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Submitted by THAÍS ALVES BARBOSA null (thaalvesb@hotmail.com) on 2020-12-06T22:57:49Z No. of bitstreams: 1 Tese corrigida final.pdf: 2289592 bytes, checksum: 4584373e0fc733af6238a95513152220 (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-12-08T13:07:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 barbosa_ta_dr_bot.pdf: 2289592 bytes, checksum: 4584373e0fc733af6238a95513152220 (MD5) Made available in DSpace on 2020-12-08T13:07:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 barbosa_ta_dr_bot.pdf: 2289592 bytes, checksum: 4584373e0fc733af6238a95513152220 (MD5) Previous issue date: 2020-02-20 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A elevação das taxas de bactérias multirresistentes em ambientes destinados a prestação de cuidados à saúde é reconhecido como um problema de saúde pública mundial. Atualmente, as opções terapêuticas são limitadas em decorrência da produção de β-lactamases de espectro estendido (ESBL), β-lactamases do tipo AmpC e carbapenemases. Tais enzimas são capazes de se disseminar com facilidade entre patógenos, dificultando o controle e o tratamento das infecções nosocomiais. Sendo assim, o presente estudo teve como objetivo principal estudar micro-organismos Gram-negativos isoladas de aspirado traqueal (AT) e da mucosa nasal (MN) e anal (MA) de neonatos da UTIN pertencentes ao Hospital das Clínicas (HC) da Faculdade de Medicina de Botucatu (FMB). Os micro-organismos foram coletados previamente em um estudo de coorte prospectivo no período de novembro de 2013 a novembro de 2014, visando determinar a resistência aos antimicrobianos, fatores de virulência e pesquisa de clones prevalentes na Unidade. As enterobactérias e os bacilos gram-negativos não fermentadores (BGNF) previamente coletados foram submetidos à identificação genotípica, detecção de β-lactamases de espectro estendido (ESBL), β-lactamases do tipo AmpC e carbapenemases, produção de biofilme e detecção de marcadores de virulência específicos em Pseudomonas aeruginosa. Para a pesquisa de clones prevalentes na unidade, foi realizada a tipagem pela técnica de eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE). Os resultados revelaram que as enterobactérias foram os micro-organismos predominantes em sítios de colonização e infecção. Este trabalho demonstrou maior colonização da MA seguida pela MN. Enterobacter cloacae foi a espécie isolada com maior frequência em amostras de colonização. Os dados aqui encontrados revelaram maiores índices de infecção por Klebsiella spp. e Serratia marcescens, causando infecção da corrente sanguínea e pneumonia, respectivamente. Nesta pesquisa, pôde ser observada elevada produção de biofilme, sendo que 95,0% das enterobactérias e 100% dos BGNF foram produtores, com maior proporção de enterobactérias mostrando média produção de biofilme, enquanto os BGNF demonstraram em sua maioria serem fortes produtores. Através da pesquisa dos genes codificadores de fatores de virulência específicos para Pseudomonas aeruginosa foi possível observar que a maioria dos isolados apresentaram genes codificadores de alginato, fosfolipase C hemolítica, exotoxina A e ramnolipídeos. A pesquisa fenotípica de ESBL revelou 16 (5,3%) dos isolados produtores dessas enzimas. Dentre esses, seis apresentaram genes de resistência, quatro (66,7%) apresentaram o gene codificador de CTX-M-9, três (50%) apresentaram o gene de TEM e um (16,7%) foi positivo para o gene de SHV e de CMY-2. A pesquisa de β-lactamases do Tipo AmpC revelou a produção fenotípica por 20 isolados e, destes, dois apresentaram o genótipo EBC. Através da análise do perfil genético, foi possível observar linhagens idênticas de espécies de enterobactérias em diferentes sítios de coleta de RNs distintos, evidenciando possível transmissão cruzada; além disso, foi possível identificar característica de persistência de algumas cepas dentro da unidade. Empregou-se uma análise uni e multivariada de regressão de Cox para verificar os fatores de risco de colonização e infecção por micro-organismos Gram-negativos. Os resultados da análise multivariada revelaram que, a cada semana a mais na idade gestacional, aumenta o risco diário em 7,0% para a colonização do RN por bacilos Gram-negativos, enquanto o uso de antimicrobianos nas primeiras 72 horas diminui o risco diário em 35% de colonização por esses patógenos. Além disso, a produção de biofilme por esses micro-organismos apresentou associação com a persistência da colonização do RN pelo mesmo patógeno e aumenta em 75% a chance diária do RN evoluir para infecção, assim como a produção de ESBL, que aumenta a chance diária em 46,8 vezes para o RN ter infecção. Os dados desta pesquisa são de fundamental importância para a saúde pública, pois permitem o conhecimento da epidemiologia molecular de espécies importantes de enterobactérias na UTIN de um hospital universitário terciário de alta complexidade, permitindo, assim, a intensificação do monitoramento e implantação de medidas de controle e precaução. The increase rates of multidrug-resistant bacteria in healthcare environments are recognized as a worldwide public health problem. Currently, therapeutic options are limited due to the production of extended spectrum β-lactamases (ESBL), AmpC-type β-lactamases and