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Esta obra é composta por textos de um grupo de professores, que no ano de 2020, reinventaram-se em suas ações pedagógicas, buscando por meio da extensão dar continuidade ao ensino com a comunidade acadêmica e externa. O momento de distanciamento, em função da pandemia do Coronavírus, nos levou a busca de meios que possibilitassem o desenvolvimento das ações pedagógicas a distância. Então, iniciamos o processo de ampliar o nosso repertório digital para aplicá-lo no desenvolvimento das aprendizagens propostas por meio de minicursos, seminários, palestras e performances artísticas.

A Escuta Intergeracional (ESTER) no enfrentamento da pandemia pelo novo Coronavírus visa diminuir os impactos gerados pelo isolamento social através da motivação no autocuidado das pessoas a respeito das medidas de proteção. A interdisciplinaridade no atendimento às necessidades dos usuários, ampliando o conhecimento e suscitando a articulação da extensão, com a pesquisa e o ensino.

Há poucos dados na literatura sobre o transporte transplacentário de imunoglobulinas em gestações múltiplas. O objetivo deste estudo foi observar fatores que influenciam a concentração de imunoglobulina G (IgG) no cordão umbilical dos neonatos e a transferência transplacentária de IgG total e de IgG contra o Streptococcus grupo B (EGB), e lipopolissacarídeos (LPS) de Klebsiella spp. e Pseudomonas spp.. Métodos: estudo prospectivo realizado no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo no período de 2012 a 2013. Foram coletadas amostras de sangue materno e de cordão umbilical no momento do parto. Os critérios de inclusão foram gestações gemelares com ausência de sinais de infecção por HIV, citomegalovírus, Hepatites B e C, toxoplasmose e rubéola e ausência de doenças autoimunes, malformação fetal e síndromes genéticas. A análise multivariada foi realizada para avaliar a associação entre os níveis de IgG em cordão umbilical e as taxas de transferência de anticorpos com a concentração materna de IgG, a corionicidade da gestação, a presença de insuficiência placentária, a restrição de crescimento intrauterino, a idade gestacional de nascimento, o peso de nascimento, o tabagismo, a doença materna e a via de parto. Resultados: a concentração de IgG total em cordão umbilical apresentou correlação positiva com os níveis maternos séricos de IgG total e a idade gestacional do parto. Os níveis de IgG total em cordão umbilical foram significativamente menores em gestações monocoriônicas quando comparadas às dicoriônicas. A taxa de transferência de IgG total apresentou correlação positiva com a idade gestacional do parto, mas negativa com as concentrações maternas de IgG total. As concentrações de IgG contra EGB e LPS de Klebsiella spp. e Pseudomonas spp. apresentaram associação com os níveis maternos de IgG específicos contra esses antígenos e com o diabetes. Os níveis de IgG contra LPS de Klebsiella spp. também foram associados com o peso de nascimento e com hipertensão materna. As taxas de transferência de IgG contra EGB e LPS de Pseudomonas spp. apresentaram correlação com os níveis maternos de IgG específicos contra os antígenos referidos. A taxa de transferência de IgG contra EGB também esteve associada com a idade gestacional do parto, enquanto a taxa de transferência de IgG contra LPS de Pseudomonas spp. apresentou correlação com diabetes. Não houve correlação entre a taxa de transferência de IgG contra a LPS de Klebsiella spp. com nenhum fator analisado. Conclusão: em gestações gemelares, a concentração total de IgG em cordão umbilical foi influenciada pela concentração materna de IgG total, pela idade gestacional do parto e pela corionicidade placentária. As concentrações de IgG total foram significativamente menores em gestações monocoriônicas que em dicoriônicas. As concentrações séricas de IgG contra EGB e LPS de Klebsiella spp. e Pseudomonas spp. em cordão umbilical apresentaram associação com os níveis maternos de IgG específicos contra esses antígenos e com a presença de diabetes. Todos os outros parâmetros estudados apresentaram diferentes associações com as concentrações de IgG e com as taxas de transferências de IgG específicas contra cada antígeno investigado There is a lack of data in the literature regarding the placental transport of immunoglobulins in twin pregnancies. The objective of this study was to examine factors that influence the concentration of immunoglobulin G (IgG) in cord serum and the placental transfer of total IgG and of IgGs against Klebsiella spp. LPS and Pseudomonas spp. LPS, and Group B Streptococcus (GBS). Methods: A prospective study was conducted at the Hospital das Clinicas in the São Paulo University Medical School between 2012 and 2013. Maternal and umbilical cord samples were collected at birth. The inclusion criteria were twin pregnancies with no evidence of infection with HIV, cytomegalovirus, hepatitis B or C, toxoplasmosis, or rubella. Twin pregnancies with evidence of autoimmune disease, fetal malformations or genetic syndromes were also excluded. Stepwise multivariate regression analysis was used to evaluate the association between cord serum concentrations of IgG and IgG transfer ratios as well as the associations between cord serum concentrations of IgG and maternal serum concentrations of IgG, pregnancy chorionicity, the presence of an abnormal umbilical artery pulsatility index, intrauterine growth restriction, gestational age at delivery (GAD), birth weight, placental weight, smoking during pregnancy, maternal disease, and mode of delivery. Results: Total IgG concentrations in cord sera were positively correlated with total IgG concentrations in maternal sera. Cord serum concentrations of IgG were also positively correlated with GAD. Cord serum concentrations of total IgG were significantly lower in monochorionic versus dichorionic pregnancies. The total IgG transfer ratio was positively correlated with GAD but was inversely correlated with total IgG concentration in maternal serum. Cord serum concentrations of IgGs against GBS, Klebsiella spp. LPS and Pseudomonas spp. LPS were significantly associated with maternal concentrations of specific IgGs and the presence of maternal diabetes. Cord serum concentrations of anti-Klebsiella spp. LPS IgG were also correlated with birth weight and the presence of maternal hypertension. The transfer ratios of IgGs against GBS and Pseudomonas spp. LPS were related to maternal concentrations of specific IgGs. The transfer ratios of IgGs against GBS and Pseudomonas spp. LPS were also associated with GAD and the presence of diabetes, respectively. None of the examined parameters were found to be correlated with the transfer ratio of IgG against Klebsiella spp. LPS. Conclusions: In twin pregnancies, in addition to the influences of maternal serum concentrations of total IgG and of GAD, chorionicity was also found to influence cord serum concentrations of total IgG. Compared with dichorionic twins, monochorionic twins were found to have lower concentrations of total IgG in cord sera. Umbilical cord serum concentrations of IgGs against GBS, Klebsiella spp. LPS and Pseudomonas spp. LPS were associated with maternal serum concentrations of specific IgGs and with maternal diabetes. All of the remaining parameters that were investigated had varying associations with concentrations of specific IgGs in cord serum and with placental transfer and were dependent on the antigen being studied

O objetivo deste estudo foi identificar e comparar a percepção da comunicação não verbal expressa durante a visita hospitalar com o grau de satisfação e de importância dos familiares em relação às suas necessidades na UTI. Métodos: estudo descritivo e transversal quantitativo. Um instrumento de identificação da comunicação não verbal adaptado e o Inventário de Necessidades e Estressores de Familiares em Terapia Intensiva (INEFTI) foram utilizados. Resultados: os familiares têm necessidades consideradas importantes que ainda não são satisfeitas pela equipe multiprofissional e dinâmica na UTI. Perceberam sinais não verbais de aproximação e conforto e de defesa e desconforto (expressão facial tensa, de ansiedade, medo, dúvida ou inexpressiva, movimentos corporais rápidos e uma postura corporal rígida e tensa) expressos por eles mesmos durante a visita hospitalar. Conclusão: quanto maior a avaliação da importância das necessidades relacionadas ao suporte, maior foi o uso de comportamentos não verbais efetivos pelo familiar durante a visita. Objetivo: Identificar y comparar la percepción de la comunicación no verbal expresa durante la visita a un familiar hospitalizado con el grado de satisfacción e importancia de la familia en relación a sus necesidades en la UCI. Métodos: Análisis cuantitativo descriptivo y transversal. Fue utilizado un instrumento de identificación de la comunicación no verbal adaptado y un Inventario de Necesidades y Factores Estresantes de la Familia en Cuidados Intensivos (INEFTI). Resultados: Los familiares tienen necesidades consideradas importantes y que todavía no están satisfechas por el equipo multiprofesional y por la dinámica de la UCI. Se percibió señales no verbales de aproximación y comodidad y de defensa y malestar expresados por ellos durante la visita al hospital. Conclusión: Cuanto mayor es la evaluación de la importancia de las necesidades relacionadas con el soporte, mayor fue el uso de comportamientos no verbales efectivos por el familiar durante la visita. Objective: To identify and compare the nonverbal perception during hospital visits with the level of satisfaction and importance for the family related to their needs during these visits to the ICU. Methods: a descriptive and cross-sectional quantitative study. An identifying instrument for the adapted nonverbal communication and the Critical Care Family Needs Inventory (CCFNI) Portuguese version were used. Results: the family members have needs that were considered important and these needs were not fulfilled by the multiprofesional and dynamic team in the ICU. Nonverbalsignals for approach and comfort (body position facing the patient and the low voice volume suitable for a ICU) and defense and discomfort (tense facial expression showing anxiety, fear, doubt or even being inexpressive body movements and a rapid rigid and tense posture) expressed by them during the hospital visit. Conclusion: The higher the importance of support-related needs assessment, the greater the use of effective nonverbal behaviors during the visit.

