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Brazil is the world's largest producer of orange and concentrated juice for export. Concentrated juice with high levels of naringin has excessive bitterness, which reduces the quality and value on the market. The debittering can be obtained by using naringinase, an enzymatic complex that degrades naringin. This study reports the production of naringinase by Aspergillus niger 426 utilizing both sugar cane molasses as carbon source and yeast extract as nitrogen source. Naringin was used as inducer. Five nitrogen sources were studied and yeast extract was found as the best one as 225.6 mU/mL of naringinase activity at 120 hours of fermentation was achivied. For optimization of naringinase production it was applied response-surface methodology, with 22 incomplete factorial design. An activity value of 354.26 mU/mL of naringinase was achivied when as independent variables yeast extract (14.0g/L) and naringin (0.2g/L) were used. When applied ultrasound waves at 20 kHz of intensity for 2 minutes in the fermented broth, the activity reached the highest value of 473.6 mU/mL. Thus, naringinase, this enzyme of great potential for biotechnological applications, has its production increased by using statistical design and ultrasound.O Brasil é o maior produtor mundial de laranja e de suco concentrado destinado à exportação. Sucos cítricos concentrados para exportação com níveis elevados de naringina são excessivamente amargos, o que reduz a qualidade e o valor comercial do produto. A redução do amargor pode ser obtida pela naringinase, um complexo enzimático que degrada a naringina. Neste trabalho Aspergillus niger 426 foi usado como produtor de naringinase utilizando matérias-prima da agroindústria, melaço como fonte de carbono e extrato de levedura como fonte de nitrogênio. Naringina foi usada como indutor. Dentre as cinco fontes de nitrogênio pesquisadas, extrato de levedura apresentou o melhor resultado de 225,6 mU/mL de naringinase em 120 horas de cultivo. Para otimização da produção de naringinase, foi aplicada a metodologia de superfície de resposta, com planejamento fatorial incompleto 22, obtendo 354,26 mU/mL de atividade de naringinase, tendo como variáveis independentes o extrato de levedura (14,0g/L) e naringina (0,2g/L). Quando aplicadas ondas de ultrassom com intensidade de 20 kHz por 2 minutos na cultura, a atividade de naringinase atingiu o valor máximo de 473,6 mU/mL. Assim, a naringinase, enzima de grande potencial de aplicação biotecnológica, teve a produção aumentada pelo uso do planejamento estatístico e ultrassom.