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Indústrias de diversos tipos necessitam que suas plantas estejam localizadas geograficamente em pontos distantes das sedes que controlam as suas operações administrativas. Como exemplo, industrias de base, como mineração, óleo & gás e de energia, que transformam matéria prima bruta para utilização em outros processos, comumente costumam ter suas instalações próximas às fontes primárias, impondo assim a necessidade de implantar uma estratégia de monitoramento de forma remota. Concentrar dados para tomada de decisões como modificar o comportamento de controladores à distância, é desejável, mas demanda operação robusta e segura. Nesse sentido, a chamada Indústria 4.0 tem, entre seus desafios, o desenvolvimento de sistemas de controle em rede, que possibilitam o monitoramento e manutenção remotos. Desta forma, acessar dados obtidos remotamente possibilita comparação com dados de outras plantas semelhantes, o que auxilia e agiliza tomadas de decisões. Este trabalho apresenta uma solução de interligação remota entre uma rede de dispositivos de automação industrial e um operador remoto, de forma segura e confiável, através do uso de uma rede virtual privada na Internet. Além disso, a análise da latência fim-a-fim é realizada, em tempo real, através de estratégias de coleta dos tempos em cada segmento do trajeto entre os dispositivos da rede de automação industrial e host remoto. Os dados coletados são tratados estatisticamente. Por fim, através do acesso remoto, o envio de comandos à rede de dispositivos de automação industrial abre horizontes para exercer supervisão e controle remoto de plantas industriais, e este é apresentado ao final do trabalho como complemento. Os resultados obtidos permitem concluir que é viável a utilização de acesso remoto através de redes privadas seguras cuja a latência interna é maior que o intervalo de latência medido, através da ferramenta produzida neste trabalho, na localização onde é realizado o acesso remoto. Many types of industries require their plants to be located geographically far from the headquarters that control their administrative operations. For example, basic industries such as mining, oil & gas, and energy, which transform raw materials for use in other processes, often have their facilities close to primary sources, thus imposing the need to implement a remote monitoring strategy. Concentrating data for decision making, such as modifying the behavior of remote controllers, is desirable, but requires robust and safe operation. In this sense, Industry 4.0 has, among its challenges, the development of networked control systems that enable remote monitoring and maintenance. Thus, accessing data obtained remotely enables comparison with data from other similar plants, which helps and speeds up decision-making. This work presents a remote interconnection solution between a WirelessHart device network and a remote operator, in a safe and reliable way, through the use of a virtual private network on the Internet. In addition, an end-toend latency analysis is performed, in real time, through strategies of collecting the times in each path between the WirelessHart devices and the remote host. The collected data is statistically treated. Finally, through remote access, sending commands to the WirelessHart device network opens horizons for supervision and remote control of industrial plants is presented at the end of the work. The results obtained allow us to conclude that it is feasible to use remote access through secure private networks whose internal latency is greater than the measured latency interval, through the tool produced in this work, in the location where the remote access is performed.

En Argentina, la suspensión de clases en todos los niveles educativos se estableció el 16 de marzo por 14 días, luego fue extendida por el decreto presidencial que estableció el Aislamiento Social Preventivo y Obligatorio (ASPO) como medida sanitaria frente a la expansión del COVID-19, y continua en todo el país, salvo algunos departamentos de ciertas provincias donde se han generado experiencias de retorno a las aulas. De ese modo, todas las instituciones escolares se cerraron para el dictado de clases y pasaron a “modalidad de educación virtual/a distancia”. En este artículo, daremos cuenta de algunos de los impactos más importantes que esta modalidad ha tenido en la educación intercultural de los pueblos indígenas de Chaco y Misiones (noreste argentino) con los que trabajamos. Para ello, fue necesario resignificar nuestros modos habituales de vinculación para que, aun cumpliendo con el ASPO, podamos registrar la situación educativa de estos pueblos, por lo que continuamos el contacto con algunos de sus referentes comunitarios a través de WhatsApp, dialogando sobre los desafíos e interrogantes que se han abierto en este contexto.

Dissertação de Mestrado em Direito: Especialidade em Ciências Juridico-Forenses apresentada à Faculdade de Direito O seguinte estudo tem como finalidade analisar a problemática da fundamentação da sentença arbitral. Ou seja, explorar o porquê de tantos pedidos de anulação de sentença arbitral no ordenamento jurídico português. Nesse sentido, estudaremos o que é a arbitragem em geral, de onde este meio alternativo de resolução de litígios surgiu, o que é necessário para compor um tribunal arbitral, as características, direitos e deveres de uma pessoa para estar apta a ser árbitro de um processo, os prazos, recursos, dentre outros elementos.Diante de toda essa análise, estaremos capacitados para destrinchar alguns acórdãos de Tribunais da Relação de Portugal que contém a problemática de que tratamos no presente estudo. Analisando caso a caso, conseguiremos entender de onde vem esse impasse em relação a fundamentação da sentença arbitral, e ainda, assimilaremos como a jurisprudência portuguesa têm lidado com o assunto.Nesse sentido, dentro do direito comparado, ainda iremos explorar outros ordenamentos jurídicos, como do Brasil, Espanha, França e Inglaterra, com o propósito de entendermos como esse tema é tratada nesses países e quais as soluções dadas em cada sistema; levando em consideração se tratar de três países do mesmo continente e de um país de continente diverso, mas sendo certo de que os cinco países em questão (incluindo Portugal) são totalmente diferentes seja em questão cultural, econômica, linguística ou territorial. Por fim, após toda essa discussão, tentaremos obter uma solução para o problema, atendendo a tudo o que está previsto na Lei de Arbitragem Voluntária, no Código de Processo Civil e na Constituição da República Portuguesa, e nos atentando também para o entendimento da doutrina e da jurisprudência. The purpose of this study is to analyze the problem of the justification of the arbitration award. This means, to explore the reason for so many requests for annulment of an arbitration award in the Portuguese legal system.In this sense, we are going to study what is arbitration in general, where this alternative means of dispute resolution arose, what is necessary to compose an arbitral tribunal, the characteristics, rights and duties of a person to be able to be an arbitrator of a process, deadlines, resources, among other elements.In the face of all this analysis, we will be able to unravel some judgments of Courts of Relation of Portugal that contains the problematic that we deal with in the present study. Analyzing case by case, we will be able to understand where this impasse comes in relation to the justification of the arbitration award, and still, we will assimilate how the Portuguese jurisprudence have dealt with the subject.In this sense, within comparative law, we are going to explore other legal systems, such as Brazil, Spain, France and England, to understand how this issue is treated in these countries and what solutions are given in each system; taking into account the three countries of the same continent and a country of a different continent, but it is certain that the five countries in question (including Portugal) are totally different in cultural, economic, linguistic or territorial terms.Finally, after all this discussion, we are going to try to find a solution to the problem, considering everything that is provided for in the Voluntary Arbitration Law, the Code of Civil Procedure and the Constitution of the Portuguese Republic, and also attempting to understand the doctrine and case law.

