composés obtenus, A217-B et A221-A, ont été réalisées. Ces spectres, ainsi que la composition élémentaire de ces composés ont permis de déterminer leurs structures. Le composé A217-B appartient à la classe des antibiotiques ionophores et au groupe des macrotétrolides. Le composé A221-A s'est révélé être l'acide phénylacétique.

Not available, L’amélioration rationnelle des procédés de fermentation passe par une meilleure compréhension de la physiologie des micro-organismes d'intérêt industriel. L’étude physiologique de Streptomyces ambofaciens producteur de la spiramycine, un macrolide à 16 membres, est largement étudiée en milieux synthétiques. L’utilisation de milieux très complexes, de type industriel et de composition souvent variable, limite ces études physiologiques dans ces conditions. Pour mieux comprendre le comportement cinétique de ce micro-organisme dans de tels milieux, nous avons abordé une étude du métabolisme initial des acides aminés, des lipides (acylglycérols) et de leur interactions dans des milieux complexes de type industriel contenant comme principaux substrats, des dextrines, de l'extrait de levure et de l'huile de maïs. Des études préliminaires en fioles d'erlenmeyer ont permis de maitriser les conditions permettant une reproductibilité des fermentations et une production de spiramycine satisfaisantes. Les interactions entre les principaux substrats du milieu de culture et leur incidence sur la production de spiramycine ont été étudiées. La présence de dextrines réduit les activités lipolytiques et protéolytiques, l'assimilation des acylglycérols, des acides gras libres à longues chaines, de certains acides aminés et la production de spiramycine. L’évolution des flux initiaux des différents substrats au cours des croissances est présentée. L’évolution de la constitution et de la mobilisation des réserves énergétiques (glycogène, tréhalose, lipides totaux et triacylglyérols) est analysée. Des hypothèses expliquant les relations entre composition en lipides de S. ambofaciens, transport des acides aminés et production de spiramycine sont proposées

Not available, L’amélioration rationnelle des procédés de fermentation passe par une meilleure compréhension de la physiologie des micro-organismes d'intérêt industriel. L’étude physiologique de Streptomyces ambofaciens producteur de la spiramycine, un macrolide à 16 membres, est largement étudiée en milieux synthétiques. L’utilisation de milieux très complexes, de type industriel et de composition souvent variable, limite ces études physiologiques dans ces conditions. Pour mieux comprendre le comportement cinétique de ce micro-organisme dans de tels milieux, nous avons abordé une étude du métabolisme initial des acides aminés, des lipides (acylglycérols) et de leur interactions dans des milieux complexes de type industriel contenant comme principaux substrats, des dextrines, de l'extrait de levure et de l'huile de maïs. Des études préliminaires en fioles d'erlenmeyer ont permis de maitriser les conditions permettant une reproductibilité des fermentations et une production de spiramycine satisfaisantes. Les interactions entre les principaux substrats du milieu de culture et leur incidence sur la production de spiramycine ont été étudiées. La présence de dextrines réduit les activités lipolytiques et protéolytiques, l'assimilation des acylglycérols, des acides gras libres à longues chaines, de certains acides aminés et la production de spiramycine. L’évolution des flux initiaux des différents substrats au cours des croissances est présentée. L’évolution de la constitution et de la mobilisation des réserves énergétiques (glycogène, tréhalose, lipides totaux et triacylglyérols) est analysée. Des hypothèses expliquant les relations entre composition en lipides de S. ambofaciens, transport des acides aminés et production de spiramycine sont proposées

Not available, aLa production de spiramycine, macrolide à 16 membres, par streptomyces ambofaciens est stimulée par des acides gras et certains acides aminés. Un milieu synthétique à base de dextrines et de chlorure d'ammonium offre des productions conséquentes. Nous avons modifié ce milieu en utilisant du glycérol comme source de carbone. La production de spiramycine est médiocre sur ce substrat et fortement régulée par l'ammonium. L'utilisation de la lysine comme source azotée en présence de glycérol est un substrat intéressant. Dans tous les cas, la synthèse de l'antibiotique est peu affectée par les phosphates. L'addition d'isobutyrate (catabolite de la valine) ou d'hexanoate (acide gras en c-6) stimule la production dans certaines conditions. Des études en discontinu ont montré que le glycérol jouait un rôle important dans la consommation des acides gras et la synthèse de la spiramycine. Des fermentations en semi-continu avec différentes conditions d'alimentation (glycérol, ammonium, hexanoate ou glycérol, lysine), indiquent que le taux de croissance et la vitesse spécifique de consommation du glycérol et de l'hexanoate contrôlent la production du macrolide

