Search

Hintergrund: TMC278-C204 ist eine Phase-IIb-Studie (NCT00110305) mit 368 HIV-1-infizierten, nicht vorbehandelten Patienten, in der TMC278, ein NNRTI der nächsten Generation, mit Efavirenz (EFV) verglichen wird. TMC278 war in dieser Studie in allen verblindet untersuchten einmal täglichen (qd)[for full text, please go to the a.m. URL], 10. Kongress für Infektionskrankheiten und Tropenmedizin (KIT 2010)

Die Prognose von Patienten mit Kopf-Hals-Karzinomen ist vorwiegend von der Lokalisation des Primärtumors und dem Vorliegen von Halslymphknotenmetastasen abhängig. Die molekularen Mechanismen, die zur zervikalen Metastasierung bei Plattenepithelkarzinomen des Kopf-Hals-Bereiches führen,[for full text, please go to the a.m. URL], 80. Jahresversammlung der Deutschen Gesellschaft für Hals-Nasen-Ohren-Heilkunde, Kopf- und Hals-Chirurgie

Die mikrobielle Produktion der Aminosäure L-lsoleucin wurde überwiegend mit Hilfe konventionell hergestellter Mutanten durchgeführt. Die in den letzten Jahren entwickelten Methoden der rekombinanten DNA-Technologie für Corynebakterien ermöglichen es, durch Überexpression von Genen des Aminosäurestoffwechsels die Produktion der gewünschten Aminosäure zu steigern. In der vorliegenden Arbeit wurden Gene der Isoleucinbiosynthese isoliert, charakterisiert und ihre Auswirkung auf die Bildung von L. Isoleucin bei $\textit{C. glutamicum}$ verfolgt. 1. Vier Gene der Isoleucinbiosynthese-Enzyme aus $\textit{C. glutamicum}$ ATCC 13032 wurden durch heterologe Komplementation von Isoleucineauxotrophen $\textit{E. coli}$-Mutanten isoliert: $\underline{ilvA}$ (Threonindehydratasegen), $\underline{ilvBN}$ (Acetohydroxysäuresynthasegene), $\underline{ilvC}$ (Isomeroreductasegen), sowie ein die $\underline{ilvE}$ (Transaminase B-Gen) $\textit{E. coli}$-Mutante komplementierendes DNA-Fragment. Das Gen der Dihydroxysäuredehydratase, $\underline{ilvD}$, konnte durch heterologe und homologe Komplementation der entsprechenden Isoleucin-auxotrophen $\textit{E. coli}$- und $\textit{C. glutamicum}$-Mutante nicht isoliert werden. 2. Die Gene der Acetohydroxysäuresynthase und der Isomeroreductase bilden im $\textit{C. glutamicum}$ Genom ein Cluster der Anordnung, $\underline{ilvBNc}$. Die Transkription beider Gene erfolgt in gleicher Richtung. Beide Gene konnten getrennt voneinander in $\textit{C. glutamicum}$ und $\textit{E.coli}$ exprimiert werden. Durch Deletionsanalyse und Transposonmutagenese konnte der codierende Bereich des Gens der Isomeroreductase auf 1,2 kb, der codierende Bereich der Acetohydroxysäuresynthase auf 3,0 kb eingegrenzt werden. 3. Bei Kionierung des $\underline{ilvA}$, $\underline{ilvBN}$ und $\underline{ilvC}$-Gens in die$\textit{C. glutarnicum}$-Stämme ATCC 13032 und DL2 konnte eine Steigerung der spezifischen Aktivität der durch diese Gene codierten Enzyme um den Faktor 20 bis 30 erzielt werden. Die Kionierung des $\underline{ilvE}$-DNA-Fragmentes führte nicht zu einer Überexpression in $\textit{C. glutamicum}$ 4. Bei Fermentationen mit den $\underline{ilvA}$- und $\underline{ilvBNC}$-Genen enthaltenden rekombinanten $\textit{C. glutamicum}$-Stämmen wurde eine Verdopplung der Isoleucinausscheidung erreicht. Bei Zugabe von Glucose als Substrat fand eine Steigerung von 1 mM auf 3 bis 4 mM Isoleucin statt, bei Zugabe der Synthesevorstufe 2-Hydroxybutyrat von 16 mM auf 36 mM, bzw. mit Stamm DL2 von 37 mM auf 70 mM.