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Submitted by Biblioteca Escola Superior de Saúde (biblioteca@ess.ipp.pt) on 2020-01-24T16:58:16Z No. of bitstreams: 1 DM_RenataSalgado_2019_MHSO.pdf: 1491629 bytes, checksum: f1de6c04d47fbc65bdeebdf1f60cc58a (MD5) Made available in DSpace on 2020-01-24T16:58:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DM_RenataSalgado_2019_MHSO.pdf: 1491629 bytes, checksum: f1de6c04d47fbc65bdeebdf1f60cc58a (MD5) Previous issue date: 2019-03

O controle de produtos de origem animal esta diretamente associado a sanidade animal e a saude publica. Na suspeita de mastite, tanto bacteriana quanto micotica, o congelamento de amostras de leite permite aumentar o periodo de tempo para analise microbiologica, permitindo um correto diagnostico laboratorial. As leveduras sao os principais agentes ambientais envolvidos na mastite micotica. O objetivo do presente trabalho foi verificar se o congelamento afeta a recuperacao de leveduras potencialmente presentes no leite. Foram utilizados seis isolados: Rhodotorula sp. (L1), Geotrichum sp. (L2), Cryptococcus sp. (L3), Candida tropicalis (L4) e Candida albicans (L5), oriundos de leite in natura , e um isolado de C. parapsilosis (ATCC 22019). Apos a inoculacao experimental, as amostras foram congeladas durante 10 dias, 3, 6 e 8 semanas. O congelamento do leite por periodos superiores a 10 dias causou reducao no numero de celulas viaveis. Sugerimos que sejam utilizados periodos mais curtos de congelamento para a analise micologica do leite.

Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar a concentração e viabilidade da fração de células mononucleares (FCM) a partir de diferentes técnicas de colheita e processamento de medula óssea (MO) em equinos. Foram avaliados cinco equinos adultos, hígidos e sem raça definida. Obtiveram-se frações de medula óssea (MO) do osso esterno, de acordo com dois protocolos: na colheita A, utilizou-se 10mL de solução de heparina dentro da seringa e em seguida, aspirou-se a MO; na colheita B, 10mL de solução de heparina foi injetada na MO e a aspiração foi realizada após 20 segundos. Todos os animais foram submetidos aos dois protocolos de colheitas, realizadas em sequência, sem intervalo entre os dois procedimentos. Após isolamento da fração de células mononucleares (FCM), das amostras de MO obtidas nas colheitas A e B, cada amostra foi dividida em dois tubos, um contendo solução de DMEM e outro contendo PBS. Assim, alternando-se o tipo de colheita e a solução diluidora, obteve-se quatro tubos de amostras por animal. Os tubos foram centrifugados e os sedimentos foram homogeneizados nos respectivos meios obtendo-se o volume final de 100μL. Realizou-se determinação da concentração e viabilidade celular, obtendo-se as concentrações médias de FCM. Para ambos os meios de diluição, a colheita B apresentou valor numérico maior em comparação à colheita A, porém não foi significativo (p>0,05). Atribui-se tal tendência à menor ocorrência de coagulação da MO no momento da colheita B, sugerindo-se melhor aproveitamento da FCM. Não houve diferença (p>0,05) entre os meios DMEM ou PBS, indicando que os mesmos não alteraram a viabilidade celular. Os protocolos utilizados para colheita de MO e separação da FCM se mostraram eficientes, para o uso em terapia celular em equinos. Abstract: The aim of this study was to evaluate mononuclear cells fraction (MCF) concentration and viability from different techniques of bone marrow (BM) aspiration and processing in horses. Five adult horses, healthy and of unknown breed were evaluated. BM was obtained from sternum bone, according two protocols: in aspiration A, 10mL of heparin solution was used inside the syringe and BM was aspirated; in aspiration B, 10mL of heparin solution was injected into the BM, and aspiration was done after 20 seconds. All the animals were submitted by both protocols realized in sequence, without a gap between the procedures. After MCF isolation, of BM samples obtained from A and B aspiration, each sample was divided into two tubes; one contained DMEM solution and the other with PBS solution. Therefore, interchanging the aspiration protocol and the dilution solution, four sample tubes were obtained for each horse. The tubes were centrifuged and the pellet was homogenized with the respectively solution to obtain the final volume of 100μL. Cellular concentration and viability were determined to obtain the FCM medium concentration. For both solutions, the aspiration B had higher numeric values comparing with aspiration A; however, it was not significant (p>0.05). This tendency is attribute for the less BM coagulation observed in the aspiration B, suggesting greater improvement of MCF. No difference (p>0.05) was found between DMEM and PBS solution, indicating that both do not alter the cell viability. The protocols used for BM aspiration and MCF isolation were efficient for application in equine cellular therapy.