carbapenemases. Such enzymes can spread easily among pathogens, making it difficult to control and treat nosocomial infections. Therefore, the present study aimed to study Gramnegative microorganisms isolated from tracheal aspirate (TA) and nasal mucosa (MN) and anal (MA) from NICU newborns belonging to the Hospital das Clínicas (HC) of the Faculty of Medicine of Botucatu (FMB). Microorganisms were previously collected in a prospective cohort study from November 2013 to November 2014, in order to determine resistance to antimicrobials, virulence factors and clone research prevalent in the Unit. Previously collected enterobacteria and non-fermenting gram-negative bacilli (NFGNB) were subjected to genotypic identification, detection of extended spectrum β-lactamases (ESBL), AmpC-type β-lactamases and carbapenemases, biofilm production and detection of specific virulence in Pseudomonas aeruginosa. For the research of clones prevalent in the unit, typing was performed using the pulsed field gel electrophoresis (PFGE) technique. The results revealed that enterobacteria were the predominant microorganisms in colonization and infection sites. This work demonstrated greater colonization of MA followed by MN. Enterobacter cloacae was the most frequently isolated species in colonization samples. The data found here revealed higher rates of infection by Klebsiella spp. and Serratia marcescens, causing bloodstream infection and pneumonia, respectively. In this research, high biofilm production could be observed, with 95.0% of enterobacteria and 100% of NFGNBs being producers, with a higher proportion of enterobacteria showing average biofilm production, while NFGNBs were mostly strong producers. Through the search for genes encoding specific virulence factors for Pseudomonas aeruginosa it was possible to observe that most of the isolates had genes encoding alginate, hemolytic phospholipase C, exotoxin A and ramnolipids. The ESBL phenotypic research revealed 16 (5.3%) of the isolates producing these enzymes. Among these, six had resistance genes, four (66.7%) had the CTX-M-9 coding gene, three (50%) had the TEM gene and one (16.7%) was positive for the gene of SHV and CMY-2. The search for AmpC-type β-lactamases revealed phenotypic production by 20 isolates and, of these, two presented the EBC genotype. Through the analysis of the genetic profile, it was possible to observe identical lineages of species of enterobacteria in different collection sites of different newborns, showing possible cross-transmission; in addition, it was possible to identify the persistence characteristic of some strains within the unit. A univariate and multivariate analysis of Cox regression was used to verify the risk factors for colonization and infection by Gram-negative microorganisms. The results of the multivariate analysis revealed that, each week more at gestational age, the daily risk increases by 7.0% for the colonization of newborns by Gram-negative bacilli, while the use of antimicrobials in the first 72 hours decreases the daily risk in 35% of colonization by these pathogens. In addition, the production of biofilm by these microorganisms was associated with the persistence of colonization of the newborn by the same pathogen and increases by 75% the daily chance of the newborn evolving to infection, as well as the production of ESBL, which increases the daily chance 46.8 times for the newborn to have infection. The data of this research are of fundamental importance for public health, as they allow the knowledge of the molecular epidemiology of important species of enterobacteria in the NICU of a tertiary university hospital of high complexity, thus allowing the intensification of the monitoring and implementation of control measures and precaution CAPES: 001

Submitted by Fernanda Cristina de Campos Casale (fernanda.campos@unesp.br) on 2019-08-27T02:31:46Z No. of bitstreams: 1 TESE FERNANDA CASALE.pdf: 2659434 bytes, checksum: 997bc56cfba5157b9871dcb026901c5d (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2019-08-27T19:04:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 casale_fcc_dr_bot_par.pdf: 918841 bytes, checksum: 540ded3b69a8253b7660b60647dfc7eb (MD5) Made available in DSpace on 2019-08-27T19:04:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 casale_fcc_dr_bot_par.pdf: 918841 bytes, checksum: 540ded3b69a8253b7660b60647dfc7eb (MD5) Previous issue date: 2019-08-09 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A mastite bovina é uma das doenças que mais causam prejuízos às propriedades leiteiras e, apesar dos programas de controle, Escherichia coli destaca-se como importante patógeno ambiental causador desta enfermidade na sua forma clínica. Isolados obtidos de infecções nas mamas são classificadas como E. coli patogênica mamária (MPEC). O objetivo deste estudo foi caracterizar geneticamente isolados de E. coli a partir de leite de vacas com mastite clínica utilizando técnicas moleculares, bem como investigar os padrões de aderência e resistência aos antimicrobianos dos isolados, para isso a investigação dos grupos filogenéticos, genes de virulência, presença de clones (por Pulsed field gel electrophoresis, PFGE), tipos de adesão em células HeLa, resistência aos antimicrobianos e genes relacionados com essa resistência