Search

To assess testicular endocrine function in the male donkey (In 5 miniature and 4 standard donkey stallions, peripheral blood concentrations of testosterone (T), estrone (E1) and estrone sulfate (E1S) were determined using radioimmunoassay.There was a highly significant influence of the season (p 0.0001) on the course of all 3 steroids. Values were low in November until January and high in April, May and June. As delineated by the measurement of E1 the breed also had an effect on the expression of seasonality. Mean T concentration (X̅g × SF The data obtained confirm that the donkey belongs to the group of long day breeders. Irrespective of the close phylogenetical relationship the course of E1S concentrations reveals distinct differences between horse and donkey.Even between closely related species established reference values for sex steroids cannot be transferred without verification.ZIEL: Erfassung der endokrinen Hodenfunktion beim Esel (Bei 5 Zwerg- und 4 Normaleselhengsten wurden die Konzentrationen von Testosteron (T), Estron (E1) und Estronsulfat (E1S) mittels radioimmunologischer Verfahren bestimmt.Für die Konzentrationen aller 3 Steroide ergab sich eine hochsignifikante (p 0,0001) Abhängigkeit von der Jahreszeit. Niedrige Werte wurden in den Monaten November bis Januar, Höchstwerte in den Monaten April, Mai, Juni gemessen. Der Verlauf der E1-Konzentrationen wies die Rasse als zusätzlichen Einflussfaktor auf die Ausprägung der Saisonalität aus. Die mittlere T-Konzentration (X̅g × SF Die erhobenen Daten bestätigen den Esel als eine zur Gruppe der „Long Day Breeder“ gehörende Spezies. Unbeschadet der engen phylogenetischen Verwandtschaft ergeben sich hinsichtlich der Produktion von E1S erhebliche Unterschiede zwischen Pferd und Esel.Referenzwerte für Sexualsteroide können auch zwischen nahe verwandte Arten nicht ohne Weiteres übertragen werden.

Diese Untersuchung galt der Entwicklung eines spezifischen Radioimmunoassays (RIA) zur Bestimmung des (Gesamt)-Schafserumleptins und Betrachtung dessen physiologischen Zusammenhänge. Der verwendete Antikörper richtete sich gegen die Partialsequenz des Schafleptins der Aminosäuren 31-44. Der spezifische Tracer und die Standardreihe wurden durch rekombinantes Schafleptin hergestellt. Die Testdurchführung beinhaltete die Abtrennung von Bindungsproteinen und die Denaturierung des Serumleptins mit 0,04 mM DTT (Dithiothreitol), 0,001 % SDS (Natriumdodecylsulfat), 0,001 mM EDTA in einem Tris-HCl Puffer (pH 8) sowie die Erhitzung der Serumproben auf 90°C über 7 Minuten. Die Empfindlichkeit (Sensitivität) des RIAs lag bei 0,4 µg/l, Die Interassayvarianz konnte durchschnittlich mit 2,5% ermittelt werden, die Parallelitätsbestimmung (Intraassayvarianz) ergab eine mittlere Standardabweichung von 5,1 %. Die Spezifität lag bei 84%. Leptin wurde bei neugeborenen Lämmern zu sechs verschiedenen Zeitpunkten innerhalb von 24 Stunden bestimmt. Es ergaben sich deutlich höhere Leptinkonzentrationen im Vergleich zu den bisher berichteten Werten und innerhalb von 24 Stunden signifikant ansteigende Konzentrationen. Der Organismus des Lamms war somit in der frühen neonatalen Periode in der Lage, Leptin unabhängig von der Plazenta zu sezernieren und die Leptinserumkonzentration zu modifizieren. Desweiteren wurde neben Leptin auch folgenden Parameter erhoben und die Beziehung zum Leptin untersucht: Geschlecht, Wurfgröße, Körpergewicht, Umgebungs- und Körpertemperatur und die Stoffwechselparameter: Triglycerid-, Cholesterin-, Blutzucker- und beta-Hydroxybutyratkonzentrationen im Serum. In dieser Arbeit konnte gezeigt werden, dass die gemessenen Leptinspiegeldifferenzen nicht vom Körpergewicht bzw. von der Fettzunahme abhängig waren. Auch war eine Abhängigkeit weder in Bezug auf das Geschlecht noch auf die Wurfgröße zu belegen. Die 74 Lämmer konnten aufgrund der Außentemperatur in vier verschiedene Gruppen eingeteilt werden, deren Leptinserumspiegel sich signifikant voneinander unterschieden. Der Einfluss der Stalltemperatur ließ sich ebenfalls direkt am Leptinspiegel unabhängig von der Gruppeneinteilung in der Korrelationsanalyse zeigen, und auch die Körpertemperatur als Konsequenz aus Umwelttemperatur und Thermogenese zeigte eine Korrelation zu den Serumleptinspiegeln. Daraus kann man auf eine Funktion des Leptins hinsichtlich der Thermoregulation bereits im frühen Neugeborenenalter schließen. Des Weiteren konnte diese Arbeit einen Zusammenhang zwischen den Leptinserumspiegeln und den Blutfetten Triglyceriden und Cholesterin aufzeigen, deren Konzentrationen ebenfalls eine Gruppenabhängigkeit aufwiesen. Erhöhte Serumtriglyceride stellen Energiespeicher dar, die erst durch einen hochregulierten (Gesamt)- eptinspiegel für die beta-Oxidation zur Energiegewinnung zur Verfügung stehen. Auch diese intakte Regulation konnte hiermit im frühen Alter bei neugeborenen Lämmern verdeutlicht werden. Ein weiterer lebenswichtiger Energieträger ist der Blutzucker. Eine direkte Regulation durch das Leptin ist durchaus denkbar, eine indirekte Regulation über Hormone wie das Insulin bereits bewiesen. Es zeigte sich beim Lamm eine signifikante positive Korrelation sechs Stunden postnatal. Wegen der Komplexität der Blutzuckerregulation konnte aber der Einfluss des Leptins zu allen anderen Zeitpunkten nicht verdeutlicht werden. Besonders die Stressregulation einer Hypoglykämie bei subthermoneutralen Temperaturen, die bei vielen der Lämmer postnatal vorlag, erfordert einen akuten nervös-hormonalen Synergismus mit einer höchstens modifizierenden Funktion des Leptins. Ein weiterer für die Notfallenergieversorgung wichtiger Träger ist das beta-Hydroxybutyrat, das ein Zeichen für einen Energiemangel darstellt und proportional dazu ansteigt. Bisher wurden nur wenige Untersuchungen hinsichtlich eines Zusammenhangs zum Leptin durchgeführt, aber die Hypothese über eine negative Korrelation zwischen der Leptin- und der beta-Hydroxybutyratkonzentration bestätigte sich zu den beiden gemessenen Zeitpunkten 12 und 24 Stunde postnatal. In this study a specific leptin radioimmunoassay (RIA) was established and we investigated the changes of serum leptin in the newborn lamb and possible physiological associations. An antiserum (rabbit) produced against a partial sequence of ovine leptin (31-44) was used. A specific tracer and standards were prepared with recombinant ovine leptin (DSL-Sinsheim). Before measurement, serum samples were denatured in a Tris-HCl buffer, pH 8.0, containing 0.04 mM dithiothreitol (DTT), 0.001 mM EDTA, and 0.001 % sodium dodecylsulfate (SDS). To dissociate leptin from leptin-binding protein and to unfold it, samples were heated to 90°C for 7 minutes. The sensitivity of the assay was 0.4 µg/L, specificity was 84%, intra- and interassay coefficients of variation were 5.1 % and 2.5 % respectively. Leptin was measured from 74 newborn lambs at six different times up to 24 hours postnatally. In comparison to other studies the measured values of leptin were higher. The change in log (leptin) during the first 24 h was highly significant (p

