Search

The objective of the present study was to evaluate mutations and polymorphisms in Complex V of the Mitochondrial DNA and its relationship with the emergence and progression of Glial tumors of the Central Nervous System in patients treated at a Reference Hospital for Oncological Treatment in Belém, Pará State, Brazil. Twenty-two tumor samples from the human nervous system were used, classified as astrocytomas of different degrees, where only two samples showed nucleotide alterations, and most patients over 50 years old are related to high-grade tumors and those below 50 years old are related to low-grade tumors, strengthening the idea that most low-grade astrocytomas are of hereditary origin and most of the emergence of high-grade ones are related to long-term exposure to carcinogenic agents. The alterations do not appear to interfere directly with the gene's function. Although mtDNA is more susceptible to mutations than nDNA, the results of this study suggest that the V complex remains intact even in a reactive environment, suggesting a protective mechanism, guaranteeing energy production in the tumor cell. El objetivo del presente estudio fue evaluar mutaciones y polimorfismos en el Complejo V del ADN Mitocondrial y su relación con la aparición y progresión de tumores Gliales del Sistema Nervioso Central en pacientes atendidos en un Hospital de Referencia en Tratamiento Oncológico de Belém, Pará, Brasil. Se utilizaron 22 muestras tumorales del sistema nervioso humano, clasificadas como astrocitomas de diferente grado, donde solo dos muestras presentaron alteraciones de nucleótidos, y la mayoría de los pacientes mayores de 50 años están relacionados con tumores de alto grado y los menores de 50 años están relacionados a tumores de bajo grado, lo que refuerza la idea de que la mayoría de los astrocitomas de bajo grado son de origen hereditario y que la mayor parte de la aparición de los de alto grado está relacionada con la exposición a largo plazo a agentes cancerígenos. Las alteraciones no parecen interferir directamente con la función del gen. Aunque el mtDNA es más susceptible a mutaciones que el nDNA, los resultados de este estudio sugieren que el complejo V permanece intacto incluso en un entorno reactivo, lo que sugiere un mecanismo protector que garantiza la producción de energía en la célula tumoral. O objetivo do presente trabalho foi avaliar mutações e polimorfismos no Complexo V do DNA Mitocondrial e sua relação com o surgimento e progressão de tumores Gliais do Sistema Nervoso Central em pacientes atendidos em Hospital de Referência no Tratamento Oncológico em Belém, Estado do Pará, Brasil. Foram utilizadas 22 amostras tumorais do sistema nervoso humano, classificadas como astrocitomas de diferentes graus, onde apenas duas amostras apresentaram alterações nucleotídicas, sendo que a maioria dos pacientes acima de 50 anos estão relacionados com os tumores de alto grau e os abaixo de 50 anos estão relacionados com os tumores de baixo grau, fortalecendo a ideia que a maior parte dos astrocitomas de baixo grau são de origem hereditária e a maior parte do surgimento dos de alto grau, estão relacionados com a longa exposição a agentes carcinogênicos. As alterações parecem não interferir diretamente na função do gene. Apesar do mtDNA ser mais susceptível à mutações que o nDNA, os resultados deste estudo sugerem que o complexo V se mantém íntegro mesmo em ambiente reativo, sugerindo um mecanismo de proteção, garantindo a produção de energia na célula tumoral.

Os gliomas s?o tumores cerebrais extremamente agressivos. A malignidade tumoral tem sido atribu?da aos diversos mecanismos de resist?ncia ? terapia que compreendem a intensa capacidade imunomodulat?ria e a invas?o do tecido subjacente. Sugere-se que purinas e pirimidinas possam atuar como mol?culas sinalizadoras, influenciando tais caracter?sticas. A hidr?lise de ATP pelas ectonucleos?deo trifosfato difosfoidrolases (ENTPDases) e a consequente forma??o de adenosina est?o relacionadas ? regula??o positiva de vias de prolifera??o, migra??o, sobreviv?ncia celular e de checkpoints imunol?gicos inibit?rios como a via PD-1/PD-L1. Deste modo, a hip?tese deste trabalho ? que a inibi??o da atividade ATP?sica resultaria na redu??o da imunossupress?o, da resist?ncia ? quimioterapia e da invasividade tumoral, de forma direta ou indiretamente atrav?s da a??o no microambiente tumoral. A atua??o sin?rgica da via da adenosina e do eixo PD-1/PD-L1 na manuten??o da imunossupress?o em gliomas foi descrita neste trabalho. ? not?rio o envolvimento destas vias na progress?o dos gliomas. Neste contexto, a inibi??o da forma??o de adenosina juntamente com o favorecimento de altas concentra??es de ATP extracelular poderiam aumentar a carga inflamat?ria antitumoral no microambiente tumoral e minimizar os mecanismos tumorais de resist?ncia ? terapia. O uso do inibidor de E-NTPDases polioxometalato-1 (POM-1) mostrou estar relacionado com a potencializa??o do efeito da temozolomida, atrav?s da redu??o da viabilidade celular e indu??o de apoptose em c?lulas de glioblastoma (GBM). Al?m disso, a an?lise do potencial invasivo-migrat?rio das c?lulas de GBM foi avaliado em modelo de cultura tridimensional atrav?s do m?todo migratory fitness, desenvolvido ao longo deste trabalho. A inibi??o da hidr?lise extracelular de ATP favoreceu a ocorr?ncia de um fen?tipo celular menos invasivo, reduzindo a massa de c?lulas migrat?rias. Com base nos achados in vitro, o efeito do POM-1 foi avaliado em um estudo piloto de GBM em modelo murino que envolveu a administra??o intranasal do inibidor e demonstrou uma forte tend?ncia ao aumento da inflama??o no local do tumor e redu??o da infiltra??o de linf?citos Tregulat?rios, que caracteriza redu??o da imunossupress?o. De modo geral, este trabalho demonstra estrat?gias de modula??o do microambiente tumoral que enfraquecem mecanismos de resist?ncia ? temozolomida e minimizam a invasividade de tumores extremamente malignos. Gliomas are extremely aggressive. Tumor malignancy has been attributed to several mechanisms of resistance to therapy that include the intense immunomodulatory capacity and the invasion of the underlying tissue. It is suggested that purines and pyrimidines may act as signaling molecules, influencing such characteristics. ATP hydrolysis by ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolases (E-NTPDases) and the consequent formation of adenosine are related to the positive regulation of proliferation, migration, cell survival and inhibitory immunological checkpoints such as the PD-1/PD-L1 pathway. Thus, the hypothesis of this study is that the inhibition of ATPase activity would result in the reduction of immunosuppression, resistance to chemotherapy and tumor invasiveness, directly or indirectly through action on the tumor microenvironment. The synergistic action of the adenosine pathway and the PD-1/PD-L1 axis maintaining immunosuppression in gliomas was described in this study. The involvement of these pathways in the progression of gliomas is well known. In this context, the inhibition of adenosine formation together with the favoring of high concentrations of extracellular ATP could increase the antitumor landscape in the tumor microenvironment and minimize the tumor mechanisms of resistance to therapy. The use of the E-NTPDase inhibitor polyoxometalate-1 (POM-1) was shown to be related to the potentiation of the effect of temozolomide, through the reduction of cell viability and induction of apoptosis in glioblastoma cells (GBM). Furthermore, the analysis of the invasive-migratory potential of GBM cells was evaluated in a 3D culture model using the migratory fitness method, developed throughout this work. Inhibition of extracellular ATP hydrolysis favored the occurrence of a less invasive cellular phenotype, reducing the mass of migrating cells. Based on in vitro findings, the effect of POM-1 was evaluated in a pilot study of GBM murine model that involved intranasal administration of the inhibitor and demonstrated a strong tendency to increase inflammation at the tumor site and reduce lymphocyte infiltration of regulatory T cells, which characterizes reduced immunosuppression. Overall, this work demonstrates tumor microenvironment modulation strategies that weaken temozolomide resistance mechanisms and minimize the invasiveness of extremely malignant tumors. Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES

Trabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2021 Submitted by Sofia Amador (sofiamador@fm.ul.pt) on 2022-02-09T11:10:38Z No. of bitstreams: 1 AfonsoMGoncalves.pdf: 2886741 bytes, checksum: 5677558da9c887f58201b2ac469c3f88 (MD5) Made available in DSpace on 2022-02-09T14:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AfonsoMGoncalves.pdf: 2886741 bytes, checksum: 5677558da9c887f58201b2ac469c3f88 (MD5) Previous issue date: 2021-07

