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Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera, Psyllidae) or asiatic citrus psyllid is an exotic pest that feedson new sprout of citrus trees causing leave deformation and redution of fruit production. It is also the vector of Candidatus Liberibacter bacterium, causal agent of the greening disease. Its excretion favors the colonization of Capinodium citri Berk & Desm., a fungus that causes fumagine on the plants. Infestation of this psyllid wasobserved in an orchard of citrus in Chapecó, Santa Catarina, Brazil, in October 2004, being this the first record of its occurrence in this State. Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera, Psyllidae) ou psilídeo-dos-citros, inseto exótico que se alimenta nas brotações das plantas cítricas, causa o encrespamento das folhas, reduz a produção de frutas e é o vetor da bactéria Candidatus Liberibacter, agente causal do “greening”. A sua excreção favorece a colonização pelo fungo Capinodium citri Berk & Desm., que causa a fumagina nas plantas. Infestação deste psilídeo foi observada em um pomar de citros localizado em Chapecó, em outubro de 2004, sendo o primeiro relato da sua ocorrência no Estado de Santa Catarina.

Submitted by JOSIANE CECÍLIA DAROLT (josicdarolt@gmail.com) on 2021-03-30T22:38:40Z No. of bitstreams: 1 Josiane_Cecília_Darolt.pdf: 3739584 bytes, checksum: 944e72a902ae8df11b775cc7c72363d5 (MD5) Approved for entry into archive by Ana Carolina Gonçalves Bet null (abet@iq.unesp.br) on 2021-04-05T14:04:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 darolt_jc_dr_araiq_int.pdf: 3739584 bytes, checksum: 944e72a902ae8df11b775cc7c72363d5 (MD5) Made available in DSpace on 2021-04-05T14:04:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 darolt_jc_dr_araiq_int.pdf: 3739584 bytes, checksum: 944e72a902ae8df11b775cc7c72363d5 (MD5) Previous issue date: 2021-03-12 Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) A produção de laranja doce do Brasil se destaca no cenário mundial. Dentre as diversas doenças que acometem a cultura, a de maior importância é o Huanglongbing (HLB), que tem como agentes causais bactérias Gram-negativas restritas aos vasos do floema do gênero Candidatus Liberibacter spp.; O psilídeo asiático dos citros Diaphorina citri, vetor de Ca. Liberibacter asiaticus (Las) e Ca. L americanus (Lam), está disseminado no Brasil e exige esforços intensivos e conjuntos para o seu controle. A não existência de variedades comerciais de citros resistentes ao HLB, nem medidas curativas para o manejo desta doença impactam negativamente a produção, resultando em perdas econômicas, bem como o aumento dos custos de produção. O manejo do inseto vetor e da fonte de inóculo é viável, mas dependente de ações internas e externas à propriedade. Uma abordagem factível para o controle da doença é o uso de biotecnologia para gerar plantas geneticamente modificadas com resistência a D. citri e/ou à bactéria. Para isso, faz-se necessário gerar informações sobre genes alvos a serem empregados em estratégias biotecnológicas contra ambos os organismos, bactéria ou inseto vetor. No presente trabalho foi reportado 95% dos genes expressos por Las durante o processo inicial da colonização da bactéria em D. citri além da presença de genes do profago PJXGC-3 na estirpe brasileira de Las. Além disso foi analisada a aquisição de Las e Lam pelo inseto em condição de infecção simples, sequencial, bem como durante a fase assintomática da doença em laranjeira doce. Finalmente foi demonstrado que Las se sobressai à Lam durante a aquisição pelo psilídeo e que ocorre a prevalência de Las em relação a Lam em laranjeira doce com dupla infecção bacteriana. Brazil's sweet orange production stands out on the world scenario. Among the various diseases that affect the citriculture, the most important is Huanglongbing (HLB), whose causative agents are gram-negative bacteria of the genus Candidatus Liberibacter spp and restricted to phloem vessels; The Asian Citrus Psyllid (ACP) Diaphorina citri, vector of Ca. Liberibacter asiaticus (Las) e Ca. L americanus (Lam), is widespread in Brazil and requires intensive and joint efforts for its control. The absence of commercial varieties of citrus resistant to HLB, nor curative measures for the management of this disease, negatively impact the citrus production, resulting in economic losses, as well as in increases on production costs. The management of the insect vector and the inoculum source is possible, but dependent on internal and external actions to the management of citrus groves. A feasible approach to the disease control is the use of biotechnology to generate genetically modified plants resistant to ACP and/or bacteria. For that, it is necessary to generate information related to target genes to be used in biotechnological strategies against both organisms, bacteria or ACP. In this study, we report 95% of the genes expressed by Las during the initial process of bacterial colonization in ACP, as well as the presence of prophage PJXGC-3 key genes in the Brazilian Las strain. Moreover, we analyzed ACP acquisition of Las and Lam under simple and sequential infection, as well as during the asymptomatic phase of the disease in sweet orange plants. Finally, we demonstrated that Las stands out Lam during ACP bacterial acquisition and that the prevalence of Las in relation to Lam occurs in sweet orange plants with double bacterial infection. 141042/2017-6

O controlo de pragas em áreas de gestão fitossanitária - AGF - (area wide pest management) é uma extensão da proteção integrada aplicada a uma praga alvo numa dada área geográfica, geralmente envolvendo várias explorações agrícolas e áreas vizinhas com plantas hospedeiras ou de refúgio do organismo alvo. Estas áreas incluem, para além das explorações comerciais, culturas abandonadas, hospedeiros alternativos e quintais que, sendo hospedeiros da praga, são fontes de novas infestações e justificam a sua incorporação nas áreas de gestão fitossanitária. A supressão da praga numa área de gestão fitossanitária reduz a reinfestação vinda de áreas não controladas, aumentando a eficácia das táticas de proteção integrada. info:eu-repo/semantics/publishedVersion

Submitted by MATEUS DE ALMEIDA SANTOS (mateus.pbl12@gmail.com) on 2019-10-01T12:03:35Z No. of bitstreams: 1 Santos_MA_Tese.pdf: 4900994 bytes, checksum: c64c72888697209c6c4df047c4ecfec8 (MD5) Approved for entry into archive by Valeria Aparecida Moreira Novelli (valeria.novelli@unesp.br) on 2019-10-16T21:18:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santos_ma_dr_araiq_int.pdf: 4900994 bytes, checksum: c64c72888697209c6c4df047c4ecfec8 (MD5) Made available in DSpace on 2019-10-16T21:18:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santos_ma_dr_araiq_int.pdf: 4900994 bytes, checksum: c64c72888697209c6c4df047c4ecfec8 (MD5) Previous issue date: 2019-09-24 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) As citriculturas brasileira e mundial têm sido assolada pelo huanglongbing (HLB), doença associada às bactérias Candidatus Liberibacter spp., transmitidas pelo psilídeo Diaphorina citri. Não há cura para a doença e o manejo do HLB é feito com plantio de mudas sadias, erradicação de plantas sintomáticas e controle do inseto vetor. Pomares de citros intercalados com goiabeiras no Vietnã, tiveram menor ocorrência de psilídeos e de plantas com HLB. O composto volátil β-cariofileno, emitido por goiabeiras foi caracterizado como repelente ao psilídeo. Laranjeiras das variedades Pera e Valência foram geneticamente modificadas (GM) com genes da terpeno sintase (TPS) e da farnesil difosfato sintase (FPPS) de Arabidopsis thaliana, com a expectativa de aumentar a produção e emissão de β-cariofileno, tornando estas plantas repelentes. Em testes biológicos e químicos foram selecionadas plantas transgênicas que apresentaram incremento no acúmulo e emissão de β-cariofileno, fazendo com que o efeito repelente deste sesquiterpeno, superasse a atração que laranjeiras exercem sobre D. citri. De maneira similar, foram geradas Arabidopsis thaliana GM para superexpressar TPS de laranjeira doce. As plantas GM foram caracterizadas quanto à expressão do transgene e dos genes da via biossintética dos terpenos com 1-deoxixilulose 5-fosfato sintase (DXS), geranil difosfato sintase (GDPS) e farnesil difosfato sintase (FPPS) e quanto ao acúmulo e emissão de β-cariofileno. Foi demonstrada a viabilidade da transformação genética de laranja doce com TPS de A. thaliana, aumentando a produção de β-cariofileno a níveis superiores do que a produção endógena deste composto. Em A. thaliana, a superexpressão da TPS também aumentou a produção do composto repelente. Houve alteração na expressão em genes chave da via biossintética dos terpenos, mas por outro lado, não houve alteração fenotípica observável, exceto o incremento na produção do β-cariofileno. Nos dois casos, onde foram utilizadas terpeno sintases de Arabidopsis e de laranjeira, a manutenção dos íntrons se mostrou preponderante para o aumento na produção e emissão de β-cariofileno. Os resultados apresentados demonstram a viabilidade desta estratégia biotecnológica para produzir compostos terpênicos repelentes e gerar plantas que possam combater a epidemia de HLB. Citrus in Brazil and around the world has been devastated by Huanglongbing (HLB), a disease which is associated to Candidatus Liberibacter spp. bacteria and transmitted by the psyllid Diaphorina citri. There is no cure to such disease and the HLB management is done by planting healthy seedlings, eradicating symptomatic plants and controlling the insect vector. Citrus orchards interspersed with guava trees in Vietnam had less occurrence of psyllids and fewer plants with HLB. The volatile compound β-caryophyllene, emitted by guava trees, has been considered a repellent to the psyllid. Pera and Valencia sweet oranges varieties were genetically modified (GM) with Arabidopsis thaliana’s terpene synthase and with farnesyl dyphosphate synthase (FPPS) genes, expecting to raise the production and emission of β- caryophyllene, turning such plants into repellents. In biological and chemical trials, transgenic plants with incremental β- caryophyllene accumulation and emission were selected, leading to a sesquiterpene repellent effect stronger than the attraction that citrus trees exert over D. citri. Similarly, genetically modified Arabidopsis thaliana were generated to overexpress sweet orange TPS. Such genetically modified plants were characterized regarding the transgene expression and to the genes of terpene biosynthesis pathway with 1-deoxyxyllulose 5-phosphate synthase (DXS), geranyl diphosphate synthase (GDPS) and farnesyl diphosphate synthase (FPPS) and to the accumulation and emission of the β-caryophyllene. The GM sweet orange plants expressing A. thaliana TPS had increased increased β- caryophyllene production to levels which are higher than endogenous production of such compound. In A. thaliana, the TPS overexpression also increased the repellent compound production. There were alterations in the expression of key genes of the terpene biosynthetic pathway, however, there was no observable phenotypic alteration, except the β-caryophyllene production increment. Arabidopsis and sweet orange terpene synthases harboring íntrons, showed a preponderant increase in β-caryophyllene production and emission. The results showed the viability of such biotechnological strategy in order to produce repellent terpene-compounds and generate plants that could fight the HLB epidemy.