The aim of this study was to produce membranes using the adapted cuprammonium method. The cellulose utilized was obtained from recycled agroindustrial residues: sugarcane bagasse, corn stover and soybean hulls. The levels of Cu (II) ions in regenerated cellulose membranes produced with cellulose from bagasse, corn stover and soybean hulls were 0.0236 wt%, 0.0255 wt% and 0.0268 wt%, respectively. These levels were approximately 15 times lower than those observed in previous studies (0.3634 wt%). Cellular viability data show that membranes produced from bagasse cellulose do not present toxicity to the cellular cultures studied. These results demonstrate an evolution in production of regenerated cellulose membranes from agroindustrial residues mainly due to a decrease in the Cu (II) ions level, showing the possibility of application of these systems with improved membranes processing.

O Transplante de Células Tronco Hematopoiéticas (TCTH) baseia-se no princípio de infusão de Células Tronco Hematopoiéticas (CTH) CD34 + num receptor condicionado. Sabe-se que tais células são capazes de gerar uma nova hematopoiese bem como que o benefício do aumento de dose de CD34 + estende-se de aproximadamente 2 x 106 CD34/Kg a 5 x 106 CD34/Kg do receptor. A determinação do número de CD34 baseia-se no número total de CD34, porém sabe-se que apenas uma pequena porção celular do grupo de CD34 está associada à recuperação medular. Uma maneira de refinar a detecção desse grupo de células quando comparado com a quantificação do CD34 total, é a análise citométrica dos padrões de tamanho e granularidade citoplasmática. No contexto do TCTH autólogo e algumas vezes no TCTH alogênico, onde a infusão das células precursoras é feita com intervalo superior a três dias após a sua coleta, o congelamento das CTH CD34 +as faz-se necessário para que as células permaneçam viáveis. O agente crioprotetor mais comumente usado é o Dimetilsulfóxido (DMSO), que em temperaturas extremamente baixas protege as CTH da morte celular, porém em temperatura ambiente torna-se tóxico. As reações adversas do receptor no momento da infusão são atribuídas, em geral, ao DMSO. Portanto existem diferentes protocolos de congelamento de CTH que usam diferentes concentrações desse agente, com o intuito de reduzir as reações adversas e, ao mesmo tempo, evitar a morte celular decorrente de temperaturas baixas. Alguns estudos concluem que a viabilidade das CTH congeladas pode ser mantida com concentrações baixas de DMSO ou com celularidade elevada nos produtos congelados. Além do DMSO, a albumina e o Hidroxetilamido (HES) são usados como adjuvantes na proteção celular ao frio. Alguns protocolos de criopreservação usam apenas o DMSO enquanto outros indicam a necessidade do uso dos três agentes juntos. Não há consenso a respeito do protocolo de criopreservação ideal. Um expressivo número de trabalhos sugere o uso do DMSO 5 a 10% juntamente com a albumina 20% e HES 6% em enxertos com celularidade até 3 x 108 células nucleadas/ml, porém existem sugestões de protocolos diferentes desse padrão que usam o DMSO como agente único assim como concentrações menores de DMSO. Com relação ao efeito tóxico do DMSO, os eventos adversos do paciente no momento da infusão são atribuídos diretamente a ele. Porém evidências recentes apontam outras possíveis causas: citocinas liberadas durante o período de armazenamento e infundidas com o enxerto e micro-agregados leucocitários decorrentes da elevada celularidade do enxerto. O presente estudo pretendeu verificar a viabilidade das CTH através da medida da Anexina-V e 7-AAD pela técnica de citometria de fluxo usando-se diferentes concentrações de DMSO, bem como comparou tal desfecho entre amostras que foram congeladas apenas com DMSO e amostras congeladas com DMSO, HES e albumina. Além disso, foram verificados os níveis de citocinas inflamatórias nos enxertos e sua relação com a concentração