Diese Untersuchung galt der Entwicklung eines spezifischen Radioimmunoassays (RIA) zur Bestimmung des (Gesamt)-Schafserumleptins und Betrachtung dessen physiologischen Zusammenhänge. Der verwendete Antikörper richtete sich gegen die Partialsequenz des Schafleptins der Aminosäuren 31-44. Der spezifische Tracer und die Standardreihe wurden durch rekombinantes Schafleptin hergestellt. Die Testdurchführung beinhaltete die Abtrennung von Bindungsproteinen und die Denaturierung des Serumleptins mit 0,04 mM DTT (Dithiothreitol), 0,001 % SDS (Natriumdodecylsulfat), 0,001 mM EDTA in einem Tris-HCl Puffer (pH 8) sowie die Erhitzung der Serumproben auf 90°C über 7 Minuten. Die Empfindlichkeit (Sensitivität) des RIAs lag bei 0,4 µg/l, Die Interassayvarianz konnte durchschnittlich mit 2,5% ermittelt werden, die Parallelitätsbestimmung (Intraassayvarianz) ergab eine mittlere Standardabweichung von 5,1 %. Die Spezifität lag bei 84%. Leptin wurde bei neugeborenen Lämmern zu sechs verschiedenen Zeitpunkten innerhalb von 24 Stunden bestimmt. Es ergaben sich deutlich höhere Leptinkonzentrationen im Vergleich zu den bisher berichteten Werten und innerhalb von 24 Stunden signifikant ansteigende Konzentrationen. Der Organismus des Lamms war somit in der frühen neonatalen Periode in der Lage, Leptin unabhängig von der Plazenta zu sezernieren und die Leptinserumkonzentration zu modifizieren. Desweiteren wurde neben Leptin auch folgenden Parameter erhoben und die Beziehung zum Leptin untersucht: Geschlecht, Wurfgröße, Körpergewicht, Umgebungs- und Körpertemperatur und die Stoffwechselparameter: Triglycerid-, Cholesterin-, Blutzucker- und beta-Hydroxybutyratkonzentrationen im Serum. In dieser Arbeit konnte gezeigt werden, dass die gemessenen Leptinspiegeldifferenzen nicht vom Körpergewicht bzw. von der Fettzunahme abhängig waren. Auch war eine Abhängigkeit weder in Bezug auf das Geschlecht noch auf die Wurfgröße zu belegen. Die 74 Lämmer konnten aufgrund der Außentemperatur in vier verschiedene Gruppen eingeteilt werden, deren Leptinserumspiegel sich signifikant voneinander unterschieden. Der Einfluss der Stalltemperatur ließ sich ebenfalls direkt am Leptinspiegel unabhängig von der Gruppeneinteilung in der Korrelationsanalyse zeigen, und auch die Körpertemperatur als Konsequenz aus Umwelttemperatur und Thermogenese zeigte eine Korrelation zu den Serumleptinspiegeln. Daraus kann man auf eine Funktion des Leptins hinsichtlich der Thermoregulation bereits im frühen Neugeborenenalter schließen. Des Weiteren konnte diese Arbeit einen Zusammenhang zwischen den Leptinserumspiegeln und den Blutfetten Triglyceriden und Cholesterin aufzeigen, deren Konzentrationen ebenfalls eine Gruppenabhängigkeit aufwiesen. Erhöhte Serumtriglyceride stellen Energiespeicher dar, die erst durch einen hochregulierten (Gesamt)- eptinspiegel für die beta-Oxidation zur Energiegewinnung zur Verfügung stehen. Auch diese intakte Regulation konnte hiermit im frühen Alter bei neugeborenen Lämmern verdeutlicht werden. Ein weiterer lebenswichtiger Energieträger ist der Blutzucker. Eine direkte Regulation durch das Leptin ist durchaus denkbar, eine indirekte Regulation über Hormone wie das Insulin bereits bewiesen. Es zeigte sich beim Lamm eine signifikante positive Korrelation sechs Stunden postnatal. Wegen der Komplexität der Blutzuckerregulation konnte aber der Einfluss des Leptins zu allen anderen Zeitpunkten nicht verdeutlicht werden. Besonders die Stressregulation einer Hypoglykämie bei subthermoneutralen Temperaturen, die bei vielen der Lämmer postnatal vorlag, erfordert einen akuten nervös-hormonalen Synergismus mit einer höchstens modifizierenden Funktion des Leptins. Ein weiterer für die Notfallenergieversorgung wichtiger Träger ist das beta-Hydroxybutyrat, das ein Zeichen für einen Energiemangel darstellt und proportional dazu ansteigt. Bisher wurden nur wenige Untersuchungen hinsichtlich eines Zusammenhangs zum Leptin durchgeführt, aber die Hypothese über eine negative Korrelation zwischen der Leptin- und der beta-Hydroxybutyratkonzentration bestätigte sich zu den beiden gemessenen Zeitpunkten 12 und 24 Stunde postnatal., In this study a specific leptin radioimmunoassay (RIA) was established and we investigated the changes of serum leptin in the newborn lamb and possible physiological associations. An antiserum (rabbit) produced against a partial sequence of ovine leptin (31-44) was used. A specific tracer and standards were prepared with recombinant ovine leptin (DSL-Sinsheim). Before measurement, serum samples were denatured in a Tris-HCl buffer, pH 8.0, containing 0.04 mM dithiothreitol (DTT), 0.001 mM EDTA, and 0.001 % sodium dodecylsulfate (SDS). To dissociate leptin from leptin-binding protein and to unfold it, samples were heated to 90°C for 7 minutes. The sensitivity of the assay was 0.4 µg/L, specificity was 84%, intra- and interassay coefficients of variation were 5.1 % and 2.5 % respectively. Leptin was measured from 74 newborn lambs at six different times up to 24 hours postnatally. In comparison to other studies the measured values of leptin were higher. The change in log (leptin) during the first 24 h was highly significant (p