A citricultura brasileira tem sido acometida por várias doenças, muitas delas, limitantes. Na década de 1930 a ocorrência do vírus da tristeza dos citrinos (CTV) causou a morte de cerca de dez milhões de árvores enxertadas em laranjeira azeda. Duas décadas depois, a introdução da bactéria Xanthomonas axonopodis pv. Citri, causadora do cancro cítrico motivou a criação de um programa nacional de erradicação desta doença, mantido no estado de São Paulo até recentemente. A erradicação nunca foi alcançada mas manteve a doença com baixa incidência. Anomalias relacionadas com porta-enxertos como o declínio dos citrinos (citrus blight) na década de 1970 e a morte súbita dos citrinos, no final da década de 1990, ambas sem causa conhecida, foram controladas com a substituição de porta enxertos suscetíveis por tolerantes. Atualmente, duas doenças têm alto custo de controlo: uma virose de laranjeiras doces causada pelo vírus da leprose dos citros (CiLV) e transmitida pelo ácaro Brevipalpus phoenicis e a pinta preta dos citrinos (citrus black spot), cujo agente causal é o fungo Guignardia citricarpa. Para além dessas doenças, o surgimento da clorose variegada dos citrinos (CVC) na década de 1980 mudou a citricultura brasileira. A CVC, causada pela bactéria de xilema Xylella fastidiosa e transmitida por 12 espécies de cigarrinhas, obrigou a que a produção de plantas (mudas) fosse feita em ambientes protegidos de insetos vetores. Em 2000 toda a formação de plantas estava em estufas. Além disso, adotou-se o sistema de cultio em substrato, em bancadas, para evitar a contaminação com Phytophthora spp. e fitonematóides. Como as plantas mães (matrizes) já estavam certificadas e protegidas, assegurou-se a sanidade do material de propagação. info:eu-repo/semantics/publishedVersion

Orientadores: Alessandra Alves de Souza, Helvécio Della Coletta Filho Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A citricultura se destaca pela sua grande importância no agronegócio paulista e brasileiro, sendo a commodity agrícola brasileira com maior hegemonia no mercado externo. Importantes regiões produtoras de citros no mundo como Ásia, Américas e África vem se deparando com um dos mais graves problema fitossanitário, o HuangLongBing (HLB), também conhecido como greening. Na Ásia e nas Américas o HLB é predominantemente causado pela espécie bacteriana Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas), que coloniza os vasos do floema da planta hospedeira causando sintomas severos em folhas e frutos, afetando a produtividade da planta e qualidade de frutos, tanto para o processamento da fruta na indústria quanto para o consumo in natura. No Brasil, o manejo recomendado e tecnicamente mais suportado até então para esta doença está alicerçado nos princípios de exclusão, erradicação e proteção. No entanto, embora ainda sendo mandatório, a erradicação de plantas com HLB tem sido cada vez mais negligenciada, passando-se a conviver com a doença, postergando o tempo de vida útil econômico da planta. Diferentes tipos de moléculas vêm sendo usadas para o manejo de fitobactérias, tendo ação direta no patógeno ou como potencializadoras da indução de resistência de plantas. Como exemplo se tem o uso de moléculas antioxidantes como a N-acetilcisteína que apresentou resultados promissores contra Xylella fastidiosa, que causa a clorose variegada dos citros (CVC) e Xanthomonas citri subsp. citri, que causa o cancro cítrico. Antibióticos como a penicilina, tetraciclina e estreptomicina têm sido testadas contra CLas em testes in vitro, in vivo e algumas já utilizadas em campo. Este projeto tem como objetivo avaliar o efeito destes compostos em laranjeiras doces infectadas com CLas, de modo a verificar a variação da concentração bacteriana, a atividade de enzimas em resposta ao estresse oxidativo causado pela infecção bacteriana e a expressão de genes relacionados à detoxificação de espécies reativas de oxigênio cloroplastidiais, sendo esta a organela mais afetada devido ao acúmulo de amido no mesmo. Pode-se verificar que, apesar do titulo bacteriano invariável nas plantas infectadas, houve uma indução a atividade enzimática de superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e ascorbato peroxidase (APX) nos tratamentos com NAC, acompanhados também da superexpressão de genes de detoxificação cloroplastidial como ascorbato peroxidase cloroplastidial (APXchl), glutationa peroxidase cloroplastidial (GPXchl) e Cu-Zn superóxido dismutase (Cu-Zn SODchl). No tratamento com antibióticos, pode-se observar uma queda no título bacteriano, no entanto não houve indução da atividade de SOD e CAT, com exceção de APX. Pode-se observar forte repressão na expressão de genes de detoxificação cloroplastidial (APXchl, GPXchl e Cu-Zn SODchl), indicando uma possível toxicidade causada pelos antibióticos. Apesar dos efeitos antimicrobianos do NAC não terem sido observados nesse trabalho, ainda há muito o que se estudar quanto a ação dessa molécula promissora na agricultura e principalmente conta o HLB. Meios de delivery no floema e a ação conjunta do NAC com os antibióticos devem ser levados em consideração Abstract: The citriculture stands out for its great importance in the agribusiness of São Paulo and Brazil, being the Brazilian agricultural commodity with greater hegemony in the external market. Important citrus producing regions in the world such as Asia, Americas and Africa have been facing one of the most serious major phytosanitary problem, the HuangLongBing (HLB), also known as greening. In Asia and in the Americas HLB is predominantly caused by the bacterial species Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas), which colonizes the phloem vessels of the host plant causing severe leaf and fruit symptoms, affecting plant productivity and fruit quality, both for fruit processing industry and for in natura consumption. In Brazil, the recommended and technically supported and proven management for this disease is based on the principles of exclusion, eradication and protection. However, although it is still mandatory, the eradication of plants with HLB has been increasingly neglected, passing to live with the disease, postponing the plant's economic useful life. Different types of molecules have been used for the management of phytobacteria, having direct action in the pathogen or as plant resistance inductors or potenciationr.. An example is the use of antioxidant molecules such as N-acetylcysteine ??that has shown promising results against Xylella fastidiosa, which causes citrus variegated chlorosis (CVC), and Xanthomonas citri subsp. citri, which causes citrus canker. Antibiotics such as penicillin, tetracycline and streptomycin have been tested against CLas in vitro tests, in vivo and some are already used in the field. The goal of this project was to evaluate the effect of these compounds on sweet orange plants infected with CLas in order to verify the variation of bacterial concentration, the activity of enzymes in response to oxidative stress caused by bacterial infection and the expression of genes related to reactive oxygen species detoxification, mainly from chloroplast, which is the most affected organelle due to the accumulation of starch in it. It could be verified that, despite the invariable bacterial titre in infected plants, there was an induction of the enzymatic activity of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and ascorbate peroxidase (APX) in the NAC treatments, also accompanied by the overexpression of Chloroplastidial ascorbate peroxidase (APXchl), glutathione chloroplastidial peroxidase (GPXchl) and Cu-Zn superoxide dismutase (Cu-Zn SODchl). In antibiotic treatment, a decrease in the bacterial titre could be observed, however there was no induction of SOD and CAT activity, with the exception of APX. There is strong repression in the expression of chloroplastdial detoxification genes (APXchl, GPXchl and Cu-Zn SODchl), indicating possible toxicity caused by antibiotics. Although the antimicrobial effects of NAC have not been observed in this study. There is still much to study about the action of this promising molecule in agriculture and especially the HLB. Means of delivery in the phloem and the joint action of the NAC with the antibiotics should be taken into consideration Mestrado Genética Vegetal e Melhoramento Mestre em Genética e Biologia Molecular FAPESP 2016/14877-0

Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2022-04-19T20:58:45Z No. of bitstreams: 1 01_Dissertac_a_oPGCA_vFinal_CD.pdf: 7825498 bytes, checksum: be10ffb1bdb8c47b14eff89c7c71816d (MD5) Made available in DSpace on 2022-04-19T20:58:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 01_Dissertac_a_oPGCA_vFinal_CD.pdf: 7825498 bytes, checksum: be10ffb1bdb8c47b14eff89c7c71816d (MD5) Previous issue date: 2018-09-03 Brazil is one of the main producers of orange juice, exporting 98% of its production.Phytosanitary problems cause loss of production and difficulty in exporting. Among existing pests is the industry?s biggest concern that Huanglongbing, also known as Greening. This disease reduces the quality of the fruit, disrupts the developmentof the plant and reduces its productivity. The main spreader of the disease-causing bacteria is the Diaphorina citri, which is 2 to 3 mm in length. For the control of the problem, one method is to capture from yellow traps and the count of the insects that insects to later adjust the dosage of the insecticides to be applied. This way of monitoring is an important component in the prevention, the detection and counting of the insect that causes the disease is carried out manually and this process is determinant for more effective insecticide applications. This research had as general objective the use of the methodology of Deep Learning with Neural Convolutional Networks (CNN) in the classification of the insect Diaphorina citri in digitized images of adhesive traps, in order to streamline the identification process and improve the accuracy results in the recognition of the insect. To do this, it was necessary to create a database with the images of the traps after digitized and to analyze the results obtained in the classification of Diaphorina citri using models of distinct architectures with deep learning approach. For automated classification, three architectures of Neural Convolutional Networks (CNN) were tried. After evaluation and application of statistical tests to compare the results of the LeNet, AlexNet, Inception architectures, the Inception model applied to the set of test samples for generalization of the model presented an average accuracy of 99.51% accuracy inthe crossvalidation and 99.37% in the validation with the final test set in the classification of the insect Diaphorina citri. O Brasil ? um dos principais produtores de suco de laranja, exportando 98% do que produz. E problemas fitossanit?rios causam perda na produ??o e dificuldade de exporta??o. Dentre as pragas existentes est? a Huanglongbing, tamb?m conhecida por Greening. Esta doen?a reduz a qualidade do fruto, atrapalha o desenvolvimento da planta e reduz sua produtividade. O principal inseto propagador da bact?ria causadora da doen?a? o psil?deo Diaphorina citri, que tem 2 a 3 mm de comprimento. Para o controle do problema, um m?todo usado consiste na captura com armadilhas amarelas e contagem dos insetos para ajuste posterior da dosagem dos inseticidas a serem aplicados. Essa forma de monitoramento ? um componente importante na preven??o, na detec??o e contagem do inseto causador da doen?a, e ? realizada de maneira manual sendo esse processo determinante para aplica??o mais efetivas de inseticidas. Esta pesquisa, teve como objetivo geral o uso da metodologia de Aprendizado Profundo (Deep Learning) com Redes Convolucionais Neurais (CNN) na classifica??o do psil?deo Diaphorina citri em imagens digitalizadas de armadilhas adesivas, como forma de agilizar o processo de identifica??o e melhorar os resultados de precis?o no reconhecimento do psil?deo. Para isso, foi necess?rio criar um banco de dados com as imagens das armadilhas ap?s digitalizadas e analisar os resultados obtidos na classifica??o do Diaphorina citri utilizando modelos de arquiteturas distintos com abordagem de aprendizado profundo. Para a classifica??o automatizada, foram experimentadas tr?s arquiteturas de Redes Convolucionais Neurais (CNN). Ap?s avalia??o e aplica??o de testes estat?sticos para comparar os resultados das arquiteturas LeNet, AlexNet, Inception, o modelo Inception aplicado ao conjunto de amostras de teste para generaliza??o do modelo apresentou uma m?dia de acur?cia de 99.51% na valida??o cruzada e 99.37% na valida??o com o conjunto de teste final na classifica??o do inseto Diaphorina citri.

