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Submitted by Mariana Rillo Sato (mari_sato_@hotmail.com) on 2020-10-27T19:07:55Z No. of bitstreams: 2 TESE PARCIAL FINAL ENTREGUE - MARIANA RILLO SATO.pdf: 2732250 bytes, checksum: 4cc1b40ef5936cf487c551ede38422c7 (MD5) TESE FINAL INTEGRAL ENTREGUE - MARIANA RILLO SATO.pdf: 8151565 bytes, checksum: ecdb4916a9cf97a305039bf15df9fb1e (MD5) Approved for entry into archive by Maria Irani Coito (irani@fcfar.unesp.br) on 2020-10-27T19:48:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sato_mr_dr_arafcf_par.pdf: 2777263 bytes, checksum: e8a4a568713d4295f5b6dd2039aba4f9 (MD5) Made available in DSpace on 2020-10-27T19:48:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sato_mr_dr_arafcf_par.pdf: 2777263 bytes, checksum: e8a4a568713d4295f5b6dd2039aba4f9 (MD5) Previous issue date: 2020-01-30 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) A candidíase vulvovaginal (CVV) é uma infecção fúngica causada tipicamente por Candida albicans, a qual apresenta resistência aos fármacos utilizados no tratamento. Carreadores lipídicos nanoestruturados (CLN) com hipericina (HIP) encapsulada dispersos em hidrogéis (HG) de geleificação in situ demonstram ser uma opção interessante para viabilizar o tratamento da CVV, associada a métodos alternativos, como a terapia fotodinâmica (TFD). Este trabalho visa avaliar o potencial dos CLN com e sem HIP encapsulada dispersos em HG, associados à TFD para administração vaginal. Os CLN sem (F6.5) e com HIP encapsulada (F6.5_0,05, F6.5_0,25 e F6.5_0,5) foram obtidos por sonicação a 35% de amplitude por 5min, contendo poloxamer 407 e na fase oleosa, estearato de polioxietileno, triglicérides do ácido cáprico/caprílico, óleo de rícino hidrogenado, etoxilado e/ou HIP. Os HG foram constituídos de poloxamer 407 e quitosana, sendo acrescidos de CLN com e sem HIP encapsulada em diferentes proporções de CLN:HG dando origem às formulações CLN_HIP-HG1, CLN_HIP-HG2, CLN_HIP-HG3, CLN_HIP-HG4 e CLN_HIP-HG5. Os sistemas F6.5, F6.5_0,05, F6.5_0,25 e F6.5_0,5 caracterizados por espalhamento de luz dinâmico, apresentaram diâmetros nanométricos com baixa polidispersão, e revelaram excelente estabilidade física. A formulação F6.5 apresentou na análise de rastreamento de nanopartículas distribuição unimodal com predominância de partículas de 151 nm. Na microscopia eletrônica de transmissão foram observadas partículas de morfologias praticamente esféricas e em escalas nanométricas. A eficiência de encapsulação da HIP foi de 89,3%. A microscopia eletrônica de varredura dos HG acrescidos de CLN com HIP encapsulada obtidos em diferentes proporções, revelou valores médios de rugosidade superficial sem diferença estatística entre os sistemas. A reologia contínua mostrou que praticamente todos os sistemas tiveram um comportamento Newtoniano; enquanto na reologia oscilatória a maioria dos sistemas apresentou valores de G’ superiores a G’’, com exceção de CLN_HIP-HG1. O HG livre e os sistemas CLN_HIP-HG1 e CLN_HIP-HG2 apresentaram satisfatórias propriedades mucoadesivas, além de valores de seringabilidade que comparados a relatos da literatura podem conferir a facilidade de estes serem aplicados na via vaginal. O ensaio de calorimetria exploratória diferencial evidenciou eventos endotérmicos com picos similares e característicos a componentes presentes nas formulações. Os dois métodos analíticos validados para quantificar a HIP (HIP solubilizada em metanol e HIP na solução receptora composta de meio tampão fosfato com 3% de Tween 80) mostraram-se condizentes aos valores preconizados pela ANVISA. O perfil de liberação in vitro da HIP liberada a partir de CLN_HIP-HG1, indicou comportamento de liberação sustentada do composto ativo durante as 12h de análise, e que os principais mecanismos de liberação seguem os modelos de Peppas e de Higuchi. Tais sistemas não apresentaram permeação na mucosa vaginal suína, além de baixos valores de retenção. Os CLN com e sem HIP encapsulada dispersos ou não em HG revelaram potente ação antifúngica