foram realizados em 110 E. coli isoladas de leite de vacas com mastite clínica de diferentes fazendas dos estados de São Paulo, Minas Gerais e Paraná. De acordo com a presença dos genes específicos arpA, chuA, yjaA e TspE4.C2, os isolados foram classificados principalmente nos grupos comensais A (50,9 %) e B1 (38,2 %), seguidos dos grupos D (2,7 %), C (1,8 %) e B2/E/F/Escherichia clade I (0,9 %). Três isolados (2,7 %) não foram categorizados em nenhum desses grupos, classificados como de grupo filogenético desconhecido. Nenhum dos 110 isolados apresentou genes que caracterizam E. coli diarreiogênicas (DEC), entretanto os genes astA e shf, geralmente encontrados em E. coli enteroagregativa, foram identificados em 7,3 % (8/110) e 10,3 % (3/29) dos isolados, respectivamente. Entre os genes que caracterizaram E. coli extra-intestinal (ExPEC), fimH (93,6 %) foi o mais frequente, seguidos pelos genes traT (77,3 %), ompT (68,2 %), ecpA (65,5 %), irp2 (34,5 %), fimA (28,2 %), sitA (26,4 %), cdt (10 %), KpsMTII/iroN/iucD (3,6 %), hlyA/ireA/ibe10 (1,8 %) e papA/papC/sat/vat (0,9 %). Pela análise de PFGE, observou-se 103 pulsotipos e seis clones, quatro dos quais obtidos na mesma fazenda em animais diferentes e um no mesmo animal, em diferentes momentos da lactação, indicando casos de persistência de E. coli nas infecções intramárias. Segundo os parâmetros de adesão em células HeLa, 26 (23,6 %) isolados aderiram de forma agregativa, enquanto quatro (3,6 %) aderiram de forma difusa; o restante dos isolados foram caracterizados com aderência não característica, não aderentes ou promoveram o destacamento do tapete celular. Em relação à ação dos antimicrobianos, 19,1 % dos isolados foram resistentes à tetraciclina e a maioria (99,1 %), foram sensíveis à cefoxitina. Ainda, cinco (4,5 %) isolados foram produtores de ESBL em teste fenotípico, ocorrendo a presença dos genes blaTEM (31,8 %), blaCTX-M-2/ blaCTX-M-8 (1,8 %) e blaCTX-M-15 (0,9 %). O gene blaCMY-2 foi relatado em um (0,9 %) isolado de E. coli. Conclui-se que os isolados de E. coli de mastite clínica bovina foram bastante heterogêneos em suas identidades gênicas, não sendo possível apresentar um padrão de virulência característico para o patotipo MPEC, pois os genes ecpA, papA, shf, ibe10, ompT, ireA, cdt, sat e blaCTX-M-8, já descritos genericamente em ExPEC, foram observados nos isolados de mastite pela primeira vez nesse trabalho. Não foram identificadas DEC e por isso, os isolados de mastite apresentam pequeno potencial de risco zoonótico, transmissível pelo leite bovino, bem como os genes associados a processos diarreiogênicos não parecem não apresentar influência no estabelecimento de mastite clínica Além disso, embora grande parte dos isolados não tenham produzido β-lactamases no teste fenotípico, a presença de cepas carreadoras desses genes no ambiente representa preocupação em saúde pública, em virtude do aumento de resistência de E. coli obtidas de animais. Bovine mastitis is one of the diseases that most causes damage to dairy properties and, despite control programs, Escherichia coli stands out as an important environmental pathogen that causes this disease in its clinical form. Isolates obtained from breast infections are classified as mammary pathogenic E. coli (MPEC). The objective of this study was to genetically characterize E. coli isolates from milk of cows with clinical mastitis using molecular techniques, as well as to investigate the adhesion patterns and antimicrobial resistance of isolates, for this purpose the investigation of phylogenetic groups, virulence genes, presence of clones (by Pulsed field gel electrophoresis, PFGE), HeLa cell adhesion types, antimicrobial resistance, and genes related to this resistance were performed on 110 E. coli isolated from milk of cows with clinical mastitis from different state farms from São Paulo, Minas Gerais and Paraná. According to the presence of the specific genes arpA, chuA, yjaA and TspE4.C2, isolates were classified mainly in commensal groups A (50.9 %) and B1 (38.2 %), followed by groups D (2.7 %), C (1.8 %) and B2/E/F/Escherichia clade I (0.9 %). Three isolates (2.7 %) were not categorized in any of these groups, classified as unknown phylogenetic group. None of the 110 isolates presented genes that characterize diarrheagenic E. coli (DEC), however, the astA and shf genes, commonly found in enteroaggregative E. coli, were identified in 7.3 % (8/110) and 10.3 % (3/29) of the isolates, respectively. Among the genes that characterized extraintestinal pathogenic E. coli (ExPEC), fimH (93.6 %) was the most frequent, followed by traT (77.3 %), ompT (68.2 %), ecpA (65, 5 %), irp2 (34.5 %), fimA (28.2 %), sitA (26.4 %), cdt (10 %), KpsMTII/iroN/iucD (3.6 %), hlyA/ireA/ibe10 (1.8 %) and papA/papC/sat/vat (0.9 %). By PFGE analysis, 103 pulsotypes and six clones were observed, four of which were obtained from the same farm in different animals and one in the same animal at different times of lactation, indicating cases of E. coli persistence in intrammary infections. According to adhesion parameters in HeLa cells, 26 (23.6 %) isolates adhered aggregatively, while four (3.6 %) adhered diffusely; the remaining isolates were characterized with non-characteristic adherence, non-adherence or promoted detachment of the cell