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27Bitstream added on 2014-11-10T11:58:04Z : No. of bitstreams: 1 000788528.pdf: 1954056 bytes, checksum: 32e406d786aa994b16ea9a2117afb377 (MD5) Delirium é uma manifestação de disfunção cerebral aguda, frequente em pacientes criticamente enfermos e está associado a aumento da morbidade e mortalidade. Na experiência das Unidades de Terapia Intensiva (UTI), esta situação afeta muitos pacientes durante o período de hospitalização, aumentando a frequência dos eventos à medida que o período de internação prolonga-se. Neste sentido, esta pesquisa buscou compreender os conceitos atribuídos ao Delirium pelos enfermeiros de UTI, bem como as estratégias utilizadas por eles na abordagem preventiva, diagnóstica e terapêutica no cuidado a pacientes que apresentam este diagnóstico. Foi um estudo qualitativo com Referencial Metodológico da Análise de Conteúdo, realizado em duas UTIs adulto de hospitais públicos do Estado de São Paulo-Brasil, sendo uma localizada no interior paulista e outra na capital. Os dados foram coletados no período de abril a julho de 2013, por meio de entrevista semi estruturada da qual participaram 18 enfermeiros do sexo feminino, com idades predominantes entre 25 e 30 anos e com 1 a 5 anos de atuação no cuidado a pacientes críticos. Os resultados do estudo deram origem a sete categorias nos seguintes temas: Delirium é confusão, agitação, alucinação e agressividade, possui múltiplas circunstâncias causais, associadas ao ambiente da UTI, a abstinência do uso de drogas e álcool, à doença psiquiátrica prévia e ao uso de fármacos/sedativos. Nos temas relacionados às estratégias possíveis para prevenção, emergiram: maior contato com a família, adequação funcional e estrutural do ambiente e intencionalidade de comunicação com o paciente. No que se refere ao diagnóstico do Delirium, os enfermeiros relataram que a alteração do comportamento o define, sendo necessária especial atenção aos sinais da comunicação não verbal. O tratamento do Delirium pode acontecer por restrição mecânica, como método ... Delirium is a manifestation of acute brain dysfunction which is frequent in critically ill patients and associated with increased morbidity and mortality. In the experience of Intensive Care Units (ICUs), this situation affects many patients during the hospitalization period, and the frequency of events increases as the hospitalization period extends. With this regard, this study aimed at understanding the concepts attributed to Delirium by ICU nurses for preventive, diagnostic and therapeutic approaches in the care for patients showing this diagnosis. It was a qualitative study with a methodological framework based on Content Analysis and conducted in two adult ICUs in public hospitals in São Paulo state - Brazil, one of which was located in inner São Paulo state and the other in the state capital city. Data were collected from April to July 2013 by means of semi-structured interviews in which 18 female nurses whose ages were predominantly between 25 and 30 years and who had worked in the care for critical patients for 1 to 5 years participated. The results in the study originated seven categories according to the following topics: Delirium is confusion, agitation, hallucination and aggressiveness. It has multiple causal circumstances associated with the ICU environment, abstinence from drug and alcohol use, previous psychiatric disease and the use of pharmaceuticals/sedatives. In the topics related to possible prevention strategies, the following emerged: greater contact with one’s family, functional and structural adequacy of the environment and intentionality of communication with the patient. As regards the Delirium diagnosis, nurses reported that behavioral changes define it, and special attention must be paid to non-verbal communication signs. Delirium treatment may take place by mechanical restriction as a therapeutic method and by the use of pharmaceuticals as a means of patient restraint, pointing out verbal communication ...

OBJETIVO: Avaliar o coping religioso/espiritual (CRE) dos familiares de pacientes internados em Unidade de Terapia Intensiva de duas instituições hospitalares. MÉTODOS: Estudo descritivo quantitativo. Os dados foram coletados de 45 familiares (80% do sexo feminino e 20% do sexo masculino com idade média de 37,5 anos) por meio de um questionário de caracterização da amostra e da Escala CRE. RESULTADOS: O valor do CRE total obtido foi de 3,4 mostrando que os familiares participantes fizeram uso médio de estratégias de CRE. Em relação ao valor da razão CRE negativo/CRE positivo, o valor médio encontrado foi 0,7, demonstrando que as estratégias de CRE positivas foram mais utilizadas. CONCLUSÃO: Os familiares utilizam estratégias de CRE positivas mais do que negativas durante o processo de hospitalização de um familiar em UTI, todos eles acreditam em Deus e a maioria crê que a espiritualidade tem ajudado a enfrentar o estresse da hospitalização. OBJECTIVE: To assess spiritual/religious coping of relatives of patients hospitalized in the Intensive Care Unit of two hospitals. METHODS: Quantitative descriptive study. Data were collected from 45 family members (80% female and 20% male, mean age 37.5 years) using a questionnaire for sample characterization and SRCOPE scale. RESULTS: The value of total SRCOPE scale obtained was 3.4 showing that the family participants mean made use of SRC strategies. Regarding the value of the ratio negative SRC/positive SRC, the mean value was 0.7, demonstrating that the positive SRC strategies were used more often. CONCLUSION: Family members use positive SRC strategies more than negative during the hospitalization of a family member in the ICU, they all believe in God and most believe that spirituality has helped them to cope with the stress of hospitalization.

Submitted by Guilherme Lemeszenski (guilherme@nead.unesp.br) on 2013-08-22T18:51:03Z No. of bitstreams: 1 S0100-736X2012000900001.pdf: 353578 bytes, checksum: a4b5d304cd1aa9cc0174a9a3dbd8c861 (MD5) Made available in DSpace on 2013-08-22T18:51:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 S0100-736X2012000900001.pdf: 353578 bytes, checksum: a4b5d304cd1aa9cc0174a9a3dbd8c861 (MD5) Previous issue date: 2012-09-01 Made available in DSpace on 2013-09-30T17:56:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S0100-736X2012000900001.pdf: 353578 bytes, checksum: a4b5d304cd1aa9cc0174a9a3dbd8c861 (MD5) S0100-736X2012000900001.pdf.txt: 45441 bytes, checksum: f2199c813fad0751c4b5707c910f5832 (MD5) Previous issue date: 2012-09-01 Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-20T13:16:11Z No. of bitstreams: 2 S0100-736X2012000900001.pdf: 353578 bytes, checksum: a4b5d304cd1aa9cc0174a9a3dbd8c861 (MD5) S0100-736X2012000900001.pdf.txt: 45441 bytes, checksum: f2199c813fad0751c4b5707c910f5832 (MD5) Made available in DSpace on 2014-05-20T13:16:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S0100-736X2012000900001.pdf: 353578 bytes, checksum: a4b5d304cd1aa9cc0174a9a3dbd8c861 (MD5) S0100-736X2012000900001.pdf.txt: 45441 bytes, checksum: f2199c813fad0751c4b5707c910f5832 (MD5) Previous issue date: 2012-09-01 A laminite é uma doença podal grave que acomete os equídeos, sendo responsável por intenso sofrimento. Neste estudo foram pesquisadas a presença de calprotectina por meio da imunoistoquímica, e de lipocalina associada à gelatinase de neutrófilos (NGAL), por zimografia, no tecido laminar do casco de equinos após obstrução intestinal. Os animais foram divididos em quatro grupos: Grupo controle (Gc), contendo sete animais normais, sem procedimento cirúrgico; Grupo Instrumentado (Gi), contendo cinco animais, os quais passaram por todo o procedimento cirúrgico sem sofrerem obstrução intestinal; Grupo Não Tratado (Gnt), contendo quatro equinos submetidos a obstrução intestinal do jejuno por distensão de balão intraluminal, sem tratamento; e Grupo Tratado (Gt), contendo quatro equinos submetidos a obstrução intestinal, e tratados preventivamente com hidrocortisona. Houve imunomarcação de calprotectina em todos os grupos experimentais, com aumento nos equinos do grupo distendido em relação ao Gc. Com relação ao NGAL, houve aumento também do Gnt e do Gi em relação ao Gc. O Gt não diferiu dos demais. Conclui-se que a distensão do intestino delgado pode promover acúmulos de leucócitos nos cascos de equinos e que o NGAL é um método viável para se detectar infiltração neutrofílica em equinos. Novos estudos deverão ser realizados para se verificar possível benefício anti-inflamatório da hidrocortisona no casco de equinos com obstrução intestinal. Laminitis is a severe hoof condition in horses that may cause intense suffering. In this study, leukocyte infiltration in hoof laminar tissue was investigated in horses subject to intestinal obstruction using immunohistochemistry to detect calprotectin, and zymography to detect neutrophil gelatinase associated lipocalin (NGAL). There were four groups: the Control Group (Gc), with seven horses, without surgical procedures; the Sham-operated Group (Gi), with five horses that were subjected to surgical procedure without intestinal obstruction; the No Treat group (Gnt), with four horses subjected to intestinal obstruction (jejunal distention using an intraluminal balloon) without treatment; and Treated group (Gt), with four horses subjected to intestinal obstruction and treated with hydrocortisone. Positive calprotectin imunostaining was detected in all experimental groups, with increase cell counts in horses of the distended group compared with the control group. NGAL expression was increased in Gd compared with Gc e Gi. The Gt did not differ from the others. In conclusion, small intestine distension can promote leukocyte infiltration in equine hoof laminar tissue, and NGAL zymography was considered a useful method for leukocyte tissue detection in horses. New studies will be conducted to verify the possible beneficial anti-inflammatory effects of hydrocortisone in hoof of horses with intestinal obstruction. Estadual Paulista Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias Departamento de Clínica e Cirurgia Veterinária Unesp FCAV Departamento de Patologia Veterinária Universidade Federal de Minas Gerais Departamento de Clínica e Cirurgia Veterinária Universidade de Campinas Departamento de Imunologia Aplicada Unesp FCAV Departamento de Patologia Veterinária

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior This paper presents a new synthetic route for obtain regioselective 5-alkyl(aryl/heteroaryl)-3-trifluoromethyl-1H-1-phenylpyrazoles (3a-e) (50-85% yields) and 5-alkyl(aryl/heteroaryl)-3-carboxialkyl-1H-1-phenylpyrazoles (4a-e) (51-89% yields) via cyclocondensation reactions of the type [3 + 2], using 1,1,1-trifluoro(chloro)-4-alkyl(aryl/heteroaryl)-4-alkoxy-3-alken-2-ones as 1,3-dielectrophile blocks and 1-phenylsemicarbazide as a new 1,2-dinucleophile. Compounds (3a-e, 4a-e) were synthesized by reactions between 4-alkoxy-1,1,1-trifluoro(chloro)-3-alken-2-ones (1a-e, 2a-e) and 1- phenylsemicarbazide in molar ratio 1:1.5, respectively, conducted in methanol as solvent and sulfuric acid as catalyst, at temperature of 60 °C and with a reaction time of 24 hours. The developed synthetic method enables the achievement of the regioselective 1,3-substituted pyrazole as a single product and/or majority in a single step reaction through the hydrolysis of the amide group. Also, the conversion of the trichloromethyl substituent, present in the precursors (2a-e), in a carboxyalkyl group was successful overcome. Finally, two series of 5-(alkyl/aryl)-4-bromo-3-(carboxyl/trifluoromethyl)-1H-1-phenylpyrazoles (7a-c, 8a-c) were obtained starting from the reactions of synthesized pyrazoles (3a-b,3e, 4a-b,4d) with N-bromosuccinimide in N,N-dimethylformamide (DMF) as solvent, in a temperature of 80 °C and with a reaction time of 2 hours (35-82% yields). Este trabalho apresenta uma nova rota sintética para a obtenção regiosseletiva de 5-alquil(aril/heteroaril)-3-trifluormetil-1H-1-fenilpirazóis (3a-e) (50-85%) e 5-alquil(aril/heteroaril)-3-carboxialquil-1H-1-fenilpirazóis (4a-e) (51-89%) via reações de ciclocondensação do tipo [3 + 2], utilizando 1,1,1-trifluor(cloro)-4-alquil(aril/heteroaril)-4-alcóxi-3-alquen-2-onas e 1-fenilsemicarbazida, a qual é um novo 1,2-dinucleófilo. Os compostos (3a-e, 4a-e) foram sintetizados através de reações entre as 1,1,1-trifluor(cloro)-4-alquil(aril/heteroaril)-4-alcóxi-3-alquen-2-onas (1a-e, 2a-e) e 1-fenilsemicarbazida em relação molar 1:1,5, respectivamente, conduzidas em metanol como solvente e ácido sulfúrico como catalisador, a temperatura de 60 °C e tempo reacional de 24 horas. O método sintético desenvolvido permite a obtenção regiosseletiva do pirazol 1,3-substituído como produto único e/ou majoritário, em uma única etapa reacional, através da hidrólise do grupamento amídico. Além de permitir a conversão do substituinte triclorometila, presente nos precursores (2a-e), em carboxialquil. Finalmente, uma série de 5-(alquil/aril)-4-bromo-3-(carboxil/trifluormetil)-1H-1-fenilpirazóis (7a-c, 8a-c) (35-82%) foi obtida apartir de reações entre os pirazóis sintetizados (3a-b, 3e, 4a-b, 4d) e N-bromosuccinimida em N, N-dimetilformamida como solvente, a temperatura de 80 °C e tempo reacional de 2 horas.

