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Der komplexe Replikationszyklus der Lentiviren wird unter anderem durch \(\it {cis}\)-aktive RNA-Sequenzen reguliert. In dieser Arbeit wurden die Funktionen der R-Region und des \(\textit {rev responsive elements}\) (RRE) genauer charakterisiert. Obwohl die Sequenz der R-Region zwischen den Lentiviren stark variiert, sind deren Funktionen hoch konserviert. Aus diesem Grund wurde die R-Region verkürzt oder durch heterologe Sequenzen ersetzt und der Einfluss auf den Vektortiter, die Genomverpackung und die Stabilität der Transkripte im Zytoplasma untersucht. Das RRE fungiert als Bindestelle für das Rev-Protein und vermittelt dadurch den Transport ungespleißter lentiviraler Transkripte in das Zytoplasma. In dieser Arbeit konnte jedoch gezeigt werden, dass auch ohne Rev/RRE-Interaktion ungespleißte SIV-Vektortranskripte in das Zytoplasma gelangen. Darüber hinaus wurde in diesem System erstmals ein Einfluss auf die Genomverpackung beobachtet, der eine Reduktion des Vektortiters nach sich zieht. The complex life cycle of lentiviruses is in part regulated by cis-acting RNA sequences. In this work the functions of the R region and the rev responsive element (RRE) were characterised. Although the sequence of the R region varies among different lentiviruses their functions are highly conserved. Therefore the R region was shortened or replaced by heterologous sequences and the influence on vector titre, genome packaging and transcript stability in cytoplasm was analysed. The RRE acts as binding site for the Rev protein and thereby mediates the nucleus to cytoplasm transport of unspliced lentiviral transcripts. However, in this work a Rev/RRE independent RNA-transport could be observed. Furthermore there was an influence of Rev/RRE on genome packaging, resulting in titre reduction.

