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O objetivo deste estudo foi caracterizar os determinantes de resistência aos antimicrobianos e fatores de virulência de isolados clínicos de Acinetobacter spp. recuperados de pacientes atendidos no Hospital Universitário (HU) de Londrina no período de janeiro de 2006 à março de 2018. Artigo científico A: Neste estudo foram caracterizados um total de 282 isolados clínicos de Acinetobacter baumannii recuperados de material respiratório de pacientes hospitalizados nas unidades de terapia intensiva (UTI) do HU entre os anos de 2006 e 2016. A identificação dos isolados foi realizada por métodos bioquímicos convencionais, sistemas automatizados e amplificação do gene blaOXA-51. A maioria dos isolados foram considerados multirresistentes (MR) (76,3%) e altas taxas de resistência aos antimicrobianos foram verificadas, inclusive aos carbapenêmicos, fármacos de escolha para o tratamento de infecções causadas por A. baumannii MR. A elevada taxa de resistência aos carbapenêmicos (100,0%) é atribuída à prevalência de isolados portadores do gene codificador da carbapenemase OXA-23 (93,6%), sendo o gene blaOXA-23, em sua maioria, associado ao Tn2008 (92,8%), seguido pelo Tn2006. Além disso, a variante blaOXA-253 foi detectada em um isolado (0,4%). Um perfil policlonal foi observado entre os isolados, os quais pertenceram aos complexos clonais internationais CC113/79, CC110/25 e CC103/15. Estes dados justificam a manutenção e disseminação do gene blaOXA-23 entre os isolados de A. baumannii nesta instituição. Artigo científico B: Neste estudo reportamos a descrição do primeiro isolado de Acinetobacter bereziniae carreador do gene blaOXA-58 detectado no Brasil. Pelo sequenciamento do genoma total do isolado Ac 374/14 verificou-se que este isolado, MR e forte produtor de biofilme, apresenta 13 genes de resistência aos antimicrobianos incluindo determinantes de resistência aos beta-lactâmicos, aminoglicosídeos, fluoroquinolonas, fenicóis e sulfonamida. Em adição, este isolado apresenta diversos sistemas de efluxo e genes de virulência. Por meio das análises in silico o contexto genético do gene blaOXA-58 foi caracterizado, demonstrando que este gene está flanqueado em ambos os lados pela sequência de inserção ISAba3, com o ISAba3 interrompido pela ISAba125 à montante do gene blaOXA-58. Este estudo revelou um novo determinante de resistência aos carbapenêmicos no HU, desta forma, é necessária a tomada de medidas de controle para impedir a disseminação deste gene. Artigo científico C: O objetivo deste estudo foi identificar a presença de genes codificadores de carbapenemases em espécies de Acinetobacter não-baumannii isoladas em um hospital brasileiro. Quatorze isolados de Acinetobacter spp. recuperados do HU entre 2006 e 2018 foram estudados. De acordo com a análise do sequenciamento do gene rpoB, foram identificados sete isolados de Acinetobacter bereziniae, dois de A. haemolyticus, dois de A. ursingii, e um de cada das espécies A. radioresistens, A. colistiniresistens e Acinetobacter sp. Seis isolados, cinco A. bereziniae e um A. colistiniresistens, carrearam o blaOXA-58 e foram considerados produtores de biofilme, e o isolado identificado como A. radioresistens apresentou o gene blaOXA-23. A análise de ERIC-PCR dos isolados carreadores de blaOXA-58 mostrou que três isolados de A. bereziniae foram clonalmente relacionados, dos quais dois foram idênticos, enquanto três isolados pertenceram a clusters individuais. Este estudo ressalta a necessidade da identificação correta de espécies de Acinetobacter e a implementação de medidas de controle de infecção hospitalar adequada para impedir a disseminação de determinantes de resistência, como o gene blaOXA-58, entre outros patógenos hospitalares relevantes. The aim of this study was to characterize the determinants of antimicrobial resistance and virulence factors of clinical isolates of Acinetobacter spp. recovered from patients attended at the Hospital Universitário of Londrina (HU) from January 2006 to March 2018. Scientific article A: In this study, a total of 282 clinical isolares of Acinetobacter baumannii clinical isolates recovered of respiratory material of inpatients in the intensive care units (ICU) of the HU between the years 2006 and 2016 were characterized. Identification of the isolates was performed by conventional biochemical methods, automated systems and amplification of the blaOXA-51 gene. Most isolates were considered multidrug-resistant (MDR) (76.3?%) and high antimicrobial resistance rates were verified, including carbapenems, drugs of choice for the tratament of infections caused by A. baumannii MDR. The high rate of resistance to carbapenems (100.0%) is attributed to the prevalence of the gene encoding the carbapenemase OXA-23 (93.6%), being the blaOXA-23-like gene mostly associated with Tn2008 (92.8%), followed by Tn2006. In addition, the variant blaOXA-253 was detected in one isolate (0.4%). A polyclonal profile was observed among the isolates, which belonged to the international clonal complexes CC113/79, CC110/25 and CC103/15. These data justify the maintenance and dissemination of the blaOXA-23 gene among the isolates of A. baumannii in this institution. Scientific article B: In this study we report the description of the first isolate of Acinetobacter bereziniae carrying of the blaOXA-58 gene detected in Brazil. By sequencing the total genome of isolate Ac 374/14 was verified that this isolate, MDR and strong biofilm producer, presents 13 antimicrobial resistance genes including determinants of resistance to beta-lactams, aminoglycosides, fluoroquinolones, phenicols and sulfonamide. In addition, this isolate presents several efflux systems and virulence genes. By means of in silico analyzes the genetic context of the blaOXA-58 gene was characterized, demonstrating that this gene is flanked on either sides by the ISAba3 insertion sequence, with ISAba3 interrupted by the ISAba125 upstream of the blaOXA-58 gene. This study revealed a new determinant of resistance to carbapenems in HU, so it is necessary to take control measures to prevent the spread of this gene. Scientific article C: The aim of this study was to identify the presence of carbapenemases-encoding genes in non-baumannii Acinetobacter species isolated in a Brazilian hospital. Fourteen isolates of Acinetobacter spp. recovered of the HU between 2006 and 2018 were studied. According to the rpoB gene sequencing analysis, was identified seven isolates of Acinetobacter bereziniae, two of A. haemolyticus, two of A. ursingii, and one from each species A. radioresistens, A. colistiniresistens and Acinetobacter sp. Six isolates, five A. bereziniae and one A. colistiniresistens, harbored the blaOXA-58 and was considered biofilm producers, and the isolate identified as A. radioresistens presented the blaOXA-23 gene. ERIC-PCR analysis of blaOXA-58 harborer isolates showed that three isolates of A. bereziniae were clonally related, of which two were identical, whereas three isolates belonged to individual clusters. This study highlights the need for correct identification of Acinetobacter species and the implementation of appropriate hospital infection control measures to prevent the spread of resistance determinants like the blaOXA-58 gene among other relevant hospital pathogens.