Submitted by JEANE DAYSE VELOSO DOS SANTOS (dayse_1990@hotmail.com) on 2018-06-06T00:38:43Z No. of bitstreams: 1 Tese.corrigidacx.pdf: 3031465 bytes, checksum: b0bb106972f6c8b900e9b70153d5c2dc (MD5) Approved for entry into archive by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br) on 2018-06-07T18:37:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pulici_jdvs_dr_jabo.pdf: 3031465 bytes, checksum: b0bb106972f6c8b900e9b70153d5c2dc (MD5) Made available in DSpace on 2018-06-07T18:37:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pulici_jdvs_dr_jabo.pdf: 3031465 bytes, checksum: b0bb106972f6c8b900e9b70153d5c2dc (MD5) Previous issue date: 2018-05-18 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Huanglongbing (HLB) é considerada a mais importante doença da citricultura mundial. No Brasil, está associada principalmente a bactéria Candidatus Liberibacter asiaticus (Las), transmitida pelo inseto Diaphorina citri. Apesar da grande importância comercial, poucas são as informações sobre vários aspectos desta doença limeiras ácidas, inclusive o potencial que esta representa como fonte de inóculo para as laranjeiras. O objetivo do presente trabalho foi (i) avaliar a favorabilidade da limeira ácida ‘Tahiti’ à reprodução de D. citri e multiplicação de Las, (ii) caracterizar sintomas foliares e danos em raízes de plantas afetadas e (iii) avaliar, por meio de inoculações cruzadas, seu potencial como fonte de inóculo para a laranjeira ‘Valência’ e vice-versa. Ambos os hospedeiros estavam enxertados em limoeiro ‘Cravo’, com 2 anos de idade. O capítulo I contém revisão de literatura, o II estudo comparativo de plantas das duas hospedeiras como criadouro de D. citri e o III caracterização de sintomas foliares, danos em raízes e resultados das inoculações cruzadas, usando como inóculo borbulhas doentes e insetos infectivos. A ‘Tahiti’ foi menos favorável que a ‘Valência’ ao desenvolvimento do inseto. Nela as taxas de oviposição e sobrevivência de ninfas foram menores, ou seja, 59,7 e 48,5%, respectivamente, em relação à ‘Valência’ no primeiro experimento, e de 75,4 e 33,4% no segundo experimento. Em ‘Tahiti’ as manchas amarelas foliares foram mais intensas, porém os danos nas raízes similares aos observados em ‘Valência’. Uma escala fotográfica foi desenvolvida e mostrou-se útil na avaliação dos experimentos. Inesperadamente, diversas plantas experimentais estavam infectadas com Phytophthora spp., o que nos permitiu, embora em caráter preliminar, também avaliar possível influência deste patógeno na interação Las-citros. Na parte aérea, Phytophthora promoveu maiores títulos nas plantas inoculadas por enxertia, assim como estimulou a planta a exibir sintomas foliares mais cedo. No sistema radicular, este patógeno não favoreceu a colonização por Las, com exceção de ‘Tahiti’ inoculada com inóculo oriundo de ‘Tahiti’, independente do método de inoculação. Phytophthora não contribuiu para aumento dos danos em plantas com Las. De forma geral, plantas de ‘Valência’ foram colonizadas por Las, independente da fonte de inóculo e método de inoculação. A ‘Tahiti’, por sua vez, foi colonizada por Las oriunda de ambos os hospedeiros, porém somente quando inoculada por enxertia. A ‘Tahiti’ pode atuar como fonte de inóculo para si mesma e para laranjeiras. Huanglongbing (HLB) is considered the most important disease of citrus worldwide. In Brazil, the bacterium most commonly associated with the disease is Candidatus Liberibacter asiaticus (Las) transmitted by the insect Diaphorina citri. Despite the great commercial importance, little is known about the disease on acid limes. The objectives of this study were (i) to evaluate the favorability of the ‘Tahiti’ acid lime for the reproduction of D. citri and multiplication of Las, (ii) characterize foliar symptoms and root damage on infected plants and (iii) to evaluate, through cross inoculations, the potential that diseased ‘Tahiti’ represents as source of inoculum to sweet orange ‘Valencia’ and vice versa. Both hosts were two-year-old and growing on ‘Cravo’ Rangpur lime rootstock. Chapter I contains literature review, II a comparative study of the favorability of the two hosts for D. citri reproduction, and III a characterization of foliar symptoms, root damage and the results of cross inoculation experiments, using as inoculum diseased budsticks and infective insects. ‘Tahiti’ was less favorable than ‘Valencia’ to insect development. On these plants oviposition rates and nymph survival were, respectively, 59.7 and 48.5% of those on ‘Valencia’ in the first experiment, and 75.4 e 33.4 % in the second experiment. On ‘Tahiti’ the yellow leaf spots were more intense, but root damage like those on 'Valencia’. Unexpectedly, several experimental plants were infected with Phytophthora spp., which allowed us to assess the influence of this pathogen on Las-citrus interaction. On Phytophthora-infected plants inoculated by grafting, higher bacterium titers were detected on leaves, and the symptoms expressed earlier. This pathogen did not favor root colonization by Las, excepting ‘Tahiti’ that received inoculum of Las from ‘Tahiti', nor contributed to increase root damage. Overall, ‘Valencia’ was infected by Las, independently of the citrus variety source inoculum and method of inoculation. ‘Tahiti’, in turn, was infected by Las originated from both hosts, but only when inoculated by grafting. When exposed to infective insects, ‘Tahiti' became infected only when the source of inoculum was another ‘Tahiti’. Removal of diseased trees of ‘Tahiti’ (as of any other citrus) from commercial or noncommercial areas should be reinforced as crucial to the success of HLB control.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O uso de pesticidas no controle de insetos praga e patógenos leva a uma série de consequências que prejudicam o meio ambiente e a saúde humana. Em busca de controles alternativos de pragas, este estudo avaliou o potencial de extratos brutos e substâncias isoladas da espécie vegetal Cabralea canjerana spp. canjerana sob a praga da soja, Anticarsia gemmatalis, e de inibidores de proteases sob a praga do citros, Diaphorina citri. Os extratos etanólicos de folhas, galhos, sementes, frutos, e triterpenos isolados de C. canjerana foram avaliados com base nos parâmetros biológicos, índices nutricionais e atividades das principais enzimas digestivas de A. gemmatalis. Os parâmetros biológicos mais afetados pelos extratos foram mortalidade e oviposição. Vale ressaltar que o tratamento extrato galhos 1000 ppm ocasionou uma mortalidade de 80% dos insetos. Os triterpenos não afetaram negativamente os parâmetros analisados. Em relação a D. citri, foi avaliado o efeito de diferentes inibidores de proteases sobre o ciclo de vida e realizada a caracterização bioquímico-cinética de cisteíno protease. Os resultados mostraram que todos os inibidores testados aumentaram a mortalidade de ninfas, no entanto, o inibidor E64 apresentou também efeitos adversos na emergência, oviposição e viabilidade dos ovos. A caracterização de cisteíno proteases de D. citri mostrou que o pH e temperatura de maior atividade foi 6,0 e 25°C. Ao analisar o efeito dos inibidores na atividade verificou-se que a enzima foi insensível a aprotinina e berenil, no entanto E64 (50 μM) reduziu significativamente a atividade. Os valores de V max app e K M app foram de 31,15 nM s -1 e 0,028 mM, respectivamente. Esses resultados sugerem que os psilídeos utilizam cisteíno proteases para a digestão de proteínas. Nossos experimentos demonstraram eficiência dos extratos etanólicos de C. canjerana em A. gemmatalis, e alterações danosas a D. citri pelo inibidor de cisteíno protease E64, o que os tornam candidatos ao desenvolvimento de um potencial inseticida. The use of pesticides in the control of insect pests and pathogens leads to a number of consequences that harm the environment and human health. In search of alternative pest control, this study evaluated the potential of raw extracts and isolated substances of the Cabralea canjerana spp. canjerana under the velvetbean caterpillar, Anticarsia gemmatalis, and protease inhibitors under the citrus pest, Diaphorina citri. The ethanolic extracts of leaves, stems, seeds, fruits, and triterpenes isolated from C. canjeranawere evaluated based on the biological parameters, nutritional indexes and activities of the main digestive enzymes of A. gemmatalis. The biological parameters most affected by the extracts were mortality and oviposition. It is noteworthy that, the treatment extract stems 1000 ppm caused a mortality of 80% of the insects. The triterpenes did not negatively affect the analyzed parameters. In relation to D. citri, the effect of different protease inhibitors on the life cycle and the biochemical-kinetic characterization of cysteine protease were evaluated. The results showed that all inhibitors tested increased nymph mortality, however, the E64 inhibitor also had adverse effects on emergence, oviposition and egg viability. The characterization of cysteine proteases from D. citri showed that the pH and temperature of highest activity was 6.0 and 25°C. In analyzing the effect of the inhibitors on the activity, it was verified that the enzyme was insensitive to aprotinin and berenil, however E64 (50 μM) significantly reduced the activity. The values of V max app and K M app were 31.15 nM s -1 and 0.028 mM, respectively. These results suggest that the psyllids use cysteine proteases for the digestion of proteins. Our experiments demonstrated the efficiency of the C. canjerana extracts in A. gemmatalis, and damage to D. citri by the cysteine protease inhibitor E64, which makes them candidates for the development of a potential insecticide.

Os citrinos são uma cultura importante em Portugal desde o séc. XVI, sendo o Algarve a principal região citrícola do país. A meados do séc. XX houve um grande aumento da área de cultivo no Algarve, tendo a citricultura passado a constituir o principal sector da agricultura da região e um dos principais sectores da fruticultura nacional. Nos últimos anos, tem havido um aumento da área média dos pomares, com abandono de pequenas parcelas, enquanto os maiores produtores têm vindo a fazer grandes plantações. Isto tem sido acompanhado de uma modernização tecnológica, parcialmente relacionada com o aumento do número de agrónomos responsáveis pela condução técnica das explorações citrícolas. Além disso, muitos pomares passaram a ser geridos tecnicamente pelas organizações de produtores que comercializam a fruta. Estas alterações, juntamente com a modernização das centrais, fizeram com que hoje os citrinos produzidos em Portugal tenham um elevado nível de qualidade e uma boa apresentação, o que permite fazer a sua comercialização nos mercados mais exigentes. Apesar dos progressos e potencialidade referidos, podemos dizer que a citricultura portuguesa está hoje ameaçada de morte. Além da já conhecida ameaça da Tristeza dos citrinos, temos hoje uma nova ameaça, o huanglongbing (HLB), também conhecida por greening, uma das doenças mais graves dos citrinos, uma vez que reduz muito a produtividade das árvores, tornando inviável o seu cultivo em zonas onde está instalada. Esta doença é provocada por uma bactéria e é transmitida por psilas, entre elas, a psila africana dos citrinos (Trioza erytreae). Esta psila foi introduzida no norte do país e tem-se vindo a disseminar para sul pela zona costeira, estando já na Figueira da Foz, e recentemente foi descoberto um novo foco em Sintra. info:eu-repo/semantics/publishedVersion