Introdução: A cirurgia guiada por fluorescência é uma técnica usada para melhorar a visualização das margens do tumor, a fim de aumentar a extensão da ressecção da neoplasia na cirurgia de glioma. A fluorescência tecidual após administração oral de ácido 5-aminolevulínico (5-ALA) está associada a alta sensibilidade, especificidade e valores preditivos positivos sem precedentes para a identificação de tecido tumoral de glioma maligno. Objetivo: Analisar a contribuição da cirurgia guiada por fluorescência para melhorar a precisão da ressecção e o diagnóstico nos gliomas. Materiais e métodos: Foi realizada uma revisão de literatura com base na pesquisa realizada no PUBMED, utilizando os descritores “neurocirurgia”, “fluorescência” e “glioma”, os quais somados aos filtros: “humano”, “revisão”, “revisão sistemática”, “5 anos”, “texto completo grátis”; resultaram em 16 artigos, sendo 3 excluídos - dois por distanciamento do conteúdo e um por não pertencer as línguas selecionadas (inglês e português). Assim, totalizando 13 artigos. Resultado e discussão: O agente 5-ALA consegue ser absorvido pelas células de glioma em tumores, por conta disso é utilizado na fluorescência na ressecção de gliomas (FRG), seu uso causou 65% de ressecção total bruta (RTB) contra 35% sem o agente. A ressecção total do tumor em estudo aumenta a sobrevida, e os pacientes com fluoresceína tiveram em 83% de recessão total com o agente e sem o agente tiveram 55% de sobrevida. Conclusão: O campo da abordagem com óptica intraoperatória possui um vasto conhecimento ainda a ser abordado, sendo necessários mais estudos sobre o tema. Por mais, o uso de agentes fluorescentes é de uma forte associação com melhores índices de ressecção tumoral, e com a consolidação desses agentes, devem ocorrer o advento de facilidade de sua aplicação, segurança e especificidade. Assim, aprimorando os índices de sucesso das abordagens cirúrgicas ao incorporar a tecnologia de fluorescência nas salas de neurocirurgia.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2020. O glioblastoma multiforme é o tipo mais agressivo de tumor do sistema nervoso central, com prognóstico clínico limitado representado por uma expectativa de vida média de 15 meses após o diagnóstico. O tratamento se dá através da ressecção cirúrgica, acompanhada de quimioterapia e radioterapia. Assim, em busca de novas terapias que possam agir de forma mais seletiva, surgem as lectinas de leguminosas, onde através de sua propriedade de reconhecer e ligar-se reversivelmente a glicanos específicos da superfície celular, são capazes de gerar efeitos biológicos de modo mais preciso. Neste trabalho foram explorados os efeitos citotóxicos da lectina DVL extraída da planta Dioclea violacea em comparação com os dados encontrados com a lectina ConA (Canavalia ensiformis) em células de glioma C6 e U87. Os resultados indicaram que DVL e ConA, foram capazes de causar alterações na morfologia, proliferação, sobrevivência e inibição da migração celular em ambas linhagens. Alterações nas vias de sinalização de Akt, mTORC1 e de MAPKs (ERK 1/2, p38MAPK e JNK p46/p54) foram evidenciadas na linhagem U87 após exposição com DVL. Adicionalmente, DVL foi capaz de aumentar a expressão de LC3II, um importante marcador autofágico. Diminuição no potencial de membrana mitocondrial e aumento na expressão de BNIP3 também foi registrado em ambas as linhagens após o tratamento com as lectinas. Entretanto, este fato não foi acompanhado da geração de espécies reativas de oxigênio. A expressão das proteinas pró-apoptóticas Bax e Bak foi diminuída por ConA e DVL, enquano Puma foi aumentada em células U87. Ao tratarmos as células com 3MA e cloroquina, dois inibidores autofágicos, foi registrada uma atenuação da morte celular gerada pelas lectinas, em ambas as linhagens, corroborando a hipótese de que a morte celular desencadeada pelas lectinas é de origem autofágica. Observamos que o uso de rapamicina, um indutor autofágico, gerou alterações sobre a densidade de U87 e interferiu na formação de esferas celulares. Ao avaliarmos o papel da TMZ, droga de escolha para o tratamento clínico do glioblastoma, não registramos indicativos de ação sinérgica entre o fármaco e as lectinas na modulação nas vias de sinalização (ex. MAPKs e Akt), exceto a expressão de LC3 II que foi potecializada. Por fim, astrócitos de telencéfalo foram tratados com ConA e DVL nas mesmas concentrações utilizadas nas linhagens de glioma. Notavelmente, não foi observado alteração da viabilidade celular (avaliada pelo teste de MTT) nem na incorporação de iodeto de propídio ou laranja de acridina, sugerindo ausência de citotoxicidade sobre os astrócitos. Em conjunto nossos resultados demonstram uma ação seletiva das lectinas nas linhagens tumorais, fortalecendo assim a sua relevância como terapia antitumoral. Abstract: The glioblastoma multiforme is the most aggressive type of central nervous system tumor, with limited clinical prognosis represented by an average life expectancy of 15 months after diagnosis. Treatment is through surgical resection accompanied by chemotherapy and radiotherapy. Thus, in search of new therapies that can act more selectively, leguminous lectins emerge, where through their property of recognizing and reversibly binding to specific cell surface glycans, they are capable of more precisely generating biological effects. In this work the cytotoxic effects of lectin DVL extracted from Dioclea violacea plant were explored in comparison with the data found with lectin ConA (Canavalia ensiformis) in glioma cells C6 and U87. The results indicated that DVL and ConA were able to cause changes in morphology, proliferation, survival and inhibition of cell migration in both strains. Changes in the signaling pathways such as Akt, mTORC1 and MAPKs (ERK 1/2, p38MAPK and JNK p46/p54) were evidenced in the U87 line after exposure with DVL. Moreover, DVL treatment was able to increase LC3II expression, an important autophagic marker. Decrease in mitochondrial membrane potential and increase BNIP3 expression was also recorded in both cell lines after lectin treatment. However, this was not accompanied by generation of reactive oxygen species. The expression of pro-apoptotic proteins Bax and Bak was decreased by ConA and DVL, while an increase of Puma expression was observed in U87 cells. When treating cells with 3MA and chloroquine, two autophagic inhibitors, there was an attenuation of lectin-generated cell death in both strains, corroborating the hypothesis that lectin-triggered cell death is of autophagic origin. We observed that the use of rapamycin, an autophagic inducer, generated changes on U87 density and interfered with the formation of cell spheres. Evaluating the role of TMZ, the drug of choice for the clinical treatment of glioblastoma, it was not observed synergistic action between the drug and the lectins, concerning cell viability and modulation of signaling pathways (i.e. MAPKs and Akt), except LC3 II expression that was potentiated. Finally, primary cultures of telencephalon astrocytes were treated with ConA and DVL at the same concentrations used in glioma lineages and it was not observed alteration in cell viability (by MTT assay) neither increase of propidium iodide or acridine orange staining, suggestin absence of cytotoxicity against astrocytes. Taken together, our results demonstrate a selective action of lectins only on tumor lineages thus strengthening their relevance as antitumor therapy.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Segundo o Instituto Nacional de Câncer (INCA), câncer é a denominação dada a um conjunto de mais de 100 doenças que têm como principal característica o crescimento desordenado de células capazes de invadir tecidos e órgãos adjacentes e de se espalhar de forma metastática para outras regiões do corpo. A Organização Mundial da Saúde (OMS) apresenta essa doença como sendo um problema de saúde pública, tendo causado 9,6 milhões de mortes em 2018, e portanto figurando como sendo a segunda principal causa de mortes no mundo. Dentre os diferentes tipos de câncer, destacam-se o câncer de pele do tipo melanoma, o glioma e o câncer colorretal (CCR), estes devido à alta letalidade e baixa taxa de sobrevida. Um grande desafio no tratamento do câncer é o desenvolvimento de resistência de algumas populações de células tumorais aos quimioterápicos antineoplásicos conhecidos, além da falta de seletividade das drogas, resultando em alta toxicidade às células normais. De fato, os Índices de Seletividade (IS) de drogas atuais com grande potencial quimioterápico são menores ou iguais a 1,0. Por outro lado, dibenzoilmetanos (DBMs) e seus derivados destacam-se por apresentarem atividade antitumoral in vitro e in vivo contra diversos tipos de tumores, possuem diversas propriedades farmacológicas (fotoproteção e atividades anti-inflamatória, antitumoral, antiviral), e pela possibilidade de serem produzidos por meio de síntese orgânica. Assim, no presente trabalho sintetizou-se um derivado inédito do DBM, denominado IP2-DBM, que foi caracterizado por técnicas espectométricas como RMN H1, RMN C13 e massas. A fim de avaliar o efeito citotóxico do IP2-DBM, foram realizados testes in vitro em linhagens de células tumorais B16F10 (melanoma), C6 (glioma) e SW480 (adenocarcinoma colorretal) e em linhagens de células normais Melan-A e VERO. Os resultados do teste de citotoxicidade realizado com MTT, mostrou que as taxas de IC50 (50% da concentração inibitória máxima) foram 9,018 μg/mL, 26,17 μg/mL e 24,04 μg/mL para as células de linhagens de melanoma, glioma e adenocarcinoma colorretal, respectivamente. Enquanto as linhagens normais Melan-A e VERO, apresentaram IC50 de 51,85 μg/mL e 99,89 μg/mL, respectivamente. Em relação a Melan-A, o IS (índice de seletividade) foi de 5,74 para melanoma e 2,15 para glioma, e em relação a VERO, os IS foram de 11,06, 3,81 e 4,15, para melanoma, glioma e adenocarcinoma do colorretal, respectivamente. Os dados obtidos indicam que o composto IP2-DBM é um potencial medicamento para o tratamento do câncer. Estudos complementares e testes in vivo são necessários para avaliar a toxicidade, o mecanismo de ação e a farmacocinética do composto. According to Instituto Nacional de Câncer (INCA), cancer is the name given to a group of more than 100 diseases,that have as a common feature the uncontrolled growth of cells capable of invading neighboring tissues and organs, and to metastatically spread to other body regions. The World Health Organization (WHO) presents this disease as a public health problem, which has caused 9.6 million deaths in 2018, being considered the second main cause of death in the world. Among the different types of cancer, melanoma skin cancer, glioma and colorectal cancer (CCR) stand out due to their high lethality and low survival rate. A great challenge for treating cancer is the development of resistance to known antineoplastic chemotherapic drugs by some cell populations, besides the low selectivity of the drugs, resulting in high toxicity to healthy cells. Indeed, the Selectivity Index (SI) of current drugs with good chemotherapic potential are smaller or equal to 1.0. On the other hand, dibenzoylmethanes (DBM) are notorious compounds for their antitumor activity in vitro and in vivo against several types of tumor, due to their diverse pharmacological properties (photoprotection and anti- inflammatory, antitumor and antiviral activities), and for the possibility of being produced through organic synthesis. Therefore, in the present work, a new DBM derivative, named IP2-DBM, was sintetized and characterized by RMN H1, RMN C13 e massas. In vivo assays wereperformed in the tumor cell lines B16F10 (melanoma), C6 (Glial) and SW480 (colorectal adenocarcinoma) and in the normal cell lines Melan-A and VERO. The synthesis was successfully concluded and the identification of the compound was confirmed. After the cytotoxicity assay with MTT, the rates IC 50 (half maximal inhibitory concentration) were 9.018 μg/mL, 26.17 μg/mL and 24.04 μg/mL for the cell lines melanoma, glioma and CCR, respectively, while the normal cell lines Melan-A and Vero presented IC50 of 51.85 μg/mL and 99.89 μg/mL, respectively. For Melan-A, the SI was 5.74 and 2.15 for melanoma and glioma, respectively. For VERO, the IS rates were 11.06, 3.81, and 4.15 for melanoma, glioma and colorectal adenocarcinoma, respectively. The data obtained suggest that the compound IP 2-DBM is a potential drug for cancer treatment. Further complementary studies and in vivo assays are necessary to guarantee the safety regarding the toxicity and to verify the mechanism of action and pharmacokinetics of the compound.