This study had as objective evaluates the process of teaching learning of a discipline of the area of health presented in the education modality at the distance using the strategy on teaching line. The methodology of used evaluation was of qualitative study, theoretical type and analyze of the students' perceptions with relationship to the existence in the process. The data were collected through an instrument with closed subjects that meditate used by UnB. The results of the study detach contributions with relationship to the planning, execution and evaluation of the lived process, highlighting as progresses the methodological innovation for the process of teaching, of the amplification of offers to the different courses of this university and of the pioneirismo in the offer of disciplines with this learning strategy.

Para superar as adversidades e manter as qualidades únicas dos parques nacionais, surgiu a idéia do planejamento para o manejo e, conseqüentemente, os planos de manejo. Atualmente, o planejamento já é um meio consolidado para auxiliar na implementação dos parques brasileiros e várias unidades contam com algum tipo de plano. A função dos planos é a de amparar as decisões dos administradores para que compreendam o contexto da área e as alternativas de manejo, seguindo prioridades e rumos específicos. Porém, na literatura há várias críticas aos planos e muitos deles parecem não cumprir o papel para o qual são elaborados. Neste contexto, avaliou-se a qualidade da informação contida em planos de manejo e documentos correlatos de oito parques nacionais quanto a sua aplicação prática, na busca de um aperfeiçoamento dos processos de planejamento. Foram selecionados oito parques nacionais e diferentes tipos de planos foram avaliados, desde os mais antigos, produzidos pelo IBDF na década de 80, até os mais atuais, totalizando 14 planos. Este trabalho se sustenta basicamente em entrevistas realizadas com os funcionários das unidades, totalizando a participação de 47 pessoas. De acordo com as entrevistas realizadas, os planos não são usados como deveriam, seu uso é aleatório, não há um acompanhamento da execução das propostas e o grau de execução das atividades previstas é baixo para todos os documentos. Boa parte das informações descritivas contidas nos planos é diferente daquelas que os técnicos atestam precisar, sendo difícil visualizar até um aproveitamento das informações obtidas nas recomendações dos planos. O zoneamento e os objetivos do manejo, que são partes comuns dos planos, são confusos quanto a sua aplicação prática. As propostas dos planos, freqüentemente estruturadas por temas ou programas (proteção, áreas degradadas, entorno, por exemplo), também são incompletas em termos de informação ou, até, contraditórias e indesejáveis. Pelo conjunto de resultados obtidos, nota-se desvios claros nos processos de planejamento e, mais ainda, que vários princípios básicos discutidos na literatura são ignorados. Uma das causas centrais dessa situação deve ser a contratação integral do planejamento, que é realizado por empresas de consultoria, culminando em propostas dissociadas das possibilidades institucionais, entre outros problemas. Conclui-se, assim, que os planos não são efetivos em relação ao papel que deveriam cumprir e não estão ajustados à conjuntura para a qual foram preparados. Na realidade, os documentos ou seu uso não implicam rumos específicos para os parques, sendo necessário rever para que se prepara um plano de manejo e o que se espera do planejamento de unidades de conservação, pois o planejamento, tal qual ocorre, não se justifica.

PONTIFÍCIA UNIVERSIDADE CATÓLICA DO RIO DE JANEIRO Neste trabalho, estendemos o método de simulaão de objetos deformáveis de Muller et al. (2005) para simular fraturas. Em Muller et al., os vértices da superfície do objeto são tratados como partículas, sujeitas a forças externas ao objeto e a uma forçainterna de restituição, que tenta restaurar a forma do objeto através de uma técnica de casamento de forma. Esse método permite-nos simular efeitos como alongamento e flexão de forma estável e, por ser geometricamente motivado, é ideal para situações que não exijam realismo físico, como a área de animação e jogos. Muller et al. propõem uma forma de simulação composta, onde objetos deformáveis podem funcionar como uma composição de agrupamentos de vértices de sua superfície: esses agrupamentos agem como objetos deformáveis em si. Nossas contribuições concentram-se na variação deste modelo. Propomos utilizar o método de Attene et al. (2006) de segmentação hierárquica de superfícies para determinar de forma automática agrupamentos que sejam partes naturais do objeto. Criamos também uma técnica para determinar de forma suave a influência dos agrupamentos em cada vértice, levando em consideração aspectos globais e locais do objeto. Por fim, estabelecemos o algoritmo para a detecção de fraturas entre os agrupamentos e a execução da ruptura correspondente. Utilizamos um conjunto de objetos para provar que nosso método é capaz de simular fraturas naturalmente, podendo ser usado tanto em sistemas os quais exijam resultado mais simples, contudo em tempo real, quanto em sistemas que necessitam de fraturas apresentando maior riqueza de detalhes. In this work, we extend the simulation method for deformable objects proposed by Muller et al. (2005) so as to be able to simulate fracturing. In Muller et al., the object surface vertices are handled such as particles in a particle system: moved by external forces and by internal restitution forces, which try to restore the original object form using a shape matching technique. This method allow us to simulate stretching and twisting effects in a stable manner, and, because it is geometrically motivated, it is ideal to situations which does not demand physical realism, as in games and animation. Muller et al. propose in their work a composed simulation mode, in which deformable objects work like a composition of clusters of its surface vertices: these clusters behave like deformable objects on their own. Our contributions focus on a variation of this model. We propose the hierarchical vertex surface segmentation method from Attene et al. (2006) as an automatic way of determining clusters which are natural parts of the object. We also created a technique to smoothly calculate the influence of the clusters in each vertex, considering global and local aspects of the object. Finally, we established an algorithm which detects fractures between vertex clusters and which breaks the object surface accordingly. We employed a set of 3D objects to demonstrate that our method is capable of naturally simulating fractures, for systems which demand simpler, real-time results, as well as for systems which need richer and more detailed fractures.

