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CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O sucesso adaptativo das orquídeas em diferentes habitats deve-se ao desenvolvimento de estratégias morfológicas e fisiológicas que promovem maior eficiência do uso da água. Dentre estas estratégias, podemos citar a suculência foliar, a absorção foliar de água (Foliar water uptake - FWU) e a expressão Metabolismo Ácido das Crassuláceas (CAM). Além disso, as raízes aéreas podem maximizar a absorção de água e nutrientes, processos que podem ser relacionados com a presença de um velame e a composição de sua parede celular. Diante disso, hipotetizamos no Capítulo 1 que a FWU pode ser uma estratégia para aquisição de água pelas orquídeas epífitas e rupícolas devido à baixa disponibilidade hídrica nestes ambientes, e que o metabolismo CAM aumentaria ainda mais a taxa de absorção de água por estas plantas. Para testar esta hipótese, avaliamos a capacidade de FWU e verificamos variações entre os habitats epifítico, rupícola e terrestre, e entre o metabolismo C3 e CAM em 16 espécies de orquídeas. Descobrimos que a absorção foliar de água pode ser uma estratégia desenvolvida pelas orquídeas, e possui relação com características estruturais das folhas. As espécies rupícolas apresentaram maior FWU, porém esta estratégia de absorção de água não foi favorecida pelo metabolismo CAM. Já no Capítulo 2, levantamos como hipótese que as raízes aéreas e terrestres de Vanilla bahiana podem apresentar características da parede celular que contribuem com seu papel em cada ambiente, bem como entender como ocorrem modificações em sua estrutura durante seu desenvolvimento. Para verificar as alterações na composição da parede celular das raízes de V. bahiana foram realizadas análises imunocitoquímicas utilizando anticorpos monoclonais que marcam epitopos de proteínas, hemiceluloses e pectinas. Descobrimos que a composição da parede celular das raízes aéreas (livres e aderidas ao forófito) e terrestres (fixadas no solo) de V. bahiana se altera em resposta ao ambiente, o que consequentemente reflete na função exercida por essas raízes. Em síntese, a absorção foliar de água provavelmente está relacionada com as condições do habitat e os traços morfológicos das folhas associados ao uso da água, e ajuda as orquídeas a enfrentar eventos de seca. As raízes aéreas de V. bahiana apresentaram uma maior complexidade e presença de pectinas, favorecendo o influxo de água e nutrientes. Nossos resultados fornecem novas perspectivas para compreender as estratégias relacionadas ao uso da água apresentadas pelas orquídeas em seus órgãos vegetativos para lidar com as condições do ambiente. The adaptive success of orchids in different habitats is due to the development of morphological and physiological strategies that promote greater efficiency in water use. Among these strategies, we can mention foliar succulence, foliar water uptake (FWU), and the expression Crassulacean Acid Metabolism (CAM). Furthermore, aerial roots can maximize the absorption of water and nutrients, processes that can be related to the presence of a canopy and the composition of its cell wall. Therefore, we hypothesized in Chapter 1 that FWU may be a strategy for water acquisition by epiphytic and rupicolous orchids due to the low water availability in these environments and that CAM metabolism would further increase the rate of water absorption by these plants. To test this hypothesis, we evaluated the capacity of FWU and verified variations between epiphytic, rupicolous, and terrestrial habitats, and between C3 and CAM metabolism in 16 orchid species. We found that foliar water uptake may be a strategy developed by orchids, and is related to the structural characteristics of leaves. The rupicolous species showed higher FWU, but this water absorption strategy was not favored by CAM metabolism. In Chapter 2, we hypothesized that the aerial and terrestrial roots of Vanilla bahiana may present cell wall characteristics that contribute to their role in each environment, as well as understand how changes in their structure occur during their development. To verify the alterations in the composition of the cell wall of the roots of V. bahiana, immunocytochemical analyzes were performed using monoclonal antibodies that mark epitopes of proteins, hemicelluloses, and pectin. We found that the cell wall composition of aerial (free and attached to the phorophyte) and terrestrial (fixed to the soil) roots of V. bahiana changes in response to the environment, which consequently reflects on the function performed by these roots. In summary, the foliar water uptake is likely related to habitat conditions and leaf morphological traits associated with water use and helps orchids cope with drought events. The aerial roots of V. bahiana showed greater complexity and presence of pectin, favoring the influx of water and nutrients. Our results provide new perspectives to understand the water use strategies presented by orchids in their vegetative organs to deal with environmental conditions. Dissertação (Mestrado) 2024-09-14

Orientador: Paulo Mazzafera Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O bagaço de cana-de-açúcar é uma matéria prima promissória para a produção de etanol de segunda geração, porém o seu uso, apresenta desafios desde que a biomassa desta cultura é lignificada (~23%), limitando o processo de sacarificação. Um dos principais enfoques para superar a recalcitrância é a modificação biotecnológica dos reguladores (Fatores de Transcrição; TFs) da deposição de lignina, dirigido a alterar o conteúdo ou a composição da lignina. A regulação transcricional da deposição de lignina, tem sido amplamente mais estudada em Arabidopsis do que em monocotiledôneas e muito pouco ou nada se sabe em cana-de-açúcar. O presente trabalho teve como objetivo identificar e caracterizar de fatores de transcrição que regulem enzimas da biossíntese da lignina em Saccharum spp. visando a alteração da deposição de lignina. O isolamento dos promotores de genes representativos da rota biosintética da lignina (CAD8, F5H e COMT) nas espécies de "Saccharum", permitiu identificar TFs repressores e ativadores. Informações originadas a partir de uma análise de componente principal (PCA), correlação de Pearson e de redes baseianas confrontando dados de expressão de genes de biossíntese de lignina, razão S/G, conteúdo de lignina, frente ao perfil transcricional dos TFs de ambos parentais, confirmadas com ensaios de transativacão de protoplastos, evidenciou em destaque que os TFs ShMYB85 e ShMYB58/63 poderiam possuir a potencial função como ativadores específicos da deposição de lignina nas espécies de Saccharum. Para corroborar estas preliminares evidencias foram desenvolvidos transgênicos com silenciamento para estes TFs (Shmyb85 e Shmyb58/63) em Saccharum spp. cultivar híbrido SP-3280. A caracterização, reforçada por análises 2D-RMN, revelou que Shmyb85 e Shmyb58/63 tiveram similaridades e diferenças em alterações relacionadas ao conteúdo e composição de lignina, testes histoquímicos, perfil de expressão de genes da biossíntese de lignina, e teor de compostos fenólicos. A sacarificação foi ais eficiente em plantas Shmyb85. Foi observado que em Shmyb85 e Shmyb58/63 houve alterações em mais de um polissacarídeo da parede celular (SCW), sendo ShMYB85 um ativador mais amplo que ShMYB58/63, desde que o primeiro controla especificadamente o teor de pectinas. Nossos dados enfatizam as oportunidades e desafios de usar estes TFs MYBs para redesenhar a parede celular com a finalidade de se produzir bioenergia. O conhecimento gerado aqui é important para impulsionar as práticas tradicionais de melhoramento em cana-de-açúcar e abordagens biotecnológicas para o aproveitamento de biomassa lignocelulósica no desenvolvimento do etanol de segunda geração Abstract: Sugarcane bagasse is a promising raw material for the production of second-generation ethanol. Still, its use presents challenges since the biomass of this crop is lignified (~23%), limiting the saccharification process. One of the main approaches to overcome recalcitrance is the biotechnological modification of the regulators (Transcription Factors; TFs) of lignin deposition, aimed at altering the content or composition of lignin. The transcriptional regulation of lignin deposition has been more studied in Arabidopsis than in monocots, and very little or nothing is known in sugarcane. The present work aimed to identify and characterize transcription factors that regulate lignin biosynthesis enzymes in "Saccharum" spp. The isolation of promoters of genes of the lignin biosynthetic pathway (CAD8, F5H, and COMT) in Saccharum species allowed the identification of repressor and activator TFs. Information originated from a principal component analysis (PCA), Pearson correlation and based networks comparing expression of genes of the lignin biosynthesis, S/G ratio, lignin content, against the transcriptional profile of the TFs of both parents, indicated ShMYB85 and ShMYB58/63 as potential regulators of lignin biosynthesis in sugarcane. Such indication was supported with protoplast transactivation assays. To have functional evidence of the role of these TFs, transgenics plants silenced for these TFs were produced using Saccharum spp. cultivar SP-3280 hybrid. The characterization, reinforced by 2D-NMR analysis, revealed that Shmyb85 and Shmyb58/63 had similarities and differences in changes related to lignin content and composition, histochemical tests, gene expresión, and phenolic compounds content. Saccharification was more efficient in Shmyb85. It was observed that in Shmyb85 and Shmyb58/63 there were alterations in more than one cell wall polysaccharide (SCW), with ShMYB85 being a broader activator than ShMYB58/63, since the first precisely controls the pectin content. Our data emphasize the opportunities and challenges of using these TFs MYBs to redesign the cell wall for bioenergy purposes. The knowledge generated here is important to boost traditional sugarcane breeding practices and approaches technologies for using lignocellulosic biomass in the development of second-generation ethanol Doutorado Biologia Vegetal Doutor em Biologia Vegetal FAPESP 2018/25058-5 CAPES 001

The aim of this study was to evaluate the direct effect of Phytogard®, a product based on potassium phosphite, on the development of Phytophthora nicotianae and to verify possible mode of action of this product on the pathogen. The pathogen's mycelium was exposed to increasing concentrations of Phytogard® and mycelial growth, production of fresh mycelium and zoospores production were evaluated. Regarding the possible mode of action of Phytogard® on P. nicotianae, the hypha morphology, electrolyte leakage, lipid peroxidation, protein synthesis and β-1,3-glucanase activity were evaluated. The pathogen mycelium was inhibited as the phosphite concentration was increased. The production of zoospores was reduced from the lowest concentration of Phytogard® used. There were morphological changes in the pathogen's hyphae and the electrolyte leakage increased as the concentration of the product increased and over time. There was no difference between treatments in the analysis of lipid peroxidation and total protein. There was a decrease in the activity of the enzyme β-1,3-glucanase as the concentrations of Phytogard® increased. It is concluded that Phytogard® inhibited mycelial growth, production of fresh mycelium and zoospores production of P. nicotianae. Furthermore, the product decreases the thickness of hyphae and increases the number of atrophied ramifications, in addition to harming plasma membrane permeability and cell wall synthesis of the pathogen. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de Phytogard®, un producto a base de fosfito de potasio, sobre el desarrollo de Phytophthora nicotianae y verificar los posibles mecanismos de acción de este producto sobre el patógeno. El micelio del patógeno fue expuesto a concentraciones crecientes de Phytogard® y se evaluó el crecimiento del micelio, la producción de la masa fresca del micelio y la producción de zoosporas. En cuanto a los posibles mecanismos de acción de Phytogard® sobre P. nicotianae, se evaluaron la morfología de las hifas, la pérdida de electrolitos, la peroxidación de lípidos, la síntesis de proteínas y la actividad de la β-1,3-glucanasa. El micelio del patógeno se inhibió al aumentar la concentración de fosfito. La producción de zoosporas se redujo a partir de la menor concentración de Phytogard® utilizada. Se produjeron cambios morfológicos en las hifas del patógeno y la pérdida de electrolitos se incrementó a medida que la concentración del producto aumentaba y con el tiempo. No hubo diferencia entre tratamientos en los análisis de peroxidación de lípidos y proteínas totales. Hubo una disminución en la actividad de la enzima β-1,3-glucanasa a medida que aumentaron las concentraciones de Phytogard®. Se concluye que Phytogard® inhibe el crecimiento del micelio, la producción de la masa fresca del micelio y zoosporas de P. nicotianae. Además, el producto disminuye el grosor de las hifas y aumenta las ramificaciones atrofiadas, además de perjudicar la permeabilidad de la membrana plasmática y la síntesis de la pared celular del patógeno. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito direto do Phytogard®, produto à base de fosfito de potássio, sobre o desenvolvimento de Phytophthora nicotianae e verificar possíveis mecanismos de ação desse produto sobre o patógeno. O micélio do patógeno foi exposto a concentrações crescentes de Phytogard® sendo avaliado o crescimento micelial, produção de massa fresca de micélio e produção de zoósporos. Quanto aos possíveis mecanismos de ação do Phytogard® sobre P. nicotianae, avaliou-se a morfologia das hifas, perda de eletrólitos, peroxidação de lipídios, síntese de proteínas e atividade da enzima β-1,3-glucanase. O micélio do patógeno foi inibido à medida que se aumentou a concentração de fosfito. A produção de zoósporos foi reduzida a partir da menor concentração de Phytogard® utilizada. Houve mudanças morfológicas nas hifas do patógeno e a perda de eletrólitos foi crescente à medida que se aumentou a concentração do produto e ao longo do tempo. Não houve diferença entre os tratamentos nas análises de peroxidação de lipídios e proteínas totais. Houve decréscimo na atividade da enzima β-1,3-glucanase à medida que as concentrações de Phytogard® aumentaram. Conclui-se que o Phytogard® inibe o crescimento micelial, a produção de massa fresca de micélio e de zoósporos de P. nicotianae. Além disso, o produto diminui a espessura das hifas e aumenta o número de ramificações atrofiadas, além de prejudicar a permeabilidade da membrana plasmática e a síntese de parede celular do patógeno.