A Ressonância Magnética é a modalidade radiológica gold standard para o estudo dos gliomas cerebrais. O diagnóstico deste tipo de tumores é geralmente realizado tendo por base a metodologia VASARI, que consiste numa análise qualitativa das imagens obtidas por Ressonância Magnética, seguindo uma lista pré-definida de critérios. Com os avanços tecnológicos surgiu o conceito de Radiomics, que consiste num conjunto de descritores computacionais extraídos das imagens que possibilitam a análise quantitativa e mais objetiva das mesmas. Estas características foram submetidas a técnicas de Machine Learning utilizando o algoritmo Random Forest. Este procedimento permitiu estratificar estas características segundo a sua importância, comparar o desempenho entre ambas e contribuir para a previsão do diagnóstico e do grau tumoral. As classificações realizadas a partir das anotações VASARI apresentaram excelentes resultados ao demonstrarem grande coerência na identificação das características com maior peso no diagnóstico tumoral e no outcome clínico. Todavia observou-se que as características radiómicas, comparativamente às características VASARI apresentavam melhores resultados relativamente à previsão do diagnóstico tumoral. Apesar disto, as características texturais gray-level co-occurrence matrices demonstraram algumas limitações por não conseguirem medir parâmetros que se demonstraram determinantes na classificação tumoral, como as proporções com e sem realce tumoral. Contrariamente às características VASARI, poucas características radiómicas se evidenciaram durante o processo de estratificação por importância. Isto demonstrou que a previsão do diagnóstico e do grau tumoral, utilizando as características radiómicas foi realizado tendo por base um conjunto de características que se complementavam e contribuíam para as assinaturas radiómicas. Para além destas evidências, neste estudo foi também comprovada a importância da standardização de parâmetros de aquisição, processamento e avaliação das imagens de Ressonância Magnética. Magnetic resonance imaging is the radiological gold standard technique for the study of brain gliomas. The diagnosis of this type of tumor is based on the VASARI methodology, which consists of a qualitative analysis, following a predefined list of criteria, of the magnetic resonance images. With technological advances the concept of Radiomics emerged, which consists of a set of computational descriptors extracted from the images that allow a quantitative and more objective analysis of them. These characteristics were submitted to Machine Learning techniques using the Random Forest algorithm. This procedure allowed stratifying these characteristics according to their importance, comparing the performance between them and contributing to the prediction of the diagnosis and tumor grade. The classifications made from the VASARI annotations presented excellent results by demonstrating great coherence in the identification of the most important features in tumor diagnosis and clinical outcome. However, it was observed that radiomic characteristics compared to VASARI characteristics presented better results when predicting the tumor diagnosis and tumor grade. Nevertheless, gray-level co-occurrence matrices textural characteristics demonstrated some limitations because they could not measure parameters that were determinant in tumor classification, such as proportions with and without tumor enhancement. Contrary to VASARI characteristics, few radiomic characteristics stood out during the process of stratification according to their importance. This demonstrated that the prediction diagnosis using the radiological characteristics was performed based on a set of characteristics that complemented each other and contributed to the radiomic signatures. In addition to this evidence, this study also proved the importance of standardization of parameters for acquisition, processing and evaluation of magnetic resonance images. Mestrado em Tecnologias da Imagem Médica

Introdução: No mundo foram diagnosticados em 2014, 256.000 novos casos de tumores do Sistema Nervoso Central (SNC) e no Brasil, estima-se 11.320 novos casos em 2018. Os gliomas correspondem a 20% dos casos e a 80% dos tumores malignos. Mutações no gene da Isocitrato Desidrogenase 1(IDH1) estão presentes em mais de 80% dos oligodendrogliomas e oligoastrocitomas graus II, III e glioblastomas secundários e conferem maior sobrevida global aos pacientes. A radioterapia desempenha um papel fundamental no tratamento dos gliomas e as evidências sugerem que os pacientes mutados têm um aumento na sensibilidade a radioterapia. Metodologia: O estudo avaliou 20 pacientes com diagnóstico de glioma difuso submetidos a radioterapia no Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia entre os anos de 2005 a 2016. Blocos de histologia com tecido tumoral dos pacientes foram submetidos a técnica de TMA, seguida de coloração HE para confirmação histologica e exame de imuno-histoquimica para observação do status da mutação IDH1. Estatisticamente, foi utilizado um nível de significância de 5% (p

Gliomas are the most common and aggressive type of intracranial neoplasia. Affect patients over 65 years old. Histopathologically, gliomas can be classified in grades I, II, III and IV. Starting from the discovery of IDH 1 and 2 mutations in 2009, the increase of survival in patients with IDH-mutated can be noticed regarding patients with IDH wild-type. The proton magnetic resonance spectroscopy enables the diagnosis of IDH-mutated gliomas, influencing the therapeutic proposal. The treatment considered as gold-standard is post-operative radiotherapy with temozolomide. Keywords: Gliomas; IDH; Mutation; Diagnosis; Treatment; Prognostic., Gliomas são o tipo de neoplasia intracraniana mais comum e agressiva. Acometem pacientes por volta dos 65 anos de idade. Histopatologicamente, os gliomas podem ser classificados em graus I, II, III e IV. A partir da elucidação das mutações IDH 1 e 2 em 2009, pode-se observar o aumento da sobrevida em pacientes com IDH-mutado em relação aos pacientes com IDH-selvagem. A espectroscopia de próton por ressonância magnética viabiliza o diagnóstico de gliomas IDH-mutados, influenciando na proposta terapêutica. O tratamento considerado como padrão-ouro consiste na radioterapia pós-cirúrgica em associação com a temozolomida. Palavras-chave: Gliomas; IDH; Mutação; Diagnóstico; Tratamento; Prognóstico. &nbsp

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2017. Os gliomas representam 50-80 % dos tumores cerebrais primários classificados como um dos tipos de neoplasia com maiores desafios na sua terapia. Dentre eles o glioblastoma multiforme (GBM) é o tipo mais agressivo, com um prognóstico pouco favorável, sendo a sobrevida média dos pacientes de aproximadamente 12 meses. Considerando a limitada eficiência das terapias disponíveis, têm sido investigadas novas moléculas bioativas. Lectinas são proteínas que ligam glicanos, apresentando diversas atividades biológicas. Estudos recentes têm indicado a capacidade de algumas lectinas isoladas de plantas, especialmente ConA, poderem induzir morte de células tumorais com certa seletividade, considerando que essas células podem apresentar alterações no padrão de glicosilação. Dentro desses paradigmas, o presente trabalho teve como objetivo central investigar o efeito citotóxico das lectinas purificadas das sementes de Dioclea reflexa (DrfL I) e de Canavalia brasiliensis (ConBr) sobre culturas celulares de glioma das linhagens C6 (rato) e U87 (humana), caracterizando o possível mecanismo dessa ação. Os resultados demonstraram que as lectinas DrfL I e ConBr (30 e 50 ?g/mL) diminuem a viabilidade (avaliada pelo ensaio de MTT) e induzem alterações morfológicas (avaliada por microscopia de luz e de fluorescência) sobre células da linhagem C6. As lectinas também demonstraram a capacidade de inibir a migração celular e sobrevivência clonogênica, especialmente na concentração mais elevada (50 ?g/mL). Além disso, ConBr e DrfL I causaram indução significativa do processo de autofagia na linhagem C6, avaliado através da coloração com laranja de acridina (LA). Notavelmente, a ação das lectinas foi dependente da integridade de sua estrutura terciária/quaternária, bem como do domínio de interação com carboidratos (CRD), considerando que a desnaturação térmica e o bloqueio do CRD (com ?-metil-manosídeo), respectivamente, levaram a perda da atividade das lectinas. Quando avaliada a ação de DrfL I e ConBr sobre a linhagem U87 (humana) foi observado que apenas DrfL I apresentou atividade citotóxica sobre esta linhagem, sendo sua ação similar ao observado sobre as células da linhagem C6. Dessa forma, nosso estudo sugere um potencial antitumoral para a lectina DrfL I, considerando sua ação sobre a linhagem de glioma U87, que deverá ser avaliada com mais profundidade em futuros estudos. Abstract : Gliomas represent 50-80 % of the primary brain tumors and it is one of the most challenging types of neoplasia for therapy. Glioblastoma multiform (GBM) is the most aggressive type of glioma, with unfavorable prognosis and average survival of patients approximately 12 months. Taken in account a limited therapy available, new bioactive molecules have been investigated. Lectins are proteins that bind glycans on cell surface displaying a diversity of biological activities. The capability of plant lectins to induce selective tumoral cell death has been reported, since the tumoral cells may express modifications in the glycosilation pattern. Taken these paradigms, the present work aimed to investigate the citotoxicity of the lectins purified from Dioclea reflexa (DrfL I) and Canavalia brasiliensis (ConBr) seeds against gliomas lineages C6 (rat) and U87 (human), characterizing a possible mechanism for this action. The results showed that DrfL I and ConBr lectins (30 and 50 ?g/mL) decreased cell viability (measured by MTT assay) and induced morphological changes (assessed by optic and fluorescence microscopy) on C6 cells. The lectins also induced inhibition of cell migration and clonogenic survival, especially at highest concentration of 50 ?g/mL. Moreover, both ConBr and DrfL I were able to induce autophagy of C6 cells, as evaluated by acridin orange stain. Noteworthy, the lectin actions were dependent of terceary/quaternary structure and carbohydrate recognition domain (CRD) since both, thermal denaturation as well as CRD blockage (by ?-methyl-manoside), respectively, impaired the lectin activity. The action of DrfL I and ConBr on the U87 lineage (human) was also evaluated. However, only DrfL I demonstrated activity against this lineage, which was very similar that observed against C6 cells lineage. In conclusion, our study suggests an antitumor potential for DrfL I lectin, considering its activity against U87 gliomas lineage. Moreover, future studies will be necessary in order to ascertain the DrfL I mechanisms using in vitro and in vivo models of gliomas.