O escorpionismo é importante assunto de saúde pública no Brasil e em vários países, sendo os escorpiões da família Buthidae envolvidos nos acidentes de importância médica. No Brasil, os principais escorpiões dessa família são do gênero Tityus, cujos representantes respondem pela maioria dos acidentes. Os Tityus serrulatus são os principais desencadeadores de acidentes graves no Brasil, quando edema pulmonar pode se instalar e está envolvido com o óbito. Assim, a maioria dos estudos é desenvolvida com sua peçonha, tendo sido demonstrado que desencadeia inflamação sistêmica e pulmonar, com leucocitose, edema e influxo leucocitário para os pulmões. Os escorpiões Rhopalurus rochai também pertencem à escorpiofauna brasileira e à família Buthidae; ocupando regiões de cerrado, pouco habitadas, não existem estudos epidemiológicos ou experimentais acerca da ação da sua peçonha no aparelho respiratório. Investigamos comparativamente a fisiopatologia do escorpionismo experimental em ratos machos, induzido pela administração intravenosa (iv) das peçonhas de T. serrulatus 200 µg/kg (pTs) e R. rochai 200 µg/kg (pRr 200) ou 400µg/kg (pRr 400); animais controles receberam NaCl 0,9% apirogênica iv em mesmo volume que as peçonhas. Foram avaliados parâmetros pulmonares como a permeabilidade vascular por extravasamento de azul de Evans (aE, 30 minutos) e proteínas (por Bradford) no lavado bronco-alveolar (LBA, 4 e 24 horas), hemorragia pela quantificação da cianometahemoglobina (60 minutos), influxo de leucócitos (4 e 24 horas) para os pulmões pela atividade da mieloperoxidase (MPO) e da N-acetil-β-D-glicosaminidase (NAG), e contagem no LBA, e produção de óxido nítrico (NO) nos pulmões pelo método de Griess modificado. Foram avaliadas também a mobilização de leucócitos para o sangue (contagem total e diferencial por microscopia) e produção do NO no coração. As peçonhas induziram aumento da permeabilidade vascular (30 minutos) no aparelho respiratório e acúmulo de proteínas nos pulmões após 24 horas, porém, ambos foram mais afetados pela pTs e só esta promoveu aumento da permeabilidade nos brônquios internos e pulmões, e acúmulo de proteínas em 4 horas. A hemorragia ocorreu nos brônquios internos e pulmão do grupo pTs. A atividade da MPO (4 e 24 horas) e NAG (24 horas), além da concentração de NO nos pulmões (4 e 24 horas), aumentou apenas no grupo pTs. No LBA houve aumento de leucócitos e células mononucleares (4 horas) no grupo pRr 400, enquanto o grupo pTs apresentou aumento de polimorfonucleares da 4ª a 24ª hora quando também ocorreu leucocitose. Alterações no leucograma ocorreram apenas no grupo pTs, com leucocitose, neutrofilia e linfopenia após 4; em 24 horas observou-se adicionalmente linfocitose e monocitose. No coração, apenas a pRr 400 promoveu diminuição de NO abaixo dos controles. Concluímos que a maioria das alterações avaliadas, ocorreram, e foram mais intensas com a pTs; a pRr não pode ser considerada atóxica, mas provavelmente é incapaz de induzir acidentes graves e morte. The scorpionism is a public health issue in Brazil and several other countries and the Buthidae’s family scorpions are involved in accidents medically relevant. In Brazil, the main scorpions of this family belong to Tityus genus, whose representatives account for most of the accidents. Severe envenomation is related mainly to Tityus serrulatus in Brazil, and pulmonary edema is involved in death; thus the majority of studies are developed with its venom. It was demonstrated that the venom from this triggers systemic and pulmonary inflammation, with pulmonary edema, leukocytosis and leukocyte migration to the lungs. The Rhopalurus rochai belong to Brazilian escorpiofauna and to Buthidae family as well; residing in regions of cerrado, poorly inhabited, therefore there are no epidemiological or experimental studies concerning its activity in the respiratory system. The study investigated comparatively the pathophysiology of experimental scorpionism in rats by intravenous (iv) administrations of T. serrulatus venom 200 µg/kg (Tsv) and R. rochai 200 µg/kg (Rrv 200) or 400 µg/kg (Rrv 400). Control group received NaCl 0,9% apyrogenic in the same volume as the venoms. We evaluated pulmonary parameter, such as vascular permeability by Evans blue extravasation (aE, 30 minutes) and proteins (by Bradford method) in bronchoalveolar lavage (BAL, 4 and 24 hours), hemorrhage by cyanomethemoglobin quantification (60 minutes), leukocytes mobilization (4 and 24 hours) to the lungs through the activity of myeloperoxidase (MPO) and N-acetil-β-D-glucosaminidase (NAG), leukocyte counts in BAL, and nitric oxide (NO) production in lung’s parenchyma by modified Griess method. We also evaluated leukocyte mobilization to peripheral blood (total and differential counts through microscopy) and quantified NO in cardiac tissue. Both venoms were able to induce aE extravasation in respiratory tract’s segments and protein accumulation after 24 hours, however both parameters were more affected by Tsv and only this promoted incresead aE in internal bronchi and lungs and protein accumulation in BAL at 4 hours. Hemorrhage occured in lower segments (internal bronchi and lung) only in Tsv group. The activity of MPO (4 and 24 hours), NAG (within 24 hours), and NO content in lungs (4 and 24 hours), were increased only in Tsv group. There was an increase of leukocytes and mononuclear cells in BAL (4 hours) in Rrv 400 group, while Tsv group showed a raise in polymorphonuclear cells, lasting up to the 24th hour (when leukocytosis also occured). Changes in leukogram were found only in Tsv group, with leukocytosis, neutrophilia and lymphopenia after 4 hours; after 24 hours, lymphocytosis and monocytosis also occured. Only Rrv 400 affected the heart, promoting a decrease on NO levels, below those found in NaCl group. We conclude that the majority of the evaluated parameters were more affected by Tsv; and Rrv although not atoxic, probably will not induce severe envenomations nor deaths.

Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada pelos fungos termodimórficos Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidiodies lutzii, sendo restrita a América Latina e endêmica no Brasil. Acredita-se que a infecção ocorra pela inalação de propágulos fúngicos quando o solo é revolvido. A PCM pode ser dividida em: (1) PCM infecção, sem sintomas, mas com reação positiva aos antígenos de Paracoccidioides spp., com prevalência muito variável entre regiões; e (2) PCM doença, classificada em (2a) PCM aguda, condição mais grave que ocorre em crianças e jovens ou (2b) PCM crônica, que ocorre em adultos e soma aproximadamente 90% dos casos. A presente pesquisa objetivou: (a) avaliar a reatividade de IgG/IgG2 de pacientes crônicos aos epítopos de carboidrato de Paracoccidioides spp.; (b) avaliar epidemiologicamente os casos de PCM infecção em Guarapuava, PR, Brasil. A investigação dos epítopos de carboidrato foi feita por immunoblot (IB) de cell free antigens (CFA) de P. brasiliensis B339 (anteriormente espécie S1), Paracoccidioides americana LDR3 (anteriormente P. brasiliensis PS2) e P. lutzii LDR2, tratados ou não com metaperiodato de sódio (SMP). IgG de coelho anti-P. brasiliensis Pb18 e IgG/IgG2 de um pool de soros de pacientes com PCM doença reconheceram principalmente antígenos de alta massa molecular (hMM, >150 kDa), gp70 e gp43, sendo esta última não detectada em P. lutzii LDR2. A reatividade aos antígenos diminuiu com o tratamento com SMP. Conclui-se que não foi possível detectar gp43 em P. lutzii LDR2 e, como P. brasiliensis, seus principais antígenos apresentam epítopos de carboidrato reconhecidos pelos soros de pacientes com PCM. No levantamento epidemiológico sobre PCM infecção, 359 soros foram analisados por ELISA para detecção de IgG contra CFA de P. brasiliensis B339, P. americana LDR3 e P. lutzii LDR2. Gp43 de B339 serviu de teste confirmatório. Estes antígenos foram também testados após tratamento com SMP para redução de reações cruzadas. Reatividade em ELISA: CFA/SMP-CFA em geral 37,3/17,8%, B339 25,3/14,5%, LDR3 24,5/1,4%, LDR2 8,3/5,8%; gp43/SMP-gp43 7,2/4,7%. Houve soros reagentes para mais de uma espécie. IB de 37 soros selecionados demonstrou diferentes padrões de reconhecimento de gp43, gp70 e hMM. Residência em zona rural e profissões relacionadas ao manejo do solo foram identificados como fatores de risco. P. brasiliensis parece ser a espécie prevalente na área, mas 21 soros de pessoas que declararam ter vivido apenas na região foram reagentes com antígenos de P. lutzii LDR2. IgG anti-gp70 e -hMM foram avaliados em amostras reagentes, mas com baixa reatividade: gp70/hMM em geral 6,4/6,7%. O uso de SMP ou antígenos purificados podem não ser adequados para levantamentos sobre PCM infecção na região avaliada, portanto, recomenda-se o uso de CFA-ELISA. Apesar de Guarapuava ser uma cidade de economia agrícola e estar localizada em região endêmica de PCM, a baixa prevalência para PCM infecção era esperada, considerando-se que a região teve relatos anteriores de menor endemicidade de PCM doença do que outras áreas do Paraná, mas as características gerais encontradas assemelham-se à outros trabalhos publicados. Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by the thermodimorphic fungi Paracoccidioides brasiliensis and Paracoccidioides lutzii, restricted to Latin America and is endemic in Brazil. It is believed that the infection occurs by inhalation of fungal propagules when the soil is plowed. PCM can be divided into: (1) PCM infection, with no symptoms but with positive reaction to Paracoccidioides spp. antigens, of variable prevalence, according to the evaluated region; (2) PCM disease, which is classified as (2a) acute PCM, a more serious condition that occurs in children and young people or (2b) chronic PCM, which occurs in adults and sums almost 90% of cases. Current research aimed to: (a) evaluate the reactivity IgG/IgG2 of chronic PCM patients to carbohydrate epitopes of Paracoccidioides spp.; (b) epidemiologically evaluate the cases of PCM infection in Guarapuava, Paraná, Brazil. The investigation of carbohydrate epitopes was performed using immunoblot (IB) of cell free antigens (CFA) from P. brasiliensis B339 (former species S1), Paracoccidioides americana LDR3 (former P. brasiliensis PS2) and P. lutzii LDR2, treated or not with sodium metaperiodate (SMP). Rabbit IgG anti-P. brasiliensis Pb18 and IgG/IgG2 from a pool of PCM patients? sera recognized mainly high molecular mass antigens (hMM, >150 kDa), gp70 and gp43, but the last was not detected in P. lutzii. Antigens reactivities decreased after SMP treatment. In conclusion, gp43 was not detected in P. lutzii LDR2 and, as P. brasiliensis, its major antigens present carbohydrate epitopes recognized by PCM patients? sera. In the epidemiological survey about PCM infection, 359 sera were analyzed by ELISA to detect IgG against CFA from P. brasiliensis B339, P. americana LDR3 and P. lutzii LDR2. Gp43 from B339 was used as a confirmatory test. These antigens were also tested after SMP treatment in order to reduce cross-reactions. ELISA reactivity: CFA/SMP-CFA in general 37.3/17.8%, B339 25.3/14.5%, LDR3 24.5/1.4%, LDR2 8.3/5.8%; gp43/SMP-gp43 7.2/4.7%. There were sera reactive with multiple species. IB of 37 selected-sera showed different patterns of recognition of gp43, gp70 and hMM. Residence in rural areas and professions related to soil handling were identified as risk factors. P. brasiliensis seems the prevalent species of the region, but 21 sera from people who declared to have only lived in Guarapuava reacted with P. lutzii LDR2. IgG anti-gp70 and -hMM were also investigated in reactive samples, but with low reactivity: gp70/hMM in general 6.4/6.7%. Use of SMP or purified antigens might not be suited for surveys about PCM infection in the evaluated region. Therefore, CFA-ELISA seems a better alternative. Although Guarapuava is a city of agricultural economy and is located in an endemic region for PCM, the low prevalence of PCM infection was expected, considering that the region had previous reports of lower endemicity of PCM disease than other areas of Paraná, but the general characteristics found are similar to other published works.