The objective was to fractionate carbohydrates and subjected feed proteins or no irrigation. Were evaluated: Panicum maximum, Urochloa brizantha, Andropogon gayanus, Urochloa humidicola and Digitaria Umfolozi, subject to two levels of irrigation. The experimental design was a 5x2 factorial arrangement with four replications. The forages were planted in plots with 4 m², two cuts were performed with an interval of 45 days. The forages were evaluated for crude protein (CP) and digestible crude protein (DCP), neutral detergent fiber (NDF), hemicellulose, acid detergent fiber (ADF), cellulose and lignin. Fractionation of CP and CHO was done according to the CNCPS. There was a significant interaction for CP and DCP (P0.05). The U. brizantha presented the highest content of cell wall components and fractions of CT. It was observed that the irrigation increased the percentage of CT fodder, no effect of irrigation (P>0.05) in fractions of CT. El objetivo era fraccionar los carbohidratos y las proteínas forrajeras sometidas o no al riego. Se evaluaron: Panicum maximum, Urochloa brizantha, Andropogon gayanus, Urochloa humidicola y Digitaria umfolozi, sometidos a dos niveles de riego. El diseño experimental utilizado fue en un esquema factorial 5x2, con 4 repeticiones. Los forrajes se plantaron en parcelas de 4 m², se hicieron dos cortes con un intervalo de 45 días. Se evaluaron los forrajes para la proteína cruda (PC) y la proteína cruda digerible (PCd), fibra detergente neutra (FDN), hemicelulosa, fibra detergente ácida (FDA), celulosa y lignina. El fraccionamiento de PC y CHO se realizó de acuerdo con el CNCPS. Se observó interacción significativa para PC y PCd (P 0.05). La U. brizantha mostró un mayor contenido de componentes de la pared celular y fracciones de CT. Se observó que el riego aumentó el porcentaje de CT de forrajes, no hubo efecto del riego (P> 0.05) en las fracciones de CT. Objetivou-se fracionar os carboidratos e proteínas forrageiras submetidas ou não a irrigação. Foram avaliadas: Panicum maximum, Urochloa brizantha, Andropogon gayanus, Urochloa humidicola e Digitaria umfolozi, submetidas a dois níveis de irrigação. O delineamento experimental utilizado foi em esquema fatorial 5x2, com 4 repetições. As forrageiras foram plantadas em parcelas com 4 m², foram realizados dois cortes com intervalo de 45 dias. As forrageiras foram avaliadas quanto aos teores de proteína bruta (PB) e proteína bruta digestível (PBd), fibra em detergente neutro (FDN), hemicelulose, fibra em detergente ácido (FDA), celulose e lignina. O fracionamento da PB e CHO foi feito segundo o CNCPS. Observou-se interação significativa para PB e PBd (P0,05). O U. brizantha apresentou maior teor dos componentes da parede celular e das frações dos CT. Observou-se que a irrigação aumentou o percentual de CT das forrageiras, não houve efeito da irrigação (P>0,05) nas frações dos CT.

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Porém, outras funções de cunho fisiológico e adaptativo, tais como armazenamento de água e manutenção da orientação foliar foram descritas para as fibras gelatinosas. As fibras gelatinosas são reportadas em diversas famílias de angiospermas nos mais diversos ambientes, com isso outras funções podem ser associadas a ocorrência das fibras gelatinosas nos mais diferentes ambientes. O objetivo desse estudo foi analisar as fibras gelatinosas em representantes de Eriosema (DC.) Desv. um gênero de leguminosa comumente encontrado em Cerrado, visando a acessar variações na distribuição e organização das fibras gelatinosas no eixo vegetativo aéreo e subterrâneo, caracterizar a estrutura básica e a histoquímica das paredes celulares. O estudo foi conduzido com 19 táxons coletados em diferentes áreas de Cerrado, sendo amostrados a folha, caule aéreo e órgão subterrâneo. O material foi processado de acordo com técnicas usuais em anatomia e histoquímica vegetal. Uma espécie foi considerada como modelo e foram utilizados os anticorpos LM5 e LM10 marcadores para galactanos e xilanos, respectivamente, nas paredes das fibras gelatinosas. As fibras gelatinosas ocorreram por todo o corpo vegetativo dos táxons de Eriosema estudados, sendo extraxilemáticas em regiões com crescimento primário e xilemáticas em regiões com crescimento secundário. Quanto à organização, na folha as fibras gelatinosas formaram calotas ao redor do floema primário da nervura principal; no caule, se organizaram em cordão cilíndrico completo ao redor do floema em crescimento primário ou em pequenos grupos separados por parênquima em crescimento secundário; no órgão subterrâneo, se organizaram em faixas tangenciais separadas por raios de parênquima xilemático. Em todos os órgãos analisados, as fibras gelatinosas exibiram três camadas parietais distintas: camada-P, incluindo a parede primária e lamela média rica em pectina; a camada-S com número variável de estratos (1-3) geralmente lignificados, e a camada-G, parede celular terciária, não lignificada ou com baixo teor de lignina. De um modo geral, a camada-G foi mais espessa que as demais camadas parietais (P e S). A espécie modelo, apresentou camada-G composta (G+L) formada por lamela não-lignificada (G) e lamela interna lignificada (L) ocorreu na folha (região da nervura principal), regiões do caule em crescimento secundário e órgão subterrâneo. A presença de lignina e xilanos na lamela interna lignificada (L) da camada-G composta foi demonstrada neste estudo, por meio de métodos histoquímico e imunohistoquimico, respectivamente. A ausência de lignina na camada-G, ao conferir propriedades hidrofílicas a esta camada parietal, pode favorecer o armazenamento de água a curto período. Porém, a presença de lignina na camada-G composta (camada-L), como observado no eixo vegetativo aéreo e subterrâneo, ao conferir rigidez e resistência mecânica permitiria proteção em condições ambientais adversas e maior resistência ao fogo. Considerando a abundância de fibras gelatinosas no eixo vegetativo dos táxons de Eriosema aqui analisados, tais fibras podem representar uma adaptação estrutural associada às condições do Cerrado, um ambiente sazonal com temperaturas elevadas e alta incidência luminosa, períodos alternados de alta e baixa disponibilidade de água, solos pobres em nutrientes e aluminotóxicos e queimadas recorrentes. Estudos experimentais com foco na ontogênese da camada-G composta nas fibras gelatinosas de plantas sujeitas a diferentes condições edáficas e climáticas serão necessários para um melhor entendimento sobre os fatores ambientais que favorecem a sua formação. Gelatinous fibers (G-fibers) are specialized sclerenchyma cells that have a highly modified, translucent, gelatinous appearance inner layer called the G-layer. Several functions are attributed to the G-fibers being the main and best known its relation with the tension wood. However, other physiological and adaptive functions, such as water storage and maintenance of leaf orientation, have been described for G-fibers. G-fibers are reported in several angiosperm families in the most diverse environments, so other functions may be associated with the occurrence of G-fibers in the most different environments. The purpose of this study was to analyze the G-fibers in representatives of Eriosema (DC.) Desv. a genus of legumes commonly found in Cerrado, aiming to access variations in the distribution and organization of G-fibers in the aerial and underground vegetative axis, to characterize the basic structure and histochemistry of cell walls. The study was conducted with 19 taxa collected in different areas of Cerrado, being sampled the leaf, aerial stem and underground organ. The material was processed according to usual techniques in plant anatomy and histochemistry. LM5 and LM10 antibodies that mark galactans and xylans, respectively, were used on the G-fibers walls. G-fibers occurred throughout the vegetative body of the studied Eriosema taxa, being extraxylary in regions with primary growth and xylary in regions with secondary growth. As for the organization, in the leaf the G-fibers formed caps along the primary phloem of the midrib; in the stem, they were organized in complete cylindrical strands around the primary growing phloem or in small groups separated by secondary growing parenchyma; in the underground organ, organized into tangential bands separated by xylem parenchyma rays. In all organs analyzed, the G-fibers exhibited three distinct parietal layers: P-layer, including the primary wall and pectin-rich middle lamella; the S-layer with variable number of strata (1-3) generally lignified, and the G-layer, non-lignified or low lignin tertiary cell wall. In general, the G-layer has always been thicker than the other parietal layers (P and S). Composite G-layer (G+L) formed by non-lignified lamella (G) and lignified internal lamella (L) occurred in the leaf (midrib region), stem regions in secondary growth and underground organ. The presence of lignin and xylans in the lignified internal lamellae (L) of the composed G-layer was demonstrated in this study by histochemical and immunohistochemical methods, respectively. The absence of lignin in the G-layer, by conferring hydrophilic properties to this parietal layer, may favor short-term water storage. However, the presence of lignin in the composed G-layer (L-layer), as observed in the aerial and underground vegetative axis, by conferring rigidity and mechanical strength would allow protection in adverse environmental conditions and greater fire resistance. Considering the abundance of G-fibers in the vegetative axis of the Eriosema taxa analyzed here, such fibers may represent a structural adaptation associated with Cerrado conditions, a seasonal environment with high temperatures and high light incidence, alternating periods of high and low water availability, nutrient-poor and aluminotoxic soils and recurrent burning. Experimental studies focusing on the composite G-layer ontogenesis in G-fibers of plants subjected to different edaphic and climatic conditions will be necessary for a better understanding of the environmental factors that favor their formation. CAPES 1585537

Submitted by Mírian Farias Ribeiro (mirianfribeiro@yahoo.com.br) on 2019-12-04T14:06:57Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) TESE_CAMILA_NUNES_2019_resumo.pdf: 978716 bytes, checksum: 9a64b8718f067a8bd1e6f177d438b776 (MD5) Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2019-12-05T21:33:43Z (GMT) No. of bitstreams: 2 TESE_CAMILA_NUNES_2019_resumo.pdf: 978716 bytes, checksum: 9a64b8718f067a8bd1e6f177d438b776 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2019-12-05T21:33:43Z (GMT). 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Gala durante armazenamento em AR e AC, na presença e ausência do 1-MCP. Após o armazenamento os frutos foram mantidos a 25 °C por sete dias, para simular condições de prateleira. Foram realizadas caracterização físico-química, análises de perfis de transcritos e de sacarídeos. Os frutos não tratados com 1- MCP, que foram armazenados em AR, apresentaram redução da firmeza e da acidez. No entanto, os frutos tratados com 1-MCP e armazenados em AR, mantiveram a firmeza e a acidez, do momento da colheita até seis meses de armazenamento, assim como observado para os frutos tratados e não tratados com 1-MCP, e armazenados em atmosfera controlada (AC). Na análise transcricional foram estudados seis dos genes de parede celular (MdFLA2, MdGAUT9, MdUDP, MdAF3, MdBXL1 e MdEXGT), durante duas safras. De modo geral, a maioria dos genes estudados, na presença do 1-MCP mantiveram o mesmo comportamento transcricional entre as safras. Em contrapartida, na ausência do 1-MCP o acúmulo transcricional foi diferente entre as safras, principalmente para os genes de biossíntese de parede celular. Dentre os genes estudados, o MdEXGT apresenta potencial envolvimento no avanço do amadurecimento de maçãs durante o armazenamento por seis meses. E a aplicação do 1-MCP, assim como, a escolha da atmosfera de armazenamento foram fatores importantes para a redução do acúmulo de transcritos desse gene e para o aumento do tempo de prateleira do fruto. The apple fruit is susceptible to changes in sensory attributes during post-harvest. To avoid changes in firmness the fruits are stored in refrigerated (AR) or controlled (AC) atmosphere combined with the application of 1- methylcyclopropene (1-MCP). However, it is still unclear what genes are involved in maintaining the cell wall in apples during storage. Changes in fruits during ripening are coordinated by genes encoding enzymes related to assembly and disassembly of the cell wall. The objective of the study was to evaluate the accumulation of transcripts of genes involved in the cell wall metabolism of cv. Gala during storage in RA and CA, in the presence and absence of 1-MCP. After storage the fruits were placed at 25 ° C for seven days to simulate shelf life conditions. Physical-chemical characterization, transcript and saccharide profile analyzes were performed. Fruits not treated with 1-MCP, which were stored in RA, showed a reduction in firmness and acidity. However, fruits treated with 1- MCP and stored in RA, maintained firmness and acidity, from the moment of harvest until six months of storage, as observed for fruits treated and not treated with 1-MCP, and stored in controlled atmosphere (CA). In the transcriptional analysis, six of the cell wall genes were studied (MdFLA2, MdGAUT9, MdUDP, MdAF3, MdBXL1 and MdEXGT) were studied for two harvests. In general, most of the genes studied in the presence of 1-MCP maintained the same transcriptional behavior between the crops. In contrast, in the absence of 1-MCP the transcriptional accumulation was different between the crops, mainly for the genes of cell wall biosynthesis. Among the genes studied, MdEXGT presents potential involvement in the advancement of apple maturing during storage for six months. The application of 1-MCP, as well as the choice of the storage atmosphere were important factors for the reduction of the accumulation of transcripts of this gene and for the increase of the time of sharing of the fruit.