Huanglongbing (HLB) é a mais severa doença em citros no mundo. Sintomas dessa doença incluem ramos com folhas amareladas, queda precoce e alteração das características sensoriais dos frutos, desfolhamento e morte prematura da árvore. Este trabalho teve como objetivos determinar as alterações físico-químicas, na composição química e nas características sensoriais no suco de laranja acometido pelo HLB, assim como investigar as causas do amargor no suco de laranja, além daquelas provenientes da limonina e nomilina. Foi realizado um estudo avaliativo das características físicoquímicas e bioquímicas de sucos de laranjas Valência colhidas em diferentes meses (fevereiro, março, abril e maio) numa mesma safra (2012). Confirmaram-se as alterações nos parâmetros estudados, sendo as colhidas no meio da estação mais adequadas ao processamento. Em seguida foi realizada uma revisão de literatura sobre os efeitos do HLB nos parâmetros físico-químicas, composição química e características sensoriais de suco de laranja, assim como a determinação laboratorial das mesmas. Tanto a revisão quanto as análises químicas demonstraram aumento da acidez titulável (AT), conteúdos de ácido cítrico, limonina e nomilina, dentre outros metabólitos secundários e redução dos sólidos solúveis (SS), ratio, açúcares e teores de ácido málico. Os sucos provenientes de laranjas sintomáticas para o HLB apresentaram maior intensidade dos seguintes atributos sensoriais: sabores amargo, ácido, metálico e umami; aromas de toranja, de casca de laranja e de suco envelhecido; e das sensações bucais de adstringência, queimação e formigamento. Foi realizado um fracionamento dos compostos não-voláteis do suco de laranja, com subsequente descrição sensorial dos mesmos. Verificou-se sabor amargo em uma fração onde a limonina e nomilina estavam presentes, mas também em outras com predomínio de ácidos hidroxicinâmicos e ausência dos limonoides. Essa é uma evidência de que outro(s) composto(s), possivelmente algum ácido hidroxicinâmico, esteja(m) envolvido(s) com o típico amargor conferido pelo HLB. Huanglongbing (HLB) is the most severe citrus disease in the world. Symptoms of HLB include branches with yellow leaves, premature dropping and changes in fruit sensory quality, loss of leaves and premature death of the tree. The objectives of this work were to evaluate the physicochemical, chemical composition and sensory changes in juice made with HLB symptomatic oranges, as well as to investigate the causes of the bitterness found in HLB orange juice, other than the bitter limonoids, limonin and nomilin. The physicochemical caracteristics and chemical composition were evaluated in juice made with Valencia oranges harvested throughout the season (February, March, April and May 2012). This study confirmed the changes of some chemical composition over the harvest season, with better attributes for processing in the mid-season. Then, a literature review and laboratory analysis evaluating the effects of HLB on physicochemical, chemical composition and sensory characteristics were conducted. Both, review and laboratory analysis, revealed increases of titratable acid (TA), levels of citric acid, limonin and nomilin, among other secondary metabolites, and a decrease of soluble solid contents (SSC), SSC/TA, sugars and malic acid contents. The juice from HLB symptomatic oranges had higher values for the sensory attributes: bitterness, sourness, metallic and umami tastes; flavors of grapefruit, orange peel and staleness; and astringent, burning and tingling month-feels compared to healthy juice. Non-volatile compounds were extracted from Valencia orange juice and fractionated and sensorially described. Bitterness was detected in the fraction containing limonin and nomilin as well as in fractions which did not contain these limonoids, but prevalence of hydroxycinnamic acids. This evidences the existence of other compounds, possibly hydroxycinnamate acids, involved with the typical HLB-bitterness.

No passado dia 25 de maio, no auditório da Caixa de Crédito Agrícola, em Algoz, teve lugar uma palestra com o título “A situação atual da citricultura na Flórida”, inserida no ciclo de seminários associado ao mestrado em Hortofruticultura da Universidade do Algarve. A palestra foi proferida por Thomas Stopyra, um prestigiado agrónomo americano que trabalha na empresa The Packers of Indian River, Ltd., especializada na produção de toranja para consumo em fresco. A palestra teve como tema central os problemas fitossanitários que têm afetado a citricultura da Flórida, nomeadamente, o cancro cítrico e, mais recentemente, o Huanglongbing (HLB ou greening). No caso do cancro cítrico, houve uma tentativa inicial de eliminação de todas as árvores infetadas, de forma a manter o Estado da Fló- rida livre de cancro cítrico. info:eu-repo/semantics/publishedVersion

Submitted by LAUDECIR LEMOS RAIOL JÚNIOR null (laudecir_junior@yahoo.com.br) on 2017-03-31T03:59:38Z No. of bitstreams: 1 Tese_Laudecir_Lemos_Raiol_Júnior.pdf: 1991949 bytes, checksum: ea284fe5c7ae6d63472b72e4fc5c107e (MD5) Rejected by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: No campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” foi informado que seria disponibilizado o texto completo porém no campo “Data para a disponibilização do texto completo” foi informado que o texto completo deverá ser disponibilizado apenas 6 meses após a defesa. Caso opte pela disponibilização do texto completo apenas 6 meses após a defesa selecione no campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” a opção “Texto parcial”. Esta opção é utilizada caso você tenha planos de publicar seu trabalho em periódicos científicos ou em formato de livro, por exemplo e fará com que apenas as páginas pré-textuais, introdução, considerações e referências sejam disponibilizadas. Se optar por disponibilizar o texto completo de seu trabalho imediatamente selecione no campo “Data para a disponibilização do texto completo” a opção “Não se aplica (texto completo)”. Isso fará com que seu trabalho seja disponibilizado na íntegra no Repositório Institucional UNESP. Por favor, corrija esta informação realizando uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2017-04-06T14:47:38Z (GMT) Submitted by LAUDECIR LEMOS RAIOL JÚNIOR null (laudecir_junior@yahoo.com.br) on 2017-04-07T14:14:25Z No. of bitstreams: 1 Tese_Laudecir_Lemos_Raiol_Júnior.pdf: 1991949 bytes, checksum: ea284fe5c7ae6d63472b72e4fc5c107e (MD5) Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-04-10T18:46:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 raioljunior_ll_dr_jabo.pdf: 1991949 bytes, checksum: ea284fe5c7ae6d63472b72e4fc5c107e (MD5) Made available in DSpace on 2017-04-10T18:46:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 raioljunior_ll_dr_jabo.pdf: 1991949 bytes, checksum: ea284fe5c7ae6d63472b72e4fc5c107e (MD5) Previous issue date: 2017-01-30 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Huanglongbing (HLB), causada pela bactéria Candidatus Liberibacter asiaticus (Las) que coloniza o floema das plantas cítricas, é considerada a doença mais grave e destrutiva dos citros. Aspectos da patogenicidade de Las ainda não estão compreendidos, dificultado pela condição não cultivável do patógeno. Entender como Las se movimenta internamente na planta para colonizar os diferentes tecidos é fundamental para o controle do HLB e a busca de materiais com potencial de resistência. O objetivo desse trabalho foi caracterizar a movimentação de Las em plantas de citros. Nos experimentos plantas de laranjeiras foram inoculadas por enxertia de segmentos de ramos de plantas infectadas de 2 - 3 cm de comprimento. Para estudo da velocidade de movimentação de Las nos vasos do floema, foi utilizado duas metodologias. A primeira envolveu poda sequencial do caule a diferentes distâncias do ponto de inoculação e avaliação de amostras de folhas seis meses após a inoculação. Já na segunda metodologia foi realizado a coleta de amostras de anéis de casca do caule a diferentes distâncias do ponto de inoculação e de raízes fibrosas. Foi avaliado também a influência de novos fluxos de crescimentos na movimentação de Las. Lotes de plantas foram podadas na parte aérea ou no sistema radicular para indução do crescimento. Plantas não podadas foram usadas como controle. Foram amostradas folhas que surgiram na planta após a inoculação, folhas velhas, anel de casca e raízes fibrosas a partir de 15 dias após a inoculação. E para o estudo do padrão de movimentação de Las nas plantas, foram utilizadas plantas aneladas totalmente, parcialmente e não aneladas no caule e inoculadas no topo ou na base do caule para avaliar se Las precisa passar pela raiz para colonizar outros pontos da copa. Os resultados permitiram concluir que a velocidade média necessária para Las atingir a raiz de 95% das plantas, localizada 85 cm abaixo do local de inoculação, foi estimado variando entre 2,9 a 6,9 cm dia-1. Foi observado também que fatores ambientais influenciam a velocidade de movimentação da bactéria na planta. No experimento para avaliar a influência das regiões de crescimento, parte aérea ou sistema radicular, na movimentação de Las, a maior probabilidade de detecção da bactéria foi observada em tecidos das regiões que foram estimulados a crescer através da poda, quando comparados com as plantas não podadas. Com relação aos tecidos amostrados, anéis de casca do caule foram as que apresentaram maiores porcentagens de detecção de Las. Além disso, as plantas em que foram estimulados o crescimento do sistema radicular apresentaram 90% a mais de probabilidade de se encontrar Las nas raízes em relação a amostras de casca do caule ou folhas. Os resultados sugerem que a bactéria precisa passar pela raiz para atingir outros pontos da copa. No entanto, esse fator não foi totalmente esclarecido porque o anelamento das plantas provocou acúmulo de amido e alteração no fluxo da seiva, que pode ter influenciado na movimentação da bactéria. Huanglongbing (HLB), caused by the bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus (Las) which colonizes the phloem of citrus plants, is considered the most serious and destructive disease of citrus. Las pathogenicity aspects are not yet understood, hampered by non-cultured condition of the pathogen. Understanding how Las moves within the plant to colonize the different tissues is fundamental for HLB management and searching for materials with resistance potential. The objective of this research was to characterize the movement of Las in citrus plants. In the experiments orange plants were inoculated using grafting segments from infected plant branches 2-3 cm long. To study the speed of Las movement in phloem, two methodologies were used. The first involved sequential pruning of the stem at different distances from the inoculation site and evaluation of leaf samples six months after inoculation. In the second methodology was collected the ring samples of stem bark at different distances from the point of inoculation until the ground level and fibrous roots. It was also evaluated the influence of the growth flows in the Las movement. Lots of plants were pruned in the aerial part or in the root system to induction of growth. Unpruned plants were used as controls. The plants were evaluated by sampling young leaves, mature leaves, stem bark and roots every 15 days from inoculation. For the study of the movement pattern of Las in the plants, we used totally, partially and non-girdling plants and inoculated at the top or base of the stem to evaluate if Las must pass through the root to colonize other points of the canopy. The results allowed to conclude that the average speed required for Las to reach the 95% root of the plants, located 85 cm below the inoculation site, was estimated varying from 2.9 to 6.9 cm day-1. It was also observed that environmental factors influence the speed of the bacterium movement in the plant. In the experiment to evaluate the influence of the growth regions, aerial part or root system, in the movement of Las, the highest probability of detection of the bacteria were observed in tissues from the regions that were stimulated to grow through pruning, when compared with unpruned plants. Regarding the sampled tissues, stem bark rings were the ones with the highest percentages of Las detection. Furthermore, the growth of the root system increased the possibility of finding Las in roots samples by 90% than in other sampled tissues. The results suggest that the bacteria must pass through the root to reach other parts of the canopy. However, this factor was not fully understood because the plants girdling caused starch accumulation and change in the sap flow, which may have influenced the movement of the bacteria.