mat. Regarding the action of antimicrobials, 19.1 % of the isolates were resistant to tetracycline and most (99.1 %) were sensitive to cefoxitin. In addition, five (4.5 %) isolates produced ESBL in phenotypic test, with the presence of blaTEM (31.8 %), blaCTX-M-2/blaCTX-M-8 (1.8 %) and blaCTX-M-15 (0.9 %). The blaCMY-2 gene was reported in one (0.9 %) E. coli isolate. It was concluded that the isolates of E. coli from clinical bovine mastitis were very heterogeneous in their gene identities. It is not possible to present a characteristic virulence pattern for the MPEC pathotype, since the genes ecpA, papA, shf, ibe10, ompT, ireA, cdt, sat and blaCTX-M-8, already described generically in ExPEC, were observed in mastitis isolates for the first time in this work. No DEC were identified, therefore, mastitis isolates have little potential for zoonotic risk, transmissible through bovine milk, and genes associated with diarrhiogenic processes do not seem to have any influence on the establishment of clinical mastitis. In addition, although most isolates have not produced β-lactamases in the phenotypic test, the presence of carrier strains of these genes in the environment is a concern in public health, due to the increased resistance of E. coli obtained from animals. CAPES: 001

Submitted by Haia Cristina Rebouças de Almeida (haia.almeida@uniceub.br) on 2019-06-07T15:03:57Z No. of bitstreams: 1 21553628.pdf: 695467 bytes, checksum: fe3718b2c690ee0f4eaf944b677c0f13 (MD5) Approved for entry into archive by Fernanda Weschenfelder (fernanda.weschenfelder@uniceub.br) on 2019-06-18T13:33:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 21553628.pdf: 695467 bytes, checksum: fe3718b2c690ee0f4eaf944b677c0f13 (MD5) Made available in DSpace on 2019-06-18T13:33:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 21553628.pdf: 695467 bytes, checksum: fe3718b2c690ee0f4eaf944b677c0f13 (MD5) Previous issue date: 2018 As betalactamases do tipo AmpC são enzimas pertencentes a classe C de Ambler, produzidas por membros da família Enterobacteriaceae e outros bacilos Gram negativos, podendo ser cromossomais ou plasmidiais. Esse mecanismo confere resistência in vivo a grande parte dos betalactâmicos, como as cefalosporinas de primeira, segunda e terceira geração, penicilinas e a alguns inibidores de betalactamase, tendo como consequência opções terapêuticas restritas. Por apresentar diferentes tipos, as famílias dessas enzimas foram classificadas de acordo com o seu perfil de resistência possuindo CMY, ACT, DHA, FOX e MIR como exemplos de AmpC plasmidial. Para a detecção dessas enzimas, existem diferentes métodos e técnicas, como os testes genotípicos por meio da PCR e os fenotípicos por meio de disco-difusão em ágar. Esse trabalho foi realizado no formato de uma revisão bibliográfica narrativa, com o objetivo de descrever o mecanismo de resistência plasmidial do tipo AmpC, bem como suas possíveis formas de detecção laboratorial. https://repositorio.uniceub.br/jspui/retrieve/37223/21553628.pdf

O crescente aumento da resistência aos antimicrobianos em Pseudomonas aeruginosa é um exemplo notável de como as bactérias podem manter e expressar novas informações genéticas que conferem resistência a uma ou várias drogas. No presente estudo avaliou-se a susceptibilidade aos antimicrobianos em isolados de P. aeruginosa em três grandes centros de referência do Estado do Rio Grande do Norte: Laboratório Dr. Almino Fernandes (LACEN-RN), Laboratório de Análises Clínicas do HUOL e Laboratório de Análise Clínicas do Hospital Giselda Trigueiro (HGT). Os isolados foram obtidos entre janeiro de 2013 e junho de 2014, onde 113 cepas foram isoladas de diversas amostras clínicas por demanda espontânea. A espécie de P. aeruginosa foi identificada inicialmente nos laboratórios de origem e confirmada, através de testes fenotípicos, no Laboratório de Micobactérias (LABMIC) da Universidade Federal do Rio Grande do Norte - UFRN. A determinação da susceptibilidade deu-se através do Teste de Disco Difusão. Após determinação do perfil de resistência, as amostras foram submetidas à avaliação fenotípica confirmatória. Do total de 113 isolados 67,2% (n = 76) apresentaram perfil de resistência a, pelo menos, uma classe de antimicrobianos. Todas as cepas de P. aeruginosa foram susceptíveis a Polimixina B. As maiores taxas de resistência foram verificadas frente à Ofloxacina (57,5%), ciprofloxacina (55,7%), Norfloxacina (55,7%), ticarcilina-ácido clavulânico (43,3%), ceftazidima (41,5%), Meropenem (39,8%), Aztreonam e Cefepime (38,9%). A frequência de resistência foi menor frente à imipenem (36,2%), tobramicina (36,2%), piperacilina-tazobactam (36,2%) e amicacina (28,3%). Das 113 cepas estudadas, 46 (40,7%) apresentaram resultados fenotípicos positivos para produção de β-Lactamases do tipo AmpC. 50 (44%) apresentaram resistência a, pelo menos, um dos carbapenêmicos avaliados, e estas foram submetidas ao teste de detecção fenotípica para produção de Metallo Beta Lactamase - MβL. Das 50 amostras com resistência a carbapenêmicos, 21 (42%) apresentaram teste fenotípico positivo para produção de metallo-β-lactamase a partir do teste de bloqueio enzimático, sendo presuntivamente consideradas produtoras de MβL. A partir dos dados obtidos, concluímos que a identificação precoce de patógenos e a