The landscape plays an important role, as it is the main indicator of physical change in the environment, and the one that is first perceived by the tourist. As it is the first contact the tourist has with the place he is visiting, we can consider the landscape as being at the heart of a location’s tourism attractiveness. The landscape is what is seen in a particular place, the way in which the space is arranged, and the range of geographical elements in a place. Landscape can be classified as either natural or urban. As it is a representation of the space, the landscape is a dynamic element that is transformed over time. This article seeks to analyze the urban landscape of Irati – Paraná, as a tourism attraction. Its results indicate its significance as a tourism resource. Key words: Landscape; Urban Landscape; Tourism; Irati. El paisaje posee un papel importante, pues es el gran indicador de la transformación física del ambiente notada primeramente por el turista. Siendo el primer contacto del turista con el lugar visitado, podemos considerar que el paisaje está en el centro de la atractividad turística de una localidad. El paisaje es lo que se ve en un determinado espacio, es la forma del espacio, el conjunto de los elementos geográficos de un lugar, que puede ser clasificado en paisaje natural o urbano. Por tratarse de una representación del espacio, el paisaje es un elemento dinámico que se transforma con el tiempo. El presente artículo tuvo como objetivo general analizar el paisaje urbano de Irati - Paraná, como atracción turística, cuyos resultados apuntan a su expresividad como recurso turístico. Palabras-clave: Paisaje; Paisaje Urbano; Turismo; Irati. A paisagem possui um papel importante, pois ela é o grande indicador da mudança física do ambiente percebida primeiramente pelo turista. Sendo primeiro contato do turista com o lugar visitado, podemos considerar que a paisagem está no centro da atratividade turística de uma localidade. A paisagem é o que se vê em um determinado espaço, é a forma do espaço, o conjunto dos elementos geográficos de um lugar, podendo ser classificada em paisagem natural ou urbana. Por se tratar de uma representação do espaço, a paisagem é um elemento dinâmico que se transforma com o tempo. O presente artigo teve com objetivo geral analisar a paisagem urbana de Irati - Paraná, enquanto atrativo turístico, cujos resultados apontam para a sua expressividade enquanto recurso turístico. Palavras-Chave: Paisagem; Paisagem Urbana; Turismo; Irati.

Thirteen Citrus tristeza virus (CTV) strains from ‘Pera’ citrus orchards, collected in Northern Paraná State, Brazil, were evaluated and compared with two severe CTV strains from São Paulo State through I-DAS ELISA (Indirect Double Antibody Sandwich Enzyme Linked Immunosorbent Assay) and SSCP (Single-strand Conformation Polymorphism) of virus capsid gene. In samples collected in two counties, high levels of absorbency (A405) were recorded, when monoclonal antibodies specific to CTV severe strains were used. In addition, SSCP patterns of these samples were identical to patterns recorded for the Capão Bonito complex from São Paulo State. These results suggest that citrus orchards of Northern Paraná State are infected with severe CTV strains. Treze isolados do Citrus tristeza virus (CTV), obtidos de pomares de laranja ‘Pêra’, da região Norte do Paraná, foram avaliados e comparados a dois isolados severos do Estado de São Paulo, por meio de I-DAS ELISA (Indirect double antibody sandwich Enzyme Linked Immunosorbent Assay) e de SSCP (Single-strand conformation polymorphism) do gene da proteína do capsídeo do vírus. Extratos de plantas de dois municípios amostrados apresentaram consideráveis valores de absorbância (A405), com os anticorpos monoclonais específicos para estirpes severas do vírus, e padrões SSCP do gene da proteína do capsídeo semelhantes aos dos isolados, oriundos do Estado de São Paulo, obtidos de plantas inoculadas com o ‘complexo Capão Bonito’. Os resultados sugerem que os pomares citrícolas da região Norte do Paraná estejam infectados por variantes severos do vírus.

Orientador: Gilson Paulo Manfio Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Mestrado

Esta tese se pauta em compreender como se efetivou a educação no meio adventista com ênfase para a formação do obreiro denominacional no Seminário / Colégio Adventista Brasileiro entre os anos de 1915 e 1947 e assinalar a experiencia religiosa de obreiros adventistas jubilados. Neste sentido, empreendemos uma pesquisa bibliográfica e documental com a intenção de indicar como a educação adventista se instrumentalizava no projeto denominacional evangelizador como estratégia missionária, analisar como se deu a formação dos obreiros denominacionais no contexto de uma instituição total em regime de internato, além de apresentar a experiência religiosa dos obreiros adventistas jubilados em seus relatos autobiográficos. This thesis focuses on understanding how education in the Adventist milieu was made with an emphasis on the formation of the denominational worker in the Brazilian Adventist Seminary / College between 1915 and 1947 and to point out the religious experience of retired adventists workers. In this sense, we undertake a bibliographical and documentary research with the intention of indicating how Adventist education was instrumentalized in the evangelical denominational project as a missionary strategy, to analyze how the formation of the denominational workers occurred in the context of a total institution under boarding school regime, besides to present the religious experience of retired adventists workers in their autobiographical stories.

Submitted by Noeme Timbo (noeme.timbo@metodista.br) on 2017-10-09T18:49:56Z No. of bitstreams: 1 Honorio Flores Filho.pdf: 4779324 bytes, checksum: 2e26c8dead014e064cf97618262837f0 (MD5) Made available in DSpace on 2017-10-09T18:49:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Honorio Flores Filho.pdf: 4779324 bytes, checksum: 2e26c8dead014e064cf97618262837f0 (MD5) Previous issue date: 2017-04-13 Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq This study analyzes a phenomenon Pentecostal that expands in the peripheries and favelas of Brazil and that we call brotopentecostalism. This Pentecostalism has as characteristic, to be a movement with important participation of blacks. As the peripheries and favelas are mainly black, these were affiliated with candomblés and umbandas, that once dominated these areas. With the arrival and proliferation of Pentecostalism, the Afro-Indo-Brazilian religions lost ground. Many blacks living in these areas of favelas were converted by the Pentecostal movement, but this Pentecostalism changed, became more diverse and assumed the popular characteristics of Brazilian black culture. In this transition, a metamorphosis of an official protopentecostalism, more solidified in their organizations, towards a more fluid Pentecostalism occurred, with churches generally constructed of fast and precarious form and, generally, of short duration. In these spaces, musicality through percussions, ginga, freedom of movement and ecstasy of the Holy Spirit, appeared as a reinterpretation of the African trance. The fact made the Pentecostal movement the proper vehicle for black. This question is based on Bastide and his studies on black and his Afro-Brazilian religion. On the question of popular religiosity, this research finds reference in Carlos Brandão. Based on the concept of coercion and emblematic cohesion are the Bourdian concepts of habitus and symbolic violence, as well as the geertian concept of religion as a symbolic system. The present thesis takes into account the real conditions of existence of the black Pentecostals marked by high social vulnerability. We searched two peripheral areas of the Metropolitan Region of João Pessoa: Mandacarú (Mandacarú and Alto do Céu) in João Pessoa and Mutirão (Mário Andreazza and Comercial Norte) in Bayeux. Populations in these areas are mostly black, poor housing and a high unemployment rate. However, there is an expressive presence of Pentecostal churches, this makes these institutions present themselves as important generators of opportunity structure and social capital. And this occurs as a typical determinant element of affirmation of brotopentecostal identity, and of popular religious movement reactive to the adverse conditions of social vulnerability and segregation in peripheries and favelas. The objective of the research was to analyze the relationship between brotopentecostalism as a typical popular religion of periphery, segregation, social vulnerability and identity in the reality of black brotopentecostal. The research methodology was quantitative-qualitative, including bibliographic, ethnographic, participatory observation, questionnaire application and in-depth interviews. The participants of the research were white and black brotopentecostais in their various hierarchical religious degrees, all of them residents of the urban periphery of João Pessoa and followers of Pentecostal churches that act in that context. Este estudo analisa um fenômeno pentecostal que se expande nas periferias e favelas brasileiras e que aqui chamamos de brotopentecostalismo. Este pentecostalismo possui como característica, ser um movimento com importante participação de negros. Uma vez que as periferias e favelas são de maioria negra, estes eram filiados aos candomblés e umbandas, que antes dominavam estas áreas. Com a chegada e proliferação do pentecostalismo, religiões afro-indígenas-brasileiras perderam espaço. Muitos negros moradores dessas zonas favelizadas foram convertidos ao pentecostalismo, todavia este pentecostalismo se modificou, se diversificou e se revestiu de características populares da cultura negra brasileira. Nesta transição ocorreu uma metamorfose de um protopentecostalismo oficial, mais solidificado em suas organizações, para um pentecostalismo mais fluído, com igrejas geralmente construídas de forma rápida e precária e, geralmente de curta duração. Nesses espaços a musicalidade através das percussões, a ginga, a liberdade de movimentos e o êxtase do Espírito Santo, apresentaram-se como reinterpretação do transe africano. O fato fez do movimento pentecostal o veículo adequado ao negro. Esta questão tem como referência teórica Bastide e seus estudos sobre o negro e sua religião afro-brasileira. Sobre a questão da religiosidade popular, esta pesquisa encontra referência em Carlos Brandão. Na base do conceito de coerção e coesão emblemática, estão os conceitos bourdianos de habitus e violência simbólica, bem como o conceito geertiano da religião como sistema simbólico. A presente tese leva em consideração as condições reais de existência dos pentecostais negros marcados por alta vulnerabilidade social. Pesquisamos duas áreas periféricas da Região Metropolitana de João Pessoa: Mandacarú (Mandacarú e Alto do Céu) em João Pessoa e Mutirão (Mário Andreazza e Comercial Norte) em Bayeux. As populações destas áreas são de maioria negra, moradias precárias e um alto índice de desempregados. Contudo, há uma expressiva presença de igrejas pentecostais, isto faz que estas instituições se apresentem como importantes geradores de estrutura de oportunidade e capital social. E isso se dá como elemento determinante típico de afirmação de identidade brotopentecostal, e de movimento religioso popular reativo às condições adversas de vulnerabilidade social e segregação em periferias e favelas. O objetivo da pesquisa foi analisar a relação entre brotopentecostalismo como religião popular típica de periferia, segregação, vulnerabilidade social e identidade na realidade do negro brotopentecostal. A metodologia de pesquisa foi de caráter quanti-qualitativa incluindo pesquisa bibliográfica, etnográfica, observação participativa, aplicação de questionários e entrevistas em profundidade. Os participantes da pesquisa foram brotopentecostais brancos e negros em seus vários graus hierárquicos religiosos, todos eles moradores da periferia urbana de João Pessoa e seguidores de igrejas pentecostais que agem nesse contexto.