Texto memorialista da escritora e editora Esther Hecht. Planting a forest of genealogical trees - A memorialistic text by the writer and editor Esther Hecht.

ResumenEn este artículo se revisan las implicancias y los efectos que han tenido las políticas educativas destinadas a las poblaciones indígenas en Argentina. De este modo, se puede contextualizar el sentido y el objetivo político de la escolarización cuando se diseña para un particular destinatario: los niños indígenas. Específicamente, en este artículo se analizan las modificaciones que ha atravesado dicha política siguiendo un recorrido histórico según dos etapas: las políticas homogeneizadoras en educación indígena (siglo XIX y XX) y las políticas focalizadas (siglo XX - hasta la actualidad). Las primeras conllevaron marginación, negación, ocultamiento y sometimiento de las especificidades lingüístico-culturales aborígenes bajo un modelo hegemónico. Las otras, si bien permiten cuestionar a nivel pedagógico, cognitivo y lingüístico los modelos educativos asimilacionistas; quedaron reducidas a programas compensatorios que en ocasiones terminan por ser funcionales al encubrimiento de las desigualdades socioeducativas en el actual contexto de políticas neoliberales. Palabras clave: Pueblos indígenas; Políticas educativas homogeneizadoras; Políticas educativas focalizadas ResumoEm este artigo revisam-se as conseqüências e os efeitos que tem tido as políticas educativas destinadas às populações indígenas na Argentina. Deste modo, pode-se contextualizar o sentido e o objetivo político da escolarização quando se desenha para um particular destinatário: as crianças indígenas. Específicamente, neste artigo analizam-se, as modificações que tem atravessado dita política seguindo um percurso histórico segundo duas etapas: as políticas homogeneizadoras em educação indígena (século XIX e XX) y as políticas focalizadas (século XX - até a atualidade). As primeiras ocasionaram marginação, negação, ocultamento e submetimento das especificidades lingüístico-culturais aborígenes baixo um modelo hegemônico. As outras, si bem permitem questionar a nível pedagógico, cognitivo e lingüístico os modelos educativos assimilacionistas; ficaram reduzidas a programas compensatórios que em ocasiões acabam sendo funcionais ao encubrimento das desigualdades sócio-educativas no atual contexto de políticas neoliberais. Palavras-chave: Povos indígenas; Políticas educativas homogeneizadoras; Políticas educativas focalizadas

Este estudo teve como objetivo avaliar o processo de ensino aprendizagem de uma disciplina da área de saúde ofertada na modalidade de educação à distância utilizando a estratégia on line de ensino. A metodologia de avaliação utilizada foi de estudo qualitativo, tipo teórico e analise das percepções dos alunos quanto à vivência no processo. Os dados foram coletados através de um instrumento com questões fechadas que contemplam utilizados pela UnB. Os resultados do estudo destacam contribuições quanto ao planejamento, execução e avaliação do processo vivenciado, destacando como avanços a inovação metodológica para o processo de ensinar, da ampliação de ofertas aos diferentes cursos desta universidade e do pioneirismo na oferta de disciplinas com esta estratégia de aprendizagem. _____________________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT This study had as objective evaluates the process of teaching learning of a discipline of the area of health presented in the education modality at the distance using the strategy on teaching line. The methodology of used evaluation was of qualitative study, theoretical type and analyze of the students' perceptions with relationship to the existence in the process. The data were collected through an instrument with closed subjects that meditate used by UnB. The results of the study detach contributions with relationship to the planning, execution and evaluation of the lived process, highlighting as progresses the methodological innovation for the process of teaching, of the amplification of offers to the different courses of this university and of the pioneirismo in the offer of disciplines with this learning strategy. _______________________________________________________________________________________________________________ RESUMEN Este estudio tuvo como objetivo evaluar el proceso de enseñanza/aprendizaje de una disciplina del área de salud ofrecida en la modalidad de educación a distancia que usa la estrategia on line de instrucción. La metodología de evaluación usada fué de estudio cualitativo, tipo teórico y análisis de las percepciones de los estudiantes con relación a la vivencia en el proceso. Los datos fueron reunidos através de un instrumento con asuntos cerrados usados por la UnB. Los resultados del estudio destacan las contribuciones con relación a la planificación, ejecución y evaluación del proceso vivenciado, resaltando como progresos la innovación metodológica para el proceso de enseñar, de la ampliación de ofertas a los diferentes cursos de esta universidad y del pioneirismo en la oferta de disciplinas con esta estrategia de aprendizaje.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. Neste estudo, nós confirmamos e estendemos o conhecimento sobre a transferência de minicírculos de kDNA de Trypanosoma cruzi para o genoma humano. Foram analisadas cinco famílias cujos parentais (G0) eram portadores da doença de Chagas. Foi possível observar a integração de kDNA de T. cruzi no genoma de todos os chagásicos estudados. Concomitantemente, investigamos a transferência gênica vertical (TGV) das seqüências integradas de kDNA para as progênies G1 e G2. A TGV foi identificada em 45% dos descendentes de chagásicos. As análises das regiões do genoma humano que flanqueavam as seqüências de kDNA mostraram a integração de minicírculos de kDNA preferencialmente em retrotransposons LINE (71% dos clones). As integrações foram identificadas também em retroelementos não-autonônomos (12%), em ilha CpG (1%) e em alguns genes (4%). Nos demais clones (12%), não foi possível determinar os loci de integração do kDNA no genoma. A análise da estrutura do kDNA integrado revelou duas seqüências consensos de minicírculos que são inseridas mais freqüentemente que as outras, sugerindo que suas características estruturais possam favorecer o processo de integração. Acreditamos