Submitted by Nivaldo Melo (nivaldo.melo@ufvjm.edu.br) on 2019-10-25T18:28:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) luciana_gomes_fonseca_almeida.pdf: 3552018 bytes, checksum: f84f2cbfe21d7068b62bfe104f7c1d23 (MD5) Approved for entry into archive by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2019-10-29T17:01:52Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) luciana_gomes_fonseca_almeida.pdf: 3552018 bytes, checksum: f84f2cbfe21d7068b62bfe104f7c1d23 (MD5) Made available in DSpace on 2019-10-29T17:01:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) luciana_gomes_fonseca_almeida.pdf: 3552018 bytes, checksum: f84f2cbfe21d7068b62bfe104f7c1d23 (MD5) Previous issue date: 2019 Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) Em um contexto de mudan?as clim?ticas, alinhado com a necessidade de reduzir as emiss?es de gases de efeito estufa, os biocombust?veis integram a diversifica??o da matriz de transporte, contribuindo para o suprimento de energia de forma segura, acess?vel e ambientalmente respons?vel. Apesar de o Brasil ser o segundo maior produtor global de etanol, ainda requer a diversifica??o de culturas bioenerg?ticas. Al?m disso, a composi??o lignocelul?sica da biomassa e a capacidade de desconstru??o da parede celular vegetal, tamb?m s?o extremamente importantes para indicar uma cultura potencial para o mercado de bioenergia. Esta composi??o f?sico-qu?mica pode ser diferenciada entre esp?cies, manejo cultural e at? mesmo em diferentes partes da mesma planta. Nesse cen?rio, o sorgo biomassa (Sorghum bicolor (L.) Moench) apresenta-se como potencial mat?ria prima para a produ??o do etanol de segunda gera??o. O sorgo ? uma planta C4, de dias curtos e com altas taxas fotossint?ticas, al?m de ter a vantagem de adapta??o a diversos ambientes, permitindo o desenvolvimento e expans?o da cultura em regi?es de cultivo com distribui??o irregular de chuvas. Dessa forma, objetivou-se com este estudo identificar gen?tipos de sorgo biomassa com potencial agron?mico e composi??o lignocelul?sica favor?vel ao desenvolvimento do etanol de segunda gera??o. Foram cultivados cinco h?bridos de sorgo biomassa, nos munic?pios de Sete Lagoas e Couto de Magalh?es de Minas, nas safras 2015/2016 e 2016/2017. A composi??o lignocelul?sica da biomassa in natura de cada material, e ap?s os pr?-tratamentos, foram determinadas para verifica??o futuras de melhores rendimentos de etanol. O pr?-tratamento ?cido foi realizado com ?cido sulf?rico (H2SO4), enquanto para o pr?-tratamento alcalino foi utilizado solu??o de hidr?xido de s?dio (NaOH). Dentre os materiais avaliados, dois h?bridos mutantes de sorgo biomassa de nervura marrom ?bmr? foram testados comparativamente a tr?s h?bridos de sorgo biomassa convencionais. Entre os caracteres agron?micos, constatou-se diferen?a na produtividade, sendo o h?brido BRS716 o mais produtivo, com produ??o de massa verde (PMV) de 98,41 t ha-1 e produ??o de massa seca (PMS) de 33 t ha-1. O h?brido de sorgo biomassa de nervura marrom bmr 2015B002 tamb?m apresentou valores considerados altos, com um PMV de 81,03 t ha-1. Em rela??o ? composi??o lignocelul?sica da biomassa in natura, os h?bridos de nervura marrom bmr 2015B002 e 2015B003 se destacaram, apresentando teores de lignina significativamente menores (4,63%) em rela??o aos h?bridos convencionais (7,15%). Verificou-se que os pr?-tratamentos foram eficientes na remo??o de lignina, constatando teores pr?ximo de zero para os gen?tipos 2015B002 e 2015B003. A lignina ? um composto polifen?lico que interfere de maneira negativa no processo de sacarifica??o, uma vez que dificulta a a??o das enzimas ao complexo celul?sico. Os resultados demonstraram que o tratamento ?cido seguido por base apresentou o melhor rendimento ap?s a hidr?lise enzim?tica, corroborado pelas an?lises de Microscopia Eletr?nica de Varredura (MEV), An?lise de Infravermelho por Transformada de Fourier (FTIR), An?lise de ?ndice de cristalinidade (DRX) e An?lise T?rmica (TG), que demonstraram a modifica??o estrutural desej?vel. Os melhores rendimentos de hidr?lise foram obtidos a partir dos materiais pr?-tratados, sendo o tratamento ?cido seguido de base o que obteve os melhores resultados. Os gen?tipos avaliados nos dois ambientes apresentaram desempenho semelhante, podendo ser recomendado para as duas regi?es. N?o houve intera??o entre h?bridos e ambiente, para todos os caracteres avaliados. A produ??o de bioetanol de segunda gera??o para os h?bridos avaliados variou entre 6.612 a 11.838 litros por hectare, por ciclo de 180 dias. O sorgo biomassa bmr 201556B002 apresentou melhor rendimento de hidr?lise, para os dois tipos de sacarifica??o utilizados, quando comparados aos gen?tipos convencionais. Tese (Doutorado) ? Programa de P?s-gradua??o em Biocombust?veis, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2019. In a context of climate change, in line with the need to reduce greenhouse gas emissions, biofuels integrate the diversification of the transport matrix, contributing to secure, affordable and environmentally responsible energy supply. Brazil is the second largest global producer of ethanol, but it needs diversification of bioenergy crops to boost agricultural production and technological development. The lignocellulosic composition of the biomass and the deconstruction capacity of the plant cell wall, are extremely important to indicate a culture as a potential biomass supply chain for bioenergy market. This physicochemical composition can be differentiated between species, cultural management and even in different parts of the same plant. Sorghum bicolor (L.) (Moench), which stands out for its dry matter yield per hectare, has been considered as potential raw material for biofuels. Sorghum is a C4 plant, photoperiod sensitive; these are characteristics of short-day plants with high photosynthetic rates. Sorghum genotypes were evaluated for agronomic potential and chemical composition favorable to the production of cellulosic ethanol. Five biomass sorghum hybrids were grown, in the city Sete Lagoas and Couto de Magalh?es de Minas, in the agricultural year 2015/2016 and 2016/2017.The lignocellulosic composition of the raw biomass of each genotype, and after acid and alkaline pretreatments was determined for future investigations of improved ethanol yields. Among the evaluated materials, two hybrid brown midrib (bmr) sorghum biomass were tested and compared to three conventional sorghum biomass hybrids. Among the agronomic characters, there was a difference in productivity. The hybrid BRS716 being the most productive, with a fresh biomass yield (FBY) of 98,41 t ha-1 and dry biomass yield (DBY) of 33 t ha-1. The hybrid sorghum brown midrib bmr 2015B002 also presented values considered high, with FBY of 81,03 t ha-1. The lignocellulosic composition of the biomass of the bmr hybrid 2015B002 and 2015B003 stood out, presenting significantly lower lignin contents (4.63%) than the conventional hybrids (7.15%). The results showed that the acid treatment followed by the alkaline treatment showed the best performance after the enzymatic hydrolysis, supported by the Scanning Electron Microscopy (SEM), Fourier Transform Infrared Analysis (FTIR), Thermal analysis (TG) and crystallinity index analysis, that demonstrated the desired structural modification. Cellulosic ethanol production for the evaluated hybrids ranged from 6,612 to 11,838 liters per hectare per cycle of 180 days. Biomass sorghum bmr 201556B002 presented better hydrolysis yield for the two types of saccharification used when compared to conventional genotypes.

Submitted by Celso Magalhaes (celsomagalhaes@ufrrj.br) on 2021-07-19T12:15:13Z No. of bitstreams: 1 2018 - Let?cia Maria Alves Ramos.pdf: 2182881 bytes, checksum: 13be87195bf275e50c95e350ed71b407 (MD5) Made available in DSpace on 2021-07-19T12:15:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018 - Let?cia Maria Alves Ramos.pdf: 2182881 bytes, checksum: 13be87195bf275e50c95e350ed71b407 (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES The reaction wood in the angiosperms is characterized primarily by the presence of gelatinous fibers, which are differentiated fibers with a thick and highly cellulosic inner layer, known as tgelatinous layer. The presence and severity of the reaction wood can be influenced by the gravitational stimulus when the tree has its branches and trunk deviated from its natural axis, as in slopes, action of strong winds, artificial induction, injuries, and others. In the case of rubbertree, it is possible that the latex tapping may influence the cambium activity, leading to the formation of this type of fibers. Therefore, the aim of this work was to study Hevea brasiliensis (Willd. ex A. Juss.) Mull. Arg. trees in order to characterize the wood structure of native trees that have passed through latex exploitation, as well as characterize the chemistry and distribution of lignin, and ultrastructure of the gelatinous fibers cell wall. For this purpose, samples of xylem were collected from rubbertrees at the Fazenda Experimental Catuaba, located in Senador Guiomard - AC (67.62711 W; 10.08433 S). In the anatomical characterization, fiber length (non-gelatinous and gelatinous); total diameter and lume diameter of non-gelatinous fibers; diameter and frequency of vessel elements; width, height and frequency of rays and tissue proportion were evaluated. Differences were observed between the anatomical structure of tapped and untapped trees to the quantitative characteristics. Only gelatinous fiber length; fiber lumen diameter; frequency of rays, and proportion of vessel elements and rays did not show significant statistical differences. The most important observations were the increase of ray width and height in the tapped trees, as well as the greater proportions of gelatinous fibers in the untraped ones. For the observation of the fiber cell wall ultrastructure, scanning electron microscopy (SEM), transmission electron microscopy (TEM) were used, which revealed that the non-gelatinous fibers present the typical configuration P + S1 + S2 + S3, while the gelatinous fibers presented the configuration P + S1 + S2 + G, in wich G layer presented a lamellar structure. The chemical analysis was performed by histochemical tests of Wiesner and M?ule, and Fourier transform infrared microspectroscopy (FT-IR). The staining presented in Wiesner test showed evidence of a lower lignin contente. The gelatinous layer G did not stain, indicating none or insignificant lignification in this portion of the wall. The M?ule test revealed the presence of guaiacil (G) units in the lignin, a result that was aligned with the FT-IR analysis. The spectra showed higher intensities for the bands assigned to G units in the gelatinous fibers than observed in non-gelatinous fibers. The S / G ratio indicated that the lignina G and S units had similar proportions, unlike that found in the literature for this species O lenho de rea??o nas angiospermas caracteriza-se principalmente pela presen?a de fibras gelatinosas, que s?o fibras diferenciadas com uma camada interior espessa e altamente celul?sica, conhecida como camada gelatinosa. A presen?a e severidade do lenho de rea??o pode ser influenciada pelo est?mulo gravitacional quando a ?rvore tem seus ramos e tronco desviados de seu eixo natural, como em terrenos acidentados, a??o de fortes ventos, indu??o artificial, inj?rias, entre outros. No caso da seringueira, ? poss?vel que a atividade explorat?ria do l?tex possa influenciar na atividade do c?mbio e, consequentemente, na forma??o desse tipo de fibras. Portanto, o objetivo deste trabalho foi estudar indiv?duos de Hevea brasiliensis (Willd. ex A. Juss.) Mull. Arg. a fim de caracterizar a estrutura do lenho de ?rvores nativas que passaram por explora??o de l?tex, bem como caracterizar a qu?mica e distribui??o de lignina, e ultraestrutura da parede celular de fibras gelatinosas. Para tanto, foram coletadas amostras do xilema de indiv?duos de seringueira na Fazenda Experimental de Catuaba, localizada em Senador Guiomard ? AC (67.62711 O; 10.08433 S). Na caracteriza??o anat?mica, foram avaliados o comprimento das fibras (n?o-gelatinosas e gelatinosas); di?metro total e di?metro do lume de fibras n?o-gelatinosas; di?metro e frequ?ncia dos elementos de vaso; largura, altura e frequ?ncia de raios e a propor??o de tecidos. Foram observadas diferen?as entre a estrutura anat?mica de ?rvores exploradas e n?o-exploradas ?s caracter?sticas quantitativas. Apenas as vari?veis comprimento de fibra gelatinosa; di?metro do lume das fibras; frequ?ncia de raios, e propor??o de elementos de vaso e raios n?o apresentaram diferen?as estat?sticas significativas. As observa??es mais importantes foram o aumento da largura e altura de raios nas ?rvores extra?das, bem como as maiores propor??es de fibras gelatinosas nas ?rvores n?o-extra?das. Para a an?lise da ultraestrutura da parede celular das fibras, foram utilizados microscopia eletr?nica de varredura (MEV), microscopia eletr?nica de transmiss?o (MET), os quais revelaram que as fibras n?o-gelatinosas apresentam a t?pica configura??o P + S1 +S2 + S3, enquanto as fibras gelatinosas apresentaram a configura??o P + S1 +S2 + G, com a camada G apresentando estrutura lamelada. A an?lise qu?mica procedeu-se com testes histoqu?micos de Wiesner e M?ule, e microespectroscopia por transformada de Fourier (FT-IR). O teste de Wiesner, pela colora??o apresentada, mostrou ind?cios de um menor teor de lignina no material. A camada gelatinosa G n?o corou, indicando nenhuma ou muito pouca lignifica??o nesta por??o da parede. O teste de M?ule revelou a presen?a de unidades guaiacil (G) na lignina, resultado que se alinhou com a an?lise FT-IR. Os espectros mostraram maiores intensidades para as bandas referentes ?s unidades G nas fibras gelatinosas que nas fibras n?o-gelatinosas. A rela??o S/G indicou que as unidades G e unidades S da lignina apresentam propor??es parecidas, diferentemente do encontrado na literatura para essa esp?cie.