Submitted by Noeme Timbo (noeme.timbo@metodista.br) on 2016-09-21T18:16:16Z No. of bitstreams: 1 Andre Aaparecido2 - ASSEMBLEIA DE DEUS MINISTÉRIO BELÉM EM ITAPECERICA DA SERRA TRANSFORMAÇÕES SOCIOCULTURAIS.pdf: 3454516 bytes, checksum: fa013ed05400b0d116ef2cb3ca24d985 (MD5) Made available in DSpace on 2016-09-21T18:16:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andre Aaparecido2 - ASSEMBLEIA DE DEUS MINISTÉRIO BELÉM EM ITAPECERICA DA SERRA TRANSFORMAÇÕES SOCIOCULTURAIS.pdf: 3454516 bytes, checksum: fa013ed05400b0d116ef2cb3ca24d985 (MD5) Previous issue date: 2016-04-07 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES This thesis aims to analyze the sociocultural changes relating to the uses and customs of God Ministry Bethlehem Assembly church in Itapecerica da Serra in Crispim neighborhood. From this perspective we try to understand the reasons that underlie today the ideological discourse and conservative church study on the flexibility and new paradigms concerning the uses and customs. Currently the Assembly of God church in Itapecerica da Serra goes through a process of change and reinterpretation on their uses and customs. We intend to discuss the possibility that such changes are derived from contact with different existing Pentecostalism in Itapecerica da Serra, and also of their own socio-cultural development of society. As a methodological process used historical items, data published through books, articles, newspapers, the church itself that assist in comparison of the data found in interviews with Assemblies of Itapecerica da Serra. The results of this research are presented in three chapters whose central axis is the discussion of sociocultural transformations of the uses and customs. Keyword: Assembly Esta dissertação tem como objetivo estudar as transformações socioculturais dos usos e costumes da igreja Assembleia de Deus Ministério Belém em Itapecerica da Serra no bairro Crispim. Dentro desta perspectiva procuramos entender as razões que permeiam ainda hoje o discurso ideológico e conservador da igreja em estudo diante da flexibilização e dos novos paradigmas assembleianos referente aos usos e costumes. Atualmente a igreja Assembleia de Deus em Itapecerica da Serra passa por um processo de mudança e ressignificação em seus usos e costumes. Pretendemos discutir a possibilidade de que tais mudanças sejam oriundas do contato com diferentes pentecostalismos existentes em Itapecerica da Serra, e também do próprio desenvolvimento sociocultural da sociedade. Tenta-se nesta pesquisa estudar as mudanças dos usos e costumes como parte da teia de significados produzida pela Igreja Assembleia de Deus. Como processo metodológico utilizamos fontes históricas, dados publicados em livros, artigos, jornais da própria igreja que auxiliarão na confrontação dos dados encontrados em entrevistas realizadas com assembleianos de Itapecerica da Serra. Os resultados desta pesquisa estão apresentados em três capítulos cujo eixo central é a discussão das transformações socioculturais dos usos e costumes

Submitted by Noeme Timbo (noeme.timbo@metodista.br) on 2016-09-14T18:52:33Z No. of bitstreams: 1 IGORMARQUES.pdf: 1484987 bytes, checksum: 222e9ad06f9f0aead873e9543fe463b9 (MD5) Made available in DSpace on 2016-09-14T18:52:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 IGORMARQUES.pdf: 1484987 bytes, checksum: 222e9ad06f9f0aead873e9543fe463b9 (MD5) Previous issue date: 2015-08-27 Against the backdrop of the denominational status of network Adventist education present in a remarkable way in the school space and the intense religious diversity students, this research analyzes the relationship of possible tensions between the denominational school status and religious diversity present. It takes into account the process of modernity causing significant change in education, in religion and in the form of the two institutes relate to each other. It took into account the socio-economic and religious profile of the students and how is the reception of religious education in Adventist school space, including students who declare themselves Adventists. The area chosen for this research was the Adventist schools located in the ABCD Paulista context, which offer high school. These school units are located in the cities of Diadema, Santo Andre and Sao Caetano do Sul, cities located in the same micro region, but with different socioeconomic realities. Tendo como pano de fundo a confessionalidade da rede adventista de educação presente de maneira marcante no espaço escolar e a intensa diversidade religiosa discente, esta pesquisa analisa a relação de possíveis tensões entre a confessionalidade escolar e a diversidade religiosa presente neste espaço. Leva em consideração o processo de modernidade causadora de importantes transformações na educação, na religião e na forma dos dois institutos se relacionarem. Levou-se em consideração o perfil socioeconômico e religioso dos alunos e possíveis tensões na recepção do religioso no espaço escolar adventista por parte dos discentes, inclusive por aqueles que se declaram adventistas. O espaço escolhido para esta pesquisa foi o de colégios adventistas localizadas no contexto do ABCD Paulista, que ofertam o Ensino Médio. Estas unidades escolares estão situadas nas cidades de Diadema, Santo André e São Caetano do Sul, cidades localizadas na mesma microrregião, mas com distintas realidades socioeconômicas.

Orientador: Liana Maria Cardoso Verinaud Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O timo é um órgão linfóide primário localizado no mediastino anterior cuja função principal é o desenvolvimento das células T. Os precursores imaturos dos linfócitos T oriundos da medula óssea chegam ao timo através da junção córtico-medular e são denominados de timócitos. Estes timócitos passam por estágio denominados duplo-negativos (DN), não expressando os co-receptores CD4 e CD8, duplo positivos, expressando estes dois receptores e simples positivo, expressando somente um dos receptores. Desta forma, o completo desenvolvimento de células T torna-se dependente da constante migração dos precursores hematopoiéticos através do microambiente tímico que é composto por componentes linfóides e não linfóides. Já está bem documentada na literatura a importância que a matriz extracelular (MEC) exerce nos processos de migração dos timócitos. Durante todo este processo, os timócitos interagem com os componentes do microambiente tímico composto pela rede tridimensional formada por células epiteliais tímicas (TEC), macrófagos, células dendríticas, fibroblastos e componentes da matriz extracelular. Contudo, esta rede tridimensional pode ser remodelada pela ação de enzimas denominadas metaloproteinases de matriz (MMPs) que são capazes de degradar componentes da MEC revelando sítios de ligação para diversas integrinas e liberando fatores de crescimento e quimiocinas interligadas a esta rede. No timo já foram descritos vários membros da família das MMPs, como a MMP-2, 9, 14, 19 e ADAM 10, 17 e 28. Contudo, pouco se sabe sobre a atuação destas moléculas nos processos intratímicos . Estudos recentes do nosso grupo mostraram que a atrofia tímica induzida por P. berghei, um protozoário transmitido através da picada de um mosquito do gênero anófeles, leva a numerosas alterações no ambiente tímico. Assim, no presente trabalho pretende-se avaliar, quantitativamente e funcionalmente, possíveis alterações nas metaloproteinases MMP-2, 9, bem como nos seus inibidores TIMP-1, TIMP-2 durante a atrofia tímica observada após infecção pelo Plasmodium berghei NK65 Abstract: The primary function of the thymus is to develop immature T-cells into cells that will be able to carry out immune functions. So, alterations in its microenvironment may disrupt intrathymic processes leading to an altered exportation of T cell to the periphery. We have recently showed that experimentally Plasmodium berghei-infected mice present severe thymic alterations characterized by atrophy with depletion of double-positive thymocytes, histological alterations with loss of delimitation between cortical and medullar regions, and altered expression of cytokines and its respective receptors. Besides, it was also observed that such alterations, conjunctively, are able to promote increase of thymocyte migratory activity. Considering that MMPs also have a crucial role in thymocyte migration, in this study we investigated alterations in the expression pattern and activity of matrix metalloproteinases MMP-2, 9, 14, 19 and ADAM-28, as well as in tissue inhibitors of metalloproteinases TIMP-1, TIMP-2 and RECK, by using the same experimental model. Our results show differential expression pattern of MMPs and TIMPs mRNAs among infected and non-infected mice. Besides, an imbalance between MMPs and their inhibitors those results in altered proteolytic activity were observed in thymus from infected mice. We hypothesize that disturbed MMP and TIMP expression and activity have also a role in the altered thymocyte migration through intrathymic microenvironments observed during plasmodium infection Mestrado Imunologia Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientadores: Dagmar Ruth Stach-Machado, Gisele Abigail Montan Torres Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: No Brasil a batata é considerada uma das principais hortaliças produzidas, tanto em área plantada quanto em consumo. A produção anual é em torno de 2 milhões de toneladas, ocupando uma área superior a 130 mil hectares, gerando cerca de 500 mil empregos. Nos últimos anos, a bataticultura brasileira vem sofrendo perdas significativas devido ao aumento da incidência de viroses, principalmente provocadas pelo vírus Y da batata (Potato virus Y - PVY). Mundialmente, são conhecidas pelo menos três linhagens distintas do vírus Y: PVYO, PVYC e PVYN, cujos sintomas variam de acordo com o ambiente e a planta hospedeira. A linhagem PVYN apresenta uma variante denominada PVYNTN, que provoca sintomas de mosaico foliar mais intenso e a indução de formação de anéis necróticos nos tubérculos. A presença de focos de infecção de PVY em índices acima de 4% (limite de tolerância regulamentada pelo Ministério de Agricultura, Pecuária e Abastecimento) é suficiente para condenar o uso de determinadas lavouras para a produção de batata-semente, além de representar grandes danos em cultivos comerciais de batata para consumo. Já o PVX pode representar um grande problema quando em associação com o PVY. É um vírus cosmopolita, sendo transmitido mecanicamente e caracterizado por mosaico leve nas folhas, mais visíveis na metade inferior da planta. Atualmente, a análise de fitossanidade e a indexação viral da batata-semente destinada à multiplicação comercial no Brasil são efetuadas através da combinação da utilização de plantas indicadoras, que demanda tempo, e por testes sorológicos como ELISA, os quais representam custos adicionais à cadeia produtiva, uma vez que o Brasil é dependente da importação dos antisoros de detecção. Deste modo, considerando a relevância do estabelecimento de testes de diagnóstico nacionais que permitam a identificação específica dos vírus Y e X, em virtude da grande incidência de infecções do PVY e da grande necessidade de proteção contra o aumento da introdução do PVX, com oagravante de grandes prejuízos na co-infecção, os objetivos específicos deste projeto foram produzir soros policlonais específicos para o PVX e PVY, estabelecer ELISA indireto e desenvolver diagnóstico molecular dos vírus através de primers específicos e do IC-RTPCR. Esse trabalho conseguiu isolar e purificar os vírus X e Y através da indexação biológica e protocolos de extração. Com isso, foi possível produzir e caracterizar os anticorpos policlonais para o PVY e o PVX, com grande especificidade e poder de detecção. Após essas etapas, foi realizado a construção de primers específicos, e o desenvolvimento de técnicas moleculares de detecção baseadas na extração de material genético de folhas infectadas e PCR com os respectivos primers, obtendo-se os respectivos fragmentos esperados, concluindo com sucesso o estabelecimento do teste. Por fim, tentouse estabelecer o IC-RT-PCR, todavia o tamanho reduzido das partículas virais inviabilizou a realização do teste, mas a execução da detecção por ELISA e molecular separadamente foi estabelecido com sucesso, permitindo agregar novas tecnologias nacionais e contribuindo com a redução dos custos para a execução dos testes de fitossanidade, importantes e imprescindíveis para o controle das viroses predominantes na bataticultura nacional. Abstract: The potato culture (Solanum tuberosum L.) represents the fourth major vegetal production in the world, reaching productivity indexes which overcome that of cerals in 5 times. Potato crop may be affected by several disease. Actually, some references point out near 40 in a total of 70 disorders are caused by viral agents. Among the most important viruses of potato, virus X and Y usually cause major concern, due to their harmfull effects in productivity and comercialization of potato. Nowadays, the viral infecctions have found their way into Brazil's potato production reagions in a very fast maner. The state of São Paulo is the most afeccted. Althought potato crop is among the stocks 10 major crops in the country, its production relies on virus-free imported potato-seeds to mantain its production. This is not only responsable by a considerable part of the production costs, but also represents a dangerous entrance door for a number of exotic pathogens inexistent in our territory. Thus, a fitosanity control of imported seed-potato lots, which enter Brazil via Santos harbor in the State of São Paulo, has fundamental importance. The usage of imunodiagnosis like ELISA, althought being efficient and widely applied, results in an additional cost due to the dependency of Brazil on the importation of policlonal antisera and monoclonal antibodys necessaries for the proper detection of the most important virus afeccting the national potato plantations. It has becoming a must for the seed-potato production a program in Brazil to have our independence of the diagnoses antiserum reagents for ELISA to at least the most important seed-potato viruses. The independence on importation of these biotecnological products and the modernization of imunodiagnosis by applying molecular techniques with specifics primers and like IC-RT-PCR (ImmoCapture - Reverse Transcriptase - Polimerase Chain Reaction), which makes possible to detect the major potato's virus in a fast, efficient and cheap way in order to screen the sanity of the material produced in the country, leading to a increase in production and stating the quality of it. This work isolated and purified the virus X and Y by biological indexing and extraction protocols. Therefore, it was possible to produce and to characterize the polyclonals antiserum to PVX and to PVY, with great specificity and power of detection. After these steps, it was made specifics primers and the development of molecular detection techniques based on extraction of genetic material from infected leaves and PCR with the primers. The expected fragments was obtained, concluding with successful the establishment of the test. Finally, there was the attempt to establish the IC-RT-PCR, however the small size of viral particles prevented the test, but the implementation of detection by ELISA and molecular separately was successful, add new national technologies allowing and contributing to the reduction of costs for implementing of the fitosanitty tests, importants and essentials for the control of viruses prevailing in the national potato culture. Mestrado Imunologia Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientadores: Liana Verinaud, Wilson Savino Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O timo é o órgão linfóide primário responsável pelo amadurecimento dos linfócitos T. O processo de maturação é dependente da integridade do microambiente e da migração coordenada por elementos de matriz e quimiocinas dos precursores hematopoiéticos nos distintos nichos tímicos. Entretanto, a literatura mostra que profundas alterações no microambiente tímico, e conseqüentemente no desenvolvimento e amadurecimento dos linfócitos T, podem ocorrer como resultado de algumas patologias. No presente trabalho, analisamos a indução de atrofia e as alterações no microambiente tímico frente a três diferentes agentes indutores de atrofia, sendo dois agentes patogênicos, P.brasiliensis e P.berghei e uma doença metabólica, a diabetes induzida por aloxana. Nos três modelos estudados foi observada a atrofia do órgão com diferente intensidade nas alterações de componentes do microambiente tímico. Importantes moléculas associadas com a migração intratímica mostraram-se alteradas com modificações significativas nos elementos de matriz e nas quimiocinas bem como na expressão dos seus respectivos receptores. Ainda, a migração ex vivo também se mostrou alterada na atrofia induzida pelos agentes patogênicos, mas não no modelo de atrofia induzido por aloxana, sugerindo que as alterações desencadeadas são específicas de cada condição patológica analisada. As modificações nos elementos estudados sugerem alterações no padrão de migração intratímica e na exportação de timócitos, com comprometimento da função tímica, levando a maturação desequilibrada dos timócitos, com conseqüências para a resposta imune periférica. Abstract: Thymus is the primary lymphoid organ responsible for differentiation of Tlymphocytes. This process is dependent of thymic microenvironment integrity and coordinated migration of hematopoietic precursors by chemokines and extracellular matrix elements. However, the literature shows that deep alterations in thymus microenvironment with modifications in thymocyte development may occur such as result of some pathological disorders. In this study we analyzed the atrophy induction and alterations in thymic microenvironment in three different models of thymus atrophy. We studied two models of infectious diseases, P.brasiliensis and P.berghei, and a metabolic disorder, alloxan induced diabetes. We have observed thymus atrophy in all models with different alterations levels in thymus microenvironment elements. Important molecules associated with intrathymic migration were been altered with significant modifications in extracellular matrix elements, chemokines and their specific receptors. Besides, ex vivo migration was altered in thymus atrophy induced by pathogenic agents, but no alterations were observed in diabetic mice suggesting that different pathological conditions studied, leads to singular alterations in thymus compartment. The modifications in thymic molecules observed in our models, suggest impaired thymus functionality and alterations in thymocyte migration patterns These alterations can lead T cell maturation imbalance with consequences in Tlymphocyte immune response. Doutorado Imunologia Doutor em Genética e Biologia Molecular