que micro-homologias ricas em AC, presentes nos minicírculos do T. cruzi e no genoma humano, podem mediar a integração do kDNA por recombinação homóloga. Os nossos achados sugerem remodelagem do genoma hospedeiro na região de justaposição das seqüências de minicírculos de kDNA no genoma humano. As análises in silico sugerem que o fenômeno descrito aqui pode resultar no surgimento de novas proteínas ou na alteração de expressão de genes pré-existentes. O real significado de tais mutações não fica restrito à Doença de Chagas, mas, sim, estende-se ao longo do processo da evolução, onde a fixação dessas mutações ajudaria a impulsionar um fluxo genético introdutor de complexidade crescente às espécies. In this study we showed the transference of Trypanosoma cruzi kDNA minicircle sequences into the human genome. All founders (G0) of five families having the chronic T. cruzi infections had the kDNA integrated into retrotransposable elements. Additionally, we demonstrated the vertical gene transfer (VGT) of those kDNA mutations to their G1 e G2 progenies. Indeed, VGT was demonstrated in 45% of Chagas patients’ descendents. The analyses of the juxtaposition regions of the kDNA to the human genome revealed that the minicircle sequences integrate preferentially into retrotransposable LINE in 71% of those mutations. These mutations were also present in non-authonomous retroelements (12%), CpG island (1%) and putatively in some genes (4%). The remaining mutations (12%) were present in undetermined loci in some chromosomes. The structure of the kDNA integrated into the host genome revealed main consensus types I and II sequences, which were found in the integration sites in high ratio then other minicircles integrated in defined loci. It appears that some particular feature in those consensus sequences favor their insertion in those loci. We believe that AC-rich micro-homologies present in the T. cruzi kDNA minicircles and in the human genome could mediate the parasite DNA integration by homologous recombination mechanism. Our findings suggest that host DNA shuffling and recombination may occur at the integration site. It appears that the phenomenon of kDNA integration may alter pre-existing genes expression or they may generate chimera proteins. The true meanings of those mutations appear not to be limited to Chagas disease. We understand that the observed genetic drift of 55% of the kDNA mutation in the progeny may help to propel a robust genetic flux possibly associated with genome growth and increasing complexity of species. We propose that the fixation of those mutations appear to influence the evolution process.

O Desenvolvimento de Software Orientado a Aspectos (AOSD) vem se consolidando como uma forma de resolver vários problemas das técnicas convencionais de programação, em particular em sistemas onde diversos interesses se encontram entrelaçados. A popularização dessa tecnologia faz surgir a necessidade de metodologias e ferramentas que facilitem o seu uso, como refatorações que levem em consideração suas características. No entanto as técnicas de modelagem de software disponíveis para AOSD não tem amadurecido no mesmo passo que as de implementação. Assim, para se poder pensar em mecanismos automáticos que trabalhem com a separação de interesses, é preciso verificar se as técnicas de modelagem existentes comportam isso. Este trabalho propõe uma adaptação da abordagem Theme de modelagem, para que ela permita uma representação mais fiel de sistemas que utilizam orientação a aspectos, em especial os que utilizam a linguagem AspectJ. Essa técnica proposta é utilizada para demonstrar algumas maneiras de detectar bad smells em sistemas orientados a aspectos. Também é mostrado como essa modelagem pode ser usada como base para a geração automática de código orientado a aspectos, e como pode ser feita a engenharia reversa de código existente de forma que ele possa ser analisado em forma de modelo. Aspect‐Oriented Software Development (AOSD) is increasingly being considered a way to solve several problems in conventional programming methods, particularly in systems with crosscutting concerns. The popularization of this technology brings the need for methodologies and tools to ease its use, such as refactorings that take into account its characteristics. However modeling techniques available for AOSD are not maturing at the same rate as implementation techniques. Thus, in order to be able to devise automatic mechanisms that deal with separation of concerns, it is first necessary to verify if existing modeling techniques support that. In this work, we propose an adaptation of the Theme modeling approach, so that it represents aspect‐oriented systems more closely, especially those using the AspectJ language. This technique is used to demonstrate a few ways of detecting bad smells in aspect‐oriented systems. It is also shown how this model can be used as a basis for the automatic generation of aspectoriented code, and how existing code can be reverse‐engineered so that its model can be analyzed.

Submitted by Vandeilson Soares Neri (vandeilson.neri@stj.jus.br) on 2009-09-23T18:19:26Z No. of bitstreams: 1 responsabilidade_civil_dano_ambiental.pdf: 621802 bytes, checksum: 0085360753c08930b5a0ecd1a84ca57d (MD5) Approved for entry into archive by Arlan Morais de Lima(arlan.lima@stj.jus.br) on 2009-09-25T17:34:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 responsabilidade_civil_dano_ambiental.pdf: 621802 bytes, checksum: 0085360753c08930b5a0ecd1a84ca57d (MD5) Made available in DSpace on 2009-09-25T17:34:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 responsabilidade_civil_dano_ambiental.pdf: 621802 bytes, checksum: 0085360753c08930b5a0ecd1a84ca57d (MD5) Previous issue date: 2005-06 Apresenta um apanhado teórico que vai desde o surgimento da responsabilidade civil no âmbito privado, até as consequências da responsabilidade civil por dano ambiental, analisando e identificando os contornos da última.

JUNG (C. G.) e KERENYI (C.). Introduction to a science of Mythology. The Myth of the divine child and the Mysteries of Eleusis. London, Routledge Kegan Paul, 289 pags.. (Primeiro Paragrafo do Artigo) No que toca a este livro, devo adiantar, ao leitor que nao se destina a responder as perguntas sem conta que se fazem acerca de minucias mitologicas.