frente à cepa de C. albicans ATCC 10231 e comportamento fungistático frente à levedura. Os CLN com e sem HIP encapsulada dispersos ou não em HG, tratados com TFD, reduziram significativamente as culturas planctônicas de C. albicans variando de aproximadamente 1 a 2 log10 (UFC/mL) comparados ao YNB; enquanto a TFD mediada pelos sistemas F6.5_0,05 e CLN_HIP-HG1 apresentaram diminuições na viabilidade do biofilme de C. albicans de 2 e 1,2 log10 (UFC/mL), respectivamente, em relação ao PBS. Na análise de SOSG, a solução de HIP livre, bem como os CLN com HIP encapsulada dispersos em HG foram capazes de fornecer efetivamente oxigênio à solução de metanol. Na análise antifúngica in vivo associada ou não à TFD, o antifúngico e os grupos tratados com TFD apresentaram uma predominância de células fúngicas de diferentes tamanhos, além disso, CLN_HIP-HG1/TFD se destacou entre os grupos tratados com TFD obtendo uma melhora significativa do perfil terapêutico comparado ao grupo infectado. Assim, os resultados evidenciaram o potencial antifúngico dos sistemas in situ para a administração vaginal da HIP demonstrando serem capazes de contribuir no tratamento da CVV. Vulvovaginal candidiasis (VVC) is a fungal infection typically caused by Candida albicans, which is resistant to the drugs used in the treatment. The hypericin (HYP)- loaded nanostructured lipid carrier (NLC) dispersed in situ hydrogels (HG) proves to be an interesting option for the treatment of VVC, associated to alternative methods such as photodynamic therapy (PDT). This work aims to evaluate the potential of HYPloaded and empty NLC or NLC dispersed in the HG, associated to PDT for vaginal administration. The empty NLC (F6.5) and HYP-loaded NLC (F6.5_0.05, F6.5_0.25 and F6.5_0.5) and were obtained by sonication at 35% amplitude for 5min, containing poloxamer 407 the aqueous phase and in the oil phase, polyoxyethylene stearate, capric/caprylic acid triglycerides, ethoxylated hydrogenated castor oil and/or HYP. The HG were composed of poloxamer 407 and chitosan, being incorporated into HYPloaded and empty NLC in different proportions of NLC:HG giving rise to formulations NLC_HYP-HG1, NLC_HYP-HG2, NLC_HYP-HG3, NLC_HYP-HG4 and NLC_HYPHG5. The F6.5, F6.5_0.05, F6.5_0.25 and F6.5_0.5 systems, characterized by dynamic light scattering, presented nanometric diameters with low polydispersity and showed excellent physical stability. Formulation F6.5 showed unimodal distribution in the nanoparticle screening with predominance of 151 nm particles. Transmission electron microscopy showed particles of practically spherical morphologies and nanometric scales. The HYP encapsulation efficiency was 89.3%. Scanning electron microscopy of the HG and HYP-loaded NLC in different proportions of NLC:HG, revealed average values of surface roughness without statistical difference between the systems. Continuous rheology showed that all systems had Newtonian behavior; while in oscillatory rheology most systems showed G’ values higher than G’’, except of NLC_HYP-HG1. The HG and the NLC_HYP-HG1 and NLC_HYP-HG2 systems showed satisfactory mucoadhesive properties, in addition to syringability values that, compared to reports in the literature, showed their ease of application in the vaginal route. Differential scanning calorimetry showed endothermic events with similar peaks and characteristics to components present in the formulations. Two analytical methods were validated to quantify the HYP (HYP solubilized in methanol and HYP in the receiving solution of phosphate buffered medium with 3% Tween 80), being consistent with the values recommended by ANVISA. The in vitro release profile of HYP released from NLC_HYP-HG1, indicated a sustained drug release behavior during the 12h of analysis, and that the main release mechanisms follow the Peppas and Higuchi models. Such systems showed no permeation in the porcine vaginal mucosa, in addition to low retention values. The NLC with encapsulated HYP dispersed or not in HG, showed potent antifungal action against the