Ingredientes funcionais podem impactar positivamente em parâmetros relacionados à saúde. O objetivo do presente trabalho foi desenvolver um ingrediente alimentar em pó, avaliando-se os efeitos na suplementação da dieta de seres humanos. Em um primeiro estudo, foram selecionados ratos Wistar machos adultos, distribuídos em 4 grupos (n = 12). Os animais foram alimentados por gavagem com 50, 12,5 e 50 mg/dia, respectivamente, de cúrcuma, quiabo e canela ou tampão fosfato salino (controle) durante 14 dias. Foram analisados a massa corporal, massa relativa de órgãos e tecidos, parâmetros bioquímicos sanguíneos (glicose, triglicerídeos, colesterol total, aspartato aminotransferase (AST) e alanina aminotransferase (ALT)) e níveis séricos de imunoglobulina A (IgA). Em estudo subsequente, clínico aleatorizado, duplo-cego, placebo-controlado, com sujeitos do sexo masculino (n=20), a amostra foi obtida segundo critérios de inclusão. Cada dose diária do ingrediente em pó continha 1 g de canela, 1,2 g de cúrcuma, 0,1 g de manoproteína e 1 g do isolado proteico de soro de leite com B. lactis, e foi administrada em cápsulas, o que garantiu o mascaramento do produto. Foram avaliados a massa corporal, o índice de massa corporal (IMC), a massa corporal magra (MCM), massa corporal gorda (MCG), gordura relativa e circunferência abdominal, além do perfil lipídico (triglicerídeos, colesterol total, colesterol-HDL (C-HDL), colesterol-LDL (C-LDL) e colesterol não-HDL (C-NHDL)) e níveis séricos de IgA antes e após 40 dias de intervenção. No experimento com animais, não foram observadas alterações nos parâmetros avaliados, exceto nos níveis de IgA, que aumentaram nos grupos de animais tratados com cúrcuma (P = 0,02) e canela (P = 0,04). Isso pode ser consequência de propriedades imunomoduladoras desses vegetais. No estudo com seres humanos, a suplementação da dieta com o ingrediente em pó foi capaz de aumentar a MCM, reduzir a MCG, gordura relativa e circunferência abdominal, bem como de modificar, positivamente, o perfil lipídico, reduzindo o colesterol total, C-LDL e C-NHDL, além de promover a queda dos níveis de IgA, o que pode caracterizar um efeito imunomodulador. Neste ensaio clínico, as limitações da amostra reduzida e por conveniência requerem novas pesquisas para se estabelecer o ingrediente testado como um produto com propriedades funcionais. Functional ingredients can positively impact health-related parameters. The objective of the present work was to develop a powdered food ingredient, evaluating the effects of its inclusion in the diet of humans. In a first study, adult male Wistar rats were selected, distributed in 4 groups(n = 12). The animals were fed by gavage with 50, 12.5 and 50 mg/day, respectively of turmeric, okra and cinnamon or Phosphate Buffered Saline(control)for 14 days. Body mass, relative mass of organs and tissues, biochemical parameters in blood (glucose, triglycerides, total cholesterol, aspartate aminotransferase(AST) and alanine aminotransferase (ALT)) and serum immunoglobulin A(IgA)levels were analyzed. In a subsequent randomized, doubleblind, placebo-controlled clinical study with male subjects (n = 20), the sample was obtained according to inclusion criteria. Each daily dose of the powdered ingredient contained 1 g of cinnamon, 1.2 g of turmeric, 0.1 g of mannoprotein and 1 g of whey protein isolate with B. lactis, and it was administered as capsules, which guaranteed the masking of the product. Body mass, body mass index (BMI), lean body mass (LBM), fat body mass (FBM), relative fat and waist circumference, in addition to lipid profile (triglycerides, total cholesterol, HDL cholesterol (HDL-C), LDL cholesterol (LDLC) and non-HDL-cholesterol NHDL-C)) and serum IgA levels were analyzed before and after 40 days of intervention. In the animal experiment, no changes were observed in the evaluated parameters, except for IgA levels which increased in the groups of animals treated with turmeric (P = 0.02) and cinnamon (P = 0.04). This may be a consequence of the immunomodulatory properties of these plants. In the human study, dietary supplementation with the powdered ingredient was able to increase LBM, reduce FBM, relative fat and waist circumference, as well as to improve the lipid profile, reducing total cholesterol, LDL-C and NHDL-C, in addition to drop IgA levels which might characterize an immunomodulatory effect. In this clinical trial, reduced and convenient sample limitations require further studies to establish the tested ingredient as a product with functional properties.

Paracoccidioidomicose (PCM) é uma das micoses sistêmicas mais importantes da América Latina, causada pelos fungos dimórficos Paracoccidioides brasiliensis (S1, PS2, PS3) e Paracoccidioides lutzii, na qual a gravidade da doença está relacionada com resposta Th2 e altos níveis de Imunoglobulina E (IgE). O presente estudo teve como objetivo avaliar o padrão de reconhecimento/reatividade de IgG e IgE séricos aos antígenos de P. brasiliensis S1 (B339), PS2 (LDR3) e P. lutzii (LDR2) na PCM humana crônica. Foi realizado Immunoblotting para verificar quais os componentes imunogênicos presentes no antígeno solúvel total (CFA) e antígeno somático (AS) de P. brasiliensis (S1 e PS2) e P. lutzii que são reconhecidos por IgG e IgE na PCM humana. A reatividade de IgG e IgE séricos de pacientes com PCM crônica (n = 24) foram analisados por Ensaio Imunoenzimático indireto (ELISA), utilizando antígeno solúvel total (CFA), fração de alta massa molecular (hMM) e gp70 de P. brasiliensis (S1 e PS2) e P. lutzii. Nos resultados de Immunoblotting foram observadas diferenças no reconhecimento de componentes imunogênicos de antígenos totais das três cepas, por IgG e IgE. As principais diferenças observadas por IgG foram: a ausência de gp43 em P. lutzii (LDR2), banda de gp70 intensamente corada em CFA de P. lutzii e presença de antígeno de alta MM e ausência de banda hMM difusa em P. lutzii. A IgE reconheceu gp70 e antígeno de ~30 kDa em CFA de P. lutzii, sugerindo que os mesmos não são exclusivamente intracelulares. Por ELISA, IgG de pacientes com PCM apresentaram maior reatividade para CFA e hMM de P. brasiliensis S1 em relação ao P. lutzii (p < 0.05), no entanto houve maior reatividade para gp70 de P. lutzii e P. brasiliensis PS2 do que S1 (p < 0.05). Anticorpos IgE apresentaram maior reatividade para CFA de P. brasiliensis do que P. lutzii (p < 0.05), diferente com hMM, com maior reatividade para P. lutzii do que P. brasiliensis S1 (p < 0.05). Em conclusão, o padrão de reconhecimento de antígeno por IgG e IgE difere de acordo com Paracoccidioides sp. Antígeno de hMM devido à maior reatividade para IgE, e antígenos de ~70 kDa e ~30 kDa produzidos, liberados e reconhecidos por IgE podem ser os principais fatores de virulência de P. lutzii, sugerindo um potencial de induzirem uma resposta Th2. Paracoccidioidomycosis (PCM) is one of the most important systemic mycosis in Latin America, caused by fungi dimorphic Paracoccidioides brasiliensis (S1, PS2, PS3) and Paracoccidioides lutzii, in which the severity of disease is related to Th2 response and high levels of immunoglobulin E (IgE). The present study aimed to evaluate the pattern recognition/reactivity of IgG and IgE sera to P. brasiliensis S1 (B339), PS2 (LDR3) and P. lutzii (LDR2) antigens in chronic human PCM. Immunoblotting was performed to verify which the immunogenic components present in the total soluble antigen (CFA) and somatic antigen (SA) from P. brasiliensis (S1 and PS2) and P. lutzii that are recognized by IgG and IgE in the human PCM. The reactivity of IgG and IgE sera from patients with chronic PCM (n = 24) were analyzed by indirect enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), using total soluble antigen (CFA), high molecular weight fraction (hMM) and gp70 from P. brasiliensis (S1 and PS2) and P. lutzii. In the results of immunoblotting were observed differences in the recognition of immunogenic components of total antigens of the three strains, by IgG and IgE. The main differences evidenced by IgG were: the absence of gp43 in P. lutzii (LDR2), gp70 band intensely stained in CFA from P. lutzii, and presence of hMM antigen and absence of diffuse hMM band in P. lutzii. IgE recognized gp70 and ~30 kDa antigen in CFA from P. lutzii, suggesting that they are not exclusively intracellular. By ELISA, IgG from PCM patients showed higher reactivity to CFA and hMM from P. brasiliensis S1 in relation to P. lutzii (p < 0.05), however was higher reactivity for gp70 from P. brasiliensis PS2 and P. lutzii than S1 (p < 0.05). IgE antibodies had higher reactivity to CFA from P. brasiliensis than P. lutzii (p < 0.05), different for hMM, with higher reactivity reactive to P. lutzii than P. brasiliensis S1 (p