A doença de Chagas (DC), infecção tropical causada pelo parasita Trypanosoma cruzi (T. cruzi), afeta de 6 a 8 milhões de pessoas no mundo. Ainda não existe um tratamento adequado para a doença na sua forma avançada e a causa para síndrome chagásica severa não está muito bem estabelecida. Acredita-se que fenômenos de transferência lateral de minicírculos de kDNA (minikDNA) estejam envolvidos no desenvolvimento das manifestações clínicas e que vesículas extracelulares (VEs) de T. cruzi sejam o principal veículo de transferência dessas moléculas para o genoma da célula. Sabe-se que os minikDNA se integram preferencialmente em regiões de retroelemento LINE -1 e que sequências de minikDNA foram encontradas no genoma de células somáticas e de tecidos tais como o tecido cardíaco e do intestino. No entanto, ainda não foram descritos quais os tipos celulares mais permissivos à integração de minikDNA e quais os mecanismos envolvidos na dinâmica de integração dessas moléculas no genoma hospedeiro. Dessa forma, a análise de integração pelo método de quantificação de kDNA e nDNA por qPCR permitiu-nos verificar que diferentes linhagens celulares foram permissivas à integração de sequências de minikDNA, sendo as células HEK 293 e Caco 2 as mais permissivas. Verificamos também que VEs de T. cruzi contêm minikDNA na conformação de dupla fita. A infecção por T. cruzi em células HEK 293 aumentou a expressão de retroelemento LINE-1, principalmente às 72 horas pós-infecção. O uso de inibidores de transcriptase reversa inibiu a integração reforçando a hipótese de que os retroelementos LINE-1 têm um importante papel na integração do kDNA. Inibidores de vias de reparo, histona deacetilase (HDAC) e síntese de purina, também inibiram a integração do kDNA. Vale ressaltar que a expressão reduzida para os genes envolvidos nos mecanismos de checkpoint e vias de reparo no DNA, tais como p53, ATM, XP-A e XP-V, impediram a integração do kDNA. Assim, conclui-se que a integração do kDNA parece depender do pleno funcionamento da maquinaria de reparo do DNA. Desse modo, postulamos que a integridade das vias BER, NER, HR, NHEJ possa ter alguma relação com a permissividade à integração dos minicíruclos de kDNA, pois essas vias influenciam na atividade dos retroelementos. Chagas disease (CD), a tropical infection caused by the parasite Trypanosoma cruzi (T. cruzi), affects 6 to 8 million people worldwide. There is still no adequate treatment for the disease in its advanced form. Furtheremore, the cause for severe chagasic syndrome is not well established. It is believed that lateral transfer of minicircles of kDNA (minikDNA) are involved in the development of clinical manifestations and that T. cruzi extracellular vesicles (EVs) are the main vehicle for the transfer of these molecules to the cell genome. MinikDNAs preferentially integrate into LINE-1 retroelement regions and minikDNA sequences have been found in the genome of somatic cells and tissues such as heart and intestine. However, the most permissive cell types for minikDNA integration and the mechanisms involved in the dynamics of integration of these molecules into the host genome have not yet been described. Thus, the analysis of integration by the method of quantification of kDNA and nDNA by qPCR allowed us to identify different cell lines permissive to the integration of minikDNA sequences, with HEK 293 and Caco 2 cells being the most permissive. We also verified that T. cruzi EVs contain minikDNA in the double-stranded conformation. T. cruzi infection in HEK 293 cells increased LINE-1 retroelement expression, mainly at 72 hours post-infection. In addition, the use of reverse transcriptase inhibitors inhibited integration, reinforcing that LINE-1 retroelements play an important role in kDNA integration. Inhibitors of repair pathways, histone deacetylase (HDAC) and purine synthesis, also inhibited kDNA integration. It is worth mentioning that the reduced expression for genes involved in checkpointmechanisms and DNA repair pathways, such as p53, ATM, XP-A and XP-V, also prevented kDNA integration. Thus, the kDNA integration seems to depend on the perfect functioning of the DNA repair machinery. Thus, we postulate that the integrity of the BER, NER, HR, NHEJ pathways may have some relationship with the permissiveness to the integration of kDNA minicircles, as these pathways influence the activity of retroelements.

Tese (doutorado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2021. INTRODUÇÃO: O surto de COVID-19, causado pelo vírus SARS-CoV-2, se espalhou rapidamente pelo mundo, atingindo países que já enfrentavam outras endemias e epidemias. Foi oficialmente declarado como uma pandemia global em fevereiro de 2020, após um aumento inesperado na hospitalização e mortalidade. Diante dessa nova doença, o Brasil enfrentou situações preocupantes que impactaram na qualidade de vida de sua população devido ao distanciamento social e físico que surgiram como soluções para reduzir a transmissão do SARS- CoV-2. Ademais, a circulação de outros vírus, como o da dengue, também impactou os sistemas de saúde pública, visto que esta infecção é epidemiologicamente similar à infecção por COVID-19 e que apresenta características clínicas semelhantes ao vírus causador da COVID-19. OBJETIVO: Dessa forma, objetivamos analisar a qualidade de vida (QV) da população brasileira no período de isolamento durante a pandemia de COVID-19 a partir dos aspectos físicos, psicológicos, sociais e econômicos e a taxa de coinfecção entre SARS-CoV-2 / vírus dadengue em pacientes que deram entrada na emergência do Hospital Regional de Planaltina comsintomas de COVID-19. MÉTODOS: Para avaliar a qualidade de vida dos indivíduos, foi realizada pesquisa online, aplicada no período