Submitted by LUMEY PEREZ ARTILES null (lumeyp@yahoo.es) on 2017-03-06T20:53:35Z No. of bitstreams: 1 Tese_Lumey_Perez_Artiles.pdf: 1138570 bytes, checksum: 01f489085bac51420d9c3526e6ac70a8 (MD5) Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-03-13T18:59:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 artiles_lp_dr_jabo.pdf: 1138570 bytes, checksum: 01f489085bac51420d9c3526e6ac70a8 (MD5) Made available in DSpace on 2017-03-13T18:59:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 artiles_lp_dr_jabo.pdf: 1138570 bytes, checksum: 01f489085bac51420d9c3526e6ac70a8 (MD5) Previous issue date: 2017-01-25 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A doença huanglongbing (HLB) é considerada um dos maiores problemas fitossanitários da cultura dos citros na atualidade e sua disseminação ocorre principalmente por insetos vectores. Desta forma, o presente trabalho teve por objetivos estudar a biologia e os parâmetros populacionais de Diaphorina citri (vector do HLB) em variedades de citros e determinar o controle natural de Tamarixia radiata sobre as populações de D. citri. A biologia de D. citri foi estudada nos hospedeiros, limão Cravo e Citrumelo ‘Swingle’ e as copas de laranjas Pera, Hamilim e Valência em combinações com estes porta-enxertos. Em cada hospedeiro avaliaram-se a duração das fases de ovo, ninfa e ciclo biológico, viabilidade, fecundidade e razão sexual. Os resultados obtidos do estudo da biologia de D. citri mostram que em Citrumelo ‘Swingle’, a praga apresentou o maior tempo de duração da fase de ovo. A duração do ciclo biológico vario de 15,08 dias em Pêra/Cravo a 16,5 dias em Hamilim/Citrumelo ‘Swingle’, diferenciando-se significativamente. As maiores taxas de sobrevivência e viabilidade para ovo e ciclo biológico foram observadas nas copas de laranjas enxertadas em limoeiro Cravo. Na combinação Valência/limoeiro Cravo o inseto apresentou a maior viabilidade dos ovos (82,02%) e a menor (73,66%) em Hamilim/ Citrumelo ‘Swingle’. Os valores de sobrevivência (ovo-adulto) variaram de 71,07 a 56,16 % entre os hospedeiros avaliados, observando-se que a combinação Pêra/Cravo favorece a sobrevivência do inseto. Com base na tabela de fertilidade, o limoeiro Cravo apresentou a maior taxa liquida de reproduço (160,57) e a menor tempo de duração de cada geração (31,54 dias). Estimativas Jackknife da taxa intrínseca de crescimento (rm) variou de 0,152 em Valencia/Limoeiro Cravo para 0,127 em Citrumelo 'Swingle'. Os resultados indicaram que o porta-enxerto limoeiro Cravo favorece os parâmetros reprodutivos da praga, enquanto o Citrumelo ‘Swingle’ foi menos adequado para o desenvolvimento de D. citri, especialmente na copa Hamilim. Para complementar o segundo objetivo os experimentos sobre o controle natural de T. radiata foram desenvolvidos em Artemisa, Cuba, durante os anos 2007, 2008 e 2009, foram realizadas coletas de 125 brotos jovens em Citrus sinensis com uma frequência quinzenal e foi contabilizada a presença de ninfas de 3o a 5o instar e determinado as porcentagens de parasitismo por T. radiata. Foram determinadas as correlações entre as porcentagens de parasitismo e as variáveis climáticas. Foi encontrada uma correlação positiva (0,545 **, p

Submitted by ANA PAULA FERREIRA PINTO null (aninhafp@gmail.com) on 2016-07-13T13:34:09Z No. of bitstreams: 1 Tese_versão final_IMPRESSÃO.pdf: 3119893 bytes, checksum: 92828165715e718e5974a8d791397878 (MD5) Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-07-15T20:10:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pinto_apf_dr_bot_par.pdf: 642033 bytes, checksum: 1b59ead155f58efc1af1b6e720314a12 (MD5) Made available in DSpace on 2016-07-15T20:10:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pinto_apf_dr_bot_par.pdf: 642033 bytes, checksum: 1b59ead155f58efc1af1b6e720314a12 (MD5) Previous issue date: 2016-05-30 Em 2004 foi relatada, nos pomares cítricos do estado de São Paulo, a presença do Huanglongbing. No Brasil, esta doença é causada pelas bactérias Candidatus Liberibacter asiaticus e Candidatus Liberibacter americanus, que são transmitidas pelo psílideo-dos-citros Diaphorina citri. A principal forma de controlar a doença é através do controle do inseto vetor, atualmente realizada com o uso de produtos fitossanitários. A mortalidade de adultos do psilídeo por fungos entomopatogênicos tem sido observada em campo, e alguns estudos estão sendo desenvolvidos, há pouca informação na literatura sobre o 2 efeito desses patógenos no controle microbiano do inseto vetor. Dessa forma, o presente estudo avaliou a patogenicidade de 20 isolados de fungos entomopatogênicos sobre adultos e ninfas de D. citri em condições de laboratório e semi-campo, bem como a sua compatibilidade com produtos fitossanitários, de diferentes grupos, utilizados na citricultura. Ninfas e adultos de D. citri, provenientes de criação em laboratório, foram expostas à uma concentração de 6,7x107 conídios/mL, avaliando a mortalidade desses insetos. Através dessa mortalidade foi determinado o tempo letal médio para 8 isolados, com maior porcentagem de mortalidade confirmada. A compatibilidade em laboratório foi observada adicionando os produtos químicos ao meio de cultura BDA, foi inoculado com o fungo em três pontos equidistantes da placa de Petri, a qual foi mantida em câmara climatizada tipo BOD por um período de sete dias. Após esse período, foram avaliados o crescimento vegetativo, esporulação, viabilidade do entomopatógeno. Em ensaios de laboratório, todos os produtos afetaram o desenvolvimento dos fungos e foi possível classificar os produtos como moderadamente tóxico, tóxico e compatível. In 2004 it has been reported the presence of HLB, also known as "greening", in citrus orchards at São Paulo state. In Brazil, this disease is caused by bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus and Candidatus Liberibacter americanus, which are transmitted by the psyllid-of-citrus Diaphorina citri. The main way to control the disease is through the control of the insect vector, which is currently carried out using chemicals. The mortality of psyllid adults by entomopathogenic fungi have been observed in the field and studies are being developed, but little is known about the effect of these pathogens in the insect vector control. Thus, we performed a study to determine the pathogenicity of entomopathogenic fungi on adults and nymphs of D. citri in laboratory and semi-field as well as its compatibility with pesticides used in citriculture. Laboratory created nymphs and adults of D. citri were exposed to a constant concentration of the pathogen 6,7x107 conidia/ml and it was observed the mortality of these insects. Through this mortality it was determined the median lethal time for 8 isolates, confirmed with the best mortality percentage. Laboratory compatibility was observed by incorporating chemicals to PDA culture medium which, after solidification, were inoculated with the fungus at three equidistant points of the Petri dish, which was kept in BOD chamber for a period of seven days. After this period, its vegetative growth, sporulation, viability of the pathogen has been evaluated. It has been observed in laboratory that all products affected the development of the fungi and it was possible to classify products as moderately toxic, toxic and compatible.