Der Nachweis der Anti-dsDNA-Autoantikörper im Serum ist von hoher diagnostischer Relevanz beim Systemischen Lupus Erythematodes (SLE). Die eingesetzten Methoden zu ihrer Bestimmung weisen jedoch mitunter große qualitative Unterschiede auf. Aus diesem Grunde wurden vier verschiedene kommerzielle ELISA (Farrzyme, Bindazyme, Orgentec und Varelisa), der Farr- Radioimmunoassay (Farr-RIA), und der Crithidia luciliae- Immunfloureszenz-Test (CLIF) hinsichtlich ihrer diagnostischen Wertigkeit beim SLE im Vergleich zu Kontrollgruppen, bestehend aus Patienten mit anderen entzündlichen Erkrankungen untersucht. Eine hohe Spezifität für den SLE wiesen insbesondere der CLIF mit 99% und der Farr-RIA mit 88% auf, wobei der Farr-RIA auch noch eine hohe diagnostische Sensitivität von 85% hatte, während der CLIF deutlich weniger sensitiv war (68%). Die diagnostische Spezifität der vier kommerziellen ELISA-Tests, die zwischen 71 und 78% lag, war diesen beiden Tests merklich unterlegen. Die Sensitivität von 3 der 4 ELISA-Tests war jedoch vergleichbar hoch bis höher als im Farr-RIA. Der Farrzyme-ELISA hatte eine etwas höhere diagnostische Spezifität (78%), aber dafür auch eine niedrigere Sensitivität von 70% als die anderen ELISAs. Die mit dem Farrzyme-ELISA, Farr- RIA und CLIF gemessenen Anti-dsDNA-Antikörper-Spiegel waren mit einer Nierenbeteiligung und niedrigen Komplementspiegeln C3 und C4 assoziiert. Für diese 3 Tests, sowie 2 weitere ELISAs (Bindazyme und Orgentec) konnte ein Zusammenhang mit der Krankheitsaktivität gezeigt werden. Die Ergebnisse bestätigen, dass sich die verschiedenen Tests qualitativ unterscheiden. Für die Diagnose eines SLE sind insbesondere der CLIF und der Farr-RIA von großer Bedeutung. Positive Testergebnisse im CLIF und Farr-RIA finden sich fast ausschließlich bei SLEPatienten. Da in den Routine-Laboratorien hauptsächlich ELISAs zum Nachweis von AntidsDNA- Antikörpern eingesetzt werden, sollte bei unklarer Diagnose ein positives Testergebnis immer im CLIF und/oder Farr-RIA bestätigt werden. Die hochempfindlichen ELISAs können bei gesicherter SLE- Diagnose zum Monitoring der Krankheitsaktiviät eingesetzt werden., The detection of anti-dsDNA antibodies plays an outstanding role in the diagnosis of systemic lupus erythematosus (SLE). However, the quality of methods used for SLE diagnosis may differ greatly. For this reason, we compared the diagnostic value of four commercial ELISAs (Farrzyme, Bindazyme, Orgentec and Varelisa) with that of the Farr radioimmunoassay (Farr- RIA) and the Crithidia luciliae immunofluorescence test (CLIF). Each was used to test serum samples from SLE patients versus control groups of patients with other inflammatory diseases. CLIF and Farr-RIA proved to be highly specific for SLE (99% and 88%, respectively). The diagnostic sensitivity of Farr-RIA was high (85%), whereas CLIF was significantly less sensitive (68%). The diagnostic specificity of the four ELISAs was lower (71% to 78%). In contrast, the diagnostic sensitivity of 3 out of 4 ELISAs was comparable or higher than that of Farr-RIA. The Farrzyme ELISA had slightly greater diagnostic specificity (78%), but was less sensitive (70%) than other ELISAs. Anti-dsDNA antibody detection by Farrzyme ELISA, Farr-RIA and CLIF was associated with renal involvement and low levels of complement components C3 and C4. Anti-dsDNA antibodies measured by these threeassays and two ELISA methods (Bindazyme and Orgentec) were related to disease activity. These results confirm that there are notable quality differences between the studied antidsDNA antibody assays. CLIF and Farr-RIA are particularly valuable for SLE diagnosis. With CLIF and Farr-RIA, positive anti-dsDNA antibody results were obtained almost exclusively in SLE patients. Consequently, positive anti-dsDNA antibody results by the ELISA tests most commonly used in routine laboratories should be confirmed by CLIF and/or Farr-RIA to establish the definitive diagnosis of SLE. The ELISA methods are highly sensitive and can be used to monitor disease activity in patients with an already confirmed diagnosis of SLE.