Diplomarbeit - Veterinärmedizinische Universität Wien - 2022, Beim equinen Sarkoid handelt es sich um einen Hauttumor, welche bei Pferden, Maultieren, Eseln und Zebras auftreten kann. Dabei handelt es sich um einen Tumor, welcher nicht zu Metastasen neigt, jedoch oft ein starkes Wachstum aufweist und nach Behandlungen zu Rezidiven neigt. Das equine Sarkoid wird durch bovine Papillomviren Typ 1, 2 und 13 verursacht. Es gibt viele Therapieansätze zur Behandlung der Sarkoide, jedoch keinen, welcher generell für alle Gegebenheiten empfohlen wird. Dadurch muss bei jedem Fall individuell entschieden werden, welche Therapie am besten geeignet ist. Ein relativ neuer Therapieansatz ist die Pferde zu Immunisieren und eine spezifische Immunantwort hervorzurufen. In diesem Versuch wurde mit einem attenuierten humanen Influenzavirus mit deletierter NS1 Region gearbeitet, welches die Onkogene E6 und E7 des bovinen Papillomvirus exprimiert. Wir gingen von der Hypothese aus, dass diese therapeutische Vakzine eine hohe Wirksamkeit in Bezug auf das equine Sarkoide aufweist. Es erfolgte eine Inokulation der Sarkoide in 2 Behandlungsschemata, welche vor allem in der Anzahl der Inokulationen als auch im Abstand zu den Behandlungen voneinander abwichen. Es wurden sowohl die innere Körpertemperatur, als auch Ödemisierungsgrad der Tumore während des Aufenthaltes an der Veterinärmedizinischen Universität Wien dokumentiert, um Nebenwirkungen der Vakzine einschätzen zu können. Auch wurden Blutproben jeweils vor den Behandlungen genommen. Zur Überprüfung der Tumorgröße wurden für mindestens 6 Monate die Sarkoide fotografiert. 11 von 30 Pferden zeigten nach der Behandlung mindestens einmal eine erhöhte innere Körpertemperatur, welche jedoch nicht länger als 24 Stunden angehalten hat. 12 von 21 Pferden, welche nach Behandlungsprotokoll 2 therapiert wurden, zeigten eine ggr. Schwellung an mindestens einem Sarkoid. Bei einem Pferd wurde eine mgr. Schwellung am Oberlid, 6-10 Tage nach der Behandlung dokumentiert. Ein weiteres Pferd zeigte mgr. Schwellungen an den Tumoren und es entwickelte zusätzlich in den Folgetagen ein hochgradiges Unterbauchödem. Insgesamt konnte bei 48 % der Pferde eine komplette Remission festgestellt werden. 14 % befinden sich noch im Regression, sprechen aber weiterhin auf die Behandlung an. Bei 14 % bleiben die Sarkoide stabil in ihrer Tumorgröße und in 24 % folgte nach der Behandlung ein progressiver Verlauf. Im Fall der progressiven Verläufe handelte es sich aber ausschließlich um Pferde mit einer hgr. Sarkoiderkrankung. Dementsprechend konnte die Wirksamkeit mit NS-1 deletierten, BPV1 Onkogene E6 und E7 exprimierenden, humanen Influenzaviren bestätigt werden. Ein wichtiger Faktor ist jedoch der Schweregrad der Tumore, da hgr. Läsionen eher Therapieresistenzen aufweisen. Um den Faktor der Neubildung besser einschätzen zu können, sollten die Pferde des Versuchs über die nächsten Jahre hinweg weiter beobachtet werden., The equine sarcoid is a skin tumor that can occur in horses, mules, donkeys and zebras. It is a tumor that does not metastasize, but often shows rapid growth and is likely to recur after treatment. Equine sarcoids are caused by bovine papillomavirus types 1, 2 and 13. There are many therapeutic approaches for the treatment of sarcoids, but there is none that is generally recommended for all conditions. So for each case, ist has to be decided individually which therapy is the most suitable. An innovative therapeutic method is to immunize the horses and induce a specific immune response. In this trial, an attenuated human influenza virus with a deleted NS1 region was used to express the E6 and E7 oncogenes of the bovine papillomavirus. We hypothesized that this therapeutic vaccine would have high efficacy in equine sarcoids. Sarcoid inoculation was performed in 2 treatment regimes, which differed mainly in the number of inoculations as well as the interval between treatments. Both internal body temperature and degree of edema of the tumors were documented during the stay at the University of Veterinary Medicine, Vienna to assess side effects of the vaccine. Blood samples were also taken prior to each treatment for further, upcoming investigations. Sarcoids were photographed for at least 6 months to check tumor size. 11 of 30 horses showed an increased internal body temperature at least once after treatment, but this did not last longer than 24 hours. 12 of 21 horses treated according to treatment protocol 2 showed mild swelling on at least one sarcoid. One horse showed moderate swelling on the upper eyelid, days after treatment. Another horse showed moderate swelling at the tumors and it additionally developed severe abdominal edema in the following days after treatment. Overall, complete remission was observed in 48 % of the horses. 14 % are still in progressive reduction but continue to respond to treatment. In 14 %, the sarcoids remained stable in tumor size and in 24 % a progressive course followed after treatment. However, in the case of progressive courses, these were exclusively horses with severe sarcoid disease. Accordingly, efficacy was confirmed with NS-1 deleted human influenza viruses expressing BPV1 oncogenes E6 and E7. However, tumor severity is an important factor, as severe lesions are more likely to be resistant to therapy. To better assess the factor of de-novo formation of sarcoids, the horses of the trial should be further monitored over the next years.