O psilídeo-asiático-dos-citros, Diaphorina citri, por ser o vetor da bactéria Candidatus Liberibacter spp., está associado a mais importante doença da cultura cítrica da atualidade, o Huanglongbing (HLB), e tem impactado negativamente na produção de citros em vários países no mundo, inclusive no Brasil. D. citri assumiu o status de praga-chave da citricultura nacional por ser o principal vetor da Huanglongbing (HLB) – doença registrada no Brasil no ano de 2004 –, e por possuir alta capacidade de transmitir bactérias a ela associadas. Há registro da incidência do psilídio-asiático-dos-citros, D. citri, em seis Estados brasileiros: São Paulo, Minas Gerais, Paraná, Rio de Janeiro, Bahia, Rio Grande do Sul e Roraima. No entanto, a presença da doença Huanglongbening (HLB), transmitida pelo D. citri, foi detectada em apenas três destes Estados: São Paulo, Minas Gerais e Paraná. Nesse contexto, o presente trabalho teve como objetivo estudar a ocorrência de D. citri em áreas citrícolas do Estado de Goiás, analisar a flutuação populacional e verificar a presença de Candidatus Liberibacter spp. por meio de sua detecção no vetor, visando melhorar as estratégias relacionadas ao seu manejo. Para tanto, foram realizados levantamentos, por meio de armadilhas adesivas e inspeções visuais, em pomares citrícolas comerciais, situados nas mesorregiões goianas: sul, centro, leste e nordeste, de fevereiro de 2012 a abril de 2014. Os adultos capturados foram analisados por meio de PCR para detcção de Ca. Liberibacter spp. e também foi realizado o estudo da flutuação populacional de D. citri. Registra-se a ocorrência de Diaphorina citri em Goiás nos municípios de Água Fria de Goiás, mesorregião nordeste, Pirenópolis, mesorregião leste, e Santa Izabel, mesorregião centro, em baixa densidade. Os hospedeiros em que houve detecção do psilídeo foram: tangerina Ponkan (Citrus reticulata Blanco), laranja-pera (Citrus sinensis L. Osbeck), laranja-natal (Citrus sinensis L. Osbeck) e limão Tahiti (Citrus x limon). Não houve detecção de Candidatus Liberibacter, sendo assim, mantêm-se o Estado como área indene de Huanglongbing (HLB). O pico populacional de adultos e/ou ninfas de D. citri ocorrem em meados da primavera e início do verão, com pico populacional em outubro de 2012 e 2013 e fevereiro de 2013, sendo influenciada diretamente pela emissão do fluxo vegetativo das plantas de citrus e pelos componentes climáticos precipitação e temperatura. The Asian citrus psilliyd, Diaphorina citri is the vector of bacteria Candidatus Liberibacter spp. Is associated to the presently most important disease of citrus, Huanglongbing (HLB), and has negatively affected citrus production in countries around the world, including Brazil. D. citri took the key pest status in the nation citrus industry because it is the principal vector of Huanglongbing (HLB), disease recorded in Brazil in 2004, and for its high ability to transmit other bacteria associated to it. There are reports of the incidence of Asian citrus psillid D. citri in six states: São Paulo, Minas Gerais, Paraná, Rio de Janeiro, Bahia, Rio Grande do Sul and Roraima. However the presence of the disease Huanglongbening (HLB), transmitted by D. citri, was detected in three states, only: São Paulo, Minas Gerais and Paraná. The present work was to study the occurrence of D. citri in citrus orchards of Goiás State, analyzing the population dynamics and verify the presence of Candidatus Liberibacter spp. through its detection in the vector, to improve strategies related to its management. To this end, surveys were conducted through sticky traps and visual inspections in commercial citrus orchards, located in Goiás mesoregions: south, central, east and northeast, from February 2012 to April 2014. The adults captured were analyzed by PCR for detcção Ca. Liberibacter spp. and was also carried out the study of population fluctuation of D. citri. Join the occurrence of Diaphorina citri in Goiás in the municipalities of Agua Fria de Goiás, meso northeast, Pirenópolis, mesoregion east, and Santa Izabel, central region, in low density. The hosts where there was detection of the psyllid were ponkan mandarin (Citrus reticulata Blanco), orange-pear (Citrus sinensis L. Osbeck), orange-natal (Citrus sinensis L. Osbeck) and Tahiti lime (Citrus x limon). There was no detection of Candidatus Liberibacter, therefore, keep the state as harmless area Huanglongbing (HLB). The population peak of adults and / or nymphs of D. citri occur in mid-spring and early summer, with population peak in October 2012 and 2013 and February 2013, being directly influenced by the issue of the growing flow of citrus plants and by climatic precipitation and temperature parameters. Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG

O Huanglongbing (HLB) é uma séria doença incurável, que traz grande prejuízo aos citricultores. No Brasil, o psilídeo Diaphorini citri é o principal inseto-vetor, o qual adquire a bactéria causadora do HLB ao se alimentar de plantas infectadas. Este trabalho apresenta um modelo baseado no indivíduo para analisar a dinâmica espaço-temporal da transmissão do HLB em um pomar de citros. As simulações indicam que a simples remoção de plantas contaminadas sintomáticas é uma prática insuficiente para controle da doença Trabalho apresentado no 35º Congresso Nacional de Matemática Aplicada e Computacional, Natal, 2014.

A citricultura é uma das principais atividades agrícolas no Brasil, sendo um dos setores mais competitivos e com maior participação no mercado externo. O sistema agroindustrial citrícola movimenta R$ 9 bilhões por ano e gera mais de 400 mil empregos diretos e indiretos (NEVES et al., 2007). Apesar da grandiosidade econômica, pode-se dizer que esta citricultura é bastante vulnerável a ocorrência de doenças, principalmente pelo fato de apresentar: i) baixa variabilidade de variedades copa (‘Pera’, ‘Natal’, ‘Valência’ e ‘Hamlin’ representam 92% da citricultura); ii) baixa variabilidade de variedades porta-enxerto (o limoeiro ‘Cravo’, Citrus limonia Blanco, representa mais de 85% dos porta-enxertos utilizados); iii) ausência de descontinuidade temporal de plantas cítricas (por tratar-se de cultura perene, as plantas estão expostas a infecções e ataques de insetos por longo período de tempo); iv) plantios contínuos, sem barreiras físicas e com intenso tráfego de pessoas (áreas contínuas ou próximas, com aproximadamente 500 mil hectares). Dentre os problemas fitossanitários da cultura dos citros, duas doenças são limitantes, o Huanglongbing (ex greening dos citros, ou HLB), e a Clorose Variegada dos Citros (CVC), ou amarelinho. Essas doenças têm grande importância por causarem significativos danos à produção, por aumentarem o custo de produção e por serem disseminadas por insetos vetores. A morte súbita dos citros (MSC), já foi considerada uma grande ameaça para a citricultura brasileira, mas sua ocorrência restringe-se às regiões norte e noroeste de São Paulo e sul do Triângulo Mineiro, em Minas Gerais. No entanto, pela alta intolerância do limoeiro ‘Cravo’ à MSC, principal porta-enxerto no Brasil, segue como uma doença em potencial para a citricultura (GIMENES-FERNANDES et al., 2002). Portanto, um panorama sobre a situação dessas doenças, particularmente em São Paulo, é importante para o planejamento de novos plantios e estratégias de manejo ou controle das mesmas. info:eu-repo/semantics/publishedVersion