Gliomas são o tipo de neoplasia intracraniana mais comum e agressiva. Acometem pacientes por volta dos 65 anos de idade. Histopatologicamente, os gliomas podem ser classificados em graus I, II, III e IV. A partir da elucidação das mutações IDH 1 e 2 em 2009, pode-se observar o aumento da sobrevida em pacientes com IDH-mutado em relação aos pacientes com IDH-selvagem. A espectroscopia de próton por ressonância magnética viabiliza o diagnóstico de gliomas IDH-mutados, influenciando na proposta terapêutica. O tratamento considerado como padrão-ouro consiste na radioterapia pós-cirúrgica em associação com a temozolomida.

Por serem tumores prim?rios localizados no sistema nervoso central, os gliomas apresentam altas taxas de mortalidade com sobrevida m?dia de dois anos. Menos de 5% dos pacientes com gliomas sobrevivem mais de cinco anos ap?s o diagn?stico, mesmo com os tratamentos mais avan?ados, os quais envolvem cirurgia, radia??o e quimioterapia. Os tumores resultam de diferentes defeitos em vias de sinaliza??o intracelulares, incluindo a via p38/MAPK. Entre as respostas celulares mediadas pela fam?lia de p38/MAPK, destaca-se a regula??o da produ??o do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF). O objetivo deste trabalho foi investigar os efeitos de ML3403, um inibidor da p38/MAPK, sobre a viabilidade das c?lulas de glioma, e avaliar o seu efeito combinado com bevacizumab (BVZ). O BVZ, j? utilizado na cl?nica como adjuvante no tratamento de gliomas, ? um anticorpo monoclonal contra o receptor de VEGF-Ae reduz a sinaliza??o envolvida no processo de angiog?nese tumoral. As c?lulas de gliomas U138MG e U251MG foram tratadas com ML3403 (0,1 a 200?M) e BVZ (1 a 200 ?g/mL)e avaliadas para viabilidade celular, atrav?s do m?todo do MTT e prolifera??o celular, atrav?s da contagem do n?mero de c?lulas. Os resultados obtidos demonstraram redu??o da viabilidade e prolifera??o celular ap?s o tratamento com ML3403. O co-tratamento com BVZ n?o apresentou efeito aditivo. A utiliza??o de inibidores da via de sinaliza??o p38/MAPK pode ser considerada como um tratamento promissor na diminui??o do crescimento de gliomas. Gliomas are primary tumors of the central nervous system that are associated with a high mortality rate; they course with an average survival rate of 2 years after the diagnosis. Less than 5 % of glioma patients survive more than five years after diagnosis, even those treated with state of the art protocols, which include surgery, radiotherapy and chemotherapy. Tumors result from impairments of intracellular signaling pathways, including the p38/MAPK pathway, which, are responsible to control of cell proliferation and tumorigenesis, among other cellular responses. The goal of the present work was to investigate the effects of ML3403, an inhibitor of p38/MAPK, on the viability and proliferation of glioma cells, and to assess its effect when combined with bevacizumab (BVZ). BVZ already used in the clinical setting as anadjuvant for treating gliomas. It is a monoclonal antibody against VEGF-A receptor and thus reduces the signaling involved in tumor angiogenesis. U138 and U251 glioma cells were treated with ML3403 (0.1 to 200 ?M) and BVZ (1 to 200 ?g/mL) and later assessedfor cell viability, by MTT method and proliferation by cell counting. The results demonstrate that treatment with ML3403 reduces glioma cell viability and proliferation. Co-treatment with BVZ does not present any significant effect. The use of p38/MAPK inhibitors may constitute an interesting treatment against glioma progression.