No Brasil, a infecção por Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis) é uma das principais causas de mortalidade em pacientes acometidos por micoses sistêmicas e um dos mais importantes modelos de estudo sobre micoses profundas. O processo inflamatório associado à presença do fungo no tecido pulmonar é o resultado de uma complexa interação entre os diferentes tipos de linfócitos e moléculas, relacionados aos diferentes padrões de resposta imune celular. Os microRNAs (miRNAs) são uma classe de pequenos RNAs não-codificantes e possuem de 19 a 25 nucleotídeos de comprimento. Recentemente descobertos, o papel desses pequenos RNAs não codificantes tem sido muito estudado, e está relacionado com a regulação pós-transcricional de diversos RNAs mensageiros (mRNAs). Neste estudo investigou-se a expressão diferencial de miRNAs do tecido pulmonar de camundongos e a sua relação com a progressão da infecção por P. brasiliensis. Para isso 12 camundongos BALB/c foram infectados com P. brasiliensis, espécie críptica S1, cepa Pb18, por via intravenosa caudal lateral (2,7 x107 células/mL) e 8 camundongos, sem estimulação, foram usados de controle. Após 28 e 56 dias, foram realizadas eutanásias e coleta dos pulmões para o estudo. Considerando que a infecção pulmonar é o principal sítio de infecção humana, este estudo investigou a expressão de miRNAs e a sua relação com aspectos imunológicos e histopatológicos no pulmão. A análise histológica foi realizada para detecção da presença de leveduras e do aspecto do parênquima pulmonar durante a infecção. As análises moleculares, avaliaram mudanças na expressão de mRNA das principais citocinas e dos principais fatores de transcrição relacionados aos perfis de células T em relação ao grupo controle, sendo: TBET para Th1, GATA-3 para Th2, ROR-ϒT para Th17 e FOXP3 para T regulatórias; e a regulação gênica pós-transcricional durante o processo inflamatório por meio de análise molecular de um painel com 84 miRNAs relacionados com a resposta inflamatória em camundongo. No 28° dia, foram observadas lesões infiltrativas por todo o parênquima pulmonar, com predomínio de leveduras e presença de macrófagos, linfócitos T e B indicando que houve uma progressão da inflamação nesse primeiro momento. Com 56° dias, o tecido apresentou um quadro controlado de infecção, com poucas leveduras e um aspecto histológico resolutivo. Foram identificados setenta e quatro miRNAs expressos diferencialmente, sendo que os miRNAs 126a-5p, 340-5p, 30b-5p, 19b-3p, 221-3p, 20a-5p, 130a-3p e 301a-3p, 466k foram regulados positivamente no 28º dia e os miRNAs let-7f-5p, let-7a-5p, 26b-5p, let-7e-5p e 369-3p foram regulados positivamente no 56º dia. De um modo geral esses miRNA estão envolvidos com os seguintes processos fisiológicos: resposta imune, proteção tecidual, regulação de proliferação celular e controle de apoptose. Os resultados deste estudo sugerem, pela primeira vez, uma possível relação dos miRNAs na regulação de processos celulares inflamatórios que ocorrem durante a resposta imune celular contra infecção de P. brasiliensis. In Brazil, the infection by Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis) is a major cause of mortality in patients suffering from systemic mycoses and one of the most important models of study on deep mycoses. The inflammatory process associated with the presence of the fungus in lung tissue is the result of a complex interaction between different types of cells and molecules related to different cellular immune response patterns. MicroRNAs (miRNAs) are a class of small non-coding RNAs, have 19 to 25 nucleotides in length. Recently discovered, the role of these small non-coding RNAs has been extensively studied, and is related to the post-transcriptional regulation of different messenger RNAs (mRNAs). In this study we investigated the differential expression of the miRNAs lung tissue of mice and its relationship with the progression of infection by P. brasiliensis. To this 12 BALB/c mice were infected with P. brasiliensis cryptic species S1, Pb18 strain, intravenously lateral tail (2.7 x107 cells/ml) and 8 mice, no stimulation, were used for control. After 28 and 56 days, they were carried out euthanasia and collection from the lungs to the study. Considering that pulmonary infection is the major site of human infection, this study investigated the expression of miRNAs and their relationship with immunological aspects and histopathological lung. Histological analysis was performed to detect the presence of yeast and appearance of the pulmonary parenchyma during infection. Molecular analysis evaluated changes in the regulation range (fold change) of mRNA of the main cytokines and key transcription factors related to T cell profiles in the control group, as follows: Tbet to Th1, Th2 to GATA-3, ROR -ΥT to Th17 and regulatory T for FOXP3; and post-transcriptional gene regulation during the inflammatory process through molecular analysis of a panel of 84 miRNAs associated with the inflammatory response in mice. After 28 days, infiltrative lesions were observed throughout the lung parenchyma, predominantly yeast and presence of macrophages, T and B lymphocytes indicating that there was a progression of inflammation that first time. With 56 days, the tissue showed a controlled framework of infection, with little yeast and a terminating histological appearance. Seventy-four differentially expressed miRNAs were identified, and the miRNAs 126a-5p, 340-5p, 5p-30b, 19b-3p, 221-3p, 20a-5p, 130a-301a-3p and 3p, 466k were upregulated in 28 day and miRNAs let-7f-5p, let-7a-5p, 26b-5p, let-7e-5p and 369-3p were upregulated after 56 days. Generally these miRNA are involved in physiological processes the following: immune response, tissue protection, the regulation of cell proliferation and apoptosis control. The results suggest for the first time a possible relationship of miRNAs in regulating inflammatory cellular processes that occur during cellular immune response against P. brasiliensis infection.

As doenças infecciosas são a causa de 20% das perdas na produção animal em todo o mundo. Dentre as enfermidades entéricas que levam a perdas na suinocultura, a colibacilose é uma das mais importantes. Em suínos, as Escherichia coli enterotoxigênicas (ETECs) associadas a distúrbios entéricos expressam as fímbrias K88 (F4), K99 (F5), 987P (F6), F41, F42 e F18. Neste estudo, investigamos a produção de anticorpos IgY em galinhas poedeiras White Leghorn e anticorpos IgG em coelhos Nova Zelândia contra proteínas de fímbrias K88 e F41 de ETEC. As amostras de ovos e soros de ambas as espécies foram coletadas ao longo do experimento para análise dos seguintes parâmetros: níveis e títulos de anticorpos às proteínas fimbriais e E. coli, perfil dos antígenos reconhecidos pelos anticorpos produzidos e o efeito antibacteriano de IgY do ovo e dos soros sobre o crescimento de E. coli K88+. Os resultados obtidos mostraram que galinhas e coelhos responderam de modo semelhante aos antígenos utilizados. Os soros e os anticorpos IgY não imunes parcialmente purificados de ovos têm a capacidade de reconhecer diversos antígenos de E. coli K88+ e E. coli F41+, inclusive os antígenos fimbriais K88 e F41. Além disso, foi observado um aumento da reatividade às fímbrias K88 e F41 após as imunizações. Já os soros não imunes de coelhos apresentaram um baixo reconhecimento dos antígenos de E. coli K88+ e E. coli F41+ e as imunizações influenciaram apenas em relação às proteína usadas na indução de resposta. Os soros (não imune e imune) de galinhas foram capazes de interferir no crescimento bacteriano da cepa K88, enquanto os soros de coelhos não mostraram a mesma atividade antimicrobiana. Quanto às propriedades imunoquímicas de anticorpos IgY obtidos das gemas, os resultados mostraram que houve um aumento dos títulos de IgY anti-K88. A avidez de IgY da gema permaneceu elevada do início ao término do experimento, e assim como no soro, apresentou um reconhecimento prévio das bactérias e após as imunizações foi observado um aumento da resposta somente para o antígeno corresponde à fímbria K88. Em todas as concentrações avaliadas neste trabalho, IgY imune e não imune foram capazes de inibir o crescimento de E. coli K88+. Em conclusão, os anticorpos de mamíferos e aves apresentarem propriedades imunoquímicas semelhantes. No entanto, apenas anticorpos de aves mostraram a capacidade de reconhecer as fímbrias presentes na ETEC e interferir no crescimento de ETEC K88+. Portanto, a inibição bacteriana demonstrada pelos anticorpos IgY sugere que estes anticorpos oferecem aplicabilidade para tratamento e prevenção de doenças entéricas como a colibacilose uma alternativa para a produção de anticorpos policlonais em mamíferos. Infectious diseases account for 20% of livestock losses worldwide. Among the enteric diseases mong the enteric diseases that cause losses in swine, colibacillosis is one of the most important. In pigs, the ETEC associated with enteric disorders express K88 (F4), K99 (F5), 987P (F6), F41, F42 and F18 fimbriae. In this study, was investigated the production of IgY antibodies in White Leghorn laying hens and IgG antibodies in New Zealand rabbit against proteins of F4 (K88) and F41 fimbriae of ETEC. Serum and eggs samples of both species were collected during the experiment for analysis of the following parameters: levels and titers of antibodies to fimbrial proteins and E. coli, profile of the antigens recognized by the antibodies produced and the antibacterial effect of IgY from the egg and the sera on the growth of E. coli K88+. The results show that chickens and rabbits responded similarly to the antigens used. The sera and non-immne IgY antibodies partially purified from eggs have the ability to recognize different antigens of E. coli K88+ and E. coli F41+, including the fimbrial antigens K88 and F41. However, was observed an increased reactivity to K88 and F41 fimbriae after the immunizations. The non-immnue serum from rabbits showed a low recognition of E. coli K88+ e E. coli F41+ antigens and immunizations influenced only the proteins used in response induction. Sera (nonimmune and immune) from chickens were able to interfere with bacterial growth of K88 strain, while rabbit sera did not show the same antimicrobial activity. With respect to immunochemical properties of IgY antibodies obtained from the yolks, the results showed that there was an increase in title of anti-K88 IgY. The avidity of egg yolk IgY remained high from beginning to end of the experiment, and as well as in serum, presented a prior recognition of bacteria and after immunizations there was an increase of response only to the antigen corresponds to K88 fimbriae. At all concentrations evaluated in this study, immune and non-immune IgY were able to inhibit the growth of E. coli K88+. In conclusion, mammalian and avian antibodies exhibit similar immunochemical properties. However, only chickens antibodies showed the ability to recognize the fimbriae present in ETEC and interfering in the growth of ETEC K88+. Therefore, the bacterial inhibition demonstrated by IgY antibodies suggests that these antibodies offer applicability for treatment and prevention of enteric diseases such as colibacillosis and an alternative for the production of polyclonal antibodies in mammals.