Orientadores: Dagmar Ruth Stach-Machado, Marcos Antonio Machado Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Este trabalho visou efetuar a identificação dos epitopos das prottnas recombinantes CB-22 e CB-104 do capsídeo do Cítrus tristeza vírus (CTV), reconhecidos pelos anticorpos monoclonais (MAb) produzidos por Stach-Machado e colaboradores (2000). Assim, os epitopos reconhecidos pelos MAbs 30.G.02 e 37.G.ll, correspondem às seqüências de aminoácidos NLHIDPTLI e TQQNAALNRDLF, localizadas nas posições 32 a 40 e 50 a 61 das proteínas recombinantes CB-22 e CB-104. O epitopo reconhecido pelo MAb 39.07 que apresenta especificidade apenas para a CB-104, homóloga aos isolados severos do CTV corresponde a seqüência TDVVFNSKGIGN, localizados na posição 120 a 131 da proteína. Estes dados corroboram com os ensaios de ELlSA, confirmando o MAb 30.G.02 como um anticorpo universal, atuando quer como anticorpo de captura ou de detecção em ELlSA Sandwich, uma vez que, seu epitopo é conservado em 87.2% dos isolados de CTV. O MAb 37.G.ll deve ser adotado apenas como anticorpo de detecção pois reconhece uma seqüência encontrada em 62,6% dos isolados, permitindo uma identificação ampla, sem efetuar a diferenciação de estirpes. O MAb 39.07 foi classificado como "forte", pois seu epitopo está presente em apenas 19,7% das seqüências, sendo estas provenientes de isolados fortes do CTV de todo o mundo. A utilização de peptídeos lineares não permitiu a identificação e caracterização do epitopo do MAb 1C.04-12, confirmando dados preliminares de nosso laboratório que permitiram inferir que o mesmo reconhece um epítopo conformacional. O conhecimento das características estruturais da proteína do capsídeo viral possibilita obtenção de informações relevantes quanto às suas propriedades biológicas, como a participação na organização e montagem da partícula viral, proteção do material genético, interação com o inseto-vetor e com a planta hospedeira e também, pela "movimentação" da partícula viral no processo de infecção na planta. Considerando que até a presente data não existem dados disponíveis no Protein Data Bank (PDB) sobre a estrutura tridimensional da proteína do capsídeo do CTV, efetuamos o estudo estrutural da CB-22, utilizando Dicroísmo Circular (CD) e Difração de Raios X a Baixo Ângulo (SAXS). A análise dos dados de CD mostrou um espectro característico de proteínas cuja estrutura secundária é predominantemente formada por a-hélices, sendo este resultado coerente com a estrutura secundária predita pelo software PSIPRED. Os estudos de SAXS revelaram uma proteína altamente oligomerizada com estruturas formadas por subunidades, que variam de acordo com a concentração da mesma em solução. Este resultado, embora tenha impossibilitado a resolução e modelagem da estrutura secundária da CB-22, demonstrou que esta proteína recombinante mantém a função da proteína nativa, responsável pela formação do capsídeo vira!. Assim sendo, podemos postular a sua utilização como uma molécula carreadora, podendo ser aplicada em protocolos de vacinação ou no transporte dirigido de ácidos nucléicos ou proteínas. Por fim, este trabalho estabeleceu diagnósticos imunomoleculares como Imunocaptura-PCR (IC-PCR) e Imuno-PCR (I-PCR) para a detecção da bactéria gramnegativa Xylella jastid[osa, agente etiológico da Cvc. Os ensaios imunomoleculares apresentaram o limite de detecção muito superior aos diagnósticos utilizados na rotina como ELlSA e PCR, sendo o limite de detecção do IC-PCR e do I-PCR de 103 a 101 células, respectivamente. Portanto, estes métodos são uma alternativa viável para efetuar o diagnóstico da CVC e também em estudos epidemiológicos, com a vantagem de eliminar as etapas de extração e concentração do material genético bacteriano, permitindo um diagnóstico acurado dessa doença Abstract: This work aims to carry out the identification of epitopes of the Citrus tristeza virus (CTV) recombinant coat protein (CB-22 and CB-l04) which are recognized by four monoclonal antíbodies (MAb) produced by Stach-Machado et aI. (2000). MAb 1C.04-12 recognizes CB-22 protein, homologous to CTV isolates that induce weak symptoms in indicators plants; while MAb 39.07 reacts to CB-l04 protein, homologous to severe CTV isolates and, MAbs 30.G.02 and 37.G.ll recognize both proteins. MAb 30.G.02 recognized the sequence formed by amino acids NLHIDPTLI, located at positions 32 to 40, while MAb 37.G.ll recognized the amino acids from 50 to 61, whose sequence is TQQNAALNRDLF. On the other hand, the MAb 39.07 recognized the sequence TDVVFNSKGIGN, located at positions 120 to 131 in CB-l04 protein. MAb 30.G.02 was considered a Universal antibody, once its epitope is conserved in 87.2% of CTV isolates, and can be applied as a coating antibody or even as a detection antibody in ELlSA Sandwich assays. The epitope of MAb 37.G.ll is conserved in 62.6% of sequences and, can be applied as detection antibody, allowing a quick and wide range screening but without strains differentiation. Finally, MAb 39.07 was classified as "Severe" antibody, once its epitope is present at only 19.7% of CTV sequences, which were derived frem severe worldwide CTV isolates. The technique of linear peptides did not allow the epitope determination of MAb 1C.04-12, since this antibody may recognize a conformational epitope in the CB-22 tridimensional structure, according to the early data from our laboratory showing that this MAb did not recognize the CB-22 under denaturating conditions, confirming the conformational nature of its eptiope. The knowledge about structural features of viral coat protein enables acquiring relevant information about biological properties of this protein. The coat protein plays an essential role in the organization and assembly of viral particle, acts in genetic material protection and, probably is involved in the interaction with insect-vector and with host plant, being responsible for the movement of viral particle in the infection processo However, there are not any data in Protein Data Bank (PDB) about the secondary and tertiary structures of CTV coat protein, and so, this work carried out a structural study about CB-22 by Circular Oichroism Spectroscopy (CO) and Small-Angle X-ray Scattering (SAXS). The CO data analysis demonstrated a spectrum characteristic of proteins whose secondary structure is predominantly formed by a-helixes, and these results are coherent of predicted structure by PSIPREO software. The SAXS data revealed a highly oligomeric protein comprising many subunits whose quantities are dependent and vary according to the protein concentration in solution. These data, although had impaired the modeling and resolving of CB-22 secondary structure, demonstrated that this recombinant protein maintain the function of native protein, responsible for the assembly of CTV capsid, and this structure without bacterial ONA is also called virus-/ike, which allows to postulate its usefulness as nucleic acid ca rrier in vaccination protocols. Finally, the third objective of this work was the establishment of immunomolecular diagnosis to gram-negative bacterium, Xy/ella fastidiosa, which causes Citrus Variegated Chlorosis in Brazil. We carried out two immunomolecular assays, like !mmmuno,Çapture PCR and !mmuno-PCR for direct detection of X. fastidiosa without ONA isolation. Whereas the reactivity of ELlSA and PCR ranged from 106 to 104 bacterial cells, the IC-PCR sensitivity was up to 103 and the detection limit of I-PCR was up to 101 bacterial cells. Therefore, ICPCR and I-PCR assays provide an alternative for quick and very sensitive rnethods to screening X. fastidiosa, with the advantage of not requiring any concentration or ONA purification steps while still allowing an accurate diagnosis of Cvc Doutorado Imunologia Doutor em Genética e Biologia Molecular