Universidade Federal de Minas Gerais This research aimed to study the activity of the HLB's scouts, workers whose function is to identify symptomatic plants, in order to understand the physical constraints, cognitive and organizational involved in accomplishing the task, characterizing the operative approach used to identify diseased plants, and to elucidate what aspects hinder the identification of symptoms. The method adopted for the research was the Ergonomic Analysis of Work EAW (Güérin et al., 2001). The results, after validation with the operators and management, allowed understanding the complex relationships between the physical, cognitive and organizational aspects present on activity. Major difficulties were observed mainly in relation to the disposal of the scouts on the platforms and in relation to working hours, at the beginning and end of the journey. Important findings have highlighted strategies, unknown by the organization, used by scouts to locate candidates‟ trees to the fine analysis of investigation of symptoms. In conclusion, the analysis enable to understand the constraints and find technical and organizational solutions to the survey work on citrus groves as well as it showed signs and symptoms not investigated yet or rarely considered by researchers involved on searches aimed at increasing the ability to diagnose the disease in the field. Esta pesquisa teve como objetivo estudar a atividade dos inspetores de HLB, trabalhadores cuja função é identificar plantas contaminadas por HLB, a fim de entender os constrangimentos físicos, cognitivos e organizacionais envolvidos na realização da tarefa, caracterizar as estratégias operatórias utilizadas para identificar as plantas doentes, e elucidar quais os aspectos dificultam a identificação de sintomas. O método adotado para a pesquisa foi a Análise Ergonômica do Trabalho - AET (Güèrin et al., 2001). Os resultados, após a validação com os operadores e gestão, permitiu a compreensão das intrincadas relações entre os aspectos físicos, cognitivos e organizacionais presentes na atividade. Maiores dificuldades foram observadas principalmente em relação à disposição dos inspetores nas plataformas e em relação ao horário de trabalho, no início e no fim da jornada. Achados importantes destacaram estratégias, desconhecidas pela organização, usadas pelos inspetores para localizar plantas candidatas para a análise fina de verificação dos sintomas. Em conclusão, a análise permitiu compreender os constrangimentos e encontrar soluções técnicas e organizacionais para o trabalho de inspeção em pomares de citros, bem como mostrar sinais e sintomas não investigados ainda ou raramente considerados pelos pesquisadores envolvidos em estudos que visam aumentar a capacidade de diagnóstico da doença no campo.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-11-27Bitstream added on 2014-06-13T19:54:03Z : No. of bitstreams: 1 sousa_mc_me_jabo.pdf: 1262141 bytes, checksum: 754a27f31e87b5e771e534235e7eb0a7 (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A severidade dos sintomas provocados pelo Huanglongbing (HLB) ou Greening, a rápida progressão na incidência de plantas afetadas nos pomares e o fato de esta doença afetar indistintamente todas as variedades comerciais de citros, contribuíram para este estudo que visou conhecer o padrão de colonização da bactéria Candidatus Liberibacter americanus (Lam) e Candidatus Liberibacter asiaticus (Las) em plantas cítricas. O PCR convencional é o teste atualmente utilizado na diagnose. Apesar de ser uma técnica reconhecidamente sensível, para o caso do HLB tem sido apenas confirmatório, ou seja, somente permite detecção da presença da bactéria em amostras de folhas sintomáticas. Surgiram aprimoramentos da técnica de PCR, como é o caso do Nested PCR e o PCR quantitativo (qPCR), demonstrado neste trabalho ser o método empregado mais sensível que o PCR convencional. Assim, através deste estudo pode-se concluir que Las e Lam se concentraram prioritariamente nas partes com sintomas de HLB das plantas de campo, naturalmente inoculadas e infectadas por liberibacter, se diferenciando na média do número estimado de cópias de liberibacter por grama de folha de plantas afetadas, sendo Las com 5,63 contra 5,01 em plantas afetadas por Lam (título bacteriano). A proporção de amostras positivas para Lam foram de 21 (19%) contra 12 (11,2%) amostras positivas para Las. A maior parte das amostras foi negativa para ambas as liberibacters (96 – Las e 90 – Lam). O pequeno acréscimo nos resultados positivos obtido pelo método de qPCR, aliado ao seu alto custo, não justifica a substituição do PCR convencional por este método na diagnose laboratorial do HLB, ficando restrito somente a pesquisa The degree of severity of the symptoms developed by Huanglongbing (HLB) or Greening, the fast incidence of diseased plants at different orchards and the fact that this phytopathogen affects various commercial citrus varieties have contributed to the proposition of the present work, that aimed to know the colonization pattern developed by the bacteria Candidatus Liberibacter americanus (LAM) and Candidatus Liberibacter asiaticus (LAS) on citrus plants. The conventional PCR is the current used assay to detect HLB. Besides being a sensitive and specific technique it is currently seen and a molecular technique that confirms the already symptomatic leaves of diseased plants. Improvements of the PCR technique named the Nested PCR and the quantitative PCR is described in this work as the most sensitive to detect the phytopathogen prior to the development of the symptoms disease. So, based on the results obtained in this work it was possible to conclude that LAS and LAM concentrate showed a tendency to appear mostly on parts of the plants exhibiting symptoms and that are already infected by these bacteria, showing difference when mean number of copies of liberibacter per g of leaf of infected plants, with LAS value of 5.63 as compared to 5.01 for LAM on plants with LAM detectable symptoms (high bacterial titer). The ratio of LAM positive samples was 21 (19%) against 12 (11.2%) positive for LAS. The majority of the samples were detected as negative for both bacteria (96% for LAS and 90% for LAM). The small increase on the positive results obtained when qPCR was used and considering its present high analysis cost, this type of PCR is not seen as adequate to diagnose LAM or LAS

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-17Bitstream added on 2014-06-13T19:42:20Z : No. of bitstreams: 1 costa_mg_dr_jabo.pdf: 593237 bytes, checksum: c4ff5532bce6b9238c25a14825e6e60c (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) O psilídeo Diaphorina citri Kuwayama tornou-se nos últimos anos, uma das mais importantes pragas na cultura de citros, principalmente pelos prejuízos causados às plantas devido à transmissão da bactéria causadora da doença Huanglongbing (HLB) ou Greening. Com a finalidade de estudar a distribuição espacial de ninfas e adultos desta praga, instalou-se um experimento em 2 áreas de citros com histórico de ocorrência de HLB, no município de Matão, região central do Estado de São Paulo, uma com plantas de 4 anos e outra com plantas de 12 anos de idade. Para estudo da agregação da população nas plantas, foram utilizados os seguintes índices de dispersão: razão variância/média (I), índice de Morisita (Id), coeficiente de Green (Cx) e expoente k da distribuição binomial negativa para cada amostragem. A distribuição binomial negativa foi o modelo mais adequado para representar a distribuição espacial do psilídeo na cultura de citros, tanto para ninfas como para adultos. Através da análise destes índices, verificou-se que, na maioria das amostragens, as ninfas encontradas nas brotações e os adultos capturados nas armadilhas apresentaram distribuição agregada. Foram desenvolvidos planos de amostragem seqüencial para ninfas e adultos em região com e sem HLB, e os números máximos de amostras esperados para se tomar a decisão foram de 264 e 83 para ninfas, em regiões com e sem a doença, e de 184 e 150 amostras para adultos, em regiões com e sem a doença. The psyllid Diaphorina citri Kuwayama is one of the most important pests of citrus, mostly because of plant damage due to transmission of the bacterium that causes Huanglongbing (HLB) or Greening disease. The experiment was carried out in 2 sweet orange orchards with previous HLB occurrence in Matão (central region of the State of São Paulo, Brazil), in plants with 4 and 12 years of age, in order to study the spatial distribution of nymphs and adults of this pest. The following dispersion indices were used to study pest aggregation in the citrus plants: variance/mean relationship (I), index of Morisita (Id), coefficient of Green (Cx), and the k exponent of negative binomial distribution for each sampling. The negative binomial distribution was the most representative spatial distribution of this psyllid in citrus, for both nymphs and adults. The analysis of these indices showed that, for most samplings, psyllid nymphs found in branches and adults caught in traps presented an aggregated distribution. Sequential sampling plans were developed for nymphs and adults in regions with and without HLB, and the maximum number of samples for decision making was 264 and 83 samples for nymphs in regions with and without the disease, and, 184 and 150 samples for adults, in regions with and without the disease, respectively.