Ziel vorliegender Arbeit war es, zwei Radioimmunoassays (RIAs) zur Bestimmung von Pregnancy Associated Glycoproteins (PAGs) im Blutplasma von Rindern zur frühen Trächtigkeitsdiagnose zu etablieren und diese auf ihre Aussagekraft und Praktikabilität unter den hier gegebenen Bedingungen zu überprüfen. Gleichzeitig sollten weitere Erkenntnisse zum spätembryonalen Fruchttod sowie zur korrekten Wahl des Besamungs(KB)-Zeitpunktes erhalten werden, letzteres anhand der Messung von Progesteron. Bei den beiden PAG-RIAs handelte es sich um boPAG1-RIA497 (RIA497) und boPAG1-RIA706 (RIA706). Bei ihnen konkurrieren bovines PAG (boPAG) aus der Probe/Standard mit 125J markiertem boPAG1 (boPAG1-Tracer) um Bindungsstellen an polyklonalen Antikörpern, die bei RIA497 gegen boPAG1 und bei RIA706 gegen caprines PAG(caPAG)55+62 kDa gerichtet sind. RIA497 wird im Labor Beckers (Liege, Belgien) routinemäßig durchgeführt (Zoli et al. 1992b); mit RIA706 liegen bisher nur wenige Erfahrungen vor. Die für die Etablierung der Methodik notwendigen spezifischen Reagenzien wurden vom Labor Beckers gestellt. Unbeschadet der dort erfolgten ersten Einarbeitung der Autorin ergaben sich erhebliche Probleme bei der Einrichtung der beiden RIAs, die sich in einer unbefriedigenden Bindung des boPAG1-Tracers an die beiden Antikörper zeigten. In den dazu durchgeführten Untersuchungen konnte das Problem nicht abschließend gelöst werden. Die beiden RIAs erfüllten nur für die Messungen der Proben aus den Tierkollektiven 1 und 2 (TK 1 und TK 2) die analytischen Qualitätskriterien, bei Messung der Proben aus Tierkollektiv 3 (TK 3) ist aufgrund der sehr geringen Bindung des boPAG1-Tracers von einer Überschätzung der gemessenen PAG-Werte auszugehen, die qualitative Aussage ist jedoch als richtig zu bezeichnen. Die Untersuchungen erfolgten an drei Tierkollektiven. TK 3 (n = 7) diente zur Erfassung des Verlaufs der PAG-Konzentrationen während der Trächtigkeit, bei den Tieren aus TK 2 (n = 197, Klein- und Mittelbetriebe) und TK 1 (n = 296, Großbetriebe) sollte die Anwendbarkeit der beiden RIAs zur laborgestützten Graviditätsdiagnostik überprüft werden. Dazu wurden die PAG-Konzentrationen am Tag der KB (1. Beprobung) sowie 29 – 31 Tage danach (2. Beprobung) gemessen. Die 2. Beprobung diente zur Diagnose „tragend“/„nicht tragend“ und wurde in TK 1 mit dem Ergebnis einer transrektalen Ultraschalluntersuchung (TRUS) zum selben Zeitpunkt, in TK 2 mit einer später durchgeführten transrektalen Palpation überprüft. Zur Feststellung embryonaler Mortalität erfolgte eine 3. Beprobung 39 – 53 Tage nach der KB bei zum Zeitpunkt der 2. Beprobung als tragend eingestuften Tieren. Da einige Kühe des TK 1 sehr früh nach der Kalbung besamt worden waren und zu erwarten war, dass zum Zeitpunkt der 2. Beprobung noch Rest-PAG aus der letzten Trächtigkeit die Testergebnisse verfälscht, wurden die Tiere in Abhängigkeit von dem zu erwartenden Rest-PAG-Gehalt in die Gruppen A (kein Rest-PAG), B (möglicherweise Rest-PAG) und C (Rest-PAG vorhanden) eingeteilt. Bei den trächtigen Tieren des TK 3 entsprach der Verlauf der PAG-Konzentrationen den Erwartungen, wobei die mit RIA706 erhaltenen Werte generell höher lagen als die mit RIA497 gemessenen Konzentrationen. Trotz Nachweis von Rest-PAG in Gruppe C konnte in allen Gruppen des TK 1 ein signifikanter Unterschied in der PAG-Konzentration zwischen den mittels TRUS als tragend und als nicht tragend diagnostizierten Tieren festgestellt werden. Zur Charakterisierung der Zuverlässigkeit beider RIAs hinsichtlich ihrer Anwendung als Trächtigkeitsdiagnostikverfahren wurde mithilfe einer ROC-Analyse der Grenzwert (cut off-Punkt) ermittelt, bei dem die höchstmögliche Anzahl von Tieren vom Test als „korrekt tragend“ (Sensitivität) bzw. „korrekt nicht tragend“ (Spezifität) erkannt wurde. Beide RIAs stellten sich mit einer Sensitivität von 93,9 (RIA497) bzw. 92,9 % (RIA706) und einer Spezifität von 85,3 (RIA497) bzw. 94,1 % (RIA706) als in dieser Hinsicht zuverlässig heraus (TK 1), wobei RIA706 aufgrund der allgemein höheren Spezifität für die frühe Trächtigkeitsdiagnose geeigneter erscheint als RIA497. Ein Ausschluss der Kühe der Gruppe C (KB 40. – 60. Tag post partum) hatte – insbesondere bei RIA706 – nur einen sehr geringen bzw. praktisch keinen Einfluss auf Sensitivität bzw. Spezifität. Das Ergebnis bestätigte sich bei Einbeziehung von TK 2 in die Berechnungen. Die Progesteron-Bestimmung zum Zeitpunkt der KB zeigte, dass 6,9 bzw. 10,9 % der Tiere in TK 1 bzw. TK 2 nicht zum korrekten Zeitpunkt zur KB vorgestellt worden waren. Spätembryonale