Os gliomas representam a classe mais comum de tumores malignos do sistema nervoso central, sendo o tumor cerebral mais agressivo e letal entre os tumores cerebrais prim?rios. Dentre os tratamentos, a radia??o ? uma das terapias mais utilizadas, por?m a radiorresist?ncia intr?nseca destes tumores continua a ser um problema cr?tico na gest?o de destes pacientes. Atualmente, sabe-se que o efeito da radia??o se estende al?m da citotoxicidade direta causada nas c?lulas tumorais. A radioterapia parece induzir uma morte celular imunog?nica, que entre as caracter?sticas est? a libera??o de ATP. O ATP pode causar citotoxicidade atrav?s do receptor P2X7 e tamb?m atua como um sinal de dano celular ativando o sistema imune. O ATP pode ser hidrolisado por enzimas do sistema purin?rgico, dentre elas a ectonucleotidase CD39/NTPDase1, ? adenosina, que tem um efeito aposto ao ATP, causando imunossupress?o. A secre??o de ATP induzida pela radioterapia e a capacidade deste nucleot?deo em modular a resposta imune, levantou a hip?tese da participa??o da sinaliza??o purin?rgica na resposta de c?lulas tumorais ? radia??o e na resposta imune induzida pela radioterapia. Portanto, neste estudo visou-se investigar: i) o papel da ectonucleotidase CD39/NTPDase1 na resposta imune induzida pela radioterapia em gliomas, ii) a import?ncia da via ATP-receptor P2X7 na resposta de gliomas ? radioterapia. Atrav?s de camundongos knockout para a enzima CD39/NTPDase1, observamos que a dele??o desta enzima combinada com a radioterapia reduziu significativamente as c?lulas imunossupressoras Tregs no tumor e no ba?o, atenuou a infiltra??o de c?lulas mieloides supressoras causada pela radia??o, e aumentou a express?o de CCR7 em c?lulas dentr?ticas e macr?fagos localizados no ba?o, indicando a presen?a c?lulas apresentadoras de ant?geno rec?mmobilizadas e dispon?veis para se diferenciarem em c?lulas imunes efetoras que sustentam uma resposta imune mais prolongada mediada por c?lulas T ant?geno espec?ficas. Deste modo, mostrou-se que o bloqueio da atividade da CD39/NTPDase1 pode controlar mecanismos imunossupressores gerados pelo tumor e promete melhorar a resposta ? radioterapia. Al?m disso, neste estudo observou-se que a radioterapia ativa o receptor P2X7 e atrav?s do silenciamento deste receptor na linhagem de glioma GL261, demonstramos que a radioterapia foi pouco eficiente in vivo, quando comparado com camundongos injetados com a GL261 WT, que expressa constitutivamente o receptor P2X7. Tamb?m demonstramos que pacientes com glioma que expressaram mais o receptor P2X7, apresentaram uma melhor resposta a radioterapia, revelando a import?ncia da express?o deste receptor em c?lulas de glioma como um marcador ?til para analisar a sensibilidade tumoral ? radioterapia e para uma resposta bem-sucedida ? radioterapia. Em suma, nossos dados lan?am luz sobre a sinaliza??o purin?rgica para a modula??o da resposta ? radioterapia em gliomas. Gliomas represent the most common class of malignant tumors of the central nervous system being the most aggressive, and lethal brain tumors in primary brain tumors. Among the treatments, radiation is one of the most used therapies, but the intrinsic radioresistance of these tumors remains a critical problem in the management of these patients. Currently it is known that the effect of radiation extends beyond the directly cytotoxicity caused in tumor cells. Radiation therapy appears to induce an immunogenic cell death that among the features is ATP release. The ATP can cause cytotoxicity via P2X7 receptor and also acts as a sign of damage activating the immune system. The ATP can be hydrolyzed by enzymes of the purinergic system, among them the ectonucleotidase CD39, to adenosine, which has an opposite effect to ATP, causing immunosuppression. The radiation-induced ATP release and the ability of this nucleotide in modulate immune responses raised the hypothesis about the purinergic signaling participation in the tumor and immune cells response to radiation. Therefore, this study investigated: i) the role of ectonucleotidase CD39/NTPDase1 in the radiation-induced immune response in gliomas, ii) the importance of ATP-P2X7 receptor in the gliomas response to radiotherapy. Using knockout mice for CD39/NTPDase1, we observed that the deletion of this enzyme combined with radiotherapy significantly reduced the immunosuppressive cells Tregs in the tumor and spleen, attenuated the infiltration of myeloid derived suppressor cells caused by radiation and increased CCR7 expression in splenic dendritic cells and macrophages, indicating the presence of freshly mobilized antigen presenting cells available to differentiate in immune-effector cells that sustain a more prolonged antigen-specific T-cell?mediated immune response. Thereby, showing that blocking the activity of CD39/NTPDase1 can control immunosuppressive mechanisms generated by the tumor and promises to improve the radiotherapy response. Furthermore, in this study we observed that radiation actives the P2X7 receptor and by silencing this receptor on the GL261 glioma cell line, we have shown that radiotherapy is less efficient in vivo when compared with mice injected with GL261 WT cells, which constitutively express the P2X7 receptor. We also showed that patients with glioma that overexpress the P2X7 receptor, showed a better response to radiotherapy, revealing the importance of the expression of this receptor on glioma cells as a useful marker to analyze the tumor sensitivity to radiation and a successful radiotherapy response. In summary, our data shed light on the purinergic signaling for modulating the radiotherapy response in gliomas. Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2016. Gliomas, tumores originados de células gliais (astrócitos, oligodendrócito ou epêndima), são os tumores cerebrais primários mais comuns. Lectinas são proteínas de reconhecimento e ligação específicos a carboidratos. O objetivo do presente trabalho foi analisar o possível efeito citotóxico das lectinas ConA, ConBr, ConM, CoxyL, ConGF, DSL (nativa e recombinante), DwL, DvioL, DmrL, DLL, DrfL e CTL, que são extraidas de plantas leguminosas, sobre células C6 de glioma de rato, um glioma com características astrocitárias. Após 24h de incubação com as respectivas lectinas e nas concentrações de 10, 30, 50 e 100µg/mL, foi observado que apenas a lectina CTL não provocou redução da viabilidade, avaliada através do teste de redução do MTT. Baseado na potência de ação citotóxica observada nesse screening as lectinas ConA, ConBr, DvioL e DSL recombinante foram escolhidas para realizar o mesmo teste do MTT, porém também nos tempos 1, 3, 6 e 12 horas, sendo então selecionadas as lectinas ConA e Dviol para investigação das possíveis vias de morte celular envolvidas. Dessa forma, através de ensaios de microscopia de fluorescência, citometria de fluxo e microscopia eletrônica conclui-se que o principal mecanismo responsável pelo efeito citotóxico de ConA e DvioL é a indução de morte celular autofágica, efeito obtido a partir das concentrações de 30µg/mL. Ao realizar ensaios com as lectinas desnaturadas, concluiu-se que o efeito biológico depende da estrutura terciária da lectina, porém, mais estudos sobre a importância do sítio de reconhecimento a carboidratos devem ser realizados, uma vez que os ensaios de bloqueio do sítio de ligação ao açúcar não mostraram claramente uma ação bloqueadora do efeito citotóxico de ConA e DvioL. Os resultados também mostraram que DvioL possui maior potência em relação a ConA na indução de morte autofágica. Este trabalho sugere DvioL com uma molécula com potencial para fututros estudos de terapia anti-tumoral. Abstract : Gliomas, tumors originating from glial cells (astrocytes, oligodendrocytes or ependymal) are the most common primary brain tumors. Lectins are proteins of specific recognition and binding to carbohydrates. The aim of this study was to analyze the possible cytotoxic effect of the lectins ConA, ConBr, ConM, CoxyL, ConGF, DSL (native and recombinant), DWL, DvioL, DmrL, DLL, DrfL and CTL, which are extracted from leguminous plants, on C6 rat glioma cells, which have astrocytes features. After 24 hours of incubation with the respective lectins and at concentrations of 10, 30, 50 and 100µg/mL, it was observed that only the CTL lectin did not cause reduction in viability as measured by MTT test. Based on the potency of cytotoxic activity observed in this screening, ConA, ConBr, DvioL and DSL recombinant lectins were chosen for the same MTT test after 1, 3, 6 and 12 hours incubation, and then ConA and Dviol lectins were selected for further investigation concerning the possible cell death pathways involved. Thus, by fluorescence microscopy, flow cytometry and electron microscopy assays, it was concluded that the main mechanism responsible for the cytotoxic effect of ConA and DvioL is the induction of autophagic cell death, the effect obtained from the concentration of 30µg/mL. When performing tests with denatured lectins, it was concluded that the biological effect depends on the tertiary structure of the lectin. However, further studies regarding the role of the carbohydrate recognition domain (CRD) deserve to be conducted, since the CRD blocking protocol did not completely abrogated the cytotoxic action of ConA and DvioL. The results also showed that DvioL have greater potency compared to the ConA to induce autophagic death. This study suggests DvioL as a potential molecule to undertake future studies for anti-tumor therapy.

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-17. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:14Z : No. of bitstreams: 1 000851655.pdf: 1706170 bytes, checksum: 990d3d441221c8d5284639c96fcf57c8 (MD5) Os tumores cerebrais primários mais comuns são denominados gliomas. Eles são definidos patologicamente pela presença de características histológicas e imuno-histoquímicas que evidenciam diferenciação glial. De acordo com a suposta linhagem de origem, eles são classificados como astrocitomas, oligodendrogliomas ou ependimomas. Dentre eles, os astrocitomas são os mais comuns e agressivos. O tratamento atualmente utilizado inclui remoção cirúrgica seguida de quimioterapia com temozolamida (TMZ) e radioterapia, porém sua eficácia é muito baixa devido à alta resistência das células tumorais. Buscando encontrar genes associados com a elevada resistência dos astrocitomas, realizamos um estudo anterior de expressão gênica diferencial utilizando uma coleção de genes de reparo de DNA. Nesta análise foram identificados sete genes significantemente superexpressos em glioblastoma multiforme (GBM), o tipo mais agressivo de astrocitoma. Estes genes são: APEX1, BRCA2, BRIP1, EXO1, NEIL3, RAD54L e XRCC2. Através de RT-PCR quantitativo, avaliamos os níveis de expressão destes genes em um painel expandido de 54 casos clínicos de astrocitomas de diferentes graus de malignidade e em 5 linhagens celulares de GBM. Todos os genes analisados mostraram-se mais expressos nos astrocitomas, com exceção de RAD54L em amostras de astrocitoma de grau II. Além disso, a superexpressão dos 7 genes avaliada isoladamente não exerce influência direta na sobrevida dos pacientes. Evidenciou-se ainda a superexpressão mais acentuada de EXO1 e NEIL3, que foram selecionados para realização de ensaios funcionais de silenciamento, e avaliação do ciclo celular e taxas de apoptose/morte efetiva das células. Estes ensaios foram realizados com as linhagens celulares T98G e U138MG, que apresentaram maiores níveis de expressão destes genes. Nos ensaios funcionais, observamos que o silenciamento... Gliomas are the most common type of primary brain cancers. They are pathologically defined by the presence of histological and immunehistochemical characteristics that evidence glial differentiation. According to the hypothetical cell of origin they are classified in: astrocytomas, oligodendrogliomas and ependimomas. Among them, astrocytomas are the more common and aggressive type. The treatment currently used for GBM includes surgical resection of tumor followed by chemotherapy with temozolamide (TMZ) and radiotherapy, but this protocol is still insufficient due to the high resistance of cancer cells. Searching for repair genes associated with the high resistance of astrocytomas, we developed a previous study of differential gene expression using a collection of DNA repair genes. In this analysis, we identified seven genes significantly overexpressed in glioblastoma multiforme (GBM), namely: APEX1, BRCA2, BRIP1, EXO1, NEIL3, RAD54L and XRCC2. Using quantitative RT-PCR, we evaluated the expression of these genes in an expanded panel of samples with 54 clinical cases of different grade astrocytomas and five GBM cell lines. All genes showed expression significantly higher in astrocytomas, except RAD54L in grade II astrocytomas. Moreover, the overexpression of this 7 genes evaluated individually doesn't exert direct influence upon patient's survival rate. Remarkably, EXO1 and NEIL3 showed the higher fold changes and were chosen for functional silencing assays. This experiments were performed with T98G and U138MG cell lines that showed the higher expression levels among the GBM cell lines analyzed. In the functional assays, we observed that the silencing of EXO1 or NEIL3 doesn't induce changes in the apoptosis and cell death rates and doesn't change the distribution of cells in cycle. Beyond this, the silencing of this two genes doesn't sentisizes cells to ionizing radiation.