análise da resistência de microrganismos aos antimicrobianos constituem importante ferramenta para auxiliar os clínicos no tratamento de infecções. Dessa forma, conhecer o perfil de susceptibilidade aos antibióticos de P. aeruginosa pode nortear a escolha de terapia empírica. The enhanced antimicrobial resistance in Pseudomonas aeruginosa is a remarkable example of how the bacteria can maintain and express the new genetic information conferring resistance to one or more drugs. In the present study we evaluated the profile of antimicrobial susceptibility in isolates of P. aeruginosa from three major Rio Grande do Norte state reference centers: Laboratory Dr. Almino Fernandes (LACEN-RN), Laboratory of Clinical Analysis of HUOL and Analysis Laboratory of Clinical Hospital Giselda Trigueiro (HGT). The isolates were obtained between January 2013 and June 2014, in which 113 strains were isolated from various clinical specimens by spontaneous demand. The species of P. aeruginosa was first recognized in home laboratories and confirmed by phenotypic tests, the Mycobacteria Laboratory (LABMIC) of the Federal University of Rio Grande do Norte - UFRN. The determination of antimicrobial susceptibility was given through the disk diffusion test. After determining the resistance profile, the samples were subjected to confirmatory phenotypic evaluation to beta lactamase producing AmpC type detection and Metallo Beta Lactamase. Of the 113 isolates 67.2% (n = 76) showed resistance profile of the at least one class of antimicrobials. All strains of P. aeruginosa were susceptible to Polymyxin B. The highest resistance rates were checked against the ofloxacin 57.5% (n = 65), Ciprofloxacin 55.7% (n = 63), Norfloxacin 55.7% (n = 63), Ticarcillin-clavulanic acid 43.3% (n = 49) Ceftazidime 41.5% (n = 47), Meropenem 39.8% (n = 45), and Aztreonam Cefepime 38.9% (n = 44), Imipenem 36.2% (n = 41 ) Tobramycin 36.2% (n = 41), piperacillin-tazobactam 28.3% (n = 32) and amikacin 28.3% (n = 32). Of the 113 strains studied, 46 (40.7%) showed positive phenotypic results for the production of β-lactamases AmpC type of approach through the disk method. Fifty (44%) isolates showed resistance to at least one of the evaluated carbapenems, and these were subjected to phenotypic screening test for production Metallo Beta Lactamase - MBL, by blocking enzymatic test with discs combined with EDTA. Of the 50 samples with resistance to carbapenems, 21 (42%) showed positive phenotypic test for the production of metallo-β-lactamase producing considered presumptively with MBL. The data demonstrate high production of β-lactamases type ampC Metallo-and β-lactamase. It was also observed high antimicrobial resistance rates, especially carbapenems. Therefore it is concluded that early identification of pathogens and analysis of microorganisms to antimicrobial resistance constitute an important tool to assist clinicians in the treatment of infections.

A inibição das fosfodiesterases (PDEs) aumenta os níveis intracelulares de nucleotídeos cíclicos 3' : 5'-monofosfato cíclico de adenosina (AMPc) e 3' : 5'-monofosfato cíclico de guanosina (GMPc), os quais tem muitos efeitos fisiológicos e bioquímicos, sobretudo no sistema cardiovascular. O objetivo deste estudo foi analisar os efeitos farmacológicos de um novo composto derivado do pirazol, LQFM 021, o qual foi apontado por estudos de modelagem molecular como possível inibidor de PDE-3. Para tanto, artérias aortas de ratos foram isoladas e montadas em banhos de órgão para registro da tensão isométrica do efeito relaxante do LQFM 021, em preparações pré-contraídas com fenilefrina. Foi analisada a participação do endotélio vascular, da guanilato ciclase solúvel (GCs) e da adenilato ciclase (AC), o papel dos canais de K+ e de Ca2+, além da contribuição da captação de Ca2+ pelo retículo sarcoplasmático. Como resultado, foi demonstrado que o LQFM 021 induz relaxamento vascular (Emax: 54.9 ± 6.0%), sendo este relaxamento potencializado pelo endotélio (Emax:88.1 ± 2.1%). A inibição da AC com MDL-12.330A (10 μM) ou da GCs com ODQ (1 μM), reduziram o relaxamento de 88,1 ± 2,1%, para 48,35 ± 3,01% e 19,95 ± 2,32%, respectivamente. A pré-contração com KCl 45 mM ou o tratamento das preparações com TEA (5 mM), reduziram quase que por completo o efeito relaxante do composto. A inibição da Ca2+/ATPase reticular com CPA (10 μM), reduziu o relaxamento estimulado pelo LQFM 021 em aproximadamente 66,5%. Curva concentração-resposta contrátil induzida pela fenilefrina (0,1 nM a 1 μM) ou pelo CaCl2 (0 a 3 mM, em meio zero-cálcio + fenilefrina) foram reduzidas pelo pré-tratamento das preparações com LQFM 021 (EC50). Em conclusão, este estudo mostrou que o novo derivado sintético de pirazol LQFM 021 é um possível inibidor de PDE-3 e possui atividade vasorelaxante. O endotélio participa e potencializa o relaxamento estimulado pelo composto. A via da GCs e AC estão envolvidas no mecanismo de ação do LQFM 021. Também foi evidenciada a participação do retículo sarcoplasmático, bem como o fluxo de K+ e de Ca2+ através da membrana celular. The inhibition of phosphodiesterases (PDEs) increases intracellular levels of cyclic nucleotides 3 ': 5'-cyclic adenosine monophosphate (cAMP) and 3 ': 5'-cyclic guanosine monophosphate (cGMP), which has many physiological and