Mortalität konnte bei 7 % der Tiere des TK 1 festgestellt werden, bei einem Tier des TK 3 konnte Fruchttod anhand des PAG-Konzentrationsverlaufs dokumentiert werden. Die durchgeführten Untersuchungen lassen das hohe Potential der PAG-Analytik für die Graviditätsdiagnostik erkennen. Die bei Etablierung der beiden RIAs auftretenden methodischen Probleme stehen einer routinemäßigen Anwendung jedoch entgegen. Aim of the present study was to establish two Pregnancy Associated Glycoprotein-radioimmunoassays (PAG-RIAs) for early pregnancy diagnosis in cattle and to evaluate their reliability and practicability under local field conditions. In addition it was attempted to obtain information on embryonic mortality and, by determing progesterone, the correct choice of the day of artificial insemination (AI). In both RIAs bovine PAG (boPAG) in the sample or standard compete with 125J labelled boPAG1 (boPAG1-tracer) for binding sites of a polyclonal antibody. In boPAG1-RIA497 (RIA497) the antiserum is directed against boPAG1, in boPAG1- RIA706 (RIA706) against caprine PAG (caPAG)55+62 kDa. While RIA497 is routinely performed by the “laboratory Beckers” (Liege, Belgium), using the method Zoli et al. (1992b), only little experience has been gained so far with RIA706. To establish the two RIAs the essential reagents (antisera 497 and 706, boPAG1) were provided by the laboratory Beckers. Irrespectively of the training given in the laboratory Beckers, problems associated with the binding of boPAG1-tracer with the two antisera became apparent. The problem could only partially be solved and analytical reliability could only be secured for the analysis of samples from collectives 1 and 2, while the data obtained for collective 3 are less quantitative but qualitative. Investigations were performed on three animal collectives. Collective 3 (n = 7) was used to observe PAG-concentrations throughout pregnancy, collective 2 (n = 197, small farms) and collective 1 (n = 296, large farms) were used, to test for the aptitude and reliability of the two RIAs for diagnosing early pregnancy. The first sample was taken on the day of AI, the second sample 29 to 31 days later. PAG-concentrations measured in the second sample were used as parameters for pregnancy diagnosis. Transrectal ultrasonography (TRUS) at the time of blood sampling (collective 1) or transrectal palpation at a later point of time (collective 2) were used as confirmatory methods. To assess embryonic mortality a third sample was collected 39 – 53 days after AI from those animals found pregnant at the second sampling. As insemination of cows from collective 1 started very early after calving (from day 40 post partum onward), it was assumed that PAGs from the preceding pregnancy could distort pregnancy diagnosis. According to the PAG-concentration expected at the second sampling, cows were assigned to the following groups: A (no residual PAG), B (residual PAG likely), C (residual PAG). PAG-concentrations in collective 3 were as expected: Increasing concentrations were detectable by both RIAs, and invariably higher concentrations were measured throughout pregnancy by RIA706. In spite of the residual PAG detected in cows of group C there were significant differences in PAG-concentration between cows diagnosed pregnant and non pregnant by TRUS. To characterize both RIAs concerning the ability to differentiate between pregnant and non pregnant animals, the cut off-value with the highest rate of correct pregnant (sensitivity) and correct non pregnant animals (specifity) was calculated by Receiver Operating Characteristic(ROC)-analysis. Both RIAs proved to be reliable concerning early pregnancy diagnosis (RIA497: sensitivity 93.9 %, specifity 85.3 %; RIA706 sensitivity 92.9 %, specifity 94.1 %). RIA706 proved to be more suitable for pregnancy diagnosis than RIA497 because of higher specifity. Excluding group C (AI between 40 – 60 days after calving) from calculation did hardly influence sensitivity and specifity. These results were confirmed by including collective 2 in the statistics. Late embryonic mortality was detectable in 7 % of the cattle in collective 1 and could be documented in one cow of collective 3. Measuring progesterone on the day of AI illustrated that 6.9 % respectively 10.9 % of the animals of collective 1 and 2 were inseminated at an inadequate point of time. These data show the high potential of analyzing PAG for early pregnancy diagnosis, but the methodical problems that appeared militate against applying both tests routinely in this laboratory.