Submitted by Simone Maisonave (simonemaisonave@hotmail.com) on 2020-06-25T23:46:55Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Elita_Silveira.pdf: 2314979 bytes, checksum: 98bfd4b7be3a2deeae3fc594c3468340 (MD5) Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2020-06-29T12:43:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_Elita_Silveira.pdf: 2314979 bytes, checksum: 98bfd4b7be3a2deeae3fc594c3468340 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2020-06-29T12:43:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_Elita_Silveira.pdf: 2314979 bytes, checksum: 98bfd4b7be3a2deeae3fc594c3468340 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2013-04-03 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Os gliomas são considerados os tumores cerebrais primários mais comuns e devastadores do sistema nervoso central devido a sua rápida progressão e seus elevados índices de recorrência. Além disso, a barreira hematoencefálica limita a entrada de quimioterápicos no SNC, de modo que apenas fármacos altamente lipofílicos possam ser utilizados. A utilização de formulações de nanocápsulas de cetoprofeno torna-se uma estratégia promissora para uma nova modalidade terapêutica devido á sua alta lipofilicidade e sua ação anti-inflamatória, que possivelmente controla a superexpressão da enzima ciclo-oxigenase-2 que está associada à gliomas clinicamente mais agressivos e controlam a modulação das células imunes no microambiente inflamatório. Assim o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do cetoprofeno em formulação de nanocápsulas sobre a proliferação in vitro e in vivo de gliomas. Primeiramente foi avaliado o efeito antiproliferativo das formulações de cetoprofeno em nanocápsulas em linhagens de glioma de rato C6, de glioma humano U138MG e U251MG. O experimento demonstrou uma redução na progressão e viabilidade celular e a ocorrência de morte celular via processo de necrose. As formulações de cetoprofeno em nanocápsulas foram seletivas para as células tumorais como evidenciado pela ausência de toxicidade sobre culturas primárias de astrócitos de ratos. A seguir foi investigado o efeito das formulações de cetoprofeno em nanocápsulas in vivo, onde através do modelo de implante de glioma e posterior análise histológica verificamos que as mesmas possivelmente foram capazes de vetorizar o cetoprofeno ao cérebro, reduzindo o volume do tumor e suas características de malignidade. O tratamento com cetoprofeno em nanocápsulas evitou o declínio da atividade locomotora dos animais implantados com glioma, parâmetro que foi avaliado pelo teste do campo aberto e que está relacionado a uma maior sobrevida dos pacientes. A avaliação da atividade nucleotidásica em linfócitos revelou que o tratamento com cetoprofeno, tanto na forma livre como nanoencapsulada, aumentou a hidrólise de ATP e ADP, enquanto que a atividade da adenosina deaminase diminuiu. As alterações na atividade das ectonucleotidases sugerem um acúmulo de adenosina, molécula imunossupressora, que pode estar envolvida na diminuição da ativação dos linfócitos, controlando o processo inflamatório pró-tumoral. As formulações de cetoprofeno em nanocápsulas também não causaram dano sistêmico como verificado através da análise das enzimas sorológicas ALT, AST e dos níveis de creatinina e uréia, as quais são marcadores de dano hepático e renal. Nossos resultados sugerem que o cetoprofeno em formulação de nanocápsula pode ter uma função importante no controle da proliferação tumoral, podendo contribuir no tratamento adjuvante de gliomas. Gliomas are the most common and devastating primary brain tumors characterized by rapid progression and high recurrence rate. Moreover, the blood-brain barrier (BBB) limits the delivery of chemotherapeutic the CNS, restricting the glioma therapy. The use of nanocapsules formulations of ketoprofen become a promising tool for a new therapeutic modality to glioma treatment. Nanocapsules have been shown to cross the BBB and the ketoprofen, a well known COX inhibitor, may be an interesting alternative to glioma treatment, since the inflammatory environment and the COX-2 overexpression are associated to increased tumor malignity. Therefore the aim of this study was to evaluate the effect of ketoprofen in nanocapsules on the in vitro and in vivo glioma proliferation. We first evaluated the antiproliferative effect of ketoprofen innanocapsules in rat (C6) and human (U138MG, U251MG) glioma cell lines. Indeed, ketoprofen in nanocapsules reduced the glioma cell viability and increased the PI incorporation, an indicative of cell death by necrosis. The cell death induced by ketoprofen in nanocapsules was selective for tumor cells as evidenced by the lack of toxicity on primary cultures of rat astrocytes. Next, the antitumor effect of ketoprofen in nanocapsules was evaluated in the in vivo rat glioma model. The histological analysis revealed that ketoprofen in nanocapsules reduced the glioma size as well as the characteristics of tumor malignity. As evaluated by the open field paradigm, the ketoprofen in nanocapsules treatment promoted an improvement of the locomotion activity of animals, which is related to increased survival of patients. In addition, ketoprofen free and in nanocapsules increased the ATPase and ADPase activity in lymphocytes, while the adenosine deaminase activity was decreased. The alterations on extracellular nucleotide metabolism by lymphocytes may be related to an increase of the immunessupressive, which can control the lymphocyte activation reducing the process of cancer-related inflammation.The formulations of ketoprofen in nanocapsules also did not cause systemic damage as verified through analysis of ALT, AST, creatinine and urea, markers of hepatic and nefrotoxicity. Our results suggest that the formulation of ketoprofen in nanocapsules can play an important role in controlling the proliferation tumor, contributing in the adjuvant treatment of gliomas.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-graduação em Neurociências, Florianópolis, 2013. Gliomas malignos constituem um grupo heterogêneo de tumores, com origem em precursores astrocíticos, abrangendo cerca de 70% de todos os tumores do Sistema Nervoso Central (SNC). Mesmos havendo diversos estudos relacionados e tratamentos, os prognósticos dos pacientes acometidos por esses tumores permanecem ruins. Dentre os tratamentos utilizados o quimioterápico cisplatina (CDDP) é um agente alquilante com atividade antineoplásica. Apesar do amplo espectro de atividade no tratamento de câncer, muitos mecanismos de resistência a essa droga já foram relatados. Gliomas exibem diversos mecanismos de resistência à quimioterapia, além disso, apresentam uma importante alteração no sistema glutamatérgico própria de seu desenvolvimento, que confere resistência, auxiliando na invasibilidade e agressividade tumoral. Assim, objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da CDDP sobre o sistema glutamatérgico e mecanismos de resistência em células de glioma humano A172, bem como em culturas primárias de astrócitos corticais de ratos neonatos. CDDP nas concentrações entre 500 e 1000 µM apresenta efeito citotóxico em células de glioma humano. No entanto, astrócitos corticais primários foram mais sensíveis à exposição a CDDP, aprensentando diminuição da viabilidade em menores concentrações (50 e 100 µM). CDDP 100 µM diminuiu a captação de glutamato tanto em células de glioma A172 quanto em astrócitos corticais, entretanto a CDDP 50 µM apresentou esse efeito apenas nas células de glioma A172. CDDP (50 e 100 µM) aumentou a liberação de glutamato tanto na linhagem de glioma humano quanto nos astrócitos corticais. Em se tratando de transportadores de glutamato, foram observados os níveis de expressão do EAAT-2 em células A172 tratadas com CDDP, sendo que as concentrações que alteraram o transporte não modificaram os níveis de expressão desse transportador. A implicação do trocador cistina-glutamato (sistema Xc-) no aumento da liberação de glutamato em gliomas já é bem descrita, entretanto CDDP (50 e 100 µM) não alterou seus níveis de expressão em células de glioma. CDDP não foi modificou os níveis totais de glutationa, entretanto o inibidor do sistema Xc- (sulfassalazina) causou evidente diminuição desses níveis, demonstrando a implicação da atividade do sistema Xc- nas defesas antioxidantes de células de glioma. A inibição do sistema Xc- preveniu o aumento da liberação de glutamato causado pela CDDP. E o tratamento concomitante com CDDP e sulfassalazina não alterou a viabilidade em células de glioma, sugerindo que a resistência à CDDP apresentada por estas células nas concentrações testadas, ocorre por um mecanismo diferente que a produção de glutationa. Esses resultados apontam que a CDDP pode aumentar o potencial invasivo e agressivo de células de glioma humano A172, elevando níveis extracelulares de glutamato através da modulação da atividade de transportadores glutamatérgicos.