biochemical effects, especially in cardiovascular system. The objective of this study was to analyze the pharmacological effects of a new compound derived from pyrazole, LQFM 021, which was indicated by molecular modeling studies as a possible inhibitor of PDE-3. For this purpose, aortas were isolated of rats and mounted in organ baths for isometric tension recording of the relaxing effect of LQFM 021, in preparations pre-contracted with phenylephrine. We analyzed the involvement of the vascular endothelium, soluble guanylate cyclase (sGC) and adenylate cyclase (AC), the role of K+ channels and Ca2+, besides the contribution of Ca2+ uptake by the sarcoplasmic reticulum. As a result, was demonstrated that the LQFM 021 induces vascular relaxation (Emax: 54.9 ± 6.0%), being this relaxation potentiated by endothelium (Emax: 88.1 ± 2.1%). The inhibition of AC with MDL-12.330A (10 μM) or of the sGC with ODQ (1 μM) reduced the relaxation of 88.1 ± 2.1%, to 48.35 ± 3.01% and 19.95 ± 2.32%, respectively. The pre-contraction with KCl 45 mM or treatment of preparations with TEA (5 mM), reduced almost completely the relaxing effect of the compound. Inhibition of Ca2+ / ATPase reticular with CPA (10 mM) reduced the relaxation stimulated by 021 LQFM approximately 66.5%. Concentration-response curve contractile induced by phenylephrine (0.1 nM to 1 μM) or by CaCl2 (0-3 mM, zero-calcium + phenylephrine) were reduced by pretreatment of preparations with LQFM 021 (EC50). In conclusion, this study showed that the new synthetic derivative of pyrazole LQFM 021 is a potential inhibitor of PDE-3 and has vasorelaxant activity. The endothelium potentiates the relaxation stimulated by the compound. The route of sGC and AC are involved in the mechanism of action of LQFM 021. Was also evidenced by participation from sarcoplasmatic reticulum, well as the flow of K+ and Ca2+ through the cell membrane.

FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais As infecções do trato urinário (ITU) são manifestações freqüentes na população, geralmente causadas por bacilos Gram-negativos. As β-lactamases são enzimas bacterianas que conferem resistência aos antimicrobianos do tipo β-lactâmicos (penicilinas, cefalosporinas, aztreonam e carbapenêmicos). A produção de β-lactamases de Espectro Estendido (ESBL) tem sido descrita como um importante mecanismo de resistência aos β-lactâmicos. De maneira geral, Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae são as espécies bacterianas mais comumente encontradas produzindo ESBL, embora a detecção dessas enzimas já tenha sido observada em diversos gêneros dentro da família Enterobacteriaceae. O objetivo deste estudo foi avaliar os perfis de susceptibilidade a antimicrobianos e correlacionar os testes fenotípicos com a detecção de marcadores genéticos para produção de β-lactamases dos tipos ESBL, AmpC e KPC em enterobactérias associadas à etiologia de ITUs em pacientes atendidos em um Laboratório de Análises Clínicas da cidade de Juiz de Fora, MG. Para o estudo restrospectivo (20012008), 66.660 isolados de urina com suspeita de ITU foram analisadas, e após a identificação bioquímica, as linhagens de enterobactérias foram submetidas a testes de susceptibilidade aos antimicrobianos, pelo método de disco-difusão, de acordo com as normas do Clinical and Laboratory Standards Institute/CLSI. A detecção fenotípica da produção de ESBL foi feita através do teste de aproximação dos discos. Para o estudo prospectivo (2009), 12.304 amostras com suspeita de ITU foram avaliadas, e após a identificação bioquímica das linhagens, foram feitos os testes de susceptibilidade aos antimicrobianos e o teste de aproximação dos discos, para a detecção fenotípica da produção de ESBL. A identificação dos marcadores de β-lactamase (SHV, TEM, CTX-M, AMPc e KPC) foi feita por reação em cadeia da polimerase (PCR). De 416 linhagens produtoras de ESBL entre 2001- 2008, E. coli foi a mais freqüente (74,4%). Altos níveis de resistência foram obtidos para sulfazotrim, gentamicina e ciprofloxacina neste período. Todas as linhagens foram sensíveis ao imipenem. No estudo prospectivo, 105 linhagens produtoras de ESBL foram isoladas, sendo E. coli a mais freqüente (63%). Foi observado um alto índice de resistência a amoxacilina-clavulanato (80,8%), e aproximadamente 70% das amostras foram resistentes à associação trimetoprim/sulfametoxazol e as fluoroquionolonas (ciprofloxacina e ácido nalidíxico). Dentre as drogas utilizadas como substrato para detecção de ESBL, a cefotaxima foi o substrato com maior índice de resistência (86,6%), seguido de aztreonam (60,9%) e ceftazidima (55,2%). Entre as 105 linhagens recuperadas, todos os marcadores genéticos pesquisados para ESBL foram detectados. Considerando-se a freqüência de detecção dos marcadores genéticos, TEM foi o mais frequente (86,6%), seguido por SHV (59%), CTX-M (31,4%) e AMPc (27,6%). Em todas as linhagens bacterianas avaliadas, foi detectado pelo menos 1 dos marcadores genéticos associados à produção de β-lactamases (22,8%), 52,4% apresentaram 2 marcadores, 20% apresentaram 3 marcadores e 4,8% apresentaram 4 dos marcadores pesquisados. β-lactamases do tipo KPC não foram detectadas. O conhecimento da epidemiologia, dinâmica de disseminação e circulação destes marcadores genéticos de resistência a drogas