Resumo Objetivou-se avaliar a influência do método de secagem sobre a composição nutricional de diferentes volumosos. Foram utilizadas quatro gramíneas (Urochloa brizantha cv. Marandu, Urochloa brizantha cv. MG4, Cynodon dactylon cv. Coastcross e Panicum maximum cv. Áries), uma leguminosa forrageira, o estilosante (Stylosanthes cv. Campo Grande) e duas silagens (Zea mays e Triticum aestivum cv. BRS Umbu). Os métodos de secagem se basearam no uso da estufa de ventilação forçada e de forno de micro-ondas. O delineamento estatístico utilizado foi um arranjo fatorial 2 x 8 (2 métodos de secagem e 8 volumosos) com 4 repetições. O método de secagem não influenciou o conteúdo de matéria seca das forragens. A secagem em forno micro-ondas elevou os teores de fibra em detergente neutro nos volumosos avaliados. Houve interação entre o método de secagem e tipo de forragem avaliada, com relação à proteína bruta (estilosante), extrato etéreo (MG4, estilosante e Áries) e nitrogênio insolúvel em detergente neutro (Coastcross, MG4, Marandu e estilosante). O forno de micro-ondas pode ser utilizado como instrumento para obtenção da matéria seca em alimentos volumosos, porém, a técnica pode afetar a composição da forragem avaliada. Abstract It was aimed determinate the influence of drying methods on nutritional composition of different roughages. The experimental material were four grass species (Urochloa brizantha cv. Marandu, Urochloa brizantha cv. MG4, Cynodon dactylon cv. Coastcross e Panicum maximum cv. Áries), one forage legume (Stylosanthes cv. Campo Grande) and two silages (Zea mays e Triticum aestivum cv. BRS Umbu). The drying methods were based on use of forced air oven or microwave oven. The experimental design were a 2 x 8 factorial arrangement (2 drying methods and 8 roughages) with 4 repetitions. There was no effect of drying method on roughages dry matter content. Microwave oven drying increased neutral detergent fiber. There was an interaction between drying method and evaluated roughage. Increased contents of crude protein (estilosante), neutral detergent insoluble nitrogen (Coastcross, MG4, Marandu e estilosante) and ether extract (MG4, estilosante e Áries) were observed when roughages were dried using microwave oven. The microwave oven usage is an alternative to obtain the dry matter content of roughages; however this technic may affect the sample composition.

O gênero Trichoderma inclui espécies que possuem habilidade de antagonizar patógenos de plantas em um processo complexo que vão desde antibiose, competição por nutrientes, micoparasitismo, indução de mecanismos de defesa em plantas ou ainda uma combinação desses. Espécies de Trichoderma são conhecidas por sua capacidade de produzir enzimas líticas tais como exoglucanases, endoglucanases, quitinases e proteases que desempenham papéis importantes na degradação da parede de fitopatógenos. Nos processos de desenvolvimento e diferenciação de Trichoderma, as β-glucanases contribuem de forma significativa no processo morfogenéticomorfolítico uma vez que a β-glucanas é o componente principal da sua parede. Nesse trabalho, realizou-se o estudo do papel funcional do gene gluc31 que codifica uma endo β-1,3-glucanase da família GH16 de Trichoderma harzianum ALL42, através da deleção deste gene. Observamos que a ausência do gene gluc31 não afetou a capacidade de micoparasitismo, in vitro, da espécie mutante de T. harzianum ALL42, entretanto, o envolvimento deste gene na síntese e remodelamento da parede celular foi demonstrado. Na ausência do gene gluc31, uma maior quantidade de polímero de quitina na parede celular das hifas da linhagem mutante Δgluc31 foi observado. A ausência do gene gluc31 em T. harzianum demonstrou ainda um efeito sobre a expressão dos outros genes pertencentes à família 16 de glicosil hidrolases em ensaios de RT-qPCR, devido a redundância de função entre as glucanases. The genus Trichoderma includes species that have the ability to antagonize plant pathogens in a complex process ranging from antibiosis, competition for nutrients, mycoparasitism and induction of defense mechanisms in plants or a combination of these. Trichoderma species are known for their ability to produce lytic enzymes such as exoglucanases, endoglucanases, chitinases, and proteases that is essential for phytopathogen cell wall degradation. In the development and differentiation processes of Trichoderma, β-glucanases contributes significantly to the morphogenetic-morphological process that lead to the presence of β-glucans as the main component of fungi wall. In this work, we studied the functional role of the gluc31 gene that encodes an endo β-1,3-glucanase of the GH16 family of Trichoderma harzianum ALL42 through the deletion of this gene. This study demonstrated that the absence of Δgluc31 gene did not affect the in vivo mycoparasitism ability of the mutant T. harzianum ALL42, however the involvement of this gene in cell wall remodeling and synthesis were demonstrated. In the absence of the gluc31 gene, a higher deposition of chitin polymers on the cell wall of the mutant hyphae was observed. The absence of the gluc31 gene in T. harzianum also demonstrated an effect on the expression of other genes belonging to the family 16 of glycosyl hydrolases, due to the function redundancy found among the glucanases. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

RESUMO Objetivou-se avaliar o uso de rações, contendo prebiótico ou antibiótico, nas fases pré e pós-alojamento sobre o desempenho de frangos de corte. Foram utilizados 720 pintos de um dia, machos, da linhagem Cobb-3500, distribuídos em blocos casualizados com quatro tratamentos, com seis repetições de 30 aves cada. Os tratamentos consistiram em: Antibiótico - aves que consumiram ração com adição de antibiótico nas fases pré e pós-alojamento; Prebiótico - aves que consumiram ração com adição de prebiótico nas fases pré e pós-alojamento; Sem aditivo- aves que consumiram ração sem aditivo nas fases pré e pós-alojamento; Jejum - aves que permaneceram em jejum na fase pré-alojamento e consumo de ração com antibiótico nas fases pós-alojamento. O fornecimento de ração pré-alojamento, dentro das caixas de transporte se iniciou no incubatório, sendo o tempo pré-alojamento de 24 horas. Para avalição do desempenho produtivo das aves, aferiram-se as variáveis de: peso médio, consumo de ração, ganho de peso, conversão alimentar, fator de produção e viabilidade criatória. A utilização de ração préalojamento com prebiótico ou antibiótico promoveu melhorias significativas (P0,05) pela utilização de aditivo nas fases de pré e pós-alojamento. Assim, conclui-se que o fornecimento de ração pré-alojamento não é necessária para frangos de corte, no período de jejum testado. SUMMARY This study aimed to evaluate the use of feed containing prebiotic or antibiotic, in the pre and post accommodation on the performance of broilers. We used 720 day-old chicks, males, Cobb-500 strain, distributed in randomized blocks with four treatments with six replicates of 30 birds each. The treatments consisted of: Antibiotic - birds fed diet with added antibiotics in pre- and post-housing; Prebiotic - birds fed feed with added prebiotic in pre and post accommodation; No aditivo- birds fed without feed additive in pre- and post-housing; Fasting - birds fasted in the pre-stage housing and feed intake with antibiotics in the post-stage housing. The provision of pre-feed accommodation within the transport boxes started in the incubator, and the pre-accommodation time of 24 hours. For productive performance analysis of bird, have assessed the variables of: average weight, feed intake, weight gain, feed conversion, production factor and production viability. The use of pre-accommodation prebiotic or antibiotic property diet resulted in significant improvements (p 0.05) for the use of additives in the pre and post accommodation. Thus, it is concluded that the supply of prehousing portion is not required for broilers tested in fasting period.

RESUMO Nesta pesquisa foram realizados experimentos com duas classes de hormônios vegetais (giberelina e citocinina); com o objetivo de verificar o efeito do ácido giberélico e 6-benzilaminopurina (GA3 e BAP) sobre a lignificação e o crescimento longitudinal em mudas de Eucalyptus grandis. O experimento foi realizado em casa de vegetação, na qual foram aplicados os reguladores de crescimento combinados ou isolados, nas seguintes concentrações: GA3 (49,13 μM e 98,26 μM); BAP (111 μM e 222 μM), com cinco repetições para cada tratamento. As comparações entre as médias da altura das plantas aos 6 meses mostraram que os alongamentos mais pronunciados do caule corresponderam aos tratamentos com a maior concentração de GA3. No tratamento em que foi combinada a menor concentração de GA3 com a menor concentração de BAP (49,13 μM de GA3 + 111 μM de BAP), ocorreu o menor teor de lignina 23,37%. ABSTRACT In this research experiments were accomplished with two classes of vegetable hormones (gibberellin and cytokinin); with the objective of verifying the effect of gibberellic acid and 6-Benzylaminopurine (GA3 and BAP) on the lignification and the longitudinal growth in seedlings of Eucalyptus grandis. The experiment was accomplished greenhouse, where were the growth regulators combined or isolated applied, in the following concentrations: GA3 (49.13 μM e 98.26 μM); BAP (111 μM e 222 μM), with five repetitions for each treatment. The comparisons among the averages of the height of the plants to the 6 months showed that the most pronounced prolongations of the stem corresponded to the treatments G[2], G[2]C[1] and G[2]C[2] where the largest concentration of GA3 was used. In the treatment G[1]C[1] where it was combined to smallest concentration of GA3 with to smallest concentration of BAP (49,13 μM de GA3 + 111 μM de BAP), it happened the smallest lignin tenor 23,37%.

As glicoproteínas são moléculas formadas pela união de proteínas à glicanos por um processo pós-traducional denominado glicosilação. Este processo é realizado nos mais variados tipos celulares, entre eles a célula fúngica, e as glicoproteínas produzidas por estas células possuem papéis biológicos essenciais à vida. Trichoderma harzianum (ALL-42) é um fungo muito estudado devido ao seu papel de biocontrole e indução de crescimento vegetal. Estudos envolvendo substâncias produzidas por este microrganismo podem colaborar para o entendimento deste mecanismo. O objetivo principal deste trabalho foi identificar e analisar as proteínas glicosiladas secretadas pelo T. harzianum quando induzido por meio de cultura contendo paredes celulares de diferentes fitopatógenos. Os secretomas produzidos para as paredes de Sclerotinia sclerotiorum e Fusarium oxysporum foram então submetidos à cromatografia por afinidade Concanavalin A e posteriormente realizada a eletroforese SDS-PAGE e coloração por Pro-Q Emerald 488 para identificação de glicoproteínas. As bandas apresentadas no gel foram recortadas e submetidas à espectrometria de massa. Os resultados demonstraram a presença de algumas proteínas como galactose oxidases, glicosídeo hidrolases, β-1,3-exoglucanases e proteases, com funções enzimáticas importantes no mecanismo de degradação de parede celular de fitopatógeno e a presença destas proteínas coincide com resultados obtidos em outros estudos. As amostras demonstraram atividade enzimática para sete substratos testados, escolhidos de acordo com as enzimas identificadas por espectrometria de massas e análise da expressão gênica relativa. Os genes relacionados a estas proteínas identificadas no glicosecretoma foram encontrados em maior expressão quando T. harzianum (ALL-42) foi crescido com as paredes de fitopatógenos em relação a duas outras situações, crescido em glicose e em glicerol, como fontes de carbono. Glycoproteins are molecules formed by the union of proteins to glycans by a post-translational process called glycosylation. This process is carried out in a variety of cell types, including fungal cell and the produced glycoproteins have biological roles essential for life. Trichoderma harzianum (ALL-42) is a fungus widely studied due to its role of biocontrol and plant growth induction. Studies involving substances produced by this microorganism may contribute to the understanding of this mechanism. The aim of this study was to identify and analyze the glycosylated proteins secreted by T. harzianum when grown in culture medium containing cell walls of different pathogen. The secretomas produced for walls of Sclerotinia sclerotiorum and Fusarium oxysporum were then subjected to Concanavalin A affinity chromatography and subsequently carried to SDS-PAGE electrophoresis and staining with Pro-Q Emerald 488 for identifying glycoproteins. The bands displayed in the gel were cut out and subjected to mass spectrometry. The results showed the presence of some proteins, galactose oxysdases, glycoside hydrolases, β-1,3-exoglucanases e proteases, with important functions in enzymatic cell wall degradation mechanism of pathogen and the presence of these proteins coincides with results from other studies. The samples showed enzymatic activity for seven substrates tested, chosen in accordance with the enzymes identified by mass spectrometry and analyzing the relative gene expression. Genes related to these proteins were identified in glicosecretoma found in higher expression as T. harzianum (ALL -42 ) was grown on the walls of plant pathogens compared to two other situations , grown in glucose and glycerol as carbon sources.