When defendants are confronted with evidence of cannabinoids in their blood suggesting consumption of cannabis they sometimes argue that this could only be due to a passive exposure. The small number of controlled studies available showed that tetrahydrocannabinol (THC), the active ingredient of cannabis, was actually found in the blood after passive exposure to cannabis smoke. The resulting blood concentrations were dependent on the applied THC doses and the size of the room in which the passive exposure occurred. However, the quantitative data indicated in the publications of the 1980s cannot be fully compared with the results of modern analytical methods. Due to the rapid distribution of THC in the body, which occurs also after passive exposure to low doses, the THC concentration in serum to be expected in a blood sample taken 1 hour after exposure is less than 1 ng/mL. For assessment of an alleged passive exposure, the metabolic THC-carboxylic acid, which is excreted more slowly, must also be taken into account. After passive exposure, similar and very low serum concentrations of THC and THC-carboxylic acid are to be expected (2 ng/mL), while higher blood levels suggest the deliberate consumption of a psychoactive dose.

Evaluating methods of hormone measurement in different specimens of male parrots in order to assess their reproductive status and stress axis.Cockatiels and rose-ringed parakeets were chosen as psittaciforme representatives and their endocrine profiles were examined. In various pre-experiments, suitable techniques for the determination of testosterone in plasma, saliva and faeces of male parrots were established. Before analysing the samples by enzyme immunoassay, blood and faeces were extracted using diethyl ether, while saliva could be tested without extraction. Based on the excretion of mainly conjugated testosterone metabolites, parrots' faecal samples were also hydrolysed with β-glucuronidase/arylsulfatase before extraction. In addition, the levels of the stress hormone corticosterone were determined by radioimmunoassay in order to assess possible relationships between stress and the secretion of testosterone.The examined psittacine species displayed different seasonal secretion patterns for both testosterone and corticosterone. Cockatiels had maximum plasma testosterone levels in February, in contrast, rose-ringed parakeets showed highest concentrations in November. As a consequence of cumulative excretion, both species showed much higher faecal than plasma testosterone concentrations. In rose-ringed parakeets, the levels of corticosterone in plasma were exceptionally high compared to the cockatiels.According to this study, we have been able to establish suitable methods for testosterone analysis in blood and faeces of cockatiels and rose-ringed parakeets, supporting the assessment of their reproductive status. At present saliva does not appear to be an ideal medium for reliable hormone level measurement, thus further investigations are required concerning this subject.By means of process analysis, it will be possible to detect increasing testosterone levels and/or pathological alterations, which could be considered in breeding programmes.

PDE5 inhibitors represent the gold standard in the medical therapy of erectile dysfunction (ED). Promising results have been published regarding further urological indications such as treatment of ureteral colic. The aim of the present study was to evaluate the functional effects of the PDE5 inhibitors sildenafil (SIL), vardenafil (VAR), and tadalafil (TAD) on tissue tension and cyclic nucleotide levels of human ureteral smooth muscle segments in vitro.Relaxant responses of human ureteral smooth muscle were investigated in vitro using the organ bath technique. Cyclic nucleotides cAMP and cGMP were determined by specific radioimmunoassays.Relaxing effects of ureteral muscle tension were observed in the rank order VARSILTAD. While only VAR significantly elevated cGMP levels 3.3-fold over control, no increase for cAMP levels was observed.Our data provide evidence that cGMP is involved in the control of the normal function of the smooth musculature of the human ureter. Our findings suggest the potential of using selective inhibitors of PDE isoenzymes in the treatment of ureteral colic.

Neither the measured stress-hormones, nor Beta-Endorphin have been influenced by music therapy. Music therapy should be initiated before the beginning of chemotherapy, preferably shortly after the operation. The greatest profit of an accompanying music therapy is between the chemotherapy courses, because the whole energy of the patient during chemotherapy is directed to questions, worries and practical aspects.