strain of C. albicans ATCC 10231 and fungistatic behavior against yeast. The HG incorporated into HYP-loaded and empty NLC in different proportions, treated with PDT, significantly reduced the planktonic cultures of C. albicans ranging from approximately 1 to 2 log10 (CFU/mL) compared to YNB; while the PDT mediated by the F6.5_0.05 and NLC_HYP-HG1 systems showed decreases in the viability of the C. albicans biofilm of 2 and 1.2 log10 (CFU/mL), respectively, in relation to the PBS. In the SOSG analysis, the free HYP solution, as well as the HYP-loaded NLC dispersed in HG were able to effectively supply oxygen to the methanol solution. In the in vivo antifungal analysis associated or not with PDT, the antifungal and groups treated with PDT showed a predominance of fungal cells of different sizes, in addition, NLC_HYP-HG1/PDT stood out among the groups treated with PDT, obtaining a significant improvement in the therapeutic profile compared to the infected group. Thus, the results showed the antifungal potential of in situ systems for the vaginal administration of HYP, demonstrating that they are capable of contributing to the treatment of VVC. FAPESP: 2016/11198-4

Orientadora: Profª. Dra Fernanda Dias da Silva Coorientador: Prof. Dr. Anderson Orzari Ribeiro Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, Santo André, 2020. O surgimento de uma grande variedade de fungos patogenicos resistentes aos antifungicos convencionais como, por exemplo, a especie Cryptococcus gattii, causadora da criptococose, tem resultado tanto no aumento do indice de doencas quanto no aumento do indice de mortalidade. Assim, torna-se urgente a necessidade de desenvolver novos procedimentos e buscar novas moleculas a fim de melhorar a terapia contra infeccoes fungicas. Muitos estudos tem demonstrado o uso da terapia fotodinamica (TFD) em patologias relacionadas a microrganismos, o que a torna uma alternativa promissora no combate a infeccoes causadas por fungos. Neste trabalho, avaliamos o efeito da TFD contra a levedura Cryptococcus gattii, utilizando o fotossensibilizador (FS) hipericina nas concentracoes de 10, 5, 2,5, 1, 0,1 e 0,01 £gM, com doses de luz a 28,8 e 57,6 J/cm2. Alem disso, tambem avaliamos a toxicidade da hipericina nao irradiada. Foram realizados ensaios liquidos de inibicao de crescimento e ensaios de viabilidade atraves do metodo de diluicao em trilha para contagem do numero de UFC/mL. Com os dados analisadode dessa molecula contra C. gattii em ensaios in vitro e seu potencial para tratamentos in vivo sozinha ou associada a outras drogas. The emergence of a wide variety of pathogenic fungi resistant to conventional antifungals such as, for example, the species Cryptococcus gattii, which causes cryptococcosis, has resulted in both an increase in the disease rate and an increase in the mortality rate. Thus, there is an urgent need to develop new procedures and search for new molecules in order to improve therapy against fungal infections. Many studies have demonstrated the use of photodynamic therapy (PDT) in pathologies related to microorganisms, which makes it a promising alternative to fight infections caused by fungi. In this work, we evaluated the effect of PDT against the yeast Cryptococcus gattii, using the photosensitizer (PS) hypericin in concentrations of 10, 5, 2.5, 1, 0.1 and 0.01 ìM, with light doses at 28, 8 and 57.6 J / cm2. In addition, we also assessed the toxicity of non-irradiated hypericin. Liquid growth inhibition tests and viability tests were carried out using the track dilution method for counting the number of CFU / mL. With the data analyzed, it is possible to conclude that hypericin has high toxicity against yeast at concentrations of 10, 5 and 2.5 ìM even without PDT. In addition, the activity of hypericin at concentrations of 5 and 2.5 ìM was enhanced in the presence of light, which demonstrates the versatility of the activity of this molecule against C. gattii in in vitro tests and its potential for in vivo treatments alone or associated with other drugs.