A plena atividade funcional do trato digestório garante o êxito de desempenho dos leitões em toda sua vida. O intestino, diante dos desafios constantes a que é submetido nos sistemas comerciais de produção, demanda recursos que preservem sua integridade e aumentem a sua capacidade absortiva, melhorando o aproveitamento do alimento ingerido. Para esse fim, o presente trabalho objetivou avaliar os efeitos do extrato vegetal Sanguinarina sobre a integridade de células epiteliais intestinais e na saúde intestinal de suínos no pós desmame e na fase de crescimento. O trabalho foi realizado em três etapas: testes in vitro, ex vivo e in vivo. Na primeira etapa, a Sanguinarina foi testada sobre células epiteliais intestinais de suínos (IPEC-1), as quais após o processo de divisão celular foram expostas às doses de 0,1; 0,25; 0,5; 0,75; 1,0 e 5,0 µM de Sanguinarina por 48 horas. O teste de citotoxicidade realizado (MTT), apontou 50% de mortalidade celular (IC50) com a dose de 0,65 µM, equivalente a 25 mg/ L de Sanguinarina. Na segunda etapa, a Sanguinarina foi testada em explantes de jejuno de leitões com 24 dias de vida. Após testes para estabelecer a melhor dose de Sanguinarina, optou-se por trabalhar com a dose de 1,0 mg/L. Posteriormente, os explantes foram incubados na presença de Sanguinarina (1,0 mg/L); DON (10 µM) e Sanguinarina (1,0 mg/L) + DON. Os explantes, quando desafiados com DON apresentaram redução (p

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de diferentes níveis de inclusão de produto fermentado à base de Saccharomyces cerevisiae (PFBSC) na dieta de frangos de corte sobre o desempenho zootécnico, perfil de imunoglobulinas, resposta vacinal contra o vírus da doença de Gumboro, características de carcaça e qualidade de carne. Foram utilizadas 832 aves, as quais foram submetidas a diferentes níveis de inclusão PFBSC (0, 250, 750 e 1500g/t). Foi adotado um delineamento em blocos ao acaso, com quatro tratamentos, oito repetições e 26 aves por parcela experimental. Os resultados mostram que a inclusão de PFBSC melhorou a conversão alimentar na fase inicial, porém no período total de criação não influenciou no desempenho das aves. Quanto à imunidade das aves, a inclusão de PFBSC não influenciou nos títulos de anticorpos séricos das aves vacinadas contra doença de Gumboro, porém o aumento da inclusão do produto reduziu a produção de IgA e IgM do soro das aves com 21, 28 e 35 dias de idade. Já a inclusão de 250 g/t de PFBSC proporcionou aumento gradativo nas concentrações de IgA e IgM séricas no transcorrer do experimento. As características de rendimento de carcaça e a maioria dos cortes não foram influenciadas, exceto para o rendimento de pernas, enquanto para a qualidade de carne, somente o pH e a oxidação lipídica da carne do peito apresentaram diferenças entre os tratamentos. Conclui-se que para o desempenho zootécnico no ciclo total de produção, não houve efeito das diferentes inclusões de PFBSC, mas houve efeito da inclusão de 250g/t do produto na ração aumentando a IgA e IgM sérica das aves no transcorrer do experimento. Houve também influência das inclusões do PFBSC sobre o aumento de rendimento de coxa e sobre coxa, quanto a qualidade de carne, os resultados demonstram que a menor inclusão, 250 g/t, foi suficiente para reduzir a oxidação lipídica das amostras de peito. The aim of this study was to evaluate the effect of different levels of inclusion of fermented product based on Saccharomyces cerevisiae (PFBSC) in the diet of broilers and the growth performance, Immunoglobulin profile, vaccine response against infectious bursal disease virus, carcass characteristics and meat quality. 832 birds, which were subjected to different levels of inclusion PFBSC (0, 250, 750 and 1500g/t) were used. Was adopted the block design completely randomized design with four treatments, eight replicates and 26 birds per experimental plot. The results show that the inclusion PFBSC improved feed conversion in the initial phase, however the total period of creation does not affect the performance of birds. Even as the immunity of the birds, the inclusion of PFBSC did not influence the titers of antibodies against the vaccine virus Gumboro Disease, however reduced the production of IgA and IgM serum of birds at 21, 28, and 35 days of age, and the only inclusion of 250 g/t of PFBSC showed a gradual increase in the levels of serum IgA and IgM throughout the experiment. The characteristics of carcass yield and most of the cuts were not affected, except for the legs yield, while the quality of meat, only pH and lipid oxidation of breast meat showed differences between treatments. We conclude that for the performance in total production cycle, there was no effect of different inclusions PFBSC, but there was effect of the inclusion of 250 g/t product in the ration increased IgA and IgM serum of birds throughout the experiment. There was also PFBSC influence of inclusions on the increase the yield legs and the meat quality the results showed that the inclusion of 250 g/t, was sufficient to reduce the lipid oxidation of breast samples.

O aumento da produção na avicultura tem sido favorecido pelo desenvolvimento de linhagens de aves mais produtivas. A maioria das características de produção depende de gasto energético que também é importante para o desenvolvimento da resposta imune. Assim a seleção para uma determinada característica pode influenciar a resposta imune das aves. Apesar da existência de diversas medidas de controle de doenças aviárias, existe o risco de surtos de doenças, trazendo prejuízos para a avicultura. Desse modo, o desenvolvimento de linhagens de aves mais resistentes a doenças é de grande importância. No Brasil, a EMBRAPA Suínos e Aves tem trabalhado no desenvolvimento de linhagens de galinhas poedeira e frangos de corte selecionadas para melhor produção, porém são poucos os estudos sobre o sistema imune destes animais. O objetivo deste trabalho foi comparar a resposta imune de linhagens de galinhas desenvolvidas pela EMBRAPA Suínos e Aves. Foram utilizados 140 animais, 70 machos e 70 fêmeas, sendo 28 animais da linhagem MM, 28 animais da linhagem CC, 28 animais da linhagem CCc, 28 animais da linhagem TT e 28 da linhagem LLc. Para avaliação da imunidade inata, os animais receberam uma injeção intra-abdominal de Sephadex a 3%. Após dois dias, os animais foram pesados e os macrófagos abdominais foram coletados e processados para a avaliação da fagocitose, produção de óxido nítrico e atividade antimicrobiana. Além disso, após o abate dos animais, os baços foram retirados e os seus pesos relativos determinados. E ainda, a medida dos halos de inibição de crescimento bacteriano e teste de resistência sérica foram utilizados para avaliação da atividade antibacteriana do soro. A imunidade humoral foi avaliada pela produção de anticorpos naturais anti-hemácia de coelho e pela indução de anticorpos específicos anti-hemácia de carneiro utilizando a técnica de microhemaglutinação. Os resultados foram submetidos ao teste de Kruskal-Wallis, seguido do teste de Dunn. Para diferenças entre machos e fêmeas da mesma linhagem foi utilizado o teste de Mann-Whitney, valores de p< 0,05 foram considerados significativos. Para a análise da atividade antibacteriana do soro em ágar foi aplicado o teste de regressão logística. Os resultados mostram que a atividade fagocítica e antibacteriana de macrófagos são semelhantes nas linhagens estudadas, porém a produção de NO é maior em frangos de corte. O peso relativo do baço foi maior nas linhagens de postura, e entre elas a linhagem MM foi maior que a CCc. Quanto à atividade antibacteriana do soro em ágar não foi encontrado diferença significativa, mas no teste de resistência sérica galinhas poedeiras responderam melhor que frangos de corte. Entre os animais de postura, machos responderam melhor no início do teste de resistência sérica, porém ao final do experimento as fêmeas tiveram melhor resposta que os machos da mesma linhagem e em frangos de corte, os machos responderam melhor que as fêmeas. Os títulos de anticorpos específicos e naturais foram maiores nas galinhas poedeiras e entre essas, as aves da linhagem CC e CCc produzem mais anticorpos. Esses dados permitem concluir que a resposta imune é melhor em aves de postura, o que sugere que a seleção genética pode influenciar a imunidade em aves. A identificação de características genéticas favoráveis pode contribuir para o melhor entendimento da resposta imune em aves e com o desenvolvimento linhagens mais resistentes a patógenos. The increase in poultry production has been favored by the development of more productive lines of birds. Most of the production traits depends on the energy expenditure than is also important for the development of the immune response. Thus selection for a particular trait can influence the immune response in poultry. Despite the existence of various control measures of poultry diseases, there is the risk of disease outbreaks, causing losses to the poultry industry. Thus, the development of lines of birds more resistant to diseases is of great importance. In Brazil, the Embrapa Swine and Poultry has been working on developing lines of layer chickens and broilers selected for best production, but there are few studies about the immune system of these animals. The goal of this study was to compare the immune response of lines of chickens developed by Embrapa Swine and Poultry. Were used 140 animals, 70 males and 70 females, 28 MM line animals, 28 CC line animals, 28 CCc line animals, 28 TT line animals and 28 LLc line animals. For evaluation of innate immunity, the animals received an intra-abdominal injection of Sephadex to 3%. After two days, the animals were weighed and the abdominal macrophages were collected and processed for the evaluation of phagocytosis, production of nitric oxide and antimicrobial activity. Additionally, after the slaughter of animals, the spleens were removed and their relative weights determined. And yet, the measures of inhibition halo of inhibition of bacterial growth and serum resistance test were used to evaluate the antibacterial activity of the serum. Humoral immunity was evaluate by the production of natural anti- rabbit red blood cells antibodies and for the induction of specific anti-sheep red blood cells antibodies using the technique of microhemaglutinação. The results were submitted to the Kruskal - Wallis test followed by Dunn's test. For differences between males and females of the same line was used the Mann -Whitney test, p values < 0,05 were considered significant. For the analysis of the antibacterial activity of the serum agar was applied logistic regression test. The results show that the phagocytic activity of macrophages and antibacterial are similar in the lines studied, but NO production is higher in broilers. The relative weight of the spleen was higher in layers lines, and between them MM line was higher than the CCc. As for the antibacterial activity of the serum agar was not found significant difference, but in the serum resistance test layers chickens responded better than broilers. Among the layer animals, males responded better early in the serum resistance test, but at the end of the experiment the females had better response than males of the same line and in broiler, males responded better than females. The titers of natural and specific antibodies were higher in layers chickens and among these, the birds of the CC and CCc lines produce more antibodies. These data showed that the immune response is better in layers chickens, suggesting that genetic selection can influence immunity in birds. The identification of favorable genetic traits can contribute to a better understanding of the immune response in birds and developing lines more resistant to pathogens.