de DMSO. Bone Marrow Transplantation (BMT) is based on the principle of hematopoietic CD34 stem cells infusion in a conditioned recipient. It is known that such cells are capable of generating a new hematopoiesis, as well as known that the benefit of the increase of CD34 dose is goes best when it is between from 2 and to 5 x 106 CD34 by patient’s body weight. The CD34 determination is based on the total CD34 number. However it is known that only a small portion of the CD34 population is related to the marrow repopulating capacity. An alternative way of detecting such cells when compared to total CD34 dose is the cytometric analysis of citoplasmatic granularity and size patterns. In the autologous BMT context and, sometimes in the allogeneic type where the graft infusion occurs more than three days after the graft harvest, the CD34 cells freezing is necessary to keep their viability. The crioprotective agent most commonly used is the DMSO, which at extremely low temperatures this agent protects the CD34 cells from dying. However at temperatures above 30°C it became toxic and causing adverse events in the patient receiving them. The adverse reactions at the infusion moment in general are linked to DMSO, thus there are some different cryopreservative protocols using different DMSO concentrations aiming to reduce the incidence of collateral damage and at the same time avoid the CD34 from dying at low temperatures. Some studies conclude that CD34 viability can be maintained with the use of high mononuclear cellularity in the graft or with low DMSO concentrations. Besides DMSO, albumin and Hydroxietilstarch (HES) are cryoprotectants adjuvants. Some Cryopreservation protocols only use DMSO as cryoprotective agent, while others indicate the three agents together. There is no consensus about the ideal cryopreservation protocol. An important number of studies suggests the use of DMSO 5 to 10% with albumin 20% and HES 6% in grafts with cellularity number of no more than 3 x 108 cells/ml, however there are some new different protocols that use DMSO alone and at lower concentrations. As to adverse events during the infusion moment, it is known that DMSO causes the effects. However, there are evidences that other causes could cause these events: cytokines released during the storage freezing time and infused with the graft and leukocyte micro-clots caused by the high cellularity in the graft. The present study aimed to study the viability of CD34 cells using the Annexin-V and 7-AAD apoptosis reagents through the flow cytometry technique in different DMSO concentrations as well as compared such outcome among the samples only frozen with DMSO and samples frozen with DMSO, HES and albumin. Besides, it was verified the inflammatory cytokine levels and their relationship with the DMSO concentration.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Metabolic syndrome (MetS) is a complex disorder represented by a set of cardiovascular risk factors, including endothelial dysfunction, oxidative stress and inflammation. Syzygium cumini has hypoglycemic, anti-inflammatory, antipyretic, hypolipidemic and antioxidant properties, besides antiviral and anticarcinogenic action. Considering the importance of MetS in the current economic and social context, morbidity and complications following this pathology, the aim of this study was to assess biochemical and inflammatory parameters in patients with MetS. Moreover, to check the effect of aqueous extract of Syzygium cumini (ASc), as well as its mechanism of action on the activity of the enzyme adenosine deaminase (ADA) and other biochemical parameters under hyperglycemic and oxidative conditions in vitro. To develop the first step of this work, were obtained samples of serum and whole blood of patients diagnosed with MetS (n=40) before initiating a physical activity program, in which we analyzed biochemical, oxidative and inflammatory