Submitted by Patricia Rocha de Araújo (patriciarocha39@hotmail.com) on 2018-10-15T01:56:34Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Patricia Rocha out 2018.pdf: 3514360 bytes, checksum: 9b0fea77694a33ed0ae69da788c5a4a2 (MD5) Approved for entry into archive by Maria Irani Coito (irani@fcfar.unesp.br) on 2018-10-16T20:37:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 araujo_pr_me_arafcf.pdf: 3514379 bytes, checksum: dffaf731be630bbca5063c79b406b6ae (MD5) Made available in DSpace on 2018-10-16T20:37:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 araujo_pr_me_arafcf.pdf: 3514379 bytes, checksum: dffaf731be630bbca5063c79b406b6ae (MD5) Previous issue date: 2018-09-20 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A candidíase vulvovaginal (CVV) é uma doença causada por espécies do gênero Candida spp. no trato genital inferior feminino que afeta um grande número de mulheres em todo mundo. Porém o uso sistêmico de fármacos causa muitas reações adversas e as formulações tópicas possuem um baixo tempo de retenção na mucosa vaginal devido à diluição dos sistemas na cavidade vaginal. Esse estudo propõe uma terapia antifúngica alternativa empregando sistemas precursores de cristais líquidos mucoadesivos (SPCLM) para a liberação de hipericina (HIP), um potente fotossensibilizador isolado de plantas do gênero Hipericum com e sem o emprego da terapia fotodinâmica (TFD). O sistema visa aumentar o tempo de permanência da formulação, bem como reduzir o número de aplicações e a quantidade de fármaco empregada. O emprego da TFD, por sua vez, se faz como uma forma de diminuir a resistência pelos microrganismos. Observou-se a formação de sistemas isotrópicos no sistema constituído por 30% da fase oleosa constituída por ácido oleico e colesterol na razão de 7:1, 40% de Procetyl AWS como tensoativo e 30% de uma dispersão de poloxamer à 16% empregando as técnicas de microscopia de luz polarizada e espalhamento de raios-X a baixo ângulo. Após a introdução de três diferentes concentrações de fluido vaginal simulado FVS (30, 50 e 100%), as formulações resultantes passaram a apresentar anisotropia e picos característicos de fase lamelar. Análises das propriedades mecânicas, reológicas e mucoadesivas das formulações indicaram que a organização e a mucoadesão dos sistemas aumentaram à medida que a quantidade de FVS aumentou. Os ensaios de validação da metodologia analítica para quantificação de HIP indicaram que o método é aceitável segundo agências regulatórias. Os testes de liberação in vitro demonstraram perfil de liberação sustentada da HIP provavelmente devido à sua alta afinidade pelos componentes da fase oleosa dos sistemas de liberação. Além disso, os SPCLM causaram aumento da retenção e baixa permeação da HIP em mucosa suína. Ensaios microbiológicos indicaram que a HIP é um agente eficaz para inativação das leveduras de Candida albicas com emprego da TFD, porém os SPCLM com HIP não potencializaram a ação antifúngica deste composto, possivelmente devido ao longo período necessário para sua liberação. Os testes de citotoxicidade indicaram que todas as formulações apresentam baixa toxicidade, porém os sistemas com hipericina incorporada apresentaram maior toxicidade para células tumorais L292. Ensaios in vivo do sistema em modelo de CVV são necessários para comprovar a viabilidade do sistema desenvolvido. Vulvovaginal candidosis (VVC) is a disease induced by Candida strains in the female genital tract that affects a great number of women worldwide. However, systemic drugs cause many adverse reactions. Also, currently employed topical dosage forms present low retention times due to their dilution in vaginal fluids. This study proposes an alternative antifungal therapy through the development of liquid crystalline precursor systems (LCPS) for hypericin release, a potent photosensitizer isolated from Hipericum plants with and without photodynamic inactivation (PDI). The developed system aims to increase the residence time of the formulations, as well as decrease the number of applications and the amount of drug. Photodynamic therapy was used to reduce microorganism resistance. Polarized light microscopy and Small-Angle X-Ray Scattering confirmed the formation of an isotropic system composed of 30% of oil phase containing oleic acid and cholesterol in (ratio of 7:1). After addition of three different concentrations of simulated vaginal fluid -SVF (30, 50 and 100%), the resultant formulations presented anisotropy and characteristic peaks of lamellar phases. Mechanical, rheological and mucoadhesive assays indicated the formation of long-range ordering systems as the amount of SVF increased. Drug validation assays indicated that the method is aceptable for hypericin quantification according to regulatory agencies. In vitro drug release assays exhibited a sustained release profile probably due to the high affinity between HIP and the oily phase components. In addition, the LCPS lead to poor permeability and enhanced retention of HIP in the porcine mucosa. Microbiological assays pointed out that HIP effectively inactivated Candida albicans yeasts with PTD, however the HIP loaded LCPS did not potentiate the antifungal activity of HIP, probably due to the long period for HIP release. Cytotoxic tests indicated that all formulations presented low toxicity, however the HIP loaded presented higher toxicity to L292 tumor cells. In vivo assays should be performed to confirm the viability of the developed system. 001