constitui um dado clínico relevante, pois possibilita a instauração de uma terapia antimicrobiana mais adequada, bem como a construção de um banco de informações epidemiológicas, como ferramenta para contenção da expansão da disseminação dos genes de resistência aos antimicrobianos β-lactâmicos. The urinary tract infections (UTI) are highly frequent within the population and usually caused by Gram-negative rods. The bacterial β-lactamases are enzymes which confer resistance against β-lactam antibiotics (penicillins, cephalosporins, aztreonam and carbapenems) amongst which Extended Spectrum β-Lactamases (ESBL) has been described as an important resistance mechanism to the β-lactam in Gram-negative bacteria. Generally, Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae are the most frequent ESBL producing bacterial species, but its production by representatives of other bacterial genus within the Enterobacteriaceae family has already been documented. The aim of this study were to evaluate the antimicrobial susceptibility patterns and to correlate phenotypic tests with the detection of genetic markers for β-lactamases production such as ESBL, AmpC and KPC in enterobacteria associated to the UTI etiology in patients assisted at a Clinical Analyses Laboratory in Juiz de Fora, MG. From a retrospective study (2001-2008), 66.660 urine samples were analyzed, and the biochemically identified bacteria were submitted to antibiotic susceptibility testing by the disk-diffusion method, according to the Clinical Laboratory Standards Institute/CLSI guidelines. Further, phenotypic detection of the ESBL production was carried out through the disk approximation test. From a prospective study (2009), 12.304 samples were evaluated, and after the microbial identification, antibiotic susceptibility tests and disk approximation assays were performed, for ESBL phenotypic detection. Identification of β-lactamase genetic markers (SHV, TEM, CTX-M, AMPc and KPC) were performed through polymerase chain reaction (PCR). Out of 416 ESBL producing bacteria identified between 2001 and 2008, E. coli was the most frequent (74.4%). High resistance levels were obtained for trimethopim-sulfamethoxazole, gentamicin and ciprofloxacin in this period. All of the strains were sensitive to imipenem. Regarding the prospective study, 105 ESBL producing bacteria were isolated, being E. coli the most frequent (63%). A high resistance rate was observed against amoxacilin/clavulanic-acid (80.8%), and almost 70% of the samples were resistant to the association trimethopim-sulfamethoxazole and the fluoroquionolones (ciprofloxacin and nalidixic acid). Among the drugs for ESBL detection, the cefotaxime was the substrate with the highest resistance rate (86.6%), followed by aztreonam (60.9%) and ceftazidime (55.2%). Among these strains, all of the researched genetic markers for ESBL were detected. In regard to the frequency of detection of the genetic markers, TEM was the most frequent (86.6%), following by SHV (59%), CTX-M (31.4%) and AmpC (27.6%). In all of the bacterial strains it was detected at least 1 of the genetic markers associated to the production of β –lactamases. Two markers were detected in 52.4% and in 20% and 48%, at least 3 or 4 markers were detected, respectively. The KPC type β -lactamase was not detected. The knowledge about the epidemiology, spread dynamics and circulation of these resistance genetic markers to drugs among the different bacterial populations constitutes a relevant issue and makes possible the establishment of a more appropriated chemotherapy. Besides, the generation of basic epidemiological information may sustain for contention of the antimicrobial resistance and the spread of resistant genetic markers related to inactivation of β-lactam drugs.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico In recent years, the isolation of bacteria producing β-lactamases has caused concern around the world, due to the fact these enzymes hydrolysis the ring β-lactam antimicrobials used in the main clinic. This aim of this study was asses the prevalence metallo-β-lactamases (MbL) in isolates of Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter baumannii obtained from patients admitted at the University Hospital of Santa Maria (HUSM). The profile of susceptibility for all isolates was evaluated by the disk diffusion method standardized by CLSI. The antimicrobial disks were distributed in a way that allows the identification of strains producers of AmpC and ESBL. For the identification of the producers of MbL the test of disk approximation with EDTA 0.1 M, EDTA 0,5M and acid 2-mercaptopropionic were performed. Isolates that did not have any of the mechanisms of resistance search were classified as multiresistant (MDR). The minimum inhibitory concentration (MIC) for ceftazidima, imipenem and polymyxin B was assessed by broth method microdilution for all isolated, according to CLSI. From January to June 2006, were obtained 32 isolates the P.aeruginosa and 41 the A. baumannii, the those 17 (23.29%) were β-lactamase AmpC-type producers, 11 (15.07%) were MbL producers, and 45 (61,64%) were classified as MDR. All strains producing MbL were Pseudomonas aeruginosa. The sensitivity of the isolates according to the CIM for antimicrobial evaluated were: 90,28% for