parameters. The results showed an increase in ADA, acetylcholinesterase (AChE) and dipeptidyl peptidase IV (DPP-IV) activities in lymphocytes of patients with MetS. Further, in these patients, we observed an increase in the activity of butyrylcholinesterase (BuChE) and ˠ- glutamyltransferase (ˠ-GT) and in C-reactive protein (hsCRP) and nitric oxide (NOx) levels, as well as disturbances in antioxidant defenses and some correlations between the parameters analyzed were obtained. Thus, these results demonstrated that MetS affects the purinergic and cholinergic systems reflecting the inflammatory and immune status of these patients, besides altering the antioxidant defenses of the same. For in vitro determinations, first, erythrocytes (RBCs) from healthy individuals were used. ASc was able to prevent the increase in ADA activity caused by exposure of RBCs to hyperglycemic conditions for 2 hours. Also, ASc acted on the activity of ADA similarly caffeine and insulin, on the other hand, dipyridamole attenuated the effect of ASc by antagonizing its the effect or by competition with the extract. Thus, it can be suggested that the ASc act by influencing the metabolism of adenosine, and its effect is related to the presence of phenolic compounds and the antioxidant properties attributed to this plant. In the next step of this work , we observed an increase in the ADA activity and lipid peroxidation and decreased cell viability after exposure of lymphocytes from healthy subjects to 2,2 ' -azobis -2- amidinopropane dihydrochloride ( AAPH ) by 2 hours in vitro. ASc and gallic acid were able to reduce the ADA activity, but did not alter the lipid peroxidation caused by AAPH . The ASc increased cell viability and reduced the activity of the enzyme lactate dehydrogenase ( LDH ). ASc, by reducing the activity of ADA, may be increasing adenosine levels and helping to maintain the beneficial effects caused by the same, such as antioxidant, anti-inflammatory and antithrombotic actions. Furthermore, the results demonstrate the cytoprotective effect evidenced by the extract. We conclude that the changes found in patients with MetS are related to inflammatory and oxidative processes and may favor the prevention and control of this clinical situation Also, the protective effects demonstrated by ASc contribute to the understanding of the wide use of this plant and its therapeutic value in the treatment of various clinical conditions. A Síndrome Metabólica (SMet) é um transtorno complexo representado por um conjunto de fatores de risco cardiovascular, entre eles a disfunção endotelial, o estresse oxidativo e a inflamação. O Syzygium cumini, conhecido popularmente como jambolão, é uma planta que apresenta propriedades hipoglicêmicas, antiinflamatórias, antipiréticas, hipolipidêmicas e antioxidantes, além de ação antiviral e anticarcinogência. Considerando a importância da SMet no contexto social e econômico atual, a morbidade e as complicações consequentes desta situação clínica, o objetivo deste estudo foi avaliar parâmetros bioquímicos e inflamatórios em pacientes com SMet. Além disso, verificar o efeito do extrato aquoso de Syzygium cumini (ASc), bem como o seu mecanismo de ação sobre a atividade da enzima Adenosina desaminase (ADA) e outros parâmetros bioquímicos sob condições hiperglicêmicas e oxidativas, in vitro. Para o desenvolvimento da primeira etapa deste trabalho, foram utilizadas amostras de soro e sangue total de pacientes com diagnóstico de SMet (40 pessoas) antes de iniciarem um programa de atividades físicas, nos quais foram analisados parâmetros bioquímicos, inflamatórios e oxidativos. Os resultados demonstraram um aumento na atividade das enzimas ADA, acetilcolinesterase (AChE) e dipeptidil peptidase IV (DPP-IV) em linfócitos de pacientes com SMet. Ainda, nesses pacientes, observou-se um aumento na atividade das enzimas Butirilcolinesterase (BuChE) e