Orientador: Prof. Dr. Anderson Orzari Ribeiro Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia/Química, 2017. No presente trabalho apresentamos a sintese e caracterizacao do fotossensibilizador hipericina e alguns de seus sais hipericinato, bem como o estudo de sua atividade fotodinamica in vitro em celulas de adenocarcinoma mamario humano. A hipericina sintetizada foi caracterizada por espectroscopia 1H RMN, espectrometria de massas e espectroscopia no infravermelho. As propriedades fotofisicas e fotoquimicas da hipericina e dos hipericinatos foram determinadas por analises dos espectros de absorcao na regiao do UV-Vis, espectros de excitacao e emissao, coeficiente de absortividade molar (¿Ã) e capacidade de geracao de especies reativas de oxigenio atraves da degradacao do DPBF (1,3-difenilbenzofurano). Para os estudos in vitro utilizou-se a linhagem de adenocarcinoma mamario humano (MCF-7) avaliando a toxicidade e fototoxicidade da hipericina e hipericinatos, localizacao celular, capacidade mutagenica e genotoxica, capacidade clonogenica, tempo de captacao celular e identificacao de via de morte celular. Os resultados apresentam indicativos de que os hipericinatos possuem eficiencia relativa superior ao da hipericina na producao de oxigenio singlete, bem como uma menor taxa de agregacao em meio biologico. Ainda, nos ensaios in vitro, foi verificado que a atividade fotodinamica foi maior para os hipericinatos em comparacao com a hipericina, demonstrando que as modificacoes moleculares no composto promovem alteracoes na sua interacao com a linhagem celular estudada. In this study we present the synthesis and characterization of photosensitizers like hypericin and hypericinates and its in vitro photodynamic ativity in human mammary adenocarcinoma cells. The synthesized hypericin was characterized by 1H NMR spectroscopy, mass spectrometry and infrared spectroscopy. The hypericinates were characterized by analysis of absorption spectra in the UV-vis region, excitation and emission spectra, molar absorptivity (å) and reactive oxygen species generation capacity through the degradation of DPBF (1,3-diphenylbenzofuran). For in vitro studies, human mammary adenocarcinoma (MCF-7) lineage was used to evaluate the toxicity and phototoxicity of hypericin and hypericinates, as well as their cell colocalization, mutagenic and genotoxic capacity, clonogenic capacity, time of cellular uptake and path of cell death identification. The results indicated that hypericinates have higher relative efficiency in the production of singlet oxygen than hypericin and lower rate of aggregation in biological medium. Furthermore, in in vitro assays, it was verified that the effectiveness of the photodynamic activity was higher for the hypericinates than hypericin, demonstrating that the molecular modifications in the hypericin macrocycle promotes changes in their interaction with cell line studied.

Orientador: Prof. Dr. Wendel Andrade Alves Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Nanociências e Materiais Avançados, 2016. Estudou-se a conjugação de micro/nanotubos de L,L-difenilalanina (MNTs-FF) com dois tipos de fluoróforo: hipericina (Hyp) e ftalocianinas de zinco (ZnPc), visando aplicação na terapia fotodinâmica. Foram feitas investigações sobre conjugados contendo hipericina organizados em diferentes arranjos cristalinos, uma fase hexagonal (P61) e outra ortorrômbica (P22121). Os resultados obtidos evidenciam uma maior eficiência na geração de espécies reativas de oxigênio (ROS) quando a hipericina está conjugada com MNTs-FF, sendo essa eficácia observada em ambas as fases, porém com melhor resultado para a fase hexagonal. Como mecanismo, foi proposto que a organização induzida pelas estruturas peptídicas e a disponibilidade de um ambiente hidrofóbico na interface de Hyp/peptídeo são fundamentais para incrementar a geração de ROS. Para os conjugados MNTs-FF com ftalocianinas de zinco, foram analisadas as propriedades morfológicas e estruturais. Com a variação dos grupos protetores dos derivados do glicerol presentes nas regiões periféricas das ZnPcs, a morfologia tubular usualmente observada em MNTs-FF muda drasticamente e passa a ser caracterizada por hastes micrométricas. Analisando sua superfície em estudos de alta resolução por AFM, foi perceptível a formação de camadas de fotossensibilizadores e um incremento substancial de rugosidade. Mesmo com a mudança na morfologia do material, a simetria cristalográfica P61, tradicionalmente encontrada em MNTs-FF não-conjugados, é mantida. Ensaios de toxicidade foram realizados em células tumorais mamárias (MCF-7), revelando que a morte