de 27 de maio a 14 de agosto de 2020. Para determinar a taxa de coinfecção dengue/SARS-CoV-2, avaliamos os testes molecular e sorológico para identificação das infecções no período de 20 de junho a 30 de julho de 2020. Também avaliamos se a infecção prévia ou ativa pelo vírus da dengue influenciou os parâmetros hematológicos, bioquímicos e clínicos, com a realização dos exames desses pacientes. RESULTADOS: Um total de 1859 pesquisas foram respondidas completamente. Nossos resultados indicam que os brasileiros foram mais afetados por aspectos econômicos e sociais do que psicológicos e físicos. Participantes desempregados eindivíduos com teste positivo para COVID-19 apresentaram a pior QV. As mulheres apresentaram piores escores de QV do que os homens, mas ter filhos não influenciou no escore. Maior escolaridade foi associada a melhor percepção de QV. O não seguimento das medidas de distanciamento social apresentou melhores escores no domínio psicológico do que aqueles que seguem regras restritas ou parciais de distanciamento social. Em relação a coinfecção, de um total de 178 pacientes com sintomas de COVID-19 internados em um grande hospital público do Distrito Federal do Brasil, cento e doze (63%) pacientes testaram positivo para COVID-19, dos quais 43 (38,4%) estavam coinfectados com o vírus da dengue e 50 (44,6%) apresentavam anticorpos indicativos de infecção prévia por dengue. Os pacientes coinfectados apresentaram menor número de linfócitos e monócitos circulantes, maiores taxas de glicose e pior condição pulmonar. As infecções anteriores com o vírus da dengue não influenciaram os parâmetros clínicos, mas a dengue ativa resultou em um aumento da taxa de hospitalização. CONCLUSÃO: Este estudo foi o primeiro a avaliar a QV de adultos no início da pandemia de COVID-19 no Brasil em nível nacional. Nossos dados podem ajudar as autoridades de saúde a identificar os principais fatores que afetam a QV da população brasileira, a fim de fornecer ferramentas para subsidiar políticas públicas e ações que possam auxiliar na promoção de bem-estar da população. Nossos dados também demonstram que a coinfecção entre SARS-CoV-2 eo vírus da dengue afeta um percentual importante de pacientes com COVID- 19, levando a piores parâmetros clínicos, exigindo maior atenção das autoridades de saúde. INTRODUCTION: The COVID-19 outbreak, caused by the SARS-CoV-2 virus, spread rapidly all over the world, reaching countries that were already facing other endemics and epidemics. It was officially declared a global pandemic in February 2020, following anunexpected increase in hospitalization and mortality. Faced with this new disease, Brazil experienced difficult situations that impacted the quality of life of its population due to the social and physical distance that emerged as solution to reduce the transmission of SARS-CoV-2. Furthermore, the circulation of other viruses, such as dengue, also impacted public health systems, as this infection is epidemiologically similar to the COVID-19 and that it has clinicalcharacteristics similar to the SARS-CoV-2 infection. OBJECTIVE: Thus, we aimed to analyzethe quality of life (QL) of the Brazilian population in the period of isolation during the COVID-19 pandemic from the physical, psychological, social and economic aspects and also evaluate the co-infection rate between SARS-CoV-2 / dengue virus in patients who were admitted to theemergency department of the Regional Hospital of Planaltina with symptoms of COVID-19. METHODS: To assess the quality of life of individuals, an online survey was carried out fromMay 27 to August 14, 2020. To determine the rate of dengue/SARS-CoV-2 coinfection, we evaluated the molecular and serological tests for identification of infections from June 20th to July 30th, 2020. We also assessed whether previous or active dengue virus infection influenced hematological, biochemical and clinical parameters, with the performance of these patients' exams. RESULTS: A total of 1859surveys were completed in full. Our results indicate that Brazilians were more affected by economic and social aspects than by psychological and physical ones. Unemployed participantsand individuals with a positive test for COVID-19 had the worst QoL. Women had worse QoLscores than men but having children did not influence the score. Higher education was associated with better perception of QoL. Failure to follow measures of social distancing had better scores in the psychological domain than those who follow strict or partial rules of social distancing. Regarding coinfection, from a total of 178 patients with symptoms of COVID-19 admitted to a large public hospital in the Federal District of Brazil, one hundred and twelve (63%) patients tested positive for COVID-19, of which 43 (38, 4%) were coinfected with the dengue virus and 50 (44.6%) had antibodies indicative of previous dengue infection. Coinfected patients had fewer circulating lymphocytes and monocytes, higher glucose levels and worse pulmonary condition. Previous infections with the dengue virus did not influence clinical parameters, but active dengue resulted in an increased rate of hospitalization. CONCLUSION:Our study was the first to assess the QoL of adults at the onset of the COVID-19 pandemic in Brazil in National level. Our data can help health authorities to identify the main factors that affect the QoL of the Brazilian population, in order to provide tools to support public policies and actions that can help promote the population's well-being. Our data also demonstrate that the co-infection between SARS-CoV- 2 and the dengue virus affects an important percentage ofpatients with COVID-19, leading to worse clinical parameters, requiring greater attention from health authorities.