Orientador: Paulo Mazzafera Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Cana de açúcar é uma das plantas mais eficientes em coletar e converter a luz solar em energia química, apresentando alta capacidade de acumular biomassa. Recentemente, com o advento do desenvolvimento do etanol de segunda geração (E2G), ou etanol lignocelulósico, o bagaço tem recebido atenção como matéria prima para a produção desse biocombustível. O seu uso, porém, apresenta grandes desafios, principalmente porque a biomassa de cana é lignificada (~23%), situação que limita o processo de sacarificação. Portanto, o estudo dos fatores que governam a recalcitrância da parede celular em plantas que apresentam características de bioenergia é de relevante importância para o desenvolvimento de variedades híbridas de cana em programas de bioenergia, de tal forma que a produção de E2G possa ser maximizada. O objetivo desta pesquisa foi estudar a biossíntese de lignina em Saccharum spontaneum, Saccharum officinarum, Saccharum robustum e Saccharum barberi, através da identificação de genes da via biossintética da lignina e da análise dos componentes da parede celular em internódios novos (segundo + terceiro) e maduros (oitavo). Neste estudo, o conteúdo de carboidratos estruturais e não estruturais foi contrastante entre as espécies, uma vez que S. officinarum e S. barberi tiveram maior de acúmulo de açúcares solúveis totais, enquanto S. spontaneum e S. robustum apresentaram maior deposição de polissacarídeos estruturais. S. spontaneum apresentou um acúmulo notável de amido com relação às outras espécies de Saccharum. S. spontaneum e S. robustum apresentaram o maior conteúdo de glicose, enquanto xilose foi maior em S. officinarum e S. barberi. A determinação do conteúdo de lignina, em adição a testes histoquímicos com corantes específicos para lignina, confirmaram a maior deposição deste polímero nos internódios maduros das quatro espécies estudadas, sendo o processo de lignificação mais acentuado em S. spontaneum e S. robustum. A razão S/G e a porcentagem de sacarificação em internódios maduros foram menores em S. spontaneum e S. robustum do que em S. officinarum e S. barberi, e não apresentaram correlação, ou seja, a maior presença de unidades S não se refletiu em maior taxa de sacarificação. A análise do perfil de oligômeros por UPLC/MS foi possível identificar 11 estruturas, entre aldeídos, monômeros, dímeros e trímeros. Independentemente da idade do internódio, S. spontaneum e S. robustum possuem a maior diversidade e frequência de oligômeros quando comparadas com S. officinarum e S. barberi. A análise por espectroscopia 2D HSQC NMR evidenciou que S. barberi e S. officinarum possuem maior porcentagem de p-hidroxicinamatos (p-coumarato e ferulato) e grupos acetil substituintes (posição C-3 e total). Um total de 13 unigenes foram identificados nas espécies de Saccharum, os quais foram: 1 COMT, 1 HCT, 1 F5H, 2 4CLs, 3 CAD,1 C3H, 1 C4H, 2 CCoAOMT e 1 CCR. A análise das árvores filogenéticas revelam que as sequências das enzimas da rota biosintética da lignina das espécies de Saccharum se agruparam preferencialmente, com o seus ortologos de Sorghum bicolor e Zea mays e cana de açúcar (parentes mais próximos do gênero Saccharum na tribo Andropogoneae) em clados sempre suportados por alto valores de bootstrap. Os genes identificados apresentaram alta homologia entre si e com híbridos comerciais (Bottcher et al., 2013). Desta forma, os resultados mostram que existe conservação entre os genes entre espécies e híbridos, mas que de alguma forma sua regulação influência o conteúdo e o tipo de lignina. Não foram feitas análises de expressão neste estudo, mas independente disso, os resultados mostram a importância de se estudar os fatores de transcrição no controle da biossíntese e de lignina, o que poderia explicar as variações encontradas no conteúdo e composição desse polímero da parede celular Abstract: Sugarcane ranks among the most efficient plants when it comes to collecting and converting sunlight into chemical energy, displaying a high capacity to accumulate biomass. With the advent of second generation ethanol (2GE), otherwise known as lignocellulosic ethanol, the bagasse has received a lot of attention as raw material for the production of said biofuel. Its use, however, poses great challenges, especially because the cane¿s biomass is lignified (~23%), which limits the saccharification process. Therefore, the study of the factors that govern the cell wall¿s recalcitrance in plants that present characteristics of bioenergy is relevant to the development of hybrid kinds of cane in bioenergetics programs in order to maximize the production of 2GE. The objective of this research has been to study biosynthesis of lignin in the Saccharum spontaneum. Saccharum officinarum, Saccharum robustum and Saccharum barberi species through the identification of genes of the biosynthetic pathway of lignin and the analysis of the components of the cell wall in bot new (second + third) and mature (eighth) internodes. In this study, the content of both structural and non-structural carbohydrates has been contrasting between the different species, since both S. officinarum and S. barberi had a larger accumulation of total soluble sugars, while S. spontaneum and S. rubustum had a larger deposition of structural polysaccharides. S. spontaneum presented a noticeable accumulation of starch in comparison with other species of Saccharum. S. spontaneum and S. robustum presented the largest glucose content, while the xylose was more abundant in S. officinarum and S. barberi. The determination of the lignin content, in addition to histochemical tests with lignin-specific dyes, has confirmed the larger deposition of this polymer in the mature internodes of the four studied species, the lignification process being more accentuated in S. officinarum e S. barberi. The S/G ratio and the saccharification percentage in mature internodes were smaller in S. spontaneum and S. robustum than in S. officinarum and S. barberi, and presented no correlation, that is, the bigger presence of S units did not translate into a higher saccharification ratio. From the analysis of the profile of the oligomers by UPLC/MS it was possible to identify 11 structures between aldehydes, monomers and trimers. Independently from the internodes¿ age, S. spontaneum and S. robustum possess the largest variety and frequency of oligomers when compared to S. officinarum and S. barberi. The analysis through 2D HSQC NMR spectroscopy has brought evidence that S. officinarum and S. barberi possess a larger percentage of p-hydroxycinnamates (p-coumarate and ferulate) and acetyl substituent groups (C-3 position and total). 13 unigenes in total have been identified in the Saccharum species, which were: 1 COMT, 1 HCT, 1 F5H, 2 4CLs, 3 CAD, 1 C3H, 1 C4H, 2 CCoAOMT and 1 CCR. The analysis of the phylogenetic trees revealed that the sequences of enzymes from the Saccharum species¿ lignin¿s biosynthetic pathway grouped preferentially with its orthologs of Sorghum bicolor, Zea mays and sugarcane (the most closely related to the Saccharum gender in the Andropogoneae tribe) into clades always supported by high bootstrap values. The identified genes presented high homology between themselves and with commercial hybrids (Bottcher et al., 2013). Thus, the results show that there is conservation of genes between species and hybrids, but their regulation influences somehow both the content and the kind of lignin. Expression analysis weren¿t made in this study, but the results show nevertheless the importance of studying the transcription factors in the control of lignin biosynthesis, which could explain the variations found in both content and composition of this polymer in the cell wall Mestrado Biologia Vegetal Mestre em Biologia Vegetal FAPESP 2014/25994-1 CAPES

Made available in DSpace on 2015-10-21T20:35:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-01-01. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-22T09:47:58Z : No. of bitstreams: 1 WOS000352022600001.pdf: 360351 bytes, checksum: a5dc9f7802bc93d092aac9fa9748b4ee (MD5) Objetivou-se avaliar as características agronômicas e químico-bromatológicas de híbridos de milho para ensilagem. Os tratamentos avaliados foram nove híbridos de milho (MX 300, RB 9308, 2B655, XB 6012, GNZ 2500, PL6890, PRE 32D10, PRE 22T10 e AG 1051), com três repetições. As maiores produções de MV foram verificadas nos híbridos PL6890 e PRE 32D10, enquanto a maior produção de MS foi observada no híbrido PRE 32D10 (13,43 t ha-1). Os híbridos PRE 32D10 e PRE 22T10 destacaram-se por apresentarem maior porcentagem de lâminas foliares em relação à planta inteira, enquanto a menor porcentagem de colmos foi encontrada nos híbridos MX 300, 2B655 e XB 6012, entretanto a maior relação folha:colmo foi verificada no híbrido XB 6012 (0,49). Observou-se maior teor de PB no híbrido PRE 32D10 (9,10% da MS), enquanto o menor teor de FDN (57,78% da MS) e celulose (24,27% da MS) foram verificados no híbrido GNZ 2500. O híbrido PL6890 apresentou maior teor de FDA (39,20 % da MS) e lignina (8,63% da MS), os demais híbridos apresentaram valores inferiores. Verificou-se menor N retido na FDN (NIDN) no híbrido RB 9308, enquanto a menor retenção de N em FDA (NIDA) ocorreu no híbrido 2B655. A menor capacidade tampão (CT) foi verificada no híbrido 2B655 (0,29). Embora haja diferenças na composição químico-bromatológica dos híbridos de milho avaliados neste estudo, recomenda-se utilizar os híbridos MX 300, PL6890 e PRE 32D10 por apresentarem produção de matéria seca mais elevada, os quais podem refletir na amortização dos custos na produção das silagens. Our aim was to evaluate agronomic and chemical characteristics of corn hybrids to ensiling. It were evaluated nine corn hybrids (MX 300, RB 9308, 2B655, XB 6012, GNZ 2500, PL6890, PRE 32D10, PRE 22T10 e AG 1051), with three replicates. The higher fresh matter yield were observed in the hybrids PL6890 and PRE 32D10, while the dry matter yield was observed in the hybrid PRE 32D10 (13.43 t ha(-1)). The hybrids PRE 32D10 and PRE 22T10 stood out to present higher percent of leaf in relation to whole plant, while the lower percent of stems was found in the hybrids MX 300, 2B655 and XB 6012, however the higher leaves: stems relation was found in XB 6012 (0.49). There was higher CP content in the hybrid PRE 32D10 (9.10% of DM), while the lower NDF (57.78% of DM) and cellulose content (24.27% of DM) were observed in the hybrid GNZ 2500. The hybrid PL6890 presented higher ADF and lignin contents, the others hybrids had values lower. The lower NDIN content was observed in the hybrid RB 9308, while the lower AIDN content occurred on the hybrid 2B655. The lower buffer capacity was observed in the hybrid 2B655 (0.29). There are some differences on chemical composition among the corn hybrids used in this study, however, it is recommended to use the hybrids MX 300, PL6890 and PRE 32D10 for showing higher dry matter yield, which may reflect in the amortization of silage production costs. Our aim was to evaluate agronomic and chemical characteristics of corn hybrids to ensiling. It were evaluated nine corn hybrids (MX 300, RB 9308, 2B655, XB 6012, GNZ 2500, PL6890, PRE 32D10, PRE 22T10 e AG 1051), with three replicates. The higher fresh matter yield were observed in the hybrids PL6890 and PRE 32D10, while the dry matter yield was observed in the hybrid PRE 32D10 (13.43 t ha-1). The hybrids PRE 32D10 and PRE 22T10 stood out to present higher percent of leaf in relation to whole plant, while the lower percent of stems was found in the hybrids MX 300, 2B655 and XB 6012, however the higher leaves: stems relation was found in XB 6012 (0.49). There was higher CP content in the hybrid PRE 32D10 (9.10% of DM), while the lower NDF (57.78% of DM) and cellulose content (24.27% of DM) were observed in the hybrid GNZ 2500. The hybrid PL6890 presented higher ADF and lignin contents, the others hybrids had values lower. The lower NDIN content was observed in the hybrid RB 9308, while the lower AIDN content occurred on the hybrid 2B655. The lower buffer capacity was observed in the hybrid 2B655 (0.29). There are some differences on chemical composition among the corn hybrids used in this study, however, it is recommended to use the hybrids MX 300, PL6890 and PRE 32D10 for showing higher dry matter yield, which may reflect in the amortization of silage production costs. Univ Estadual Paulista, UNESP, Dept Zootecnia, Jaboticabal, SP, Brazil Univ Camilo Castelo Branco, UNICASTELO, Descalvado, SP, Brazil EPAMIG, Empresa Pesquisa Agropecuaria Minas Gerais, Uberaba, MG, Brazil UNESP, Dept Zootecnia, Jaboticabal, SP, Brazil Univ Estadual Paulista, UNESP, Dept Zootecnia, Jaboticabal, SP, Brazil UNESP, Dept Zootecnia, Jaboticabal, SP, Brazil