Orientadores: Clarice Weis Arns, Dagmar Ruth Stach-Machado Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: o Metapneumovírus Aviário (AMPV), também denominado vírus da rinotraqueíte dos perus (TRT), é um vírus que acomete e causa infecção no trato aéreo superior das galinhas e perus. Além da infecção respiratória, em poedeiras e matrizes está associado com uma queda significativa na produção de ovos. Em galinhas o vírus está relacionado com a Síndrome da Cabeça Inchada (SCI), uma enfermidade multifatorial, e por este motivo é importante o diagnóstico diferencial. Testes realizados com anticorpos monoclonais (Mabs) e técnicas moleculares são capazes de detectar diferenças entre os subtipos do vírus. Os métodos de diagnóstico incluem isolamento ou detecção da partícula viral ou testes sorológicos. O isolamento das amostras virais SHS-BR-121 (subtipo A) e STG-SHS-1439 (subtipo B) foi realizado em cultura de anel de traquéia, em fibroblasto de embrião de galinha (FEG) e em células chicken embryo related (CER). A comparação das médias dos títulos obtidos para as duas amostras virais, em célula CER, apresentou diferença estatisticamente significativa (P=0,014) com p< 0,05. Neste projeto foi avaliada a suscetibilidades de seis sistemas celulares (CER, Vero, BHK-21, HEp-2, MDBK e ED) para a multiplicação das duas amostras virais (subtipos A e B). Destes sistemas as células CER, Vero e BHK-21 demonstraram ser apropriadas para a replicação vira!. Os títulos nestas células variaram de 105.5 a 107,o/mL DICC50 , para o vírus SHS-BR-121, e 105,5 a 106.0/mL DICC50 para o vírus STG-SHS-1439. As diferenças entre as médias dos títulos nos diferentes sistemas celulares foi estatisticamente significativa para a amostra SHS-BR-121 inoculada em CER em relação as células Vero e BHK-21 (P= 0,01 e P=0,004, respectivamente) com p< 0,05. Para a amostra STG-SHS-1439 não houve diferença estatística significativa, com p