celular é maior quando as ZnPcs estão conjugadas com MNTs-FF. Estudos de citometria identificaram que a principal via de morte celular é necrose, com eficiência de cerca 80% para os conjugados MNTs-FF/ZnPc. Esses achados mostram que essa conjugação aumenta a eficiência na geração de ROS dos fotossensibilizadores (Fs) utilizados nesse trabalho, indicando potencial aplicação desses materiais na terapia fotodinâmica. It was studied the conjugation of L,L-diphenylalanine micro/nanotubes (MNTs-FF) with two types of fluorophore: hypericin (Hyp) and zinc phthalocyanines (ZnPc), order application in photodynamic therapy. It was made investigations on conjugates containing hypericin organized into different crystalline symmetries, a hexagonal phase (P61) and an orthorhombic phase (P22121). The results obtained here are evidence for higher efficiency in the generation of reactive oxygen species (ROS) when hypericin appears conjugated to MNTs-FF. This improvement is observed for MNT-FFs organized into both phases; however, efficiency is still higher for self-assemblies exhibiting hexagonal symmetry. As a mechanism, it was proposed that organization induced by peptide structures and availability of a hydrophobic environment in the vicinities of Hyp/peptide interfaces are crucial for boosting the generation of ROS. In conjugates formed between MNTs-FF and ZcPcs, structural and morphological properties were analyzed in detail. It was found that, by varying glycerol moieties in the periphery of ZnPcs, the tubular morphology usually observed in MNTs-FF changes dramatically and is then characterized by micrometer-long sticks with faceted surfaces. High-resolution AFM imaging showed the formation of layers of photosensitizers and substantial increment on the surface roughness. In despite these drastic morphological and surface changes, the crystalline arrangement of peptides within the complexes remained into the hexagonal P61 phase usually found in bare MNTs-FF. Cytotoxocity assays performed on tumoral mammary cells (MCF-7) indicated that cell death upon light irradiation is higher when ZnpCs is conjugated to MNTs-FF. Cytometry assays identified that the main mechanism leading to cell death is necrosis, with effectiveness of about 80% for MNTs-FF/ZnPc. These findings show that this conjugation enhances efficiency in ROS generation by the photosinthesizers used in this work, indicating the potential of these materials for photodynamic therapy.

Estima-se que aproximadamente 25% das drogas prescritas em todo o mundo são oriundas de espécies vegetais. Dentre as plantas com alto potencial medicinal, se destaca o Hypericum perforatum L. (HP), planta herbácea perene, pertencente à família Hypericaceae. Extratos orgânicos e aquosos de HP têm sido utilizados na medicina popular e em testes pré-clínicos para o tratamento e prevenção de diversas doenças através de efeitos nefroprotetores, atividades antioxidante, antifúngica, ansiolítica, antiviral e cicatrizante. Estudos clínicos indicaram que esta espécie pode ser útil no tratamento de desordens originadas do sistema nervoso central, especialmente na depressão unipolar. HP contém, ao menos, dez classes de compostos biologicamente ativos, dentre eles antraquinonas/naftodiantronas, derivados de floroglucinol, flavonoides, biflavonas, xantonas, óleos voláteis, aminoácidos, vitamina C, cumarinas, taninos e carotenoides. Ao mesmo tempo em que os constituintes possuem relevantes efeitos farmacológicos, os mesmos podem prejudicar, por antagonismo farmacocinético (interação com algumas enzimas do citocromo), a eficácia de outros fármacos. Devido a relevante importância do HP como agente terapêutico, ressalta-se a importância do desenvolvimento de novos estudos com o intuito de elucidar questões ainda controversas acerca do extrato de HP, e.g., dose, melhor horário para colheita, padronização dos extratos, e possíveis efeitos tóxicos, podendo assim, definir claramente os riscos e benefícios da utilização desta planta. It is estimated that approximately 25% of prescribed drugs are derived from plant species. Among the plants with high medicinal potential, it highlights the Hypericum perforatum L. (HP), perennial herbaceous plant belonging to the family Hypericaceae. Organic and aqueous extracts of HP have been used in folk medicine and in pre-clinical testing for the treatment and prevention of several diseases through effects nefroprotetores, antioxidant, antifungal, anxiolytic, wound healing and antiviral activities. Clinical studies indicated that this specie can be useful in the treatment of central nervous system disorders, especially to unipolar depression. HP contains at least ten classes of biologically active compounds, including anthraquinones/naftodiantronas, phloroglucinol derivatives, flavonoids, biflavones, xanthones, volatile oils, amino acids, vitamin C, coumarins, carotenoids and tannins. At the same time that the secondary metabolites have important pharmacological effects, they can impair the effectiveness of other drugs by pharmacokinetic antagonism.