Not available, aLa production de spiramycine, macrolide à 16 membres, par streptomyces ambofaciens est stimulée par des acides gras et certains acides aminés. Un milieu synthétique à base de dextrines et de chlorure d'ammonium offre des productions conséquentes. Nous avons modifié ce milieu en utilisant du glycérol comme source de carbone. La production de spiramycine est médiocre sur ce substrat et fortement régulée par l'ammonium. L'utilisation de la lysine comme source azotée en présence de glycérol est un substrat intéressant. Dans tous les cas, la synthèse de l'antibiotique est peu affectée par les phosphates. L'addition d'isobutyrate (catabolite de la valine) ou d'hexanoate (acide gras en c-6) stimule la production dans certaines conditions. Des études en discontinu ont montré que le glycérol jouait un rôle important dans la consommation des acides gras et la synthèse de la spiramycine. Des fermentations en semi-continu avec différentes conditions d'alimentation (glycérol, ammonium, hexanoate ou glycérol, lysine), indiquent que le taux de croissance et la vitesse spécifique de consommation du glycérol et de l'hexanoate contrôlent la production du macrolide

Not available, L'objectif du travail est d'établir un modèle physiologique du comportement d'une souche de saccharomyces cerevisiae génétiquement manipulée dans le métabolisme des acides aminés aromatiques. Pour réaliser un suivi simultané du tryptophane, de la tyrosine et de la phénylalanine un dosage par chromatographie sur couche mince est mis au point. Il comprend une séparation des acides aminés, une révélation à la ninhydrine et un dosage densitométrique des taches. Cette méthode permet de doser les acides aminés aromatiques à une concentration minimum de 10 mg/l par acide amine avec une précision supérieure à 90%. La souche mutante cultivée en batch sur milieu synthétique présente des caractéristiques particulières par rapport à la souche sauvage. La croissance s'arrête à un plateau plus bas et indépendant de la concentration initiale de glucose. A la fin de la fermentation le glucose et l'éthanol produit ne sont pas complètement consommés. Un ajout de phénylalanine restaure une croissance identique à celle de la souche sauvage et la source de carbone est complètement consommée. Cependant on n'observe plus d'excrétion de tryptophane. Un dosage de la phénylalanine dans le milieu de culture lors de fermentations fed-batch montre que la levure est capable de faire des réserves intracellulaires de phénylalanine et que le démarrage de la production de tryptophane est sous le contrôle d'une concentration intracellulaire de phénylalanine. Un modèle physiologique prenant en compte la concentration intracellulaire de phénylalanine a été réalisé. Il simule bien la croissance avec limitation par la phénylalanine et le moment du déclenchement de l'excrétion de tryptophane

Not available, L'objectif du travail est d'établir un modèle physiologique du comportement d'une souche de saccharomyces cerevisiae génétiquement manipulée dans le métabolisme des acides aminés aromatiques. Pour réaliser un suivi simultané du tryptophane, de la tyrosine et de la phénylalanine un dosage par chromatographie sur couche mince est mis au point. Il comprend une séparation des acides aminés, une révélation à la ninhydrine et un dosage densitométrique des taches. Cette méthode permet de doser les acides aminés aromatiques à une concentration minimum de 10 mg/l par acide amine avec une précision supérieure à 90%. La souche mutante cultivée en batch sur milieu synthétique présente des caractéristiques particulières par rapport à la souche sauvage. La croissance s'arrête à un plateau plus bas et indépendant de la concentration initiale de glucose. A la fin de la fermentation le glucose et l'éthanol produit ne sont pas complètement consommés. Un ajout de phénylalanine restaure une croissance identique à celle de la souche sauvage et la source de carbone est complètement consommée. Cependant on n'observe plus d'excrétion de tryptophane. Un dosage de la phénylalanine dans le milieu de culture lors de fermentations fed-batch montre que la levure est capable de faire des réserves intracellulaires de phénylalanine et que le démarrage de la production de tryptophane est sous le contrôle d'une concentration intracellulaire de phénylalanine. Un modèle physiologique prenant en compte la concentration intracellulaire de phénylalanine a été réalisé. Il simule bien la croissance avec limitation par la phénylalanine et le moment du déclenchement de l'excrétion de tryptophane

Not available, Un criblage de souches d'actinomycètes isolées du sol, produisant des activités antagonisant la croissance de plusieurs levures et moisissures, a été réalisé. Les souches productrices de macrolides polyéniques ont été écartées. Les trois souches finalement retenues appartiennent au genre Streptomyces. Des milieux de culture permettant la production des activités antilevuriennes et antifongiques, en milieu liquide ont été établis. Des méthodes d'extraction par solvants et de purification de petites quantités des composés actifs ont été mises au point, notamment la chromatographie liquide à haute performance en phase inverse. Les spectres d'activité antimicrobienne des composés obtenus ont été établis ( bactéries Gram (-) et Gram (+) ; levures; moisissures). Les composés purifiés obtenus ont été caractérisés par leurs propriétés de solubilité dans différents solvants, leur spectre d'absorption dans l'ultraviolet et diverses réactions chromo géniques. A l'étude de la spectrométrie de masse et de la résonance magnétique nucléaire (1 H et 13 C), de premiers éléments de la structure chimique de deux des composés obtenus, ont pu être avancés.