Orientador: Maria Silvia Viccari Gatti Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A qualidade reprodutiva de fêmeas de suínos é determinada pelos índices de retorno ao cio, tamanho da leitegada, abortos, natimortalidade e mumificação fetal, entre outros itens. Parvovírus suínos (PVS) pela passagem transplacentária em porcas, podem levar à morte fetos em diferentes idades gestacionais, sendo associados aos índices elevados de mumificação fetal no início da gestação quando esses não são imunocompetentes. Em estágios mais tardios da gestação, fetos imunocompetentes podem sobreviver à infecção por PVS e esses vírus são isolados de fetos abortados e natimomortos. De granjas tecnificadas, com vacinação contra a parvovirose, foram coletadas amostras de 39 fetos com idade gestacional acima de 70 dias, com o objetivo de associar PVS a problemas reprodutivos de fêmeas. A imunocompetência dos fetos foi comprovada já que 93,4% deles foi positivo na inibição da hemaglutinação Por imunoperoxidase, a proteína estrutural VP2 de PVS foi detectada por anticorpo monoclonal no citoplasma de células isoladas e individualizadas de pulmão (macrófagos alveolares), em múltiplas células do músculo cardíaco e em células estromais de timo (retículo-epiteliais), tanto de fetos natimortos como abortados. Não houve diferença estatisticamente significante nesses achados entre fetos natimortos e abortados, mas tecidos do pulmão e do timo foram significativamente mais positivos que o coração. Por nested-PCR para o gene da proteína não estrutural NS-1 de PVS foram analisadas 108 amostras de tecidos de fetos natimortos, abortados e mumificados. O DNA viral foi detectado em 82,4% das amostras, sem diferença significativa para o tipo de feto, determinando que a parvovirose suína não deva ser caracterizada apenas como doença da mumificação fetal. A freqüência de identificação de PVS foi maior no pulmão (96,99%) e coração (93,33%) que no baço (54,91%), rim (69,56%) e timo (66,0%). Nos fetos com morte estimada entre 70 a 99 dias de gestação a detecção por nested-PCR foi maior (94,76%) que naqueles com 100 ou mais dias (55,57%). Houve diferença significativa na detecção de PVS em tecidos de fetos oriundos de porcas com menor (92,28%) e maior (65,43%) número de partos, o que sugere uma maior ocorrência da transmissão transplacentária em porcas mais jovens, submetidas a um menor número de vacinações. Mesmo em animais com anticorpos o DNA viral foi detectado, mostrando que a infecção ocorreu e se manteve independente da imunocompetência do feto. Ainda, nossos dados mostram que PVS estão associados tanto com a mumificação fetal, como com abortos e natimortalidade em suínos Abstract: Swine female reproductive quality is mainly measured by return to estrus, litter size, abortion, stillbirth and mummies. Porcine parvovirus (PPV) transplacental infection is associated to fetal death at different gestacional age, and mostly with fetal mummification due to abscence of fetal immunecompetence in early pregnancy. In late gestational age, immunecompetent fetuses can survive the PPV infection and the virus may be isolated from stillbirth and aborted animals. From commercial vaccinated swine herds, thirty nine fetuses over 70 days of gestational age, so immunocompetent, were separated for analysis. The application of hemagglutination inhibition test confirm fetal immunecompetence in 93,4% of the samples. Viral antigen was detected in isolated individual cells of the lung (alveolar macrophage), in multiple miocardial cells and in stromal cells of the timus (epithelial-reticular), by immuneperoxidase staining using an anti-VP2 monoclonal antibody. These results were observed in stillbirth and aborted fetuses. There was no statistically significant difference for PPV infection in stillbirth and aborted fetuses, but lung and thymus were significantly more positive that the heart. The presence of virus in fetal tissues was analyzed by nested-PCR assay for the NS-1 gene of PPV in stillbirth, aborted fetuses and mummies. The viral DNA was detected in 82.4% of the samples, with no significant difference in the type of fetus, determining that the porcine parvovirosis should not be characterized only as a disease of fetal mummification. Using nested-PCR assay, the frequency of identification of PPV was higher in the lung (96,99%) and hearth (93,33%) than in the spleen (54,91%), thymus (66,0%) and kidney (69,5%). Fetuses which death estimated age more than 100 days old were less positive to PPV and a significant difference in PVS detection was detected in tissues from fetuses from sows with lower (92.28%) and highest (65.43%) number of parturitions. This suggests for a higher susceptibility of transmission in younger sows, submitted to a fewer vaccinations. PPV DNA were detection was independent of antibody presence in fetuses. Fetus immunecompetence did not prevent the infection by PPV and these viruses are associated with abortion, stillbirth and mummies Doutorado Microbiologia Doutor em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Wirla Maria da Silva Cunha Tamashiro Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O objetivo do presente trabalho foi a obtenção e caracterização de anticorpos monoclonais contra a IL6 humana recombinante (hr) para serem empregados em ensaios imunoenzimáticos do tipo ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay) de detecção da IL6 humana nativa, presente em fluídos biológicos de pacientes portadores de quadros onde os níveis de IL6 encontram-se elevados, ou então produzida por monócitos humanos e murinos ativados in vitro. Dois grupos de hibridomas (1A6 e 3B1) secretores de anticorpos monoclonais anti-IL6 foram obtidos pela fusão de células de mieloma da linhagem SP2 Ag14/0 com esplenócitos de camundongos BALB/c, previamente imunizados com a IL6 humana recombinante. Esses hibridomas foram selecionados com base em sua reatividade com a hrIL6, através de ensaios do tipo ELISA indireto. As imunoglobulinas (Igs) monoclonais produzidas pelos hibridomas dos dois grupos são do isotipo IgG1 Kappa e foram purificadas de líquidos ascíticos e dos sobrenadantes de cultura por cromatografia de afinidade. As proteínas purificadas foram conjugadas com biotina para uso em ensaios de ELISA de captura da hrIL6, de modo a se identificar um ou mais pares de anticorpos adequados a esse tipo de teste, bem como para definir a sensibilidade de detecção da citocina. O par de anticorpos monoclonais 3B1E4 x 1A6F10-biotinilado se mostrou mais promissor nos ensaios de ELISA, detectando a citocina recombinante entre 8 e 512 ng/mL, liberando densidades óticas mais elevadas. Todos os anticorpos monoclonais (AcMos) anti IL6 estudados foram capazes de neutralizar a atividade biológica da citocina em ensaios empregando o hibridoma B13.9, uma célula dependente de IL-6 para seu crescimento. Finalmente, o par de hibridomas anti IL6 3B1E4 e 1A6F10 foi estudado quanto às suas principais características de cultivo: crescimento, produção in vitro dos anticorpos, consumo de glicose e produção de lactato e amônia. O seqüênciamento da porção N-terminal do par 3B1E4 e 1A6F10 revelou que as cadeias leves dos dois anticorpos apresentam seqüência idêntica de aminoácidos. Porém, a análise dos dez resíduos de aminoácidos presentes na região variável das cadeias pesadas resultou em seqüências completamente distintas nos dois monoclonais, sendo um forte indício de diferença nos sítios de ligação ao antígeno dos anticorpos estudados Abstract: In the present study we have developed monoclonal antibodies against human recombinant (hr) IL6, for the use in ELISA assays to detect the human native IL6 present in biological fluid of patients or in supernatant of activated human and rodent monocytes. Two families of hibridomas (1A6 and 3B1) secreting MAb against-IL6 were obtained from the fusion of mieloma cells from SP2 Ag14/0 lineage with spleen cells from BALB/c mice, previously immunized with human recombinant IL6. Those hibridomas were selected on the basis of their reactivity with the hrIL6, through an ELISA indirect assay. The monoclonal immunoglobulins (Igs) produced by these hibridomas are from IgG1 Kappa isotype and were purified from ascitic fluid and culture supernatant by affinity chromatography. The purified proteins from the ascitic fluid were conjugated with biotin for the use in ELISA hrIL6 capture assay, to identify one or more pairs of antibodies appropriated to this kind of test, as well to define the sensibility of cytokine detection. The pair of MAbs 3B1E4 x 1A6F10-biotinilates was shown promising in ELISA assays, detecting the recombinant cytokine between 8 and 512 ng/mL, liberating elevated optical densities. All of the a-IL6 MAbs studied were capable to neutralize the biological activity of the cytokine in attempt employing the hibridoma B13.9 IL-6 dependent. Finally, the pair of hibridomas a-IL6 3B1E4 and 1A6F10 was studied as regards his main cultivation characteristics: growth, MAb production in vitro, lactate and ammonia production and glucose consumption. The N-Terminal portion sequence of 3B1E4 and 1A6F10 revealed that both light-chains present identical amino acid sequence. However, the analysis of the ten amino acid residues present in variable region of heavy-chains resulted in completely distinct sequences in both antibodies, being a strong indication of difference in their ability to recognize the antigen Mestrado Imunologia Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Wirla Maria da Silva Cunha Tamshiro Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A administração de uma proteína solúvel por via oral é um dos meios mais efetivos de induzir a supressão da resposta imune sistêmica a antígenos protéicos, conhecida como tolerância oral ou de mucosas. No presente estudo, a tolerância oral à ovalbumina (OVA) foi analisada em camundongos BALB/c, selvagens e transgênicos (DO11.10), jovens, adultos, de meia-idade e velhos, utilizando-se protocolos de ingestão forçada (gavagem) ou voluntária (adicionada à água de beber) da proteína, aplicados por tempos variados. Tanto a gavagem como a ingestão voluntária de OVA induziram a tolerância sistêmica em camundongos BALB/c selvagens, de todas as faixas etárias avaliadas, de modo dose-dependente, conforme constatado pela produção reduzida de anticorpos séricos específicos, após o desafio antigênico por via parenteral. Entretanto, o tratamento oral com OVA não produziu o mesmo efeito nos camundongos transgênicos DO11.10, de qualquer das idades examinadas, muito embora esses animais tenham apresentado uma redução significativa no número de células do clonotipo KJ1-26, observada tanto no baço quanto no sangue periférico, após a ingestão da proteína. Nos camundongos BALB/c, o esquema de imunização parenteral com OVA, utilizando o hidróxido de alumínio como adjuvante, gerou preferencialmente a produção de anticorpos da classe IgG1, dependentes de linfócitos Th2, cujos níveis foram significativamente reduzidos pelo pré-tratamento oral com OVA. Nos camundongos transgênicos DO11.10, o mesmo esquema de imunização induziu uma resposta humoral mista, com a produção de anticorpos IgG2a e IgG1, dependentes das citocinas produzidas por linfócitos Th1 e Th2, respectivamente, cujos níveis não foram afetados pela prévia ingestão de OVA. Uma vez que camundongos BALB/c jovens tornaram-se tolerantes pela ingestão voluntária de OVA (4mg/mL, por 7 dias consecutivos), esse estado foi mantido por mais de 44 semanas e pôde ser revertido pela transferência adotiva de 6x10 células esplênicas naive, isoladas de camundongos jovens da linhagem selvagem. Entretanto, nos camundongos transgênicos DO11.10, a transferência adotiva do mesmo número de células esplênicas da linhagem selvagem, seguida por novo tratamento oral com OVA por ingestão voluntária, resultou em níveis ainda mais elevados de anticorpos séricos específicos. As células dendríticas (DCs) de camundongos BALB/c jovens tolerantes à OVA foram menos eficientes em sustentar a proliferação in vitro de células T naive, isoladas tanto de camundongos selvagens como transgênicos, do que as DCs de camundongos BALB/c imunizados apenas por via intraperitoneal (i.p.). As co-culturas de células T naive e DCs de camundongos tolerantes apresentaram níveis significativamente menores de citocinas liberadas por células com perfil Th1 (IL-2 e IFN-g) e Th2 (IL-4 e IL-10) do que as culturas realizadas na presença de DCs obtidas de camundongos BALB/c imunizados com OVA por via i.p. Por outro lado, as DCs de camundongos transgênicos DO11.10, alimentados ou não com OVA e desafiados com o antígeno por via i.p., foram igualmente eficientes em induzir a proliferação de células T específicas, assim como a secreção das citocinas IL-2, IFN-g, IL-4 e IL-10. Entretanto, a secreção de TGF- 'beta' foi significativamente mais elevada nos sobrenadantes de cultura de células T naive co-cultivadas com as DCs de camundongos BALB/c tolerantes do que com as DCs de camundongos DO11.10 ou dos BALB/c imunizados por via parenteral. Os resultados obtidos no presente trabalho indicam que, em um sistema imune integro, a tolerância às proteínas da dieta se estabelece às custas das interações entre células apresentadoras de antígeno e células T, nas quais as proporções celulares e as moléculas estimuladoras resultantes estão em delicado equilíbrio. Alterações nesse balanço podem provocar, como observado no camundongo DO11.10, o desencadeamento de respostas imunes dirigidas contra o antígeno relacionado com a população linfocitária predominante, podendo resultar em doenças inflamatórias e alérgicas. Estudos mais aprofundados são necessários para entender a dinâmica dessas populações celulares na indução e manutenção da tolerância, para eventualmente utilizar esse conhecimento na reversão de manifestações autoimunes ou de hipersensibilidades ou ainda na prevenção da rejeição de transplantes Abstract: The oral administration of soluble protein is one of the most effective ways of inducing the suppression of the systemic immune response to proteic antigens, otherwise known as oral tolerance. In this study, oral tolerance to ovalbumin (OVA) was analyzed in wild type BALB/c and DO11.10 transgenic mice of four ages: young, young adult, middle-aged and old, using protocols of forced ingestion (gavage) and continuous feeding (OVA added to the drinking water). Both gavage and voluntary ingestion (continuous feeding) of OVA induced dosedependent systemic tolerance in the BALB/c mice of all ages evaluated, as indicated by reduced production of specific antibodies in the sera after antigenic challenge. However, neither treatment affected the DO11.10 transgenic mice, since these present a significant reduction in the number of clonotype KJ1-26 cells after the ingestion of the protein, as observed in the spleen and peripheral blood. In BALB/c mice, a schedule of parenteral immunization with OVA using alumen as adjuvant preferentially leads to IgG1 antibody production, which is dependent on Th2 lymphocytes, with levels significantly reduced by oral pre-treatment with OVA. In DO11.10 transgenic mice, however, the same immunization schedule induced not only the production of the IgG1 antibodies related to cytokines produced by Th2 lymphocytes, but also IgG2a, related to Th1-producing cytokines, which had not been affected in the BALB/c mice. Once young BALB/c mice became tolerant by voluntary ingestion of OVA (4mg/mL, for 7 consecutive days), the state of tolerance was maintained for more than 44 weeks, although reversed by adoptive transference of 6 x 10 (x6) naive spleen cells, isolated from young wild type mice However, in the DO11.10 transgenic mice, the adoptive transfer of the same number of BALB/c spleen cells had to be followed by a new oral treatment with OVA by continuous feeding; this resulted in higher specific antibody levels in the sera. The dendritic cells (DCs) from tolerant young BALB/c mice were less efficient in supporting in vitro proliferation of isolated naive T cells (whether from BALB/c or DO11.10 mice) than were the DCs from BALB/c mice immunized intraperitoneally (i.p.). Cocultures of naive T cells and DCs from tolerant BALB/c mice revealed lower levels of cytokines from Th1 (IL-2 and IFN -) and Th2 (IL-4 and IL-10) than did those including DCs from i.p. immunized individuals. On the other hand, the DCs from DO11.10 transgenic mice, whether or not they had been fed with OVA, challenged intraperitoneally with the antigen were all equally efficient in the induction of the proliferation of specific T cells, as well as the secretion of IL-2, IFN -g, IL-4 and IL-10. However, TGF- 'beta' secretion was significantly higher in the supernatants of T cell cultures from naive BALB/c mice co-cultivated with DCs from tolerant BALB/c mice than in the presence of DCs from DO11.10 or immunized BALB/c mice. The results indicate that tolerance to dietary proteins is dependent of interactions between antigen presenting cells and T cells, with the ratio of these cells and the resultant stimulatory molecules in delicate balance. As observed in DO11.10 mice, alterations in this balance can cause immune responses against the antigen and generate inflammatory and allergic illnesses. Other studies are necessary to understand the dynamics of these cell populations in the induction and maintenance of tolerance, in the hopes that autoimmune and hypersensitivity manifestations can be reversed and transplant rejection prevented. Doutorado Imunologia Doutor em Genética e Biologia Molecular

Orientador : Dagmar Ruth Stach-Machado Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Mestrado