Orientadora: Profa Dra Patrícia Dantoni Alnis Bezerra Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Ciência & Tecnologia - Química, 2014. A reação quimiluminescente do sistema peróxi-oxalato (QL-PO) envolve derivados do ácido oxálico e um peróxido. Desde sua descoberta, em 1963, por Chandross, vem sendo muito estudada visando-se o entendimento de seu mecanismo e sua aplicação para diferentes fins. O processo de emissão da reação QL-PO ocorre pela excitação de um fluoróforo através de um mecanismo de transferência eletrônica a partir de um intermediário de alta energia formado na reação. Geralmente os fluoróforos e os ésteres são insolúveis em água e pouco solúveis em meios parcialmente aquosos, necessários em muitas aplicações analíticas. Assim, muitos grupos de pesquisa vêm estudando novos fluoróforos para a reação, além de buscarem formas de contornar problemas de solubilidade, estabilidade do éster e reprodutibilidade aplicando-se tensoativos e ciclodextrinas, possibilitando o trabalho em meios majoritariamente aquosos. Desta forma, neste trabalho, foi estudado o efeito da presença das ciclodextrinas naturais (CDs) sobre os sinais quimiluminescentes da reação entre oxalato de bis-(2,4,6-triclorofenila) (TCPO) e peróxido de hidrogênio (H2O2), em meio parcialmente aquoso tamponado por fosfato (pH 6,00, 7,00 e 8,00) e carbonato (pH 10,4). Avaliou-se, também, a aplicabilidade da hipericina sintética (Hyp) como novo fluoróforo da reação, obtendo-se as melhores condições reacionais e comparando seus resultados aos obtidos com outros fluoróforos. A adição das CDs ao meio reacional foi realizada solubilizando-as em tampão. Na presença de 2,5-difeniloxazol, PPO, como fluoróforo, não se notou influência da presença das CDs sobre os sinais quimiluminescentes. Aplicando-se a fluoresceína, Flu, observou-se que em meio de tampão fosfato, pH 6,00, há aumento de Imax em 29,5% com gama-CD e supressão da Área em 95,6% com beta-CD. Quando estudados o nível de acidez e a natureza do tampão, os melhores resultados foram obtidos em meio de tampão fosfato pH 8,00. Estudando-se os espectros de absorção e fluorescência da Flu e da Hyp em meio parcialmente aquoso, tamponado e na presença de CDs, não se verificou interação entre o fluoróforo e as CDs, explicando-se a não influência da presença das CDs sobre os sinais quimiluminescentes. A avaliação da Hyp como fluoróforo foi iniciada por meio de sua caracterização espectrofotométrica, obtendo-se espectros de absorção, fluorescência e quimiluminescência, comprovando que a Hyp é a espécie emissora do sistema. Um estudo de estabilidade mostrou que a solução da Hyp pode ser armazenada por 50 dias, ao abrigo da luz e em congelador. Avaliando-se os efeitos dos tampões e das concentrações de cada reagente, obteve-se melhores resultados com tampão fosfato pH 8,00, TCPO 1,3x10-4 mol L-1, Hyp 1,3x10-5 mol L-1 e H2O2 8,9x10-5 mol L-1. Comparando-se a Hyp a outros fluoróforos, obtiveram-se intensidade e rendimento quântico fluorescente baixos nas condições reacionais, bem como sensibilidade para quantificação de H2O2 inferior a de outros fluoróforos. No entanto, quando determinado o rendimento quântico quimiluminescente, a Hyp apresentou o melhor resultado comparado aos demais, indicando uma limitação instrumental devido à baixa sensibilidade da fotomultiplicadora para o comprimento de onda de emissão da Hyp. Porém, esta importante substância com fins terapêuticos apresentou resultados positivos quando aplicada na reação QL-PO e abre perspectivas de novos estudos nesta área. The chemiluminescent reaction of peroxyoxalate system (PO-CL) involves oxalic acid derivatives and a peroxide. Since its discovery, in 1963, by Chandross, it has been much studied in order to understand its mechanism and its application for different purposes. The process of issuing the PO-CL reaction is achieved by the excitement of a fluorophore through a mechanism of electron transfer from a high-energy intermediate formed in the reaction. Usually the fluorophores and the esters are insoluble in water and poorly soluble in partially aqueous medium, necessary in many analytical applications. Thus, many research groups are studying new fluorophores for the reaction and seeking ways to circumvent problems of solubility, stability of the ester and reproducibility by applying surfactants and cyclodextrins, thus making it possible to work in mostly aqueous medium. In this way, in this work, the effect of the presence of the natural cyclodextrins (CDs) on the chemiluminescent signals of the reaction between oxalate of bis-(2,4,6-trichlorophenyl) oxalate (TCPO) and hydrogen peroxide (H2O2), in partially aqueous medium and in the presence of phosphate (pH 6.00, 7.00 and 8.00) and carbonate (pH 10.4) buffers was studied. The applicability of synthetic hypericin (Hyp) as a new fluorophore of the reaction was also evaluated, obtaining the best reactional conditions and comparing its results to those obtained with other fluorophores. The addition of the CDs to the