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In dieser Arbeit wurden acht Gene quantitativ mit Real-Time PCR auf DNA- und RNA-Ebene untersucht. Sieben dieser Gene liegen auf dem langen Arm des Chromosoms 20 (ADA, AIB1, BCAS1, PFDN4, PTK6, PTPN1, ZNF217). Zusätzlich wurde das schon sehr intensiv untersuchte Gen Her2/neu (Chromosom 17q12) mitbestimmt, um eventuelle Zusammenhänge mit Genen der Region 20q abzuklären. Diese Arbeit hatte zum Ziel, herauszufinden, ob die ausgewählten Gene verantwortlich für die Amplifikation der Region 20q13 sind, ob sie überexprimiert sind und ob ein Zusammenhang zwischen einem DNA-Zugewinn oder einer Überexpression und den klinischen und histopathologischen Parametern besteht. Wir fanden bei der Untersuchung der 54 IDC Fälle kaum DNA-Zugewinne der untersuchten Gene, wohingegen auf RNA-Ebene vor allem die beiden Gene PTK6 und Her2/neu überexprimiert waren. Diese beiden Gene zeigten bei der statistischen Auswertung eine Korrelation, deren Bedeutung noch weiter abgeklärt werden muss. Eight genes were analysed on DNA- and RNA-Basis by means of quantitative Real-Time PCR. Seven of these genes map to the long arm of chromosome 20 (ADA, AIB1, BCAS1, PFDN4, PTK6, PTPN1, ZNF 217). Additionally the gene Her2/neu (Chromosom 17q12), which has already been well investigated in other studies, was analysed to find potential coherences. The aim of this study was, to discover a responsibility of these genes for the amplification of the region 20q13, if they are over expressed and for a correlation between gain of DNA, over expression and clinical and histo-pathological parameters. We investigated 54 IDC cases and found only few amplification of the selected genes however we found an over expression of the genes PTK6 and Her2/neu. These two genes showed a statistical correlation, which has to be investigated furthermore.

Decorin ist ein multifunktionelles Proteoglykan, das an einer Vielzahl von physiologischen Prozessen beteiligt ist und das von Endothelzellen bei der entzündungsbedingten Angiogenese gebildet wird. Ziel der Arbeit war es, Faktoren zu finden, die eine Induktion der Decorin-Synthese in Endothelzellen hervorrufen, und deren Rolle im verwendeten Kultivierungssystem näher zu charakterisieren. Durch Zugabe von IL-10 und IL-6 konnte eine Steigerung der Decorin-mRNA-Synthese in Endothelzellen bewirkt werden. Bei der IL-vermittelten Induktion der Decorin-Proteinsynthese war es dabei eine grundlegende Voraussetzung, dass die Endothelzellen in Kontakt mit einer Kollagenmatrix standen. Bei Inkubation der Endothelzellen in einer 3D-Kollagenmatrix konnte bei den IL behandelten Proben ebenfalls Decorin nachgewiesen werden. Zudem waren bei den entsprechenden Zellen eine verminderte Apoptoserate sowie die Bildung Kapillar-ähnlicher Strukturen zu erkennen. Diese Versuche zeigen, dass die verwendeten Interleukine eine Decorin induzierende Wirkung und eine physiologische Relevanz bei der entzündungsbedingten Angiogenese besitzen.

Wie sich in den letzten Jahren gezeigt hat, ist Fettgewebe nicht nur ein inerter Fettspeicher, sondern produziert auch eine Vielzahl endokrin wirksamer Substanzen, die unter anderem auch an der Blutdruckregulation beteiligt sind. Da Adipositas ein wichtiger Risikofaktor für die Entwicklung der Hypertonie ist, sollte im Rahmen dieser Dissertation ein System zur quantitativen Untersuchung der Genexpression in Primärkulturen humaner Adipocyten entwickelt werden und dessen Funktionalität am Beispiel der hormonellen Regulation der Gene des Renin-Angiotensin-Systems demonstriert werden. Dies beinhaltete die Etablierung der Adipocytenisolierung und -kultivierung, eines Stimulationsassays, die Entwicklung einer der besonderen Größe und dem hohen Fettgehalt der Zellen angepaßten Zellzahl- und Vitalitätsbestimmungsmethode, die Untersuchung vier verschiedener RNA-Extraktionsmethoden auf ihre Eignung für Adipocyten und die Etablierung eines besonders sensitiven RT-PCR Systems zur Untersuchung der Genexpression mittels einer fluoreszenzmarkierten Sonde. Exemplarisch konnte anhand der Renin-Angiotensin-System-Gene die Funktionalität der Methoden demonstriert werden, indem nicht nur die Genexpression aller Komponenten des Renin-Angiotensin-Systems in humanen Adipocyten nachgewiesen wurden, sondern auch gezeigt werden konnte, dass Hydrocortison sowohl die Genexpression als auch die Dichte des Angiotensin II Typ 1-Rezeptors in der Adipocytenmembran stimuliert. Dieser Aspekt könnte möglicherweise nicht nur bei der besonderen Adipositasform des Cushing-Syndroms, sondern auch für die Entstehung der zentralen Adipositas von Bedeutung sein. Adipose tissue has functions above-and-beyond storing fat. It also produces a variety of different endocrine substances, some of which influence blood pressure regulation. Obesity is a well known risk factor for the development of hypertension Thus, the genes regulating expression of vasoactive molecules in adipose tissue, possibly contributing to an increase in blood pressure are of great interest. The aim of this work was to develope a system for quantitative gene expression analysis in primary cultured human adipocytes and to demonstrate its utility for studying the hormonal regulation of genes encoding the renin-angiotensin-system. We established procedures for the isolation and culture of human adipocytes, as well as a stimulatory assay. We also developed methods for the determination of cell number and vitality. Above this, four RNA extraction protocols were evaluated regarding their suitability for adipocytes, and a very sensitive RT-PCR system for gene expression analysis using fluorescent labeled probes was established. As an example for the functionality of these methods we showed that all genes of the renin-angiotensin-system are expressed in human adipocytes. We also demonstrated that hydrocortisone stimulates the gene expression as well as the density of the angiotensin II receptor type 1 on cultured human adipocytes. This finding may be of interest for the development of the obesity phenotype found in cushing syndrome, but could also contribute to the development of central obesity.