O presente estudo teve o objetivo de avaliar as características produtivas, rendimento de carcaça e cortes, qualidade de carne, incidência de carnes PSE e a imunidade das aves alimentadas com dietas suplementadas com vitamina E e/ou selênio. Foram utilizados 624 pintainhos machos de um dia de idade da linhagem Hubbard, criados até os 42 dias de idade. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado com 4 tratamentos (A – Controle; B – Suplementação de 150 UI de vitamina E/kg de ração; C – Suplementação de 0,50 mg de selênio/kg de ração e D – Suplementação de 150 UI de vitamina E + 0,50 mg de selênio/kg de ração) e 6 repetições com 26 aves por parcela experimental. A suplementação da vitamina E foi na forma de α-tocoferol e o selênio na forma de selenito de sódio. Utilizou-se um esquema fatorial 4X2 (tratamentos X características da carne) para análises de qualidade de carne e um esquema fatorial 4X2X2 (tratamentos X imunização X pós imunização) para as análises imunológicas. Os resultados mostram que o selênio proporcionou o pior desempenho zootécnico nas aves. Não houve diferença significativa para rendimento de carcaça. Já para rendimento de cortes o selênio proporcionou o menor rendimento de peito e o maior rendimento de asas nas aves. Quanto ao sistema imune, para títulos totais de anticorpos não houve diferença significativa, mas houve uma interação significativa entre tempo pós- imunização e inoculação, onde houve diferença significativa para o efeito da inoculação e para o efeito do tempo pós-imunização nas aves inoculadas com hemácia de carneiro. Para os títulos de IgY e títulos de anticorpos naturais, observa-se que houve uma diferença estatística entre o tempos pós-imunização, onde a maior produção ocorreu no 2º pós imunização (42° dia de vida). Não houve diferença significativa para o peso relativo dos órgãos linfóides. Para qualidade de carne, os resultados mostram que a suplementação apenas de selênio proporcionou uma menor intensidade de vermelho, maior perda de peso por cozimento e uma menor força de cisalhamento, enquanto que a suplementação de vitamina E proporcionou uma menor oxidação da carne. Ao se avaliar as características da carne normal e PSE (Pale, Soft e Exudative), observa-se que a carne PSE apresentou menor pH, intensidade de vermelho e capacidade de retenção de água, além de maiores valores de luminosidade, intensidade de amarelo, perdas de peso por cozimento e oxidação lipídica. A quantidade de vitamina E depositada no músculo, foi maior nos tratamentos em que foram suplementados a vitamina. Quanto à atividade da fosfolipase A2 (PLA2), observa-se que a suplementação de apenas selênio proporcionou menor atividade desta enzima e não houve diferença desta em relação às carnes normais e PSE. A incidência desta anomalia não foi influenciada pelas suplementações de vitamina E e/ou selênio. Assim, conclui-se que o desempenho zootécnico foi pior para as aves suplementadas com selênio, comprometendo assim o rendimento de cortes. Para o sistema imune a suplementação de vitamina E e/ou selênio na dieta das aves não proporcionou qualquer melhora. A vitamina E mostrou ser um eficiente antioxidante na prevenção da oxidação lipídica, para a qualidade de carne observou-se que não houve sinergismo entre a vitamina E e o selênio. The present study had the objective of evaluating the characteristics productive, carcass yield and cuts, meat quality, incidence of meats PSE and immunity of birds fed diets supplemented with vitamin E and / or selenium. Were used 624 chicks males a day of age of the lineage Hubbard reared until the 42 days old. The experimental design was entirely randomized with 4 treatments (A- Control; B- Supplementation of 150 IU of vitamin E/kg of ration; C- Supplementation of 0,50 mg of selenium/kg of ration and D- Supplementation of 150 UI of vitamin E + 0,50 mg of selenium/kg of ration) and 6 repetitions with 26 birds per plote. The supplementation of vitamin E was in form of α-tocopherol and selenium in form of sodium selenite. We utilized an factorial scheme 4X2 (treatments X meat characteristics) for analyzes of meat quality and one factorial scheme 4X2X2 (treatments X immunization X post immunization) for the analyzes immunological. The results show that selenium afforded the worst performance zootechnical in birds. No significant difference for carcass yield. Already for cuts yield selenium favored the lowest breast yield and higher yield of wings in birds. For meat quality, the results show that supplementation only of selenium provided a lowest intensity of red, greater weight loss by cooking and a smaller shear force, while that supplementation of vitamin E provided a low oxidation of the flesh. When evaluating meat characteristics normal and PSE (Pale, Soft and Exudative), observes-if that meat PSE presented smaller pH, intensity of red and retention capacity water, besides higher luminosity values, yellow intensity, weight losses by cooking and lipid oxidation. The amount of vitamin E deposited in muscle, was higher in treatments where were suplementated vitamin. Regarding activity of phospholipase A2 (PLA2), observes-if that supplementation of only selenium provided smaller activity this enzyme and not there was difference this in relation to meats normal and PSE. The incidence this anomaly was not influenced by supplementations of vitamin E and/or selenium. As to the system immune, for titles totals of antibodies no significant difference, but there was a significant interaction between time postimmunization and inoculation, where a difference was significant for the effect of inoculation and for the effect of time postimmunization in the inoculated birds with erythrocyte mutton. To the titles of IgY and titles of antibodies natural, observes-if that there was a statistical difference between the times postimmunization, where greater output occurred in 2º post immunization (42° day of life). No significant difference for the relative weight of lymphoid organs. Thus, it is concluded that vitamin E showed to be efficient antioxidant in the prevention of lipid oxidation, for the quality of meat it was observed that there was no synergism between vitamin E and selenium. The performance zootechnical was worst for birds supplemented with selenium, thus compromising the cuts yield. To the immune system to supplementation of vitamin E and/or selenium in diet of birds not afforded any improves.