reaction medium was performed solubilizing them in buffer. In the presence of 2,5-diphenyloxazole, PPO, as fluorophore, the influence of the presence of CDs on the chemiluminescent signals wasn¿t noticed. Applying the fluorescein, Flu, it was observed that with phosphate buffer, pH 6,00, there is an increase of Imax in 29.5% with gamma-CD and suppression of Area in 95.6% with beta-CD. On studying the acidity level and the nature of the buffer, the best results were obtained in a phosphate buffer solution with pH 8.00. Studying the absorption and fluorescence spectras of Flu and Hyp in partially aqueous medium, buffered and in the presence of CDs, it was verified that there is no interaction between the fluorophore and the CDs under the working conditions, explaining the lack of influence of the presence of CDs on the chemiluminescent signals. The evaluation of Hyp as fluorophore was initiated through its spectrophotometric characterization, obtaining absorption, fluorescence and chemiluminescence spectra, proving that Hyp is the emitting species of the system. A stability study showed that Hyp¿s solution can be stored for 50 days, away from light and in freezer. Evaluating the effects of buffers and concentrations of each reagent, the best results were obtained with phosphate buffer pH 8.00, TCPO 1,3x10-4 mol L-1, Hyp 1,3x10-5 mol L-1 and H2O2 8,9x10-5 mol L-1. Comparing the Hyp to other fluorophores, there were obtained low intensity and fluorescent quantum yield in the reactional conditions, as well as sensitivity to quantification of H2O2 lower than other fluorophores. However, on determining the chemiluminescent quantum yield, the Hyp presented the best result compared to the others, indicating an instrumental limitation due to the low sensitivity of the photomultiplier at the emission wavelength of the Hyp. However, this substance ¿ important as it is for therapeutic purposes ¿, exhibited positive results when applied to PO-CL reaction, opening prospects for further studies in this area.

A erva-de-São-João é uma planta medicinal empregada no tratamento antidepressivo. A hipericina é considerada um dos compostos que contribui para o efeito medicinal da planta. Uma vez que a concentração e a quantidade do princípio ativo pode ser afetada pela nutrição das plantas, este trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos do pH do solo e da adubação fosfatada sobre o crescimento inicial e a produção de hipericina em erva-de-São-João. O experimento foi realizado em Lages, SC, de julho a dezembro de 2003, em casa de vegetação. Utilizou-se delineamento experimental inteiramente casualizado (fatorial 4 x 3), correspondendo a quatro valores de pH (4,1; 5,5; 6,0 e 6,5) e três doses de P (0, 50 e 100 mg kg-1 de solo), com quatro repetições. Foram cultivadas duas plantas por vaso, em um Cambissolo Húmico Álico. Avaliou-se a produção de massa seca, a altura e o número de ramificações da parte aérea, o número de glândulas escuras nas folhas e a concentração e a quantidade total de hipericina na parte aérea. A produção de massa seca da parte aérea aumentou com a adição de P e, em maior magnitude, com a calagem. A altura das plantas somente foi influenciada pela calagem. O número de ramificações e de glândulas escuras e a concentração de hipericina aumentaram com a aplicação de P apenas na ausência de calagem, e com a calagem na ausência de P. Os maiores conteúdos de hipericina por vaso foram verificados nos tratamentos com pH 6,0 e 6,5 e doses de P de 50 e 100 mg kg-1 de solo. St. Jonh's wort is a medicinal plant used for anti-depressive treatment. Hypericin is considered one of the compounds that contribute to the medicinal effect of the plant. Since the concentration and the total quantity of active ingredients may be affected by plant nutrition, this work was conducted to investigate the effects of soil pH and phosphorus (P) addition to the soil on initial growth and hypericin production of St. John's wort. The experiment was carried out in Lages, SC, from July until December of 2003, in a greenhouse. It followed a completely randomized factorial design (4 x 3), with four levels of pH (4.1, 5.5, 6.0, and 6.5) and three doses of P (0, 50, and 100 mg kg-1 of soil), and four replicates. Two plants were cultivated per pot, under a Humic Inceptisol. Plants were harvested and assessed for aerial dry matter production, height, number of lateral shoots, number of dark glands in the leaves, aerial hypericin content and aerial total hypericin production. The aerial dry matter production increased with P addition and, in a larger amount, with liming. The plant height was only affected by the liming. The number of lateral shoots and dark glands in the leaves as well as the hipericin concentration only increased with P application in the soil without liming, and with liming in the soil that did not receive P. The highest total hypericin production per pot was achieved in the treatments with pH values of 6.0 and 6.5 and P doses of 50 and 100 mg kg-1 of soil.