1. ������������������ ������������������������������ ������ ������ ���������� ������������ ���������� �� (HSV-1) ������ ������������������ �������������� ���������������� ������ ���������� �������� ������������ �������� ���������������� ������������
- Subjects
endocrine system ,������������������������������ ������ ,integumentary system ,urogenital system ,viruses ,�������������� ���������������� ,�������������� ���������� ,Herpes virus ,������������������ ,antiviral screening ,recombinant viruses ,reporter genes ,hormones, hormone substitutes, and hormone antagonists - Abstract
�� ������ ������ ���������� ������������ ���������� �� (HSV-1) ���������� ������ ���������������������� ����������������, ������ ���������������� �������������� �� ������������������������ ������������������ ������ ���� ���������������� ������ �������� ������ ��������������. �� �������������������� ������ HSV ������������������ ������������������ ������ �������������� ������������������ ���������� �������� ��������������, ���������� ������ ���������������������� ������ ���� ������ ���������������������� (������������������ ���� �������������������������������������� ����������������). ���� �������������� ������������������ ��������-���������������� �������������� (���� �������������������� ������ ���� �������������� ������), ������ ���������������������� ���� �������������� ������ DNA ������ ������, ���������������� ������������������������ ������ ������ �������� ������������ ������ ������������������ (TK) ������ ���������������������� ���������������� ������ ���������������������� ������ �������������� ������ tk. ��������������, �������������� ������������������ ������������ ������ ������ �������������� �������������� ���� �������������������������� ���������������������� ������������. �� ������������ ������ ���������������� �������������������������� ���������������� �������� ���� ���������������������������� ������������������������������ ������, ������ ���� ������������������ �������������� ����������������, �������� ������ �������������������� �������������� �������������������� ���������������� (EGFP) ������ ���� ���������������������� ������ ������������������������ (LUC), ���� ���������� �������������� ������������ ���� ������������������������ in vivo �� ���� ������������������ in vitro. ������������������������ ������������ ���������������������������� �������� ���� �������������� ������ EGFP ������������������������ ������������������ ������ ������ 5��� ������ 3��� ���������������������� ���������������� ������ ���������������� ������ tk ������ HSV-1 �������� ���� ������������������ ���������������������������� ���� �������� ���������������� �������������������������� ������ �������� ������������������. ���������������� �������������� �������� ���������� ������ ���� �������������� ������ LUC. ���� �������������� ���������������� �������������������� �������� ������������ ���������� HSV-1 (������������ 17) ������ ���������������� ������ ������ ���������������������������� ������������������������ �������������������������� ������ ������������������������ ������������ ���� HSV-1 ����������������������������. ������ ���������������������� ���� �������������� ���������������� ������������������������ ������ �������������������������� ������������ ������ ������������������ ������������. ���� ������������������������������ ������ ������������������ ���� ������������������ �������������� ���������������� �������� ������ ������ ������������ ������ ���������������������� ���������������� ������ tk ������ ������������������ ������������ ������������������ ������������������ ���������������� ���� �������� ������ ���������������� ������. �� ���������������������� �������� �������� ������������ �������������� ������ �������������� ���������� ������������������������ �������������������� ������ ���������� ������ ���������������� ������ ��������������������������, ���� ������������ ���������� ���������������� ������ �������������������� �������������������������� ��������������. �� �������������� ���������� �������������� �������� ������������ ������ �������������� ���������������� ��������������. ���� ��������������������, ���� ������������������������ ������ ���������������� �������������������������� ���������������� ������������������������ ������ ���� ������������������������������ ������ ������ ������������������������������ ������������������ ���� �������������� ���������������� ������ ���������� ������������ ������ ������������������ ���������������� ������ ������������ ������ ������������������������������������ ���������������� �������� ���������������� ��������������. ���� ��������������������, �� ������������, �� �������������������� ������ ���� ������������ �������������� ���������������������� ������������������ ������������������, Herpes Simplex Virus type 1 (HSV-1) is a widespread pathogen, which causes acute or latent infections for the lifetime of the host. The severity of HSV infections varies from relatively minor to very serious, even life-threatening, conditions (especially in immuno-compromised patients). Currently available anti-herpes drugs (e.g. acyclovir and its analogs), which inhibit virus DNA synthesis, require activation by the virus thymidine kinase (TK) and they are rendered inactive by tk gene mutations. Therefore, a serious need for novel antivirals with diverse modes of actions exists. The aim of the present master thesis was to construct recombinant viruses that express reporter genes, i.e. enhanced green fluorescent protein (EGFP) and firefly luciferase (LUC), that can be easily assayed in vivo or in vitro. Transfer vector was constructed where the EGFP gene was flanked by 5��� and 3��� regulatory sequences of the HSV-1 tk gene to allow site-specific homologous recombination with the virus genome. Similar work was already made for LUC gene. The reporter genes were introduced in wild-type HSV-1 strain 17 and virus progeny was generated following cotransfection of the transfer vectors with HSV-1 nucleocapsids. Viruses expressing the reporter genes were plaque isolated and verified. The recombinant viruses expressed the expected reporter genes under the control of the tk regulatory elements and displayed growth kinetics similar to those of their parent virus. Their usefulness in antiviral screening was verified by testing a battery of chalcones and cyclohexenones, which were synthesized in the lab of pharmaceutical chemistry. This test led to the identification of two active antiviral compounds. In conclusion, the results of the present master thesis indicate that the recombinant viruses that were constructed express the reporter genes and are powerful and sensitive tools for rapid and quantitative screenings of novel antivirals. As a result, time, effort and cost of such processes are significantly reduced
- Published
- 2018
- Full Text
- View/download PDF