gama-glutamiltransferase (GGT), e nos níveis de proteína C reativa (PCR) e óxido nítrico (NOx), bem como alterações nas defesas antioxidantes e algumas correlações entre os parâmetros analisados foram obtidos. Assim, esses resultados demonstraram que a SMet afeta a atividade da ADA e o sistema colinérgico refletindo o estado imune e inflamatório desses pacientes, além de alterar as defesas antioxidantes dos mesmos. Para as análises in vitro, primeiramente, foram utilizados eritrócitos (RBCs) de indivíduos saudáveis. O ASc foi capaz de prevenir o aumento na atividade da ADA causado pela exposição dos RBCs a condições hiperglicêmicas por 2 horas. Ainda, o ASc atuou sobre a atividade da ADA de maneira semelhante a cafeína e a insulina; por outro lado, o dipiridamol atenuou o efeito do ASc por antagonizar o efeito do mesmo ou por competição com o extrato. Assim,pode-se sugerir que o ASc influencia no metabolismo da adenosina, além de seu efeito estar relacionado a presença de compostos fenólicos e às propriedades antioxidantes atribuídas a essa planta. Na etapa seguinte da realização deste trabalho, observou-se um aumento na atividade da ADA e na lipoperoxidação, e redução da viabilidade celular após a exposição de linfócitos de indivíduos saudáveis ao 2,2 -azobis (aminodipropano) dihidrocloreto (AAPH) por 2 horas, in vitro. O ASc e ácido gálico foram capazes de reduzir a atividade da ADA, mas não alteraram a lipoperoxidação causada pelo AAPH. O ASc aumentou a viabilidade celular e reduziu a atividade da enzima Lactato desidrogenase (LDH). O ASc ao reduzir a atividade da ADA, pode estar aumentando os níveis de adenosina e colaborando para a manutenção dos efeitos benéficos provocados pela mesma, como ações antioxidantes, antiinflamatórias e antitrombóticas. Além disso, os resultados demonstraram o efeito citoprotetor evidenciado pelo extrato. Podemos concluir que as alterações encontradas nos pacientes com SMet estão relacionadas aos processos inflamatórios e oxidativos e podem favorecer medidas de prevenção e controle desta situação clínica. Também, os efeitos protetores demonstrados pelo ASc contribuem para o entendimento da ampla utilização desta planta e de seu valor terapêutico no tratamento de diversas patologias clínicas.

A radiação infravermelha (RIV) é dividida em IVA (700-1.400 nm), IVB (1.400-3.000 nm) e IVC (3.000 nm-1 mm). Ela penetra nos tecidos biológicos podendo aumentar a temperatura local (levando a lesões à longo prazo) ou induzir reações fotoquímicas independentes do calor. Dentre estas destaca-se o aumento da mitose tecidual, ativação de genes ligados a proliferação celular, reparo de DNA e apoptose.A radiação ultravioleta é dividida em UVC (200-290 nm), UVB (290-320 nm) e UVA (320-400 nm). O UVB causa danos ao DNA que levam à alterações celulares, fotoenvelhecimento, apoptose e necrose. Exposição não térmicas de IV antes do UVB previne os efeitos danosos deste último. Esta proteção não depende de calor ou divisão celular e é dependente do número de exposições de IVA anteriores ao UVB. Nesta Tese analisou-se a interação entre as radiações IV e UVB in vivo e in vitro, Nos experimentos in vivo verificou-se que exposição crônica à radiação infravermelha alterou o tecido epitelial aumentanto a proliferação celular de forma anormal levando a histopatologias, sem alterar os órgãos mais profundos ou modificar o peso dos animais estudados. As histopatologias foram aumentadas quando a radiação infravermelha foi aplicada após a irradiação com UVB, ambos de forma crônica. Em contrapartida, irradiação crônica com IV antes do UVB gerou um efeito protetor reduzindo as histopatologias originadas pela exposição ao UVB, mas não aos níveis da irradiação apenas com o infravermelho. Nos experimentos in vitro verificou-se que a irradiação com infravermelho antes do UVB reduziu o número de células apoptóticas e necróticas e está proteção não foi dependente da redução