Paracoccidioidomicose é uma importante micose sistêmica na América latina, com alta incidência no Brasil, Argentina, Colômbia e Venezuela. A doença é atribuída ao fungo termodimórfico Paracoccidioides spp.. Durante o processo infecioso podemos destacar o papel desempenhado pela parede celular, estrutura esta, vital para o crescimento, sobrevivência, e morfogênese do fungo, a qual está em constante mudança em resposta a sinais do ambiente. O interesse no estudo da parede celular de fungos ocorre principalmente pela ausência dessa estrutura nas células de mamíferos; por esse motivo os componentes da parede são alvos promissores para o desenvolvimento de novas drogas. Para descrever o perfil das proteínas constituintes da parede celular (PPCs) de Paracoccidioides sp. nas formas leveduriforme e miceliana, foi utilizada uma abordagem proteômica combinando cromatografia líquida em nanoescala com espectrometria de massas multiplexada (nanoUPLC-MSE). Entre as proteínas identificadas foi encontrada uma transglicosidase, homologa a Crh1p, correspondendo a uma proteína GPI ancorada, conhecida por estar envolvida em ligar quitina à β-glucana. Adesinas anteriormente descritas em Paracoccidioides sp. como enolase, gliceraldeído-3- fosfato desidrogenase, álcool desidrogenase, frutose-1,6-bifosfato aldolase e algumas chaperonas também foram identificadas. Além disso, nós identificamos a formamidase que tem sido descrita como localizada na parede celular e pode estar envolvida no metabolismo de nitrogênio, além de contribuir com propriedades antigênicas. Paracoccidioidomycosis (PCM) is the important systemic mycosis in Latin America, with high incidence in Brazil, Argentina, Colombia and Venezuela. The disease has been attributed to the thermodimorphic fungus Paracoccidioides sp.. During the infective process, we can highlight the role of the cell wall, which is a dynamic structure, vital for growth, survival and morphogenesis of the fungus. In addition, this structure is constantly changing in response to environmental signals and different stages of the cycle of the fungus. The interest in the fungal cell wall occurs primarily by lack of this structure in mammalian cells; for this reason cell wall components are promising targets for antifungal drug design. In order to describe the profile of cell wall proteins (CWPs) of Paracoccidioides sp., it was used a proteomic approach coupling nanoscale liquid chromatography to multiplexed mass spectrometry (nanoUPLC-MSE) to identify the CWPs isolated from Paracoccidioides sp. yeast cells and mycelia. Among the identified proteins, it was found a transglycosylase orthologue to the Crh1p, which is a GPI anchored protein, known to be involved in attaching chitin to β-glucan. Adhesins previously described in Paracoccidioides sp. such as enolase, glyceraldehyde-3-phosphate, alcohol dehydrogenase, fructose-1,6-biphosphate aldose and some chaperones were also identified. Moreover, we identified formamidase that was previously described as localized in the fungus cell wall and may be involved in nitrogen metabolism besides contributing with antigenic properties. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2020-04-30T19:16:12Z No. of bitstreams: 1 2013 - Bruno Couto da Silva.pdf: 4598422 bytes, checksum: e4985dfbfeb330a18221071cb7ebc2c8 (MD5) Made available in DSpace on 2020-04-30T19:16:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013 - Bruno Couto da Silva.pdf: 4598422 bytes, checksum: e4985dfbfeb330a18221071cb7ebc2c8 (MD5) Previous issue date: 2013-05-24 Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior, CAPES, Brasil. This research aimed to reduce lignin and p-coumaric acid content through ozonolysis using sugarcane bagasse to obtain a material with lower recalcitrance. Ozone was produced by an ozone generator with medical purity oxygen. The reaction occurred in a glass column with continuous ozone flow at 400 mg / h. The standardization of the ozone flow was performed by iodometry. As a sample, it was used sugarcane bagasse (Saccharum spp), variety rb867515 pre-extracted with ethanol PA. The bagasse was previously ground, and lignin and p-coumaric acid determined by the Klason method (24%) and HPLC (96 mg / ml), respectively. Infrared (FTIR) transmittance mode analyses of control sample, and the reaction products under neutral, basic and acidic pH revealed that the reactions promoted biomass transformations related to structural characteristics of the original lignin content. The observed infrared signals were quantitated by baseline correction using the signal 1500 cm-1 as internal standard. Spectra were recorded 13C NMR CP / MAS solid samples as well as control of the ozonolysis products. For the analysis of p-coumaric acid content, it was used a method for the determination of phenolic acids in the cell wall described in specific literature. The determination of p-coumaric acid was performed by HPLC using standard from FLUKA, inc. to obtain calibration curve. It was found 96.?g/ml on control sample, whereas in neutral condition 6h was found 4.9 mg / ml, in basic 2h was found 7.5 mg / ml and in 4h acid was found 9.5 g / ml. There was a significant loss of lignin, as determined by the Klason method, reducing the original 24% lignin of the control sample to 7.55% (2 h), 8.72% (4 h) and 13.78% (6 h) under neutral conditions, 11.70% (2 h), 13.83% (4 h) and 9:35% (6 h) and 6.67% (2 h) 6.67% (4 h) and 13.04% (6 h) in acidic pH. These results showed that the process of ozonolysis reduced the lignin content and p-coumaric acid concentration in the biomass allowing the change of the proposed structural characteristic of lignin etheric structure for a condensed structure, indicating that the original recalcitrance was significantly reduced the observed characteristics final material. There were some losses of cellulose and hemicellulose. The analyzes showed no changes in these constituents. Esta pesquisa teve como objetivo a redu??o dos teores de lignina e ?cido p-cum?rico por ozon?lise utilizando baga?o de cana-de-ac?car visando obter um material com menor propriedade de recalcitr?ncia. O oz?nio foi produzido por um ozonizador alimentado por oxig?nio de pureza medicinal. A rea??o ocorreu em uma coluna de vidro com fluxo cont?nuo de oz?nio de 400 mg/h. A padroniza??o do fluxo de oz?nio foi realizada por iodometria. Como amostra, foi utilizado o baga?o de cana (Saccharum spp), variedade rb867515 pr?-extra?do com etanol PA. O baga?o foi previamente mo?do, tendo seus teores de lignina e ?cido p-cum?rico determinados pelo m?todo de Klason (24 %) e por CLAE (96,91 ?g/ml) , respectivamente. Foram realizadas an?lises por infravermelho (FTIR) no modo transmit?ncia da amostra controle e dos produtos de rea??o em condi??es neutras, b?sicas e ?cidas, revelando que as rea??es promoveram trasnforma??es da biomassa relacionadas as caracteristicas estruturais originais da lignina controle. Os sinais observados foram quantificados por m?todo de linha base, utilizando o sinal 1500 cm-1 como padr?o interno. Foram registrados espectros de RMN 13C CP/MAS no estado s?lido das amostras controle assim como dos produtos de ozon?lise. Para as an?lise do teor de ?cido p-cum?rico das amostras, foi utilizado m?todo para a determina??o de ?cidos fen?licos da parede celular conforme descrito na literatura espec?fica. A determina??o do teor de ?cido p-cum?rico foi realizada por CLAE usando padr?o do mesmo ?cido de marca FLUKA ap?s tra?ada a curva de calibra??o. Foram encontrados 96,91?g/ml para amostra controle, nos produtos de ozon?lise em condi??o neutra 6h (4,9 ?g/ml), b?sico 2h (7.5 ?g/ml) e ?cido 4h (9.5 ?g/ml). Houve perda expressiva de lignina, determinadas atrav?s do m?todo de Klason, tendo reduzido de 24% da amostra controle para produtos de ozon?lise 7,55% (2 h); 8,72% (4 h) e 13,78% (6 h) em condi??es neutras, de 11,70% (2 h); 13.83% (4 h) e 9.35% (6 h) e 6.67% (2 h), 6,67% (4 h) e 13,04% (6 h) em meio ?cido. Os resultados mostraram que o processo de ozon?lise reduziu o teor de lignina e a concentra??o ?cido p-cum?rico na biomassa, permitindo, propor que houve mudan?a da caracteristica estrutural de lignina da amostra com estrutura et?rica para uma estrutura condensada, indicando que a recalcitr?ncia original foi significativamente reduzida, observadas as caracter?sticas finais do material. N?o foram determinadas as perdas de celulose e hemicelulose. Os espectros de RMN 13C n?o mostraram varia??es significativas desses constituintes.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:49:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Renan Vasconcelos Santos.pdf: 2145055 bytes, checksum: 12d61fee1beb0fbd0b1b459c9f469ff6 (MD5) Previous issue date: 2013-04-02 Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Since the dawn of civilization, man has used microbial fermentation to produce various consumer goods. The yeast Saccharomyces cerevisiae is undoubtedly the main factor in known fermentation processes, responsible for the production of bread, beer, wine, cachaça and bioethanol. S. cerevisiae was the first eukaryotic organism to have its genome sequenced and has been used for several decades as a model for eukaryotic cellular and molecular studies. The yeast cell wall is a robust structure composed of a structural internal layer of glucan and chitin, and an outer layer of mannoproteins covalently linked to the structural layer, which determine the bulk properties of the cell surface. The flocculation of yeast can be defined as a non-sexual, reversible and calcium-dependent aggregation of cells in multicellular masses, called flocs, with subsequent sedimentation from the medium in which they are suspended. It is a very complex process and depends on numerous factors such as the characteristics of the medium (pH and the presence of cations), conditions of fermentation (oxygenation, sugars, growth temperature, and the ethanol concentration) and the expression of genes of the FLO family. The process involves the interaction of specialized cell wall proteins called lectins, present only in cell flocculants, and carbohydrates (receptors) in the cell wall of neighboring cells. Flocculation properties specifically set may lead to an improvement in the processing of fermentation biotechnology products, such as food, beverages and biofuels. The group s previous data on the identity of flocculation profile between wild yeast strains isolated from different stills showed two strains with a characteristic profile of sedimentation (BT0510 BT0605), while two others (BT0505 and BT0601) showed no flocculation capacity. The objective of this study was to evaluate the relationship between the content of carbohydrates (glucose and mannose) and cell wall-related genes to the flocculation process in order to better understand the factors that cause the difference in behavior flocculant. Yeast cells were grown in YEPD medium and incubated at 28 ° C and 150 rpm agitation. The cell wall was extracted by a combination of sonication, vigorous agitation with glass beads and boiling in detergent solution. After extensive washing with ultrapure water, the pellet containing the cell wall was incubated at 80 ° C to complete drying and determination of dry weight. Then the samples were subjected to hydrolysis with sulfuric acid, precipitation of sulphate ions by adding Ba (OH) 2, and concentration in vacuum. The liberated monosaccharides were analyzed by HPLC on a column of REZEX-RHM, isocratic elution with ultrapure water, differential refraction detector at 60 ° C. The expression levels of FLO genes and genes related to cell wall between a flocculent strain and a non-flocculent were compared using Real Time PCR. No significant difference was found between the levels of glucose and mannose in flocculent and non-flocculent strains, which suggests that the profile of flocculation is not directly related to the concentration of cell wall carbohydrates. Analysis of relative gene expression showed a significant increase in the FLO gene family (FLO1, FLO8 and FLO10) in flocculant strain, confirming expectations. A large increase of 27 times was noted in CWP1 gene, confirming studies suggesting a major importance of this gene for the cell wall and in the flocculation process. There was also an increase in other genes related to the cell wall. Studies of cell wall proteomics, and mass spectrometry analysis may help elucidate the results, and contribute to a better understanding of flocculation in fermentation processes Desde os primórdios da civilização, o homem utiliza as fermentações microbianas para a produção de diversos bens de consumo. A levedura Saccharomyces cerevisiae é, sem dúvida, o maior expoente dos processos fermentativos conhecidos, responsável pela fabricação do pão, da cerveja, do vinho cachaça e do bioetanol. S. cerevisiae foi o primeiro organismo eucarionte a ter seu genoma sequenciado e vem sendo utilizada há várias décadas como um modelo eucarionte para estudos celulares e moleculares. A parede celular de levedura é uma robusta estrutura composta por uma camada estrutural interna de glucanos e quitina, e uma camada externa de manoproteínas covalentemente ligadas à camada estrutural, que determinam a maior parte das propriedades de superfície da célula. A floculação de levedura pode ser definida como um processo não sexual, reversível e cálcio-dependente de agregação de células em massas multicelulares, chamadas flocos, com a subsequente sedimentação a partir do meio em que elas estão suspensas. É um processo muito complexo e depende de numerosos fatores, tais como as características do meio (pH e a presença de cátions), as condições de fermentação (oxigenação, os açúcares, a temperatura de crescimento, a concentração de etanol) e a expressão dos genes da família FLO. O processo envolve a interação de proteínas especializadas da parede celular denominadas lectinas, presentes apenas em células floculantes, e carboidratos (receptores) na parede celular das células vizinhas. Propriedades de floculação especificamente ajustadas poderia levar a uma melhoria no processamento de produtos biotecnológicos de fermentação, tais como alimentos, bebidas e biocombustíveis. Dados anteriores do grupo sobre a identificação do perfil de floculação entre cepas selvagens de levedura isoladas de diferentes alambiques mostraram duas cepas com um perfil característico de sedimentação (BT0510 e BT0605), enquanto outras duas (BT0505 e BT0601) sem capacidade de floculação. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a relação entre o conteúdo de carboidratos (glicose e manose) da parede celular e de genes relacionados à parede com o processo da floculação, a fim de melhor entender os fatores que causam a diferença no comportamento floculante. As células de levedura foram cultivadas em meio YEPD, incubadas a 28 ºC e 150 rpm de agitação. A parede celular foi extraída por combinação de sonicação, agitação vigorosa com pérolas de vidro e de ebulição em solução detergente. Após lavagem extensiva com água ultra pura, o pellet contendo a parede celular foi incubado a 80 ºC para secagem completa e determinação do peso seco. Em seguida, as amostras foram submetidas a uma hidrólise com ácido sulfúrico, precipitação de íons sulfato por adição de Ba(OH)2, e concentração a vácuo. Os monossacarídeos liberados foram analisados por HPLC na coluna REZEX-RHM, eluição isocrática com água ultra pura, detector de refração diferencial a 60 ºC. Por PCR em Tempo Real foram comparados os níveis de expressão dos genes FLO e de genes relacionados à parede celular entre uma cepa floculante e outra não-floculante. Não foi encontrada diferença significativa entre o teor de glicose e manose nas cepas floculantes e não floculantes, o que sugere que o perfil de floculação não está diretamente relacionado com a concentração de carboidratos de parede celular. A análise da expressão gênica relativa mostrou um aumento significativo dos genes da família FLO (FLO1, FLO8 e FLO10) na cepa floculante, confirmando as expectativas. Um grande aumento, de 27 vezes, foi observado no gene CWP1, corroborando com estudos que sugerem uma grande importância deste gene para a integridade da parede celular e para o processo de floculação. Também houve aumento de outros genes relacionados à parede celular. Estudos de proteômica da parede celular, além de análise em espectrometria de massas poderiam ajudar a elucidar os resultados encontrados, e contribuir para o melhor entendimento da floculação nos processos fermentativos