Objetivou-se com o trabalho avaliar os efeitos da suplementação de diferentes níveis de glutamina dietética (0; 1,0; 1,5; 2,0%) para leitões desmamados associados a duas condições: submetidos ou não a desafios com 0,3 µg lipopolissacarídeo de Escherichia coli (LPS); e sob duas condições de alojamento (creches caracterizadas com diferentes fatores de risco). Por tanto foram desenvolvidos dois experimentos. No primeiro experimento foram avaliados 4 níveis de L-glutamina dietética e duas situações de desafio (Creche I, com baixo fatores de risco; e Creche II, com altos fatores de risco), definindo um desenho experimental em modelo fatorial 4 x 2. Foram utilizados quarenta e oito leitões com 21 dias de idade, alojados em número de 2 por baia, um macho castrado e uma fêmea, avaliados durante 30 dias. Houve interação dos fatores para a conversão alimentar, onde para os animais da Creche I níveis crescentes de glutamina promoveram melhora da conversão alimentar. Para o fator alojamento, os animais da Creche I apresentaram melhor (P≤0,05) ganho diário de peso, consumo diário de ração e peso final, e menor incidência e intensidade de diarréia. A glutamina demonstrou ser benéfica para a conversão alimentar, quando as condições de ambiente apresentaram baixos fatores de risco; e a condição ambiental com baixos desafios sobrepõe a ação da glutamina para características de ganho de peso e consumo de ração. No segundo experimento foram avaliados 4 níveis de L-glutamina dietética e duas situações de desafio (sem LPS e com LPS, administrados no 22°, 23°, 24°, 25° e 26° dias do período experimental). Foram avaliados o desempenho, o perfil sérico de cortisol e o leucograma. As coletas de sangue realizadas nos 22°, 24°, 26° e 28° dias de experimento. Foram utilizados 96 animais, desmamados aos 21 dias de idade, alojados em número de dois por baia (um macho castrado e uma fêmea), durante 30 dias. Foi observado efeito quadrático para o ganho diário de peso para os animais não desafiados, com ponto de máxima (0,303 kg/dia) para 0,41% de glutamina e efeito linear negativo para a conversão alimentar de animais desafiados. Houve interação para o número de leucócitos totais entre os teores de glutamina e LPS e efeito linear dos teores de glutamina dos animais não desafiados sobre o número de leucócitos totais. Para neutrófilos e linfócitos houve efeito quadrático apenas dos teores de glutamina. A suplementação de glutamina em até 2% na dieta melhora a conversão alimentar dos animais submetidos ao desafio com LPS e favorece a imunidade celular sérica de leitões após o desmame. The aim in this was to evaluate the effects of different levels of dietetic glutamine (0; 1.0; 1.5; 2.0%) to weaning piglets associated with two conditions: submitted or not to 0.3 µg Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS) challenge; and two housing conditions (nurseries characterized with different presences of risk factors). Two experiments were well characterized. In the first, were evaluated four levels of dietetic L-glutamine and two challenge conditions (Nursery I, with low risk factors level and Nursery II, with high risk factors level), setting a 4x2 factorial experimental design. Forty eight piglets with 21 days, allocated two per bay, one barrow and one female, were evaluated during 30 days. There was an interaction for feed conversion ratio with an improvement when the levels of glutamine were increased for the Nursery I animals. For the housing factor, animals allocated at Nursery I had better (P

A enzima fitase é utilizada na nutrição de frangos para melhorar o aproveitamento dos nutrientes, uma vez que esta quebra o fitato presente no milho e no farelo de soja disponibilizando o fósforo, cálcio, aminoácidos e energia. Diante destes fatores, foi conduzido um experimento com o objetivo de avaliar a influência da fitase dietética sobre o desempenho, qualidade da carne, parâmetros sanguíneos e imunológicos e o crescimento alométrico de alguns órgãos de frangos de corte. Foram utilizados 330 pintainhos de corte, machos, da linhagem Cobb, entre 1 a 42 dias de idade, submetidos a seis rações experimentais, sendo uma controle, e cinco formuladas conforme as exigências nutricionais consideradas na ração controle, porém com redução em 30% na concentração do fósforo disponível, sendo suplementadas com 0; 250; 500; 1000 e 2000 unidades fitase por quilograma (FTU/kg). As rações foram fornecidas em três fases, de 1 a 7, 8 a 28 e 29 a 42 dias de idade. O desenho experimental foi inteiramente casualizado com 6 tratamentos e 5 repetições (cada repetição foi representada por um box com 11 aves cada). Os parâmetros de desempenho foram avaliados nas idades de 1 a 21 e de 1 a 42 dias. Aos 21 dias de idade, os frangos alimentados com 500 FTU/kg tiveram o ganho de peso (GP) e a conversão alimentar (CA) iguais ao tratamento controle (P>0,05). A suplementação de fitase em 1000 e 2000 FTU/kg piorou a CA e reduziu o peso relativo do jejuno. No hemograma, a dieta com 2000 FTU/kg resultou em aumento do número total de hemácias. Houve efeito quadrático de regressão para GP, consumo de ração (CR) e peso do jejuno aos 21 dias. Não foram observados efeitos dos tratamentos no volume globular, hemoglobina, leucócitos, heterófilos, linfócitos, relação heterófilos/linfócitos, cálcio, fósforo, ferro, concentração de IgG, IgM e IgA, anticorpos total, peso relativo da Bursa de Fabrícius e baço. Aos 42 dias o GP, a CA, o pH e a capacidade de retenção de água da carne, volume globular, hemoglobina, hemácias, leucócitos, heterófilos, linfócitos, relação heterófilos/linfócitos, a concentração de IgG, IgM e IgA, anticorpos total, peso relativo da Bursa de Fabrícius, baço, coração, fígado, pâncreas, proventrículo mais moela, duodeno, jejuno íleo e intestino grosso não foram influenciados (P>0,05) pelos tratamentos. O consumo de ração foi maior (P0.05). Phytase supplementation at 1000 and 2000 FTU/kg increased FC and reduced the relative weight of the jejunum. In hemogram, the diet with 2000 FTU/kg increased the total number of red blood cells. There were no effects on immunological parameters. At 42 days the WG, the FC, the parameters of meat quality, blood counts and immunological parameters were not influenced (P> 0.05) by the treatments. The feed intake (FI) was higher (P

O GenBank é um banco de dados público de sequências de nucleotídeos, atualmente gerido pelo NCBI - National Center for Biotechnology Information, que fornece mecanismos para o acesso e processamento de informações armazenadas. Uma forma de acesso às informações do GenBank é através da suíte BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) para busca de similaridade local entre sequências genéticas. As informações do GenBank podem ser acessadas pelo website do NCBI ou localmente. O website NCBI BLAST é uma maneira fácil de encontrar sequências, mas impõe algumas limitações na parametrização da consulta, e pesquisas em lote de larga escala não estão disponíveis. Objetivando preencher esta lacuna, este trabalho irá apresentar a ferramenta VNBlast. O VNBlast é uma aplicação web amigável que tem como base o NetBlast do NCBI, que oferece um número substancial de parâmetros para a busca e alinhamento de sequências que são efetuadas diretamente no GenBank através de webservices, evitando a necessidade de download dos conjuntos de dados e apresentando como resultado informações constantemente atualizadas. O VNBlast foi capaz de executar alinhamentos de forma mais simplificada e intuitiva que o Netblast, apresentou maiores possibilidades de resultados que o site BLAST da NCBI, ofereceu mais parâmetros para busca direta que as ferramentas citadas e possibilitou a execução de buscas em lote. GenBank is a public database of nucleotide sequences built by the National Center for Biotechnology Information (NCBI) that provide mechanisms for accessing and processing stored information. A way to access information on GenBank is BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) a program to search for local similarity between sequences. GenBank information can be accessed through NCBI website or locally. NCBI BLAST website is an easy way to find sequences, but imposes some limitations in the parameterization of the query, and batch searches in large-scale are not available. In order to fill this gap, this paper will introduce the VNBlast tool. VNBlast is a user-friendly web application based on NCBI NetBlast, which offers a substantial number of parameters for search and alignment of sequences directly on GenBank, avoiding the need of manual download of datasets and always presenting as result updated information. VNBlast was able to perform alignments in an easier and more intuitive way than Netblast, it presented more possibilities of results than the NCBI BLAST website, offered more parameters for direct search that the mentioned tools and allowed the execution of batch searches.

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma das micoses sistêmicas mais importantes da América Latina, e tem o Brasil como centro endêmico. Trabalhos recentes demonstram que as drogas que atuam na via da calcineurina interferem no crescimento de fungos patogênicos, incluindo o fungo Paracoccidioides brasiliensis, em ensaios in vitro, sugerindo o seu potencial terapêutico. O presente trabalho teve como objetivo investigar o efeito da Ciclosporina A (CsA), um inibidor da via da calcineurina, na paracoccidioidomicose experimental em camundongos. Os camundongos BALB/c foram divididos em quatro grupos de 6 animais cada (“Control”, “CsA”, “Pb” e “Pb/CsA”). Dois grupos de animais (“Pb” e “Pb/CsA”) foram inoculados (i.v.) com 1x106 leveduras de P. brasiliensis (Pb18), enquanto os outros dois grupos (Control e CsA) receberam apenas solução salina tamponada (PBS). Durante 30 dias, os grupos CsA e Pb/CsA receberam, em dias alternados, 10mg/kg de CsA (s.c.), já os grupos “Control” e “Pb” receberam PBS. Antigenemia, resposta imune humoral, resposta imune celular, histopatologia e unidades formadoras de colônias foram avaliadas após 30 dias de infecção. A antigenemia, resposta imune humoral e citocinas (IFN-y, TNF-α, IL-4 e IL-10) foram avaliadas por ensaio imunoenzimático (ELISA). A avaliação da resposta imune celular foi realizada por teste de hipersensibilidade tardia (DTH) e por meio de cultura de linfócitos estimulados com exoantígeno de Pb. Os resultados mostraram que a CsA possui um efeito protetor na PCM experimental, com diminuição da antigenemia e da carga fúngica nos órgãos. A CsA foi capaz de inibir tanto a resposta imune específica humoral como a celular, com a diminuição do nível das citocinas IFN-, TNF-α e IL-4. Concluímos pelos resultados que a CsA embora induza imunodepressão apresenta efeito protetor na PCM experimental em camundongos BALB/c. Paracoccidioidomycosis (PCM) is an important systemic mycosis prevalent in Latin America with most causes in Brazil. Calcineurin pathway has been described as essential to pathogenic fungi, including P. brasiliensis, and its potential therapeutic application throughout pharmacologic inhibition has been described. The objective of this work was to evaluate the protector effect of cyclosporine A (CsA), a calcineurin inhibitor, in murine experimental PCM. Male BALB/c mice were separated into 4 groups composed by 6 animals each ("Control", "CsA", "Pb" and "Pb/CsA). Groups "Pb" and "Pb/CsA” were inoculated i.v. with 1x106 Paracoccidioides brasiliensis yeast cells (Pb18), while control and CsA groups received only saline-phosphate buffer (PBS). During 30 days, “CsA” and “Pb/CsA” groups received every other day 10mg/kg of CsA (s.c.), the groups "control" and "Pb" received just PBS. Antigenemia, humoral immune response, cytokines (IFN- TNF-α, IL-4 and IL-10) assessed by ELISA, cellular immune response evaluated by delayed hypersensitivity (DTH) test and by lymphocyte culture stimulated with specific Pb exoantigen, the colony-forming units (CFU) and histopathology were all evaluated 30 days post infection. The results showed that CsA has protective effect in experimental PCM, with decreased antigenemia and organs fungal load. Ciclosporin was able to inhibit the specific humoral and cellular immune response, with decrease in IFN-y, TNF-α and IL-4 cytokine levels. In conclusion, althout the immunossupressive effect, the CsA has protective effect in murine experimental PCM.