da taxa mitótica ou da expressão do gene p53. Por fim, experimentos com infravermelho sem um controle adequado da temperatura podem induzir proteínas de choque térmico ou alterar tecidos de uma forma que não depende dos comprimentos de onda do infravermelho. A melhor forma de evitar o aumento da temperatura nestes experimentos é através do uso de LEDS de infravermelho. Infrared radiation (IR) is divided into IRA (700-1,400 nm), IRB (1,400-3,000 nm) and IRC (3,000 nm-1 mm). It penetrates into biological tissues and can increase local temperature (causing lesions in the long term) or induce photochemical reactions independent from heat. Among these, stands out the increase of tissue mitosis, activation of genes related to cellular proliferation, DNA repair and apoptosis. Ultraviolet radiation (UV) is divided into UVC (200-290 nm), UVB (290-320 nm) and UVA (320-400 nm). UVB damages DNA, which can lead to cellular alterations, photoaging, apoptosis and necrosis. Non thermal IR irradiation before UVB irradiation prevents the deleterious effects of the last one. This protection is independent of heat or cellular division and it is dependent of the number of irradiations with IR before exposition to UVB. In this Thesis, it was analyzed the interaction between the IR and UVB radiations in vivo and in vitro. In the in vivo experiments it was verified that chronic IR exposition altered the epithelial tissue increasing cellular proliferation in an abnormal way leading to histopathologies, without altering the visceral organs or modifying the weight of the studied animals. The histopathologies increased when IR was applied after irradiation with UVB. In contrast, chronic IR irradiation before UVB irradiation created a protector effect reducing the histopathologies originated from UVB exposition, but not into the same levels of IR irradiation alone. In the in vitro experiments, it was verified that IR irradiation before UVB reduced the number of apoptotic and necrotic cells and these protection was independent from a reduction in mitotic rate or p53 gene expression. Finally, IR experiments without an adequate temperature control can induce heat shock proteins or alter tissues in a manner that is independent from IR wavelengths. The best way to avoid the temperature increase in an experiment is through IR LEDs.

O uso de plantas medicinais para o tratamento de muitas doenças está associado à medicina popular de diferentes partes do mundo. A cada dia, os microrganismos que causam prejuízos à saúde humana e animal têm se mostrado mais resistentes à maioria dos antibióticos conhecidos, fato este que estimula a procura por novas substâncias com potencial antimicrobiano, principalmente de ocorrência natural. O uso na medicina popular das espécies do gênero Pterodon e Lippia, devido aos seus efeitos anti-reumáticos, analgésicos e antiinflamatórios, é amplamente difundido. Para a avaliação da atividade antimicrobiana e análise de citotoxicidade em fibroblastos bovinos foram selecionadas as espécies Pterodon emarginatus Vog., Lippia lacunosa, Lippia rotundifolia e Lippia salvifolia. Os microrganismos-alvo deste estudo (Staphylococcus aureus, Streptocccus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis, Streptococcus bovis e Klebsiella pneumoniae) foram obtidos de animais com mastite, oriundos de propriedades rurais no interior de Minas Gerais. De P. ermaginatus, foram testadas as frações hexânica (FH), acetato de etila (FAE), butanólica (FB), metanólica (FM) e etanólica (FE), sendo que a atividade antimicrobiana foi evidenciada para as FH e FE. A menor CIM encontrada foi a da FH contra S. dysgalactiae na concentração de 0,625 mg/mL. Para a obtenção dos peptídeos de Lippia, foram preparados os extratos aquosos (EA) a partir de suas folhas e flores. Os EA de L. lacunosa e L. salvifolia foram bacteriostáticos (CIM = 80 µ g/mL) para S. aureus e S. agalactiae, respectivamente. L. rotundifolia