Tese (doutorado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências Médicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2021. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). A doença de Chagas (DC) é uma doença tropical negligenciada transmitida por vetores causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi. A patologia é endêmica nas Américas, mas devido às migrações, a doença adquiriu importância global. A maioria dos indivíduos infectados permanece assintomática, entretanto, cerca de um terço dos pacientes progride para a fase crônica sintomática, que inclui sintomas digestivos e/ou cardíacos. Apesar do conhecimento atual, os mecanismos envolvidos na patogênese da DC ainda não estão totalmente elucidados. A hipótese integrativa permite avaliar como múltiplos mecanismos contribuem para a gênese dos sintomas presentes na DC. Assim, o objetivo do nosso estudo foi avaliar de forma integrativa a importância de fatores relacionados ao hospedeiro e o parasita em pacientes com diferentes sintomas da DC crônica. O estudo foi realizado com 176 pacientes, agrupados segundo o perfil clínico. A carga parasitária, os eventos de integração kDNA e a quantidade de LINE-1 foram avaliados por qPCR. A produção de anticorpos específicos contra o parasita e contra autoantígenos, cardíacos e intestinais, foram avaliadas por ELISA. A dosagem de citocinas foi realizada por citometria de fluxo. Nossos resultados confirmaram que a carga parasitária e o tratamento com o fármaco tripanocida durante a fase crônica não influenciam o perfil clínico dos pacientes. Da mesma forma, a análise de citocinas demonstrou a predominância do perfil pró-inflamatório nos grupos estudados. Ademais, todos os pacientes produziram anticorpos contra o parasita, e contra autoantígenos cardíacos e intestinais, independentemente dos sintomas. Tais achados sugerem que nenhum desses fatores influencia significativamente a patogênese da DC quando analisados de forma independente. No entanto, mediante as análises de correlação, foi possível detectar diferentes padrões de citocinas nos pacientes avaliados. Os indivíduos assintomáticos apresentaram uma produção mais equilibrada de citocinas pró e anti-inflamatórias. Além disso, o aumento dos níveis de IL-10 e IL-4 foram associados ao aumento da produção de anticorpos contra o T. cruzi e contra antígenos próprios, e o perfil de produção de anticorpos autoreativos diferiu entre os pacientes sintomáticos. Finalmente, os eventos de integração do KDNA não se correlacionaram com a gravidade dos sintomas, sugerindo que o sítio de integração deve ser o fator determinante. Dessa forma, nossos resultados fortalecem a hipótese de que processos patogênicos múltiplos influenciam o desenvolvimento das diferentes formas clínicas da CD, apoiando o uso de abordagens integrativas para criar uma assinatura clínica para pacientes crônicos com CD. Chagas disease (CD) is a vector-borne neglected tropical disease caused by the protozoan Trypanosoma cruzi. It is endemic in the Americas, but it has spread all over the world due to migrations. CD presents different clinical forms; following infection, while most individuals remain asymptomatic, about a third will progress to symptomatic chronic phase, which includes digestive and/or cardiac symptoms. Despite current knowledge, the mechanisms underlying the symptomatic forms of CD's are not fully elucidated. The integrative hypothesis proposes that multiple mechanisms contribute to the genesis of chronic, symptomatic CD. In the present study, we analyzed different host- and parasite-related factors to develop an integrative analysis to how they relate to the different manifestations of chronic CD. The study was conducted with 176 patients, grouped according to clinical profile. Parasite load, kDNA integration, and LINE-1 quantification were assessed by qPCR. Antibody reactivity against parasite-, cardiac- and intestinal-specific antigens were evaluated by ELISA. Cytokine production was measured by flow cytometry. Our data confirms that parasitic load and trypanocide treatment received during the chronic phase did not influence the patients' clinical profile. Similarly, cytokine analysis demonstrated a pro-inflammatory profile in all CD patients. All patients produced antibodies against the parasite, as well as cardiac and intestinal self-antigens, regardless of the symptoms. Such findings suggest that none of these factors significantly influence CD pathogenesis when taken independently. Nevertheless, using correlation analyses, we detected different cytokine patterns in the different clinical forms of CD, the asymptomatic patients presenting a more balanced production of pro- and anti-inflammatory cytokines. Furthermore, increased IL-10 and IL-4 levels were associated with the production of antibodies against parasite and host antigens, the profile of autoreactive antibody production differs among symptomatic patients. Finally, kDNA integration events failed to correlate with symptom severity, possibly suggesting that the site of integration may be a determining factor in this sense. Taken together, our results strengthen the notion that multiple pathogenic processes influence CD clinical forms, supporting the use of integrative approaches to create a clinical signature for chronic CD patients.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2020. A resposta ao dano no DNA (DDR) é essencial para a manutenção do bom funcionamento da célula. Esta resposta consiste na ativação de checkpoint do ciclo celular e o mecanismo de reparo de DNA. Diferentes vias de reparo são ativadas dependendo do tipo de lesão. A cisplatina é uma droga intercalante que provoca adutos no DNA e ligações interfitas. O peróxido de hidrogênio (H2O2) é um agente oxidante que, em concentrações suprafisiológicas, causa dano ao DNA e outras moléculas. Os principais danos causados pelo estresse oxidativo são modificações de base e quebra de fita de DNA. Existem evidências de que o Trypanosoma cruzi, protozoário causador da doença de Chagas, atue de diversas maneiras no metabolismo da célula hospedeira, incluindo o metabolismo de DNA. Neste trabalho, analisamos a influência de duas cepas de T. cruzi, Berenice (DTU TcII) e Colombiana (DTU TcI), na resposta ao dano de DNA em células L6, de miócitos de rato. As células receberam tratamentos em duas concentrações diferentes de cisplatina e H2O2 e tiveram diversos aspectos da sua biologia celular avaliados, como viabilidade, proliferação, morfologia, degradação de DNA e expressão de genes de reparo e de ciclo celular. Percebe-se que a célula reage ao dano de DNA de forma diferente dependendo da concentração do composto usado, seja cisplatina, seja H2O2. O tratamento com cisplatina mostrou que a cepa Berenice alterou a resposta ao dano, aumentando a intensidade de algumas vias de reparo (ex. MMR) e diminuindo a intensidade de resposta a quebras de dupla-fita (DSBs), o que provocou maior degradação de DNA e maior mortalidade. Também houve maior proliferação em células infectadas com Berenice e tratadas com cisplatina. As células infectadas por Colombiana, por outro lado, apresentaram um perfil de resistência à cisplatina, com ativação de diferentes vias eficazes ao reparo de adutos de DNA (como NER). Os resultados levantaram a hipótese se a infecção por Colombiana estimula o reparo alternativo via retrotransposon LINE-1. Também foi verificado um perfil de senescência destas células, assim como em células não infectadas. O tratamento com H2O2 mostrou que a infecção pelo T. cruzi pode atuar como um elemento estressor ou protetor do DNA hospedeiro, dependendo da cepa utilizada e da concentração de H2O2. Diferenças na degradação de DNA (DSB ou