Submitted by Boris INFORMAT (boris@uerj.br) on 2021-04-26T01:16:20Z No. of bitstreams: 1 Aline Oliveira da Silva Dissertacao completa.pdf: 1706550 bytes, checksum: 83fcc2ad6997f27155cbcfc15a3ea0fc (MD5) Made available in DSpace on 2021-04-26T01:16:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aline Oliveira da Silva Dissertacao completa.pdf: 1706550 bytes, checksum: 83fcc2ad6997f27155cbcfc15a3ea0fc (MD5) Previous issue date: 2012-02-08 Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico The extracellular matrix (ECM) modulates both strong cell adhesion by inducing junctional complexes - and intermediate states of adhesion, where cells can differentiate, migrate and proliferate, depending on the signaling pathways activated by adhesion receptors. Tenascin-C is a matricellular protein widely secreted by glioma cells. It has a significant anti-adhesive activity and is involved in proliferation and tumor angiogenesis. Alves et al., 2011 observed that endothelial cells seeded on ECM of the U373 adhere less and are deficient in the ability to form tubes when compared with those plated on ECM of the HUVECs. This phenotype was reproducible with substrates for TN-C/FN mimetic of native tumor matrix composition. We also investigated whether the blockage of different domains of TN-C in glioma-derived matrix could revert this poor angiogenic phenotype. Pre-treatment of glioma-derived matrix with antibodies against FNIII-type 1-3 repeats, FNIII-type 4-5 repeats and the EGF-like N-terminal domain of TN-C partially rescued endothelial cell ability to form tubes. PKC-alpha activation has been previously implicated in the induction of tubulogenesis in Matrigel. By western blotting, we observed an increase in the phosphorylation of a threonin 638 - a possible inhibitory site PKC alpha protein - and in the threonine 505 of PKC delta leading to its inactivation - in tubulogenesis-defective endothelial cells previously incubated with ECM of gliomas. The antagonistic effect of these isoforms of PKC was demonstrated when we used selective inhibitors and activators of the PKCs. When HUVECs were incubated with ECM U373 MG in the presence of PMA, they rescued their ability to form tubes; pre-treatment of HUVECs with inhibitor of PKC δ (rottlerin) also partially rescued the tubulogenic ability of these cells. However, pre-treatment of HUVECs were seeded on the HUVEC ECM (which form tubes normally) with an inhibitor of PKC α (RO320432) led to impairment of tubulogenesis. Moreover, this matrix also induces activation of ERK and AKT. Our data suggest a role for TN-C-induced aberrant vascular phenotypes often observed in malignant gliomas can have the possible contribution of PKC-alpha inhibition, as well as of ERK and Akt activation, in endothelial cells exposed to tumor ECM. A matriz extracelular (MEC) é capaz de modular a adesão celular, induzindo processos de sinalização celular. No estado de aderência intermediária, induzido por proteínas matricelulares, as células tendem a se diferenciar, migrar e proliferar. A tenascina-C é uma proteína matricelular amplamente secretada em gliomas que está envolvida na proliferação e angiogênese tumoral. A MEC de gliomas, possui elevada incorporação de tenascina-C (TN-C), uma glicoproteína matricelular desadesiva que compete com a glicoproteína adesiva fibronectina (FN), desestabilizando os contatos focais e induzindo proliferação celular em gliomas. Neste trabalho nós nos propusemos a investigar o papel da TN-C tumoral no fenótipo angiogênico de células endoteliais. Recentemente em um trabalho publicado pelo nosso grupo observamos que as células endoteliais semeadas sobre matrizes de glioma (U373 MG) aderem menos e são deficientes na capacidade de formar tubos quando comparadas com àquelas plaqueadas sobre MEC de HUVECs. No entanto, neste trabalho, reproduzimos este fenótipo semeando as células endoteliais em suportes de TN-C /FN miméticos da composição da matriz tumoral nativa. Por western blotting, observamos um aumento na fosforilação em treonina 638 da proteína PKCα, um possível sítio inibitório, e um aumento na ativação de PKCδ. O efeito antagônico na regulação dessas isoformas de PKC foi demonstrado quando usamos inibidores seletivos de PKC α e δ e um ativador de PKCα (PMA). Observamos que quando tratamos as HUVECs plaqueadas sobre MEC de U373 com PMA, resgatamos a capacidade dessas células de formar tubos, o pré-tratamento dessas HUVECs com inibidor de PKC δ (rotlerina) resgatou parcialmente a capacidade tubulogênica dessas células. O pré-tratamento das HUVECs que foram semeadas sobre MEC da HUVEC (que formam tubos normalmente) com um inibidor de PKC α (RO320432) levou a diminuição da capacidade tubulogênica. Além disso, esta matriz também induz ativação de ERK e AKT. Investigamos também se o bloqueio dos diferentes domínios da TN-C na matriz derivada de glioma poderia, de alguma forma, reverter o defeito angiogênico das células, propiciado pela interação com a matriz extracelular de gliomas. O pré-tratamento da matriz extracelular de glioma com anticorpos anti-TN-C (contra os domínios FNIII 1-3, 4-5 FNIII e N-terminal) resgatou parcialmente a capacidade das células endoteliais de formar tubos. Nossos dados sugerem que a indução do fenótipo vascular observado em muitos gliomas, com predomínio de vasos mal formados e sub-funcionais, pode ser parcialmente devido ao comprometido da sinalização mediada por PKCs em células endoteliais, bem como do aumento da ativação das vias de ERK e Akt.

O glioblastoma multiforme (GBM) é um tipo de tumor bastante agressivo, que apresenta uma elevada taxa de proliferação e um comportamento altamente invasivo. A ecto-5’-nucleotidase (e5NT/CD73) é uma enzima expressa de forma bastante ampla, a qual age na hidrólise do AMP extracelular, com consequente formação de adenosina, molécula com diversas funções celulares. Além da função enzimática, foi mostrado que a e5NT/CD73 também exerce importante papel na interação célula-célula e célula-matriz. Muitas evidências apontam para funções de promoção tumoral desempenhados pela e5NT/CD73, a qual se apresenta expressa em altos níveis em diferentes tumores. No presente estudo caracterizamos o papel desempenhado pela e5NT/CD73 no crescimento de GBM in vitro e in vivo através do silenciamento de sua expressão e atividade em células de glioma de rato C6. A e5NT/CD73 foi silenciada por RNA de interferência estável através de lentivírus e o silenciamento foi caracterizado por métodos de imunofluorescência e atividade enzimática. Além disso, investigamos parâmetros de malignidade in vitro, como adesão e migração celular. Para uma melhor análise do papel da proteína no crescimento tumoral, implantamos as células C6 silenciadas em um modelo de glioma em ratos. Análises patológicas e imunohistoquímicas usando o marcador nestina foram realizados. Foram obtidos dois clones silenciados de forma estável, C6-c54 e C6-c56, os quais tiveram uma significativa redução na expressão e atividade da e5NT/CD73. Foi observada uma significativa alteração no parâmetro de adesão in vitro de ambos clones silenciados, e esse efeito deve-se provavelmente à função de adesão exercida pela proteína e não da sua atividade enzimática, uma vez que o uso do inibidor APCP não foi capaz de diminuir a capacidade de adesão das células wt. Além disso, o implante das células silenciadas não foi capaz de gerar uma massa tumoral in vivo, o que foi confirmado posteriormente por análise imunohistoquímica. Não obstante, todos tumores C6 wt cresceram com todas características histopatológicas de GBM. O crescimento dos tumores C6 não foi bloqueado pela co-injeção com o inibidor enzimático APCP. Desse modo, nossos resultados corroboram outros dados da literatura que indicam um papel crucial da sinalização purinérgica na progressão de GBM. Estudos complementares são necessários para o estabelecimento de novas e mais eficazes terapias contra esses tumores, utilizando a e5NT/CD73 como alvo. Glioblastoma (GBM) is a very aggressive tumor that presents a high proliferative and invasive behavior. Ecto-5’-nucleotidase (e5NT/CD73) is a widely expressed enzyme that hydrolyses extracellular AMP, producing adenosine, an important molecule in several cell functions. Besides that, e5NT/CD73 has been shown to exert an important role in cell-cell and cell-matrix interactions. Several evidences suggest that e5NT/CD73 has tumor-promotion functions, being upregulated in several tumors. In this study we aimed to better characterize the role of e5NT/CD73 in glioma progression by silencing its expression in a rat C6 glioma cells and analyzing the in vitro and in vivo growth of GBM. Knockdown (KD) of e5NT/CD73 was obtained through stable RNA interference mediated by lentivirus and KD cells were analyzed through immunofluorescence and activity methods such as HPLC and malaquite-green. We also assessed parameters of malignancy in vitro, such as cell adhesion and migration. For a deeper investigation, we implanted KD C6 cells in rat striatum and performed pathological and immunohistochemical analyses to assess tumor size and malignancy. Two stable e5NT/CD73 KD clones of C6 glioma cells were obtained, named C6-c54 and C6- c56, and these clones presented a large reduction in expression and AMPase activity of e5NT/CD73. A significant alteration in adhesion parameter of silenced cells was observed in vitro possibly due to the loss of the adherence function of e5NT/CD73 per se. In addition, e5NT/CD73 KD cells were not able to develop a tumor mass in the striatum of rats, which was confirmed by immunohistochemistry analyses, whereas all rats injected with C6 wt cells developed tumors with all histopathological features of GBM. Tumor growth of C6 wt cells was not blocked by the co-injection with the enzymatic inhibitor APCP. Taken together these results reinforce the crucial involvement of purinergic signaling in the GBM progression. Further studies are necessary to establish new and powerful therapies against these tumors using e5NT/CD73 as target.