Orientador : Leonilda M. B. dos Santos Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencas Medicas Resumo: Estudos realizados nos modelos experimentais e em humanos têm sugerido que as células autoreativas são constituintes normais do organismo. No entanto, essas células não invadem o órgão alvo e não dão início às reações auto-imunes; fato que não está completamente esclarecido, embora seja evidente que a supressão ativa por células regulatórias tenha um papel crítico. O papel dos agentes infecciosos na gênese das doenças autoimunes é amplamente conhecido. A pré-exposição a certos agentes infecciosos como Mycobacterium tuberculosis (Mt) e as proteínas de choque térmico (hsp) componentes dos agentes infecciosos, contudo, pode ser benéfica e, em alguns casos, reduz a gravidade das doenças auto-imunes experimentais. O presente estudo mostra que o Mycobacterium tuberculosis (Mt) ou antígenos derivados desse agente como o PPD e peptídeo de uma hsp de PPD (180-196) reduzem a gravidade da Encefalomielite Experimental Autoimune e a resposta proliferativa das células T encefalitogênicas. A modulação da doença,é devido, pelo menos em parte, à ativação do efeito supressor dos linfócitos que expressam o receptor para o antígeno gd. Estes linfócitos altamente purificados reduzem significativamente a doença se transferidos adotivamente, além disso, as células T ?? proliferam em resposta ao peptídeo de PPD (180-196) ou são estimuladas pela ativação direta do receptor ?? produzindo quantidades significativas do fator transformador de crescimento (TGFb). Sendo esta citocina conhecida pelo seu importante efeito imunossupressor, ao menos em parte, a supressão observada, pode ser atribuída ao aumento de produção do TGFb. Simultaneamente, a atividade citotóxica dos linfócitos T gd foi também testada durante o curso clínico da EAE. O número de células T gd e o índice de apoptose de células T auto-reativas aumentaram significativamente na fase de recuperação da EAE induzida em ratos Lewis e, após a co-cultura com células T gd, as células T auto-reativas perderam parte do seu efeito encefalitogênico e de sua capacidade blastogênica. Essa redução na encefalitogenicidade é devida, pelo menos em parte, à eliminação de células T auto-reativas por apoptose. Essas evidências sugerem que antígenos derivados dos antígenos micobacterianos, incluindo o peptídeo sintético, podem ser utilizados para estimular uma via imunoregulatória, contribuindo, dessa forma, na manutenção da tolerância ao próprio e reduzindo a ativação de clones auto-reativos indesejáveis Abstract: Studies in experimental animal models and in humans have suggested that autoreactive cells are normal constituents of the T-cell repertoire. Why these T cells do not invade their target organs and initiate autoimmune reactions is not completely understood, although it is increasingly evident that active suppression by regulatory cells plays a critical role. The role of infectious agents in the genesis of autoimmune diseases is widely recognized. The pre exposure to the heat shock protein components of infectious agents, such as Mycobacterial antigens, however, can be beneficial and, in certain instances, ameliorate experimental autoimmune diseases. The present study provides evidence that antigens derived from Mycobacterium tuberculosis (Mt), such as Mt themselves, PPD and the peptide of PPD heat shock protein (180-196) reduces the severity of Experimental Autoimmune Encefalomyelitis and the proliferative response of encephalitogenic T cells. The modulation of the disease is due, at least in part, to the activation of suppressive effects of T lymphocytes that express the antigen receptor gd. Highly purified gd T lymphocytes reduce significantly the disease when adoptively transfer; moreover, gd T cells are activated to proliferate by the PPD(180-196) peptide, producing significant amounts of transforming growth factor (TGFb). Thus, the suppressive effect of gd T cells may, at least in part, be attributed to the TGFb they produce, since TGFb has well-documented immunosuppressive capabilities. Simultaneously, the direct effect of gd T cells on autoreactive T cells was also examined. The number of gd T cells and apoptosis of autoreactive T cells increased significantly in the recovery phase of the EAE induced in Lewis rats, and after co-culturing with gd T cells, autoreactive T cells loose some of their encephalitogenic effects and blastogenic capacity. This reduction in encephalitogenicity is due, at least in part, to the elimination of autoreactive T cells by apoptosis. Evidence provided here suggests that antigens derived from mycobacterial antigen, including a synthetic peptide with a conserved sequence of a HSP can be used to stimulate an immunoregulatory pathway, thus contributing to the maintenance of self-tolerance and reducing the activation of unwanted self-reactive clones Doutorado Ciências Básicas Doutor em Clínica Médica

Orientador: Wirla Maria da Silva Cunha Tamashiro Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A produção de óxido nítrico (NO) e das interleucinas pró-inflamatórias, IL-Ia, IL-IO e TNF-a, por células aderentes, residentes e/ou elicitadas, proveníentes de camundongos eutímicos da linhagem BALB/c, no decorrer do seu desenvolvimento pós-natal, foi investigada no presente trabalho As células residentes das cavidades peritoneais de camundongos récem-natos (1-15 dias) foram capazes de liberar quantidades elevadas de NO (59,08 + 3,31 µMol/l x 106 céls), quando estimuladas in vitro com LPS+IFN-y. Ao contrário, células peritoneais residentes obtidas de camundongos com idade superior a 30 dias não liberaram quantidades mensuráveis de NO «5IlMol/1 x 106 céls). As células provenientes de camundongos naive com 72 semanas de idade também foram capazes de liberar quantidades mensuráveis de NO após o estímulo com LPS + IFN-y, entretanto em níveis bem inferiores àqueles observados nos camundongos neonatos (7-14 µMol/1 x 106 céls). As células dos animais das demais faixas etárias só foram responsivas ao estímulo in vitro, liberando em média 29,35 + 2,72 IlMol de NO/1 x 106 céls (adulto jovem de 4 a 24 semanas) e 61,04 + 9,01 IlMol de NO/1 x 106 céls (adulto velho de 32 semanas), quando proveníentes de anímais elicitados in vivo com tioglicolato. A produção de NO também foi elevada em camundongos de 15 dias (63,88 + 5,34 JlMol de NO/1 x 106 céls) elicitados in vivo com tioglicolato. Experimentos realizados para verificar se a ausência de produção de NO pelas células não primadas pelo tioglicolato, obtidas de animais com idade superior a 30 dias, se devia às doses de LPS + IFN-y até então empregadas ou ao tempo de coleta após o estímulo não resultaram em uma mudança significativa do perfil anteriormente obtido. Os animais de todas dose de IFNy doses crescentes do lipopolissacáride produziram um aumento nos níveis do gás as idades empregadas responderam de forma dose-dependente aos estímulos utilizados, sendo que o estímulo que parece ter uma influência maior na produção de NO nas idades estudadas é o LPS, tanto nos camundongos previamente elicitados como nos naive, pois para uma mesma liberado. A sintase de óxido nítrico induzível (iNOS) pode ser detectada por Westem blot em lisados obtidos de células residentes e elicitadas de camundongos com até 8 semanas de idade. Nos animais mais velhos testados (32 e 72 semanas de idade) só foi possível a detecção da iNOS em lisados obtidos de células elicitadas pelo tioglicolato. No que se refere a produção de IL-la, foi possível verificar que as células aderentes obtidas de animais jovens e velhos, previamente estimulados com tioglicolato, foram igualmente responsivas ao estímulo empregado in vitro (LPS). Em células residentes, no entanto, observou-se que os níveis dessa citocina foram mais baixos em animais jovens, elevando-se nos animais velhos (72 semanas de idade). Por outro lado, a liberação de TNF -a não pode ser observada em sobrenadantes de quando as células aderentes foram obtidas de cavidades peritoneais previamente estimuladas cultura de células aderentes obtidas de cavidades peritoneais de animais naive de qualquer idade testada. A liberação de TNF -a só pode ser detectada em sobrenadantes de cultura com tioglicolato. Neste caso, os níveis de TNF-a foram baixos (433,8 e 143,10 pglml) em animais neonatos (1 e 2 semanas de idade, repectivamente) e se mostrou de 10 a 15 vezes mais elevada em animais com idade igualou superior a 8 semanas. Células residentes ou elicitadas com tioglicolato, obtidas de animais com idade superior a 8 semanas foram capazes de produzir IL-I0 em níveis detectáveis. Entretanto, as quantidades de IL-IO liberadas por células provenientes de animais previamente elicitados pelo tioglicolato foi 2,5 a 4 vezes menores do que as detectadas em células provenientes de cavidades não elicitadas. De acordo com observações já relatadas na literatura, os resultados ora obtidos sugerem que durante o envelhecimento as células inflamatórias, particularmente os macrófagos, produzem de forma aumentada certos mediadores, tais como o TNF-a, bem como o óxido nítrico Mestrado Imunologia Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Leonilda Maria Barbosa dos Santos Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A EAE é uma doença autoimune causada por linfócitos T CD4 +. Pode ser induzida em animais geneticamente susceptíveis através da imunização com mielina ou seus componentes, ou ser transferida passivamente para animais normais através de clones autorreativos aos componentes da mielina. É utilizada como modelo para o estudo da Esclerose Múltipla Humana. A EAE induzida em ratos Lewis é caracterizada por se apresentar como doença monofásica, isto é, após a inoculação com o neuroantígeno, o animal apresenta um único e severo pico da doença, se recupera e não volta mais a apresentar períodos de exacerbação. Vários autores têm demonstrado o envolvimento das células T TCR ?d, citocinas como o TGFß, e deleção dos clones autorreativos por apoptose no modelo de EAE. Desta forma, no presente trabalho demonstramos que as células T TCR ?d estão significativamente aumentadas no período de recuperação da doença e que esta população celular secreta TGF, citocina e também esta envolvida na recuperação da mesma por seu efeito regulador do sistema imune. Foi também demonstrado que a recuperação do animal é devido a deleção dos clones autorreativos por apoptose Mestrado Imunologia Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Leonilda Maria Barbosa dos Santos Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A Encefalomielite Experimental Autoimune é uma doença que apresenta muitos aspectos clínicos e histológicos em comum com a Esclerose Múltipla em humanos, e por este motivo vem sendo utilizada para o estudo da mesma. O estudo dos mecanismos envolvidos na supressão da EAE seja através da administração oral de neuro-antígenos ou na fase remissiva da doença, revelou que a supressão ativa é o principal mecanismo imuno-modularor (HIGGINS & WEINER, 1988; LIDER et al., 1989) Sabe-se que a indução da EAE está relacionada a clones de células T CD4 + do tipo Th1auto-reativas a neuro-antígenos, e a produção de citocinas pró inflamatórias, tais como IL-2, TNF-a e IFN-? (NICHOLSON & KUCROO, 1996). Em contrapartida, a supressão da doença é mediada por células do tipo Th2 e por citocinas anti-inflamatórias, tais como IL-4, IL-10 e TGF-f3 (CHEN et al., 1994; DRUET et al., 1996) Foi demonstrado anteriormente o papel das células T ?d no controle da autoimunidade (CARDILLO et aI., 1993) e na tolerância imunológica (McMENAMIN et aI, 1994; McMENAMIN et aI, 1995; SUZUKI et aI., 1995) No presente trabalho procuramos investigar o papel dos linfócitos T ?d na indução de EAE, utilizando o anticorpo monoclonal anti-TCR ?d 3A10 para modular essa população celular. Os resultados aqui obtidos mostram a exacerbação da EAE nos camundongos ?d -depletados, com aumento da severidade e da incidência da doença e também antecipação do aparecimento dos seus sinais clínicos. Nos estudos in vitro observou-se aumento da resposta linfoproliferativa para a proteína básica de mielina (MBP) e da produção de anticorpos anti-MBP no soro, sugerindo aumento da atividade dos clones auto-reativos causadores da doença. Houve também aumento da resposta linfoproliferativa a concanavalina A. O estudo da produção de citocinas por células esplênicas dos animais ?d -depletados revelou aumento da secreção de TNF-a e diminução da secreção de TGF-I3. Todos esses resultados sugerem que os linfócitos T ?d exercem uma função imuno-supressora no modelo de EAE. O aumento da resposta linfoproliferativa a concanavalina A para os animais ?d -depletados sugere que esta atividade supressora é inespecífica, a exemplo do mecanismo de bystander suppression proposto por MILLER et aI. (1991) e provavelmente se efetiva através da secreção de citocinas anti-inflamatórias, dentre as quais o TGF-13 está envolvido Mestrado Imunologia Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores: Leonilda Maria Barbosa Santos, Ilma Aparecida Paschoal Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Mestrado Imunologia Mestre em Ciências Biológicas