Only a few cases of specific tuberculous infections of total hip arthroplasties have been published. We report the case of a 66-year-old male patient who received a cementless total hip arthroplasty due to osteoarthritis of the left hip in 1990. Four years later, revision arthroplasty with a Wagner revision stem was performed because of aseptic loosening. In 1995 revision of a loosened acetabular cup was necessary. In 1996 we saw the patient for the first time in our outpatient unit. He complained of increasing pain in the region of the left hip. X-rays showed loosening of the Wagner stem. Aspiration of the synovial fluid of the left hip revealed an infection with mycobacterium tuberculosis (radioimmunoassay). There were no signs of tuberculous infection in the patient's history. Treatment consisted of removal of the prosthesis followed by antituberculosis chemotherapy for 12 months with rifampicin, ethambutol, isoniazid, and pyrazinamide. In April 2001 revision of the left hip joint and implantation of a MRP titanium revision stem and reconstruction of the acetabulum with an acetabular reconstruction ring was done. Until today the patient exhibits no signs of recurrence of the tuberculous infection.

In der vorliegenden Studie wurde ein Radioliganden-Rezeptor-Bindungstest zum Nachweis des Plasma-Leptin entwickelt und seine Praktikabilität im Vergleich zur Radioimmunologischen Bestimmung überprüft. Zur Gewinnung von AK gegen Leptin wurden Kaninchen mit rekombinantem Leptin der Maus immunisiert. Alle Tiere antworteten mit einer positiven Immunreaktion. Das Antiserum mit dem höchsten Titer kam im Radioimmunoassay in einer Endverdünnung von 1:28000 zum Einsatz, die Kreuzreaktion mit humanem Leptin belief sich auf 100%. Die IC-50 lag um 30 fmol/tube(350µl) humanem Leptin. In der Durchführung der RBT?s kamen Zellen der Erythroleukämie-Zelllinie K562, die sich durch einen besonders hohen Besatz von Leptinrezeptoren auszeichnen, zur Anwendung. 50% Verdrängung des Radioliganden wurden bei ca. 10 fmol/100µl Leptin beobachtet. Mit beiden Nachweismethoden wurde eine positive Beziehung zwischen BMI und Leptinkonzentration im Plasma gefunden. Die Analyse der Meßwerte in einer limitierten Zahl von Patienten deutet darauf hin, daß mit beiden Verfahren vergleichbare Meßergebnisse erzielt werden. Dies läßt, mit Einschränkung, den Schluß zu, daß mit beiden Methoden das biologisch verfügbare Hormon gemessen wird. Angesichts ähnlicher Leistung bei weitaus höherer Praktikabilität des RIA bleibt die Anwendung des RBT speziellen Studien der Rezeptorphysiologie vorbehalten.

Ghrelin a novel peptide consisting of 28 amino acids was first identified in the stomach in 1999. It is mainly produced in endocrine cells of the human gastric mucosa, but it was also found in several other tissues e. g. in the pituitary, the hypothalamus and the pancreas. The functional receptor belongs to the family of the 7-transmembrane G-protein receptors and is predominantly detected in the pituitary and at lower levels in hypothalamic nuclei, the stomach, heart, lungs, kidneys, gut, the adipose and many other tissues. According to the widespread distribution of the peptide and its receptor, ghrelin has multiple biological effects: it stimulates the release of growth hormone in the pituitary and induces a rise in the serum concentration of ACTH, cortisol, catecholamines and prolactin. Ghrelin causes an increase of food intake and body weight by stimulating the production of neuropeptide Y (NPY) and agouti-related protein (AGP) in the nucleus arcuatus. It further leads to elevated concentrations of plasma glucose. A physiological antagonism between ghrelin and GLP-1 in the hypothalamic regulation of appetite is being discussed. The basic serum level of ghrelin depends on the state of nutrition and is negatively correlated with the body-mass-index. It shows a certain pattern of variation before and after food intake with a preprandial increase and a postprandial decrease. Ghrelin modulates gastric acid secretion and the gastrointestinal motility via vagal cholinergic pathways. The discovery of ghrelin definitely contributes to the understanding of the growth-hormone secretion and of the regulation of appetite and food intake.

Formal and clinical comparison of a new 3 (rd) -generation-Tg-IRMA (3-G-IRMA; Dynotest Tg-plus) with a conventional Tg-IRMA (3-G-IRMA; SELco Tg-assay) for patients with differentiated thyroid carcinoma. In addition we evaluated, if thyroglobulin (Tg) levels above a specific threshold concentration indicate the need for further investigations for residual disease.Tg concentration of 105 sera of 93 consecutive patients with a differentiated thyroid cancer was determined with both assays and compared at different cut-off values (Dynotest Tg-plus: 0.2, 1, 2 ng/ml; SELco Tg-assay: 0.5, 1, 2 ng/ml) with the clinical results in respect to the corresponding TSH concentration.Tg concentration did not show any significant difference (SELco Tg-assay 0.5 ng/ml, Dynotest Tg-plus 0.2 ng/ml). The Tg-values of both assays correlated with 97%. However, correlation of recovery in both assays was small (40%). The sensitivities and specificities of both assays at different cut-offs and TSH values did not reveal significant differences. In patients with TSH concentration30 micro U/ml the functional assay sensitivity was superior to arbitrary cut-offs in the decision to start further evaluations.In our study neither formal nor clinical significant differences between two Tg-assays were found. In a hypothyroid patient (TSH30 micro U/ml, Tg concentration exceeding the functional assay sensitivity) further investigations for residual disease are warranted. Higher thresholds are of limited value, due to an unacceptably high rate of false negative results.