O câncer de mama é uma das neoplasias malignas mais comuns em mulheres e é responsável por uma grande parcela de mortes relacionadas ao câncer em todo o mundo. O malondialdeído (MDA), um dos produtos finais da peroxidação lipídica, encontra-se elevado no plasma de pacientes com câncer de mama. As quimiocinas e seus receptores estão envolvidos no controle do direcionamento dos linfócitos, mecanismo essencial do sistema imunológico. O receptor de quimiocina CXCR4 pode estar envolvido no desenvolvimento de uma variedade de patologias como o câncer de mama. No presente estudo, foram avaliados níveis de MDA e expressão de CXCR4 no sangue periférico nos diferentes estadiamentos do câncer de mama, além disso, foram avaliados o perfil etário das pacientes, sua distribuição nos diferentes estadiamentos da doença, bem como a distribuição dos tipos de carcinoma. Foram utilizadas amostras de sangue periférico de 59 pacientes com câncer de mama entre 31-76 anos e 84 doadoras de sangue saudáveis acima dos 25 anos de idade. Das pacientes estudadas, 74% apresentou idade superior aos 45 anos. Em relação ao estadiamento, observou-se maior número de pacientes no estágio II da doença (49.1%), seguido do estágio III (42.4%), estágio IV (5.1%) e estágio I (3.4%). A análise dos tipos de carcinoma nas pacientes mostrou que 93.2% dos carcinomas eram do tipo ductal invasor, enquanto 3.4% eram do tipo lobular invasor e 3.4% não foram identificados. O nível de MDA no grupo controle foi 0.34 ± 0.03 ?mol/L e no grupo de pacientes com câncer foi 1.41 ± 0.11 ?mol/L apresentando diferença estatisticamente significativa (p

Objetivos: Com o objetivo de determinar as características clínicas e imunológicas associadas à esquizofrenia e ao transtorno esquizoafetivo, o presente trabalho avaliou dados clínicos e mensurou os níveis séricos de interleucina-6 (IL-6), receptor solúvel de interleucina-2 (sIL-2R), interleucina-2 (IL-2), alfa (a) 1,2 beta e gama globulina, imunoglobulinas (Ig), anticorpos anti-hipocampo, e do sangue total foram genotipadas moléculas de HLA classe I e II, a detecção do vírus da Borna e contagem de células matadoras naturais (NK), em pacientes esquizofrênicos, esquizoafetivos, familiares biológicos e controles saudáveis. Métodos: Os critérios de exclusão foram indivíduos menores de 18 anos e maiores de 55 anos, portadores de doenças crônicas ou submetidos a tratamento que afetasse o sistema imunológico. Foram selecionados 50 pacientes esquizofrênicos e esquizoafetivos, 48 controles saudáveis, 41 familiares em primeiro grau sem transtorno mental e 48 familiares em primeiro grau com transtorno de humor. Todos os sujeitos foram submetidos à entrevista clínica estruturada para o DSM-IV, transtornos do Eixo I (SCID-I versão clínica). Os métodos utilizados para medidas imunológicas foram: ELISA e/ou quimioluminescência (interleucinas, IgE e anticorpos anti-hipocampo), eletroforese (a1, a2, gama, beta globulina e albumina), nefelometria (IgA, IgG e IgM), citometria de fluxo (NK), SSP-PCR (HLA) e RT-PCR (Doença do vírus da Borna ?VDB). Resultados: A duração média da doença nos pacientes esquizofrênicos e esquizoafetivos foi de 15,341 ± 9,90 anos e a idade média de início da doença foi de 22,4 ± 7,371 anos. Não houve diferença significativa no gênero (p = 0,057), idade (p = 0,96), albumina (p = 0,64) e índice de massa corpórea (Kg/m2) (p = 0,07) entre pacientes, controles e familiares. Pacientes e familiares com e sem transtorno de humor tiveram significativamente maiores níveis séricos de IL-6 pelo método de quimioluminescência (p = 0,008) e ELISA (p = 0,003). A dosagem de a2 globulina foi significativamente maior entre pacientes do que entre controles (p = 0,002). Não houve diferença significativa em relação a sIL-2R (p = 0,1), IL-2 (p = 0,8), NK (p = 0,07), IgE (p = 0,06), IgG (p = 0,64) e IgM (p = 0,51) entre pacientes, familiares e controles. Pacientes, familiares com transtorno de humor e familiares sem transtorno mental tiveram maiores valores de auto-anticorpos dirigidos contra o hipocampo, 0,167 ± 0,077, 0,158 ± 0,058, 0,164 ± 0.092, respectivamente, do que os controles, 0,143 ± 0,037, mas não significativos (p = 0,53). A associação positiva com HLA B*15 foi encontrada significativamente maior nos pacientes, familiares com transtorno de humor e familiares sem transtorno mental (p = 0,003) do que em controles saudáveis. A associação negativa com HLA B*35 foi encontrada significativamente maior nos familiares sem transtorno mental (p = 0,03) do que nos controles saudáveis. A VDB teve significativamente maior presença nos pacientes e familiares biológicos do que nos controles (p = 0,04). Conclusão: Os resultados sugerem a existência de envolvimento imunológico ou inflamatório e mecanismos imunogenéticos em pacientes esquizofrênicos, esquizoafetivos e em familiares biológicos. Objective: Aiming at determining the clinical and immunological characteristics associated with the schizophrenia,and schizoaffective disorder the present study evaluated clinical data and measured the serum levels of interleukin-6 (IL-6), interleukin-2 soluble receptor (sIL-2R), interleukin-2 (IL-2), alpha (a1, a2), beta, gamma globulin, serum immunoglobulins (Ig), antibodies anti-hippocampus, and from whole blood were assessed natural killer cells count (NK), Borna virus, and genotyping HLA class I, II, in schizophrenic and schizoaffective patients, biological relatives, and healthy controls. Methods: The exclusion criterion was subjects under 18 years old and older than 55 years old and chronic diseases or any treatment which affect the immune system. The subjects were 50 schizophrenic and schizoaffective patients, 48 healthy controls, 41 first-degree relatives without psychiatric disease, and 48 first-degree relatives with mood disorder. All subjects were interview by structured diagnostic criteria categorized according to DSM-IV, axis I (SCID?IV). The methods were: ELISA and/or chemiluminescent (interleukins, IgE, autoantibodies against hippocampus); electrophoresis (a1, a2, gamma, beta globulin, albumin); nephelometry (IgA, IgG e IgM); flow cytometry (NK), SSP- PCR (HLA), and RT-PCR (Borna Disease Virus - BDV). Results: The mean duration of illness in the schizophrenic and schizoaffective patients was 15,341 ± 9,90 years and the median age at onset was 22,4 ± 7,371years. There were no significant differences in gender (p = 0,057), age (p = 0,96), albumin (p = 0,64), or body mass index (Kg/m2) (p = 0,07) among patients, controls and relatives. Patients and relatives with and without mood disorders had significantly higher serum levels of IL-6 in chemiluminescent (p = 0,008), and ELISA Method (p = 0,003). The a2globulin dosage was significantly higher among patients than among controls (p = 0,002). There were no significant differences in sIL-2R (p = 0,1), IL-2 (p = 0,8), NK (p = 0,07), IgE (p = 0,06), IgG (p = 0,64), and IgM (p = 0,51) levels among patients, families, and controls. Patients, families with humor disorder and without mental disorder presented higher values of autoantibodies against hippocampus 0,167 ± 0,077, 0,158 ± 0,058, 0,164 ± 0,092, respectively, than controls 0,143 ± 0,037, but not significantly (p = 0,53). The positive association with HLA B*15 was found significantly higher in patients, families with humor disorder and families without mental disorder (p = 0,003) in relation to healthy controls. The negative association with HLA B*35 was found significantly higher in families without mental disorder (p = 0,003) in relation to healthy controls. The presence of BDV was found significantly higher in patients and biological families than in controls (p = 0,04). Conclusion: These results suggest the existence of involvement of an immunological or inflammatory process and an immunogenetic association in schizophrenic and schizoaffective patients, and their biological relatives.