polymyxin B, 36,11% for imipenem and 18% for ceftazidima. There was a high prevalence of MDR isolates and producers of β-lactamase-type AmpC and MbL in HUSM, this is extremely worrying once there is limiting therapy available. This situation becomes even more worrying with the find of isolates resistant the polymyxin B, witch is one of the last options of treatment for MDR isolates and producers of MbL. The detection of microorganisms is extremely important for the committees of infection hospital with the goal of preventing outbreaks, as well as guide the medical team on the conduct therapy, since there are few effective antimicrobial clinically for these pathogens and no prospects for development the new antimicrobial in the near future. Nos últimos anos, o isolamento de bactérias produtoras de β-lactamases tem causado preocupação em todo o mundo, devido ao fato dessas enzimas hidrolisarem o anel β- lactâmico dos principais antimicrobianos utilizados na clínica. Este trabalho teve por objetivo avaliar a prevalência de metalo-β-lactamases (MbL) em isolados de Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter baumannii obtidos de pacientes atendidos no Hospital Universitário de Santa Maria (HUSM). O perfil de sensibilidade para todos os isolados foi avaliado pelo método de disco difusão padronizado pelo CLSI. Os discos de antimicrobianos utilizados foram distribuídos de forma que permitisse a identificação dos isolados produtores de AmpC e ESBL. Para a identificação dos produtores de MbL utilizou-se o teste de disco aproximação com os seguintes agentes quelantes: EDTA 0,1M, EDTA 0,5 M e ácido 2-mercaptopropiônico. Os isolados que não possuíam nenhum dos mecanismos de resistência pesquisados foram classificados como multirresistentes (MDR). A concentração inibitória mínima (CIM) para ceftazidima, imipenem e polimixina B foi avaliada pelo método de microdiluição em caldo para todos os isolados, de acordo com o CLSI. Durante o período de janeiro a junho de 2006 foram obtidos 32 isolados de P.aeruginosa e 41 de A. baumannii, destes 17 (23,29%) foram produtores de β-lactamase do tipo AmpC, 11 (15,07%) foram produtores de MbL e 45 (61,64%) foram classificados como MDR. Todas as cepas produtoras de MbL foram de Pseudomonas aeruginosa. A sensibilidade dos isolados de acordo com a CIM para os antimicrobianos avaliados foram as seguintes: 90,28% para polimixina B, 36,11% imipenem e 18% ceftazidima. Observou-se uma alta prevalência de isolados MDR no HUSM, além de isolados produtores de β-lactamase do tipo AmpC e MbL, o que é extremamente preocupante devido limitar a terapia a poucos antimicrobianos. Esta situação torna-se ainda mais preocupante com a detecção de isolados resistentes a polimixina B, a qual é uma das últimas opções de tratamento para infecções causadas por isolados de P. aeruginosa e Acinetobacter baumannii MDR e produtores de MbL. A detecção desses microrganismos é de grande importância para as comissões de controle de infecção hospitalar com o objetivo de prevenir surtos, bem como orientar a equipe médica sobre a conduta terapêutica, uma vez que há poucos antimicrobianos efetivos clinicamente para esses patógenos e as perspectivas para o desenvolvimento de novos antimicrobianos em um futuro próximo são mínimas.

Objetivos: Avaliar o perfil de suscetibilidade, a prevalência da produção de AmpC, β-lactamase de espectro estendido (ESBL) e Metalo-β-lactamase (M-βla) em Pseudomonas aeruginosa obtidas de dois hospitais universitários distintos (ISCMPA e HCPA) em Porto Alegre. Em adição, tipagem molecular por PFGE foi realizada entre os isolados produtores de M-βla para avaliar a relação clonal. Métodos: Foi determinada a suscetibilidade de 238 isolados de P. aeruginosa para 8 agentes antimicrobianos, através do teste de disco-difusão, usando agar Müller-Hinton (MH) de acordo com “National Committee for Clinical Laboratory Standards” (NCCLS) . Todos isolados foram avaliados para produção de AmpC com o disco de imipenem (indutor) próximo ao disco de cefepima/ceftazdima (substrato). Um achatamento no halo de cefepime/ceftazidima pela indução da enzima pelo imipenem, indicava resultado positivo para AmpC. Todos isolados forma avaliados para a presença de ESBL através do teste de aproximação de disco com ceftazidima, cefepima, cefotaxima, ceftriaxona e ticarcilina-clavulanato como inibidor de β-lactamase. A produção de M-βla foi determinada através do teste de aproximação de discos de CAZ a discos impregnados com ácido2-mercatopropiônico (2-MPA). As taxas de resistência foram comparadas através do Teste Exato de Fisher. Valor de P

Chemicals binding to membrane receptors may induce events within the cell changing its behavior. Since these events are simultaneous and hard to be understood by students, we developed a computational model to dynamically and visually explore the cAMP signaling system to facilitate its understanding. The animation is shown in parts, from the hormone-receptor binding to the cellular response. There are some questions to be answered after using the model. The software was field-tested and an evaluation questionnaire (concerning usability, animations, models, and the software as an educational tool) was answered by the students, showing the software to be a valuable aid for content comprehension.