The experiment was conducted to evaluate the bromatological characteristics and the in vitro digestibility of four sugarcane varieties, subjected or not to hydrolysis, with quicklime. A completely randomized design was employed with three replications arranged in a 4 × 2 factorial scheme, with four sugarcane varieties (SP 52454, RB 867515, RB 855536 and IAC 862480), hydrolyzed or not. There was significant effect on brix (p < 0.05) and industrial fiber (p < 0.05), and IAC 862480 variety had the lowest levels of industrial fiber. There were no significant difference (p > 0.05) in neutral detergent fiber, acid detergent fiber and lignin levels among the sugarcane varieties under analysis and for the sugarcanes, hydrolyzed or not. The use of sugarcane hydrolysis with 1% quicklime improves the in vitro digestibility of NDF and ADF, regardless of the variety studied. Hydrolysis with 1% quicklime did not alter the sugarcane chemical composition.

Paracoccidioides brasiliensis é um fungo patogênico termodimórfico, agente causador da Paracoccidioidomicose (PCM), uma micose sistêmica que afeta principalmente indivíduos da América Latina. Muitos fatores são necessários para que P. brasiliensis estabeleça infecção, como o remodelamento da parede celular e a capacidade de captar nutrientes do hospedeiro para seu metabolismo. Como o íon ferro é um cofator de diversas reações, o hospedeiro diminui a disponibilidade de íons ferro na forma livre para o patógeno. Portanto, o presente trabalho visa investigar o perfil de proteínas da parede celular de P. brasiliensis quando em condição de depleção do íon ferro. Para esse fim, realizou-se a extração das proteínas da parede das células de P. brasiliensis em meio com restrição do íon ferro. O perfil proteômico das condições experimental e controle foram obtidos por eletroforese bidimensional com posterior análise de imagens. Análises estatísticas demonstraram as proteínas reguladas nas condições de depleção de ferro, que foram submetidas à digestão tríptica e identificação por espectrometria de massas. Foram identificadas 26 proteínas por perfil de digestão tríptica (PMF) e/ou perfil de fragmentação dos íons (MS/MS). A maioria dessas proteínas apresenta preditas modificações pós - traducionais e apenas algumas apresentam peptídeo sinal em suas sequências, o que sugere que elas são endereçadas à superfície por vias não clássicas. Paracoccidioides brasiliensis is a dimorphic fungus, the causative agent of paracoccidioidomycosis (PCM), a systemic mycosis that affects mainly people from Latin America. In order to establish infection, many factors are required for P. brasiliensis, such as cell wall remodeling and the ability to capture nutrients from the host. As iron is an important cofactor of many reactions, the host reduces the availability of free iron ions to the pathogen. Therefore, this study aims to elucidate the proteomic profile of the cell wall in response to iron depletion. The extraction of surface proteins of the cell wall in iron restriction and iron replete conditions was performed and the proteomic profile was obtained by two-dimensional electrophoresis with subsequent analysis of images. Statistical analysis demonstrated proteins with differential level of expression in each condition, which were subjected to tryptic digestion and identification by mass spectrometry. It was identified 26 proteins by peptide mass fingerprint (PMF) and/or ions fragmentation (MS/MS). The majority of these proteins have post - translational modifications and only some have in their sequences signal peptide, suggesting that they are addressed to the surface by non-classical pathways. Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq

Objetivou-se, neste trabalho, estudar a influência do lactato de cálcio e do tipo de açúcar nas propriedades mecânicas e na estrutura celular de pedaços de melão desidratados osmoticamente. O processo foi conduzido por duas horas com agitação de 120 rpm e temperatura controlada (30º C), utilizando-se soluções desidratantes de sacarose ou maltose a 40ºBrix, contendo lactato de cálcio em concentrações de 0, 0,5, 1,0 e 1,5% (p/v). As amostras foram submetidas às determinações de perda de água, ganho de sólidos, incorporação de cálcio, propriedades mecânicas (tensão e deformação na ruptura) e microscopia óptica. Os ensaios com maltose, em ação conjunta com o sal, promoveram uma maior perda de água e um menor ganho de sólidos. A adição de lactato de cálcio na solução osmótica de sacarose ou maltose resultou em maiores valores de tensão na ruptura para as frutas, sendo que tal aumento foi mais pronunciado nos ensaios com sacarose, devido à maior incorporação de cálcio observada nesses tratamentos. O lactato de cálcio mostrou-se eficiente na preservação da estrutura celular das amostras, quando utilizado em concentrações de até 1,0%. A maltose apresentou um maior efeito protetor na manutenção da funcionalidade da membrana celular, enquanto que o processo realizado apenas com soluções de sacarose, assim como os ensaios realizados com concentração de sal igual a 1,5% provocaram danos na parede celular e intensa plasmólise do citoplasma. The purpose of this work was to study the influence of calcium lactate and sugar type on mechanical properties and cellular structure of osmodehydrated melon pieces. The process was carried out for two hours under controlled temperature (30º C) and agitation (120 rpm), using a 40ºBrix sucrose or maltose solution containing calcium lactate (0 to 2,0%). Samples were analyzed with respect to water loss, solids and calcium gain, mechanical properties (stress and strain at rupture) and structure by light microscopy. Maltose treatments in combination with the salt action promoted higher water loss and lower solids gain rates. The calcium lactate addition in the sucrose or maltose solution resulted in higher stress at rupture values. This increase was more pronounced for sucrose treatments, due to the higher calcium uptake observed in these experiments. Calcium lactate was efficient in the maintenance of melon cellular structure when used at concentrations up to 1,0%. Maltose showed a higher protector effect in cellular membrane functionality, while the treatment performed only with sucrose solution as well as both treatments with salt concentration at 1,5%caused an intense cytoplasm plasmolysis and cell wall damages.

Made available in DSpace on 2016-06-24T04:00:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sergio Araujo Figueiredo.pdf: 5051471 bytes, checksum: 845523d46a114f99e92e4c1f07b80e2a (MD5) Previous issue date: 2011-06-03 ??-galactosidases are a class of glycosyl-hydrolases that act on the plant cell primary walls, hydrolyzing ??-D-galactose at the nonreducing ends of ??-D-galactosides present in several biological molecules. Initially a characterization of the monosaccharides present in the primary wall of the pericarp and endosperm of Coffea arabica fruits at different ripening stages was performed, identifying the polysaccharides present in these regions, along with the putative carbohydrate target for the ??-galactosidase. In parallel, a molecular and a biochemical characterization of ??-galactosidase was performed. A partial characterization of ??-galactosidase genomic DNA structure, along with a transcription analysis and an in vitro and in situ biochemical activity were performed, identifying peaks of expression in the early stages of growth and in fully ripe fruit. Finally, in order to evaluate the ??-galactosidase effects on coffee fruit ripening, C. arabica calli were transformed by biolistic using RNA interference approach, in order to obtain genetically modified coffee plants with a silenced ??-galactosidase expression. Three transgenic calli growing on selective medium containing ammonium glufosinate were obtained, two of which contained the ??-galactosidase gene fragment. These calli are under embryogenic regeneration and the resulting seedlings will be further analyzed in order to confirm the presence of the transgenes and to assess of the effects of ??-galactosidase gene silencing on coffee fruit ripening. As ??-galactosidases sao uma classe de glicosil-hidrolases que atuam na parede primaria das celulas vegetais, hidrolisando residuos ??-D-galactosis de extremidades nao redutoras de ??-D galactosideos presentes em diversas moleculas biologicas. Inicialmente foi feita uma caracterizacao dos monossacarideos presentes na parede primaria do pericarpo e do endosperma de frutos de Coffea arabica em distintas fases de maturacao, identificando os polissacarideos presentes nesta regiao celular, juntamente com os provaveis carboidratos-alvo para as ??-galactosidases. Em paralelo, foi realizada uma caracterizacao molecular e bioquimica das ??-galactosidases. Foi realizada uma caracteriza????o parcial da estrutura do seu DNA genomico, juntamente com uma analise do nivel de transcricao e da atividade bioquimica in vitro e in situ foram realizadas, identificando picos de expressao nas fases iniciais de crescimento e nos frutos completamente maduros. Por fim, visando avaliar os efeitos das ??-galactosidases na maturacao de frutos de cafe, calos embriogenicos de C. arabica foram transformados por biobalistica, utilizando a tecnica do RNA interferente, com a finalidade de obtencao de plantas geneticamente modificadas de cafeeiro para o silenciamento da expressao do gene das ??-galactosidases. Foram obtidos tres calos transgenicos crescendo em meio seletivo com glufosinato de amonio, dentre os quais dois continham o fragmento deste gene. Estes calos encontram-se em fase de formacao de embrioes somaticos e as plantulas resultantes desta regeneracao serao analisadas, a posteriori, para confirmacao da presenca dos transgenes e avaliacao dos efeitos do silenciamento do gene das ??-galactosidases sobre a maturacao de frutos de cafe.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-17Bitstream added on 2014-06-13T18:34:30Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_af_me_jabo.pdf: 572955 bytes, checksum: f64dd01902ef75161ee1881df3afa8ed (MD5) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) A avaliação nutricional de alimentos para ruminantes tem sido de grande importância para adequar os bancos de dados dos sistemas de formulação de dietas em regiões de clima tropical. Devido à grande quantidade de opções de forrageiras, várias alternativas de avaliação dos alimentos foram desenvolvidas nas últimas décadas, entre elas, as técnicas in vitro. O objetivo desse trabalho foi avaliar a composição química, digestibilidade e a produção de gases in vitro de três cultivares de Brachiaria: Brachiaria brizantha cv. Marandu, Brachiaria brizantha cv. Xaraés e Brachiaria híbrida cv. Mulato, submetidas a níveis de oferta (4, 7, 10 e 13% do peso vivo animal), sob ciclos de pastejo rotativo. A cultivar Xaraés apresentou os maiores teores de FDN, FDNcp, FDA, LIG e menor produção de gases em 96 horas no componente lâmina foliar . Houve diminuição dos CNF e fração B2 e o aumento da fração C dos carboidratos nos componentes colmo e lâmina foliar entre ciclos de pastejo em todos as cultivares. A cultivar Marandu apresentou maiores valores de digestibilidade (DIVMO e DIVMS) nos dois componentes. A cultivar Marandu apresentou a melhor composição química e maiores valores de digestibilidade Nutritional evaluation of ruminant feed has been of great importance to adapt the databases of the systems of feed formulation in tropical regions. Due to the large amount of various alternative options for forage food assessment were developed in recent decades, among them the in vitro techniques. The aim of this study was to evaluate the chemical composition, digestibility and gas production in vitro of three cultivars of Brachiaria, Brachiaria brizantha cv. Marandu, Brachiaria brizantha cv. Xaraés and Brachiaria hybrid cv. Mulato, subjected to offer levels (4, 7, 10 and 13% of live weight) under rotational grazing. Xaraés cultivar showed the highest contents of NDF, NDFcp, ADF, lignin, and lower gas production in 96 hours in the stem and leaf fractions. There was a decrease in NFC and B2 fractions and increased the fraction C of carbohydrates in the stem and leaf fractions between grazing cycles in all the cultivars. Marandu cultivar showed the highest digestibility (IVDMD and IVDOM) in both fractions. The leaf fraction had lower levels of fiber and higher protein content in relation to the stem fraction. Cultivar Marandu had the best chemistry and higher digestibility values