Orientador: Liana Maria Cardoso Verinaud, Roger Chammas Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Gliomas são tumores primários do sistema nervoso central e o glioblastoma multiforme é sua forma clínica mais comum e de pior prognóstico. Na tentativa de entender sua biologia, a linhagem NG97 foi estabelecida, demonstrando características de glioblastoma com atipia nuclear e elevadas taxas de mitose. Recentemente, descobriu-se que esta é uma linhagem híbrida humano-murina derivada da fusão de células de astrocitoma humano e estroma murino que provavelmente ocorreu no processo de estabelecimento desta linhagem, a qual foi posteriormente denominada NG97ht. Esta linhagem apresenta crescimento de massas tumorais quando inoculada em camundongos imunodeficientes, demonstrando características histopatológicas de pseudopaliçada, comuns a glioblastomas. Estas são regiões hipercelulares que margeiam ambientes necróticos e postula-se que sejam células migrantes de ambientes necróticos/hipóxicos. Além disso, estas áreas têm como característica a expressão de moléculas relacionadas à adaptação a hipóxia, como o fator induzido por hipóxia (HIF), atuando na sobrevivência celular pela indução de diferentes genes. É visto que em hipóxia há aumento da produção de galectina-3, a qual está envolvida em diversos processos celulares e que é somente expressa nestas regiões de pseudopaliçada, não sendo detectada em suas áreas tumorais adjacentes. A galectina-3 é uma lectina que possui ligação a beta-galactosídeos e se relaciona com o aumento da mobilidade, adesão, crescimento e progressão tumoral. Além disso, estudos indicam que em alguns tipos tumorais, a metilação do promotor de galectina-3 é responsável pela modulação de sua expressão. Nossos resultados apresentados neste trabalho demonstraram que a hipóxia é capaz de modular positivamente a expressão de galectina-3, tanto em câmara de hipóxia quanto em cloreto cobaltoso, composto químico capaz de mimetizar a hipóxia, apresentando aumento de expressão de galectina-3 em meio completo ou privado de soro fetal bovino, mimetizando ambientes necróticos com pouco oxigênio e nutrientes. Além disso, foi demonstrado que a regulação da expressão gênica de galectina-3 in vitro e in vivo não é realizada pela metilação de seu promotor. Ensaios utilizando a técnica de interferência por RNA demonstraram que o knockdown de galectina-3, em situação in vitro com privação de oxigênio e nutrientes, induziu aumento das taxas de morte celular. Estes dados podem indicar também que a galectina-3 protege as células tumorais dentro de ambientes necróticos em glioblastomas, criando as áreas de pseudopaliçada. Em conclusão, estes experimentos demonstram as propriedades da galectina-3 de proteção contra a morte em privação de oxigênio e nutrientes, comuns dentro de tumores, destacando sua importância como alvo para agentes anti-neoplásicos. Abstract: Gliomas are primary Central Nervous System tumors. Among them, glioblastomas are the most common clinical forms and have the worst prognosis. In an attempt to understand glioma biology, the NG97 cell line was established. This cell line presents glioblastoma's characteristics, showing nuclear atipia and high growth rate. Recently, it was discovered that this is a human-murine hybrid cell line derived from the fusion between human astrocytoma and murine stroma cells that likely occurred in the process of cell line establishment. The cell line was therefore renamed NG97ht. This cell line grows as tumors in immunodeficient mice displaying histopathological characteristics of pseudopalisades commonly seen in glioblastomas. These areas are comprised by hypercellular regions in the edge of necrotic environments and are possibly constituted by actively migrating cells out of necrotic/hypoxic environments. Besides, these pseudopalisades show the expression of molecules related to adaptation to oxygen deprivation, like Hypoxia Inducible Factor (HIF), which is involved in cell survival through the induction of many genes. Also, it has been shown that under hypoxia, galectin-3 production is stimulated, a protein involved in diverse cellular processes and that is only present in these pseudopalisades in glioblastomas, not being detected in its adjacent areas. Galectin-3 is a lectin that binds to beta-galactosides and is related to increased motility, adhesion, tumor growth and progression. Also, studies describe that galectin-3 expression is related to its promoter methylation degree in some tumor types. Our results presented here demonstrated that assays performed in hypoxic chamber and in a chemical condition mimicking hypoxia (incubation with cobaltous chloride) showed galectin-3 induction in either complete medium or deprived of fetal bovine serum, mimicking tumor's necrotic areas deprived of oxygen and nutrients. Besides, it was demonstrated that galectin-3 modulation in vitro and in vivo is not due to promoter methylation. Tests related to galectin-3 knockdown in oxygen and nutrient deprivation demonstrated that this protein has a key role in protection against cell death. It is possible that these results may indicate that galectin-3 can also protect tumor cells inside glioblastoma's necrotic areas, acting as a survival factor in disadvantageous environments with low concentrations of oxygen and nutrients. In conclusion, these experiments demonstrate galectin-3 properties related to protection against cell death in environments deprived of oxygen and nutrients, commonly found inside tumors, highlighting its importance as a target to antineoplastic agents. Mestrado Imunologia Mestre em Genética e Biologia Molecular

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências. Efeito do Chumbo na modulação de proteínas da família das MAPKs, Akt, Hsp27 e Hsp70 em cultura de células de glioma C6 de rato, bem como análise comparativa da viabilidade de linhagem tumoral C6, U373 e cultura primária de astrócitos frente à exposição a este metal.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências. Neste estudo foi avaliado o efeito da derrota social sobre a progressão tumoral de células de glioma C6 inoculadas no cérebro de ratos. Os animais foram divididos em 4 grupos: inoculados com salina (grupo S, controle), inoculados com glioma C6 (grupo I), inoculados com glioma e depois submetidos a dupla derrota social (grupo I/D) e derrotados e depois inoculados com glioma (grupo D/I). Após 15 dias da inoculação, os animais foram avaliados quanto à progressão tumoral, sobrevivência, atividade motora (teste de campo aberto) e parâmetros imunológicos (níveis séricos de IgG contra glioma C6 e contagem sanguínea de linfócitos, granulócitos e monócitos). A progressão tumoral nos grupos inoculado e depois derrotado (I/D) e derrotado e depois inoculado (D/I) aumentou 69% e 41%, respectivamente, em relação ao grupo inoculado (I); o grupo I/D apresentou uma progressão tumoral 19% maior do que o grupo D/I. A atividade motora dos animais dos grupos I/D e D/I foi reduzida em 52% e 26%, respectivamente. Os animais I/D e D/I sofreram uma redução da sobrevivência de 34% e de 16%, respectivamente, quando comparados ao grupo I. Os níveis séricos de IgG contra glioma C6 foram aumentados nos animais inoculados com glioma (grupos I, I/D e D/I); entretanto no grupo I/D este aumento foi menor. No grupo I/D também mostrou uma redução no número de linfócitos e de granulócitos. Em conclusão, os resultados indicaram que a derrota social em ratos aumentou a progressão tumoral de glioma e reduziu a sobrevivência e alguns parâmetros da resposta imune dos animais observadas no modelo experimental proposto.

Orientador: Luiz Fernando Bleggi Torres Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Clínica Cirúrgica. Defesa: Curitiba, 1998 Inclui bibliografia Resumo: Estudo de 9 casos de Glioma do Nervo Ótico (GNO) detectados no Banco de Patologia Tumoral do Sistema Nervoso Central da População da Cidade de Curitiba Foram analisados aspectos clínicos, hlstol6gicos e imuno-histoquímicos na tentativa de se obter fatores prognósticos para as referidas lesões. Oito pacientes eram do sexo feminino e apenas 1 do sexo masculino, com idades variando entre 1 e 25 anos ( media de 8,67 anos) Três pacientes eram portadores de neurofibromatose. As manifestações clinicas mais frequentes foram diminuição da faculdade visual, atrofia de papila óptica uni ou bilateral e proptose ocular. A lesão se restringia ao nervo óptico em 3 casos e a ambos os nervos em 1 caso, havia infiltração do quiasma ótico em 5 casos. Todos os pacientes foram operados, sendo realizada biópsia da lesão em 1 caso, ressecção total em 2 casos e ressecção parcial em 6 casos Dois pacientes foram submetidos a tratamento radioterápico e outros 2 a tratamento quimioterápico Apenas 1 paciente evoluiu com óbito, no pós-operatório; os demais permanecem vivos, com doença estável em 6 casos e sem doença nos 2 casos em que a ressecção total foi possível. Em todos os casos o diagnostico anatomopatológico foi de astroclima pilocitico. A avaliação histológica revelou baixa celularidade (com variação entre 1273 e 3820 células neoplásicas/mm2 ), matriz pilocitica com moderada a intensa cistificação, discreta proliferação vascular, ausência de mitoses e rara anaplasia nuclear. O índice proliferativo obtido por imunocoloração variou entre zero e 27,1% para o PCNA e entre zero e 0,7% para o Ki-67; esse com 3 resultados inconclusivos devido a problemas técnicos A analise estatística, Ilimitada pelas condições da amostra, revelou existirem moderadas correlações entre as variáveis localização da lesão, celularidade e Índice proliferativo pelo PCNA. A correlação entre localização da lesão e celularidade foi considerada discretamente significativa ( p = 0,0617). Não foi possível qualquer Inferência estatística sobre os outros parâmetros clínicos, histológicos e imuno- histoquímicos Abstract: Nine cases of OptiC Nerve Glioma detected at the Bank of Central Nervous System Tumors of Curitiba were studied. The clinical, histological and Immunohistochemical aspects were analysed In order to identify prognostic factors Eight patients were female and only 1 one was male, With ages ranging from 1 to 25 years ( mean' 8,67 years) There was association with neurofibromatosIs In 3 cases The most frequent clinical signs were visual loss, uni or bilateral optiC atrophy and proptosIs The lesion was confined to the OptiC nerve in 3 cases and to both nerves In 1 case; there was infiltration of the optic chiasm In 5 cases. All patients underwent surgical procedures, which varied from single biOpsy In 1 case to total resection In 2 cases; partial resection was performed In 6 cases. Two patients were treated With radiotherapy and 2 others with chemotherapy Death occured in only 1 case, at the post-operative period; 6 patients have stable leSions, and the both patients In whom total resection was possible are dIsease-free The pathological diagnosis was pilocytlc astrocytoma In all cases. The histological evaluation showed low cellularity ( countlngs varying from 1273 to 3820 neoplastic cells/mm2 ), pilocytic matnx With moderate to Intense cystrficatlon, mild vascular proliferation, absence of mitOSISand rare nuclear anaplasia The PCNA labeling Index vaned from zero to 27,1% The KI-67 labeling index ranged from zero to 0,7%, With 3 Inconclusive results due to technical problems IX The statistical analysIs, restncted by the sample's dimension, revealed moderate correlations among the variables. site of the lesion, cellulanty and PCNA labeling Index. The correlation between site of the leSion and cellularity was estimated as discreetly significant ( p = 0,0617) No other statistical inference could be made about clinical, histological or Immunohistochemical parameters