SSB) sugerem que diferentes mecanismos estão atuando no reparo de DNA em cada grupo analisado. Também foi encontrada diferença na expressão de genes em células infectadas (ex. BER e HR) com a cepa Berenice, que diminuíram a intensidade de resposta no dano moderado. A infecção pela cepa Colombiana impediu a ativação de muitas das vias de resposta ao H2O2 (NER e MMR). Como, neste caso, a mortalidade não se alterou em relação ao controle, questiona-se uma influência direta do parasito no reparo de DNA do hospedeiro. As descobertas apresentadas neste trabalho contribuem para a melhor compreensão da relação parasito-hospedeiro e pode auxiliar tanto na melhor compreensão da patologia da doença de Chagas, como também ter aplicações em outras áreas, como a da pesquisa em câncer e trazer explicações para o dúbio papel oncoprotetor x oncogênico relatado para o T. cruzi. The DNA Damage Response (DDR) is essential for genomic integrity and cell survival. This response involves cell cycle checkpoints and mechanisms of DNA repair. Depending on the damage type, different repair pathways are activated. Cisplatin is a drug that generates DNA adducts and interstrand crosslinks. Hydrogen peroxide (H2O2) is another compound that, in supraphysiological concentrations, damages DNA and other biomolecules. Oxidative stress causes mainly base modifications and DNA strand breaks. There are evidences that Trypanosoma cruzi, a protozoan that causes Chagas disease, interferes in different manners with the metabolism of the host cell, including DNA metabolism. In this research, we analyzed the influence of two T. cruzi’s strains, Berenice and Colombiana, in the DDR of L6 cells (rat myocytes). L6 cells were treated with two different concentrations of cisplatin and H2O2, and different biological aspects were evaluated, as viability, proliferation, morphology, DNA degradation and expression of repair and cell cycle genes. Depending on the concentration of cisplatin or H2O2, the cells reacted differently, showing distinct rates of DNA damage, considering the concentration of cisplatin or H2O2. Treatment with cisplatin showed that Berenice strain altered host damage response to DNA damage, with higher expression of some repair pathways (e.g. MMR) and lower expression of genes related to the repair of double strands breaks (DSB), resulting in DNA degradation and mortality. Cells infected with Colombiana strain, on the other hand, presented a cisplatin resistance profile, with activation of effective pathways to repair DNA adducts (as NER). The results also indicated that infection by Colombiana archetype stimulates an alternative repair via retrotransposon LINE-1. These cells also presented a senescent profile, similar to non-infected cells. Hydrogen Peroxide treatment showed that T. cruzi infection may act as a stressor or protective element of host DNA, depending on the strain and on the H2O2 concentration. Differences were also detected differences in gene expression in cells infected with Berenice strain, which reduced the DNA damage response intensity (e.g. BER and HR), in the treatment with 0,8mM of H2O2. Infection with T. cruzi Colombiana did not activate multiple pathways in response to H2O2 (NER and MMR). These cells did not show signicant differences in mortality, indicating that maybe the parasite influences the host DNA to repair itself directly. Our results will contribute to a better understanding of the parasite-host relationshp and can not only clarify Chagas disease pathology, but also help to understand the dubious role of T. cruzi in response to cancer.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2020. A Doença de Chagas afeta milhões de pessoas e é uma das principais causas de morte na América Latina. A prevenção e o desenvolvimento de um tratamento eficaz para está infecção podem ser favorecidos por uma compreensão mais aprofundada da interação do Trypanosoma cruzi, seu agente etiológico, com a microbiota intestinal de seus hospedeiros vertebrados. No presente estudo, realizamos revisão sistemática para estabelecer os conhecimentos produzidos sobre o tema pela comunidade científica. Também foram realizadas análises experimentais, por meio de PCR quantitativa (qPCR), para identificar os principais gêneros de bactérias (Lactobacillus sp., Enterococcus sp., Escherichia coli, Clostridium sp. e Bacteroides sp.) presentes no intestino de camundongos suscetíveis (BALB/c) ou resistentes (C57BL/6) à infecção. Ademais, a influência do parasito sobre a composição da microbiota intestinal foi investigada. A revisão sistemática revelou enorme escassez de artigos científicos que investigam o assunto, sendo apenas sete trabalhos selecionados pelos descritores e critérios de inclusão/exclusão estabelecidos. Os dados experimentais demonstraram que não há diferença significativa na composição da população microbiana intestinal das linhagens de camundongos estudadas, exceto para o gênero Bacteroides, que não foi identificado na linhagem C57BL/6. A infecção por T. cruzi não alterou o perfil de bactérias da microbiota intestinal de camundongos BALB/c, porém resultou em aumento significativo de Bacteroides sp. em C57BL/6. Desta forma, nossos resultados sugerem que a composição inicial da microbiota parece não ser o fator determinante de suscetibilidade/resistência dos animais, mas sim, a maneira como a microbiota é alterada na presença do T. cruzi. Assim, o enriquecimento populacional de Bacteroides pode ser o fator responsável pela maior resistência da linhagem C57BL/6 ao parasito. Entretanto, devido à carência de informações sobre o tema na literatura, mais estudos são necessários para esclarecer como a infecção por T. cruzi influencia o microbioma intestinal e quais as consequências de um possível desequilíbrio para seu hospedeiro. Chagas disease affects millions of people and is one of the leading causes of death in Latin America. The prevention and development of an effective treatment for this infection can be favored by a deeper understanding of the interaction of Trypanosoma cruzi, its etiological agent, with the intestinal microbiota of vertebrate hosts. In the present study, we carried out a systematic review to define the knowledge on the topic of the scientific community. Experimental analyses were also performed, using real time PCR (qPCR), to identify the main genera of bacteria (Lactobacillus sp, Enterococcus sp, Escherichia coli, Clostridium sp and Bacteroides sp) present in the intestine of T. cruzi-susceptible (BALB/c) or -resistant (C57BL/6) mice. In addition, the influence of the parasite on intestinal microbiota composition was investigated. The systematic review revealed an enormous lack of scientific articles investigating the subject, with only seven papers selected by the descriptors and inclusion/exclusion criteria. Was no significant difference in the composition of the gut microbiota population of the studied mice, except for the genus Bacteroides, which was not see in the C57BL/6 strain. Infection by T. cruzi did not change the bacteria profile in the gut of BALB/c mice, but resulted in a significant increase of Bacteroides sp in C57BL/6. Thus, our results suggest that the initial composition of the microbiota does not seem to be the determining factor of the susceptibility/resistance of the animals, but rather, the way how it is altered by the T. cruzi. Thus, Bacteroides enrichment may be the factor responsible for the greater resistance of the C57BL/6 strain to the parasite. However, due to the lack of information on this issue, further studies are needed to confirm our data and to clarify how T. cruzi infection affects the intestinal microbiome and what are the consequences of this disbiosis for the host.