Submitted by Simone Maisonave (simonemaisonave@hotmail.com) on 2020-06-13T23:12:34Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Tatiane_Timm.pdf: 477905 bytes, checksum: bb527c4f3c55544563770801397a5c7b (MD5) Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2020-06-15T17:31:12Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Tatiane_Timm.pdf: 477905 bytes, checksum: bb527c4f3c55544563770801397a5c7b (MD5) Made available in DSpace on 2020-06-15T17:31:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Tatiane_Timm.pdf: 477905 bytes, checksum: bb527c4f3c55544563770801397a5c7b (MD5) Previous issue date: 2011-02-09 Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq A maçã ‘Gala’ apresenta vida útil limitada devido às alterações de textura da polpa, que podem ser observadas já nos primeiros meses de armazenamento refrigerado. Essas mudanças se devem às alterações mediadas por enzimas atuantes na parede celular e na lamela média. Dentre essas enzimas, as a-L-arabinofuranosidases atuam na hidrólise nas cadeias laterais da pectina, mostrando importância na alteração da textura dos frutos. A expressão e atividade dessas enzimas, assim como outras alterações que acompanham o amadurecimento, têm sido relacionadas com a ação do etileno, porém essa relação nem sempre é clara. Deste modo, o presente trabalho teve como objetivo estudar a influência do etileno sobre a expressão do gene MdAF3 em um clone de maçã ‘Gala’ (Baigent) bem como avaliar a atividade enzimática a-L-arabinofuranosidase e outras alterações dos frutos, como firmeza de polpa e síntese de etileno endógeno, em resposta aos tratamentos com etileno exógeno e 1-MCP.Os níveis de transcritos de MdAF3 foram reduzidos com a aplicação de 1-MCP e aumentados pelo tratamento com etileno, o que indica ser este gene regulado pelo hormônio. A atividade enzimática esteve mais baixa com o 1-MCP e a firmeza de polpa manteve-se mais alta com esse tratamento. Esses resultados indicam que o gene MdAF3 codifica uma proteína com atividade -L-arabinofuranosidase e que esta, por sua vez, participa nos processos que culminam com a mudança na textura de maçãs cv. ‘Gala’. Ainda, verificou-se que atividade enzimática e transcrição do gene mostraram importância no armazenamento desta cultivar, pois nesse período alcançaram níveis mais altos quando comparados com os frutos no momento da colheita. The ‘Gala’ apples has limited shelf life due to changes in texture of the pulp, which can be observed during the first months of storage. These changes are due to changes mediated by enzymes active in the cell wall and middle lamella of cells. Among these enzymes, the a-L-arabinofuranosidases act in the hydrolysis of pectin side chains, showing its importance in changing the texture of the fruit. Expression and activity of these enzymes, as well as other changes that occur during ripening, have been related to ethylene action, although this relationship is not always clear. Thus, the aim of this work was to study the influence of ethylene on gene expression MdAF3 in a clone ‘Gala’ apple (Baigent). Additionally, evaluate the a-Larabinofuranosidase enzyme activity, and other changes, such as firmness and endogenous synthesis of ethylene in response to treatments with exogenous ethylene and 1-MCP. The levels of MdAF3 transcripts were reduced by applying 1- MCP and increased by treatment with ethylene, indicating that this gene is regulated by the hormone. The enzyme activity was lower with 1-MCP, and the pulp firmness remained higher with this treatment. These results indicate that the gene MdAF3 encodes a protein with activity -L-arabinofuranosidase, and this enzyme participates in the processes that culminate with changes in the pulp texture of apples cv. 'Gala'.Besides, it was found that both enzyme activity and gene transcription were important for the storage of this cultivar, since in this period reached higher levels when compared with the fruit at harvest.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-12-02Bitstream added on 2014-06-13T21:06:27Z : No. of bitstreams: 1 lourenco_msn_dr_jabo.pdf: 595650 bytes, checksum: 1a674a74c6c121235358d42b7a1a4db4 (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Foram realizados dois experimentos, objetivando-se avaliar quantitativamente diferentes metodologias propostas em análises de fibra em detergente neutro (FDN) e fibra em detergente ácido (FDA), visando à precisão dos resultados analíticos, a redução nos custos e no tempo das análises, bem como a minimização no descarte de resíduos químicos. Foram utilizados seis alimentos de uso corrente na alimentação animal: feno de Tifton 85 (Cynodon spp.), cana-de-açúcar (Saccharum officinarum L.), silagem de milho (Zea mays L.), capim-xaraés (Brachiaria brizanta cv. Xaraés), capim-marandu (Brachiaria brizanta cv. Marandu) e um concentrado protéico, o farelo de babaçu (Orbignya phalerata). No primeiro experimento foram comparados os teores de FDN e FDA obtidos pelo método convencional com três métodos alternativos que utilizam a autoclave como sistema digestor e no segundo experimento foi avaliada a possibilidade de reutilizar, por uma vez, as soluções detergentes e a acetona recuperada, utilizadas no desenvolvimento das primeiras análises. O delineamento experimental utilizado na análise de cada alimento foi o inteiramente casualizado, em um esquema fatorial 4x2 (4 metodologias e 2 formas de análises), no primeiro experimento e 2x4x2 (2 utilizações, 4 metodologias e 2 formas de análises), no segundo experimento. Observou-se que a implantação das metodologias alternativas permitiu ganhos significativos com a redução dos custos operacionais e do tempo da análise, minimizando os impactos ambientais. A precisão analítica dos métodos alternativos variou entre os alimentos estudados, tendo sido recomendados nas determinações dos teores de FDN no feno de Tifton 85, farelo de babaçu e cana-de-açúcar e nas determinações dos teores de FDA apenas no farelo de babaçu pelo método alternativo que utiliza a autoclave e saquinhos... Two experiments were conducted, aiming to quantitatively evaluate different methods proposed for the analysis of neutral detergent fiber (NDF) and acid detergent fiber (ADF). This evaluation included the precision of analytical results, the reduces costs and time analysis and minimizes waste generation. Six typical foods in animal nutrition were used: Tifton 85 hay (Cynodon spp.), sugarcane (Saccharum officinarum L.), corn silage (Zea mays L.), grass xaraés (Brachiaria brizantha cv. Xaraés) grass marandu (Brachiaria brizantha cv. Marandu) and a proteic concentrated, the babassu meal (Orbignya phalerata). The first experiment compared the NDF and ADF results of the conventional method with three alternative methods that use autoclave as system digester and on the second experiment the possibility of reuse, for once, of detergent solutions and recovered acetone applied on the first experiment, were studied.The experimental design used in the analysis of each food was completely randomized in a 4x2 factorial scheme (four methods and two forms of analysis) in the first experiment and 2x4x2 (2 uses, four methods and two forms of analysis) in the second experiment .It was observed that alternative methodologies has allowed significant gains by reducing operating costs, time of analysis, minimizing environmental impacts. The analytical precision of alternative methods varied among studied foods. NDF alternative methods were recommended for Tifton 85, babassu meal and sugarcane samples. ADF determinations by alternative methods are not recommended for samples studied; except for babassu meal that can be analyzed by the alternative method using an autoclave and bags of ANKOM. All analytical results of the determinations of NDF and ADF showed the same behavior in both forms of analysis used (non-sequential and sequential), except the determination of ADF in corn silage... (Complete abstract click electronic access below)

As características químico-bromatológicas e a digestibilidade do capim-braquiária (Brachiaria decumbens cv. Basilisk) e do amendoim forrageiro (Arachis pintoi cv. Amarillo) foram avaliadas em resposta a níveis de sombreamento artificial (0, 50 e 70%), com o objetivo de determinar alterações no valor nutritivo destas forrageiras em função das variações no ambiente luminoso. Utilizou-se o delineamento em blocos completamente casualizados, com três repetições. Foram realizados três e dois cortes, respectivamente, para avaliação das plantas de braquiária e amendoim forrageiro, ao longo do período experimental. O teor de matéria seca das duas espécies avaliadas foi reduzido (p0,05) nos constituintes de parede celular, no primeiro corte. Já as plantas coletadas no segundo corte apresentaram queda linear (p0,05) em nenhum dos cortes. De modo geral, o teor dos macronutrientes Ca, Mg, P e K quando alterado, aumentou em função dos níveis crescentes de sombra. Tanto o amendoim forrageiro quanto a braquiária apresentaram variações em sua composição químico-bromatológica em função dos tratamentos. Os coeficientes de digestibilidade das duas espécies não foram afetados de forma significativa pelo incremento nos níveis de sombra. The chemical characteristics and digestibility of signalgrass (Brachiaria decumbens cv. Basilisk) and forage peanut (Arachis pintoi cv. Amarillo) were evaluated in response to different shade levels (0, 50 and 70%) with the objective of determine changes in nutritive value of these forage species. Treatments were arranged in four replicates of a randomised complete block design. There were three and two harvests within the experimental period, for signalgrass and forage peanut, respectively. The dry matter content of both species was reduced (p0.05) in the cell wall constituents. On the other hand, in the second harvest it was observed a linear reduction (p0.05) by treatments. The variation in macronutrients (Ca, Mg, P and K) concentration was not consistent between species and harvests, but in general the concentrations of the minerals evaluated were higher under shade. The data indicated that signalgrass and forage peanut have great potential to produce quality forage in silvopastoral systems.

Objetivou- se verificar a existência de variação genética entre cultivares de capim- colonião quanto ao efeito da maturidade sobre a composição química e a digestibilidade, e classificar os genótipos de acordo com características produtivas e de qualidade nutricional. Utilizou- se o delineamento de blocos ao acaso, com parcelas subdivididas e três repetições, considerando parcelas as datas de corte e subparcelas, os genótipos. A produção de MS diferiu entre os genótipos somente aos 90 dias de crescimento, mas a porcentagem de folhas, colmos e material morto variou tanto aos 60 como aos 90 dias de crescimento. Ao contrário do observado para as folhas, a composição química e a digestibilidade do colmo apresentou grande variabilidade entre os genótipos. O colmo apresentou concentrações mais elevadas de FDN, FDA e lignina e menores valores de PB em comparação às folhas. Apresentou ainda maior digestibilidade da MS aos 60 dias de crescimento e maior digestibilidade da FDN aos 30 e 60 dias de crescimento. No agrupamento dos cultivares, os genótipos PM39 e PM47 foram apontados como os mais promissores no programa de melhoramento, por apresentarem alta produtividade e alta qualidade nutricional. A maturidade pouco afeta a digestibilidade de folhas em comparação ao colmo. Quando a participação de colmo no total de massa seca aumenta, esse componente passa a ser o limitador da qualidade de plantas forrageiras. Portanto, programas de melhoramento devem considerar, além da relação folha:colmo, também a digestibilidade in vitro da FDN do colmo na seleção de genótipos. This study aimed to verify the existence of genetic variation among guineagrass cultivars regarding the effect of maturity on chemical composition and digestibility, and to classify the genotypes according to productive characteristics and nutritional quality. A randomized block design, with split- plots and three replications, was used. Dates of the cuts were considered as the plots, and the genotypes were considered as the sub- plots. Dry matter yield differed among the genotypes only at 90 days of growth, but the percentage of leaves, stems, and senesced material changed at 60 days of growth, as well as at 90 days of growth. Differently from what was observed for the leaves, chemical composition and digestibility of stem showed great variability among genotypes. The stem showed higher concentrations of neutral detergent fiber, acid detergent fiber, and lignin, and lower values of crude protein, when compared to the leaves. It also presented higher digestibility of dry matter at 60 days of growth, and higher digestibility of neutral detergent fiber at 30, and at 60 days of growth. Clustering of the cultivars identified the PM39 and PM47 genotypes as the most promising ones in the breeding program, because they showed high productivity and high nutritional quality. Maturity has little effect on leaf digestibility when compared to the stem. When participation of the stem increases in the total of dry matter, this component becomes the major factor limiting quality of forage plants. Therefore, breeding program must consider, in addition to leaf:stem ratio, the in vitro digestibility of neutral detergent fiber of the stem when selecting genotypes.