Diplomarbeit - Veterinärmedizinische Universität Wien - 2021, Das equine Sarkoid ist die beim Pferd am häufigsten vorkommende Hautneoplasie. Und obwohl Sarkoide nicht metastasieren, beeinflussen sie sowohl das Wohlbefinden der betroffenen Pferde als auch deren Nutzung. Auch nach zahlreichen Jahren intensiver Forschung konnten noch nicht alle Faktoren zur Entstehung der Erkrankung verstanden werden. Mittlerweile ist jedoch bekannt, dass das Bovine Papillomvirus (BPV1, BPV2, BPV13) verantwortlich für die Entstehung und Ausbreitung von Sarkoiden ist. Heutzutage ist eine Einteilung in sechs Formen von Sarkoiden, nämlich okkultes, verruköses, noduläres, fibroblastisches, malevolentes und gemischtes Sarkoid üblich. Die Therapie kann sehr frustrierend sein, da diese Tumore häufig zu Rezidiven neigen. Dabei steigt die Rezidiv-Wahrscheinlichkeit nach erfolglosen Therapieversuchen deutlich. Wichtig ist daher, von vornherein die passende Therapie auszuwählen, was sich durch die Vielzahl an vorhandenen Möglichkeiten schwierig gestalten kann. Zu Kombinationen von Therapien sind bis jetzt noch wenige Studien bekannt, ebenso, wie eine Klassifizierung und Beurteilung der Rezidivraten nach Schweregrad nicht üblich ist. Das Ziel dieser Studie war daher, zu evaluieren, ob der Einsatz von mehreren Therapiemodalitäten die Rezidivrate speziell bei hochgradigen Sarkoiden senken kann. Dazu wurde eine Besitzerumfrage bezüglich Rezidive durchgeführt und mit den erhaltenen Therapien verglichen. Bei einer Teilnehmerzahl von 53 betrug die Rezidivrate 34 %. Während der Follow-Up Zeit von 13 Monaten bei allen Pferden blieben 70 % Rezidiv frei. Die Arbeitshypothese konnte widerlegt werden, da lediglich zwei Pferde mit nur einer Therapiemodalität behandelt wurden, wovon beide kein Rezidiv bekommen hatten. Es konnte kein signifikanter Unterschied in der Therapieanzahl von Pferden, die ein Rezidiv hatten und jenen, die rezidivfrei blieben, festgestellt werden. Ebenso konnte keine Therapie als signifikant besser als andere identifiziert werden. Da es teilweise zu großen Differenzen in der Teilnehmeranzahl der einzelnen Therapiemodalitäten kam, wären weitere Studien mit größerer Teilnehmerzahl sinnvoll, um dies zu prüfen., The most common skin neoplasia in horses is the equine sarcoid. Although it does not tend to metastasize it has a big influence on the horse’s welfare as well as its use for the owner. Despite that many years of research on this topic have been done, not all mechanisms of this disease have been completely understood yet. However, it is known, that bovine papillomaviruses (BPV1, BPV2, BPV13) are the cause of equine sarcoids. Commonly, six types can be classified, including the occult, verrucous, nodular, fibroblastic, malevolent and mixed sarcoid. Finding the proper therapy option can be very frustrating due to the fact that these tumours tend to have a high recurrence rate and can even increase in numbers after failure of therapy. The success of the very first treatment is therefore really important. Coming up with the appropriate therapy can be difficult since many different options with variable outcomes are available. These days, a combination of options is commonly used, nevertheless hardly any studies about this are known, as well as commonly no classification of the severity level is compared to the recurrence rate. Therefore, the aim of this study was to find out whether the use of more than one therapy option in severe cases can reduce the recurrence rate. Owners have been asked for the occurrence of relapse and the results were compared with the therapies the patient received before. Of 53 participants 34 % showed a relapse of the tumour. Throughout the follow-up time of 13 months no recurrence could be observed in 70 % of the horses. Because only two of 53 Participants were treated with a single therapy option, among whom no relapse occurred, the working hypothesis can be disproved. No significant difference in the number of therapy modality between the horses having a recurrence and those that didn’t was observed. Moreover, no therapy option seems to be significantly better than the others. Further studies with more participants are necessary to confirm this outcome.

Diplomarbeit - Veterinärmedizinische Universität Wien - 2020

Diplomarbeit - Veterinärmedizinische Universität Wien - 2020

Diplomarbeit - Veterinärmedizinische Universität Wien - 2020

Diplomarbeit - Veterinärmedizinische Universität Wien - 2019