The detection of TSH-receptor antibodies (TRAb) in patients with Graves' disease is routinely used in nuclear medicine laboratories. This determination has been possible for approximately 3 years with a second generation human TRAb assay. Studies showed that this TRAb determination is diagnostically more sensitive compared to established, porcine TRAb assays.The aim of our study was to investigate, based on a ROC analysis, whether TRAb determination with the new, second generation assay allows a dependable statement about probability of occurrence of relapse after radioiodine therapy in patient suffering from Graves' disease.57 patients were examined with the DYNOtest TRAKhuman (BRAHMS Diagnostica AG, Hennigsdorf) directly before and six months after therapy with radioiodine (dose: 150 Gy). A ROC-analysis was performed to determine positive/negative predictive values depending on different cut-off values.Whereas 21/57 patients became eu- or hypothyroid after six months, 36/57 patients relapsed. Non-relapsed patients showed a significant lower median TRAb titer (4.2 IU/l vs. 19.2 IU/l; p0.05) compared to relapsed patients. But the positive predictive value conducted 63 and 66, 62 and 66 as well as 63 and 69% (before and after therapy) linked with the cut-offs 1.0, 1.5, and 2.0 IU/l. So it was in areas also achieved by the first generation porcine radio receptor assay.An increased sensitivity is achieved undoubtedly with the new DYNOtest TRAKhuman in the diagnostic of Graves' disease. It is not held over the established radio receptor assay concerning the positive predictive value for relapsing patients.

The concentrations of lactogenic hormones (prolactin--PRL, growth hormone--GH, insulin-like growth factor I--IGF-I) and steroid hormones (progesterone--PG, estradiol--E2) were determined by RIA in the blood plasma of 8 lactating ewes (3 with twins) and compared with that of 3 non-lactating cycling ewes of the same age. All animals live in a flock of 30 Awassi sheep under identical conditions in Syria. The lactation period (192 +/- 25 days) is divided to a suckling period (until day 63) and a hand milking period (2 fold daily) with different levels of milk production (near 2 litres/day in the former, decreasing from 0.8 to 0.1 litre/day in the latter). During the suckling period the concentrations of steroid hormones in the blood plasma are lower, these of lactogenic hormones are higher of lactating than of non-lactating ewes. During the milking period only the concentrations of E2, PRL and IGF-I in the blood plasma of lactating animals are lower than in non-lactating ewes. But, during this time more and more seasonal influences (increasing day length and temperature) overwhelm the influence of lactation on the hormone secretion. Suckling of twins is accompanied with higher levels of E2, PRL and IGF-I in the blood plasma of their mothers than suckling of single lambs. During the lactation period a strong correlation exists between milk yield and the level of GH (r = 0.85) and IGF-I (r = 0.71), a smaller correlations to the level of E2 (r = 0.49) in the blood plasma of the lactating ewes. During the suckling period the milk yield is influenced positively by PRL (r = 0.77) and GH (r = 0.68), but negatively by PG (r = -0.76). During the milking period the milk yield is determined extensively by the level of IGF-I (r = 0.89) in the blood plasma. The concentrations of the analyzed hormones in the blood plasma correlate always positively together.

The university hospital Freiburg intends to establish step by step a total quality management system (TQMS) in all facilities with an external certification as its final aim. This has been reached already in the central laboratory. Therefore, it is effective for the department of nuclear medicine to do the same for its own lab specialized in thyroid hormones. The TQMS has been built up within six months on the basis of DIN EN ISO 9001:2000. This internationally accepted standard is of uttermost economical importance for an institution situated near the French and Swiss border. This review describes the procedure in detail. Responsible for the effort were the engagement of the coworkers in the lab as well as an adequate choice of the external adviser and the authority for certification. The procedure is formalized to a high degree and much understanding for analytic thinking and systematization is needed. Now it remains to be seen, if the desired effect (increased understanding for quality within the department, more efficient performance of the lab, better acceptance by the clients) will arise.

In a prospective study, thyroid metabolism in 102 patients undergoing diagnostic coronary angiography was investigated, stratified for thyroid morphology. The thyroid function serum parameters "TT3, rT3, TT4, fT4 and TSH" and the urinary iodine excretion were measured before and three weeks after diagnostic intraarterial administration of the iodine-containing contrast agent. Only patients with euthyroid function were included in order to answer the questions whether or not the administration of non-ionic iodine containing contrast medium leads to significant thyroid function changes in euthyroid patients and whether thyroid morphology is a prognostic factor for the risk of developing hyperthroidism. Serum concentrations of thyroid autoantibodies (TPO-Ab, Tg-Ab, TSH-receptor-Ab) were measured and thyroid ultrasound was performed. According to the ultrasound findings, 4 morphologic groups were formed: normal thyroid glands (n = 37), normal sized but nodular glands (n = 16), diffuse goiter (n = 15) and nodular goiter (n = 34). Twenty-five patients were positive for Tg-Ab; TPO-Ab were found in 13 patients. TSH-receptor-Abs were not detected in all patients. TT3 levels did not significantly change after iodine application (p = 0.30). TT4 and fT4 levels showed significantly different alterations in the 4 groups (fT4 p0.001). The amount of iodine given did not influence alteration of serum concentrations of TSH (p = 0.67), TT3 (p = 0.68), TT4 (p = 0.37), fT4 (p = 0.92) and rT3 (p = 0.81). Elevated levels of urinary iodine excretion correlated with the amount of contrast medium given (p = 0.087). Albeit there was a high number of nodular transformed glands and goitrous patients included, and our cohort was recruited in an iodine deficient area, we did not observe hyperthyroidism in any patient. However, thyroid function parameters are significantly altered after coronary angiography independent of antibody status and the amount of contrast agent given, but dependent on thyroid morphology.