foi bacteriostática contra S. uberis (CIM=10 µ g/mL). O teste de viabilidade celular demonstrou que os extratos obtidos de Lippia lacunosa e Lippia rotundifolia não foram tóxicos quando comparados ao controle, no entanto, foram observadas alterações morfológicas em concentrações >80 µ g/mL. Com esses resultados, pode-se verificar que tais plantas apresentam potencial antimicrobiano e sua utilização pode estar prevista tanto para o tratamento da mastite como em formulações antissépticas utilizadas em laboratórios, como aqueles de cultivo celular. The use of medicinal plants in the treatment of many diseases is associated with the popular medicine from different parts of the world. Each day, the microrganisms that cause damages to the human and animal health have shown more resistance to most of the known antibiotics, stimulating the search for new antimicrobials substances, mainly from natural occurrence. The use of the specie Pterodon ermaginatus and genus Lippia as anti-inflammatory, antirheumatic and analgesic drugs in the popular medicine is widely spread. For the evaluation of the antimicrobial activity the species Pterodon emarginatus Vog., Lippia lacunosa, Lippia rotundifolia and Lippia salvifolia were selected the microrganisms (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis, Streptococcus bovis and Klebsiella pneumoniae) which were retrieved from animals with mastitis raised on farms in the country side of Minas Gerais. From P. ermaginatus were tested the hexanic (HF), ethyl acetate (AEF), buthanol (BF), methanol (MF) and ethanol (EF) fractions. The antimicrobial activity was evidenced by the HF and EF. The smallest MIC found was of the HF against S. dysgalactiae in the concentration of 0.625 mg/mL. For the attainment of peptides of Lippia, the aqueous extracts (AE) from its leaves and flowers had been prepared. The AE of L. salvifolia and L. lacunosa were bacteriostatic (MIC=80 µ g/mL) for S. aureus and S. agalactiae, respectively. L. rotundifolia was bacteriostatic against S. uberis (MIC=10 µ g/mL). The test of cellular viability for the extracts of Lippia sp showed that they were not toxic when compared to the control. The morphologic analysis showed that alterations in the format of the cells occurred in a concentration ≥ 80 µ g/mL. These results of this study provide additional evidence that these plants have antimicrobial potential against microrganisms that cause bovine mastitis and suggest its use as a natural antiseptic.

No presente trabalho foi elaborada uma técnica para protocolo de colheita de medula óssea (MO) (10ml. kg-1), do osso femoral, para isolamento, quantificação e viabilidade da fração total de células mononucleares (CM). Para tanto, 40 cães machos ou fêmeas, sem raça definida, com idade aproximada de dois anos, pesando em torno de 10kg, foram submetidos a procedimento asséptico em ambiente cirúrgico para colheita de MO. Para a obtenção de uma quantidade suficiente de CM, durante o procedimento foi utilizada a agulha tipo Steis anatômica, que favoreceu a colheita de volume sangüíneo em menor espaço de tempo e não danificou a viabilidade celular. Também foi utilizado o Kit Bone Marrow collection, que teve a finalidade de filtrar as espículas ósseas, mantendo a integridade das CM colhidas durante o período decorrido para o acondiconamento do sangue. Durante o período da colheita de MO, os animais foram submetidos à collheita de sangue periférico (pré, trans e pós-operatório) para avaliações hematológicas e sofreram autotransfusão sangüínea para suprir a queda acentuada de hemoglobina ocorrida nos primeiros momentos da coletaheita. O total de MO colhida e filtrada foi colocado lentamente sob gradiente de densidade Histopaque (1.077g ml-1). O material foi centrifugado a 440 x g por 30 minutos e o anel de células foi colhido, lavado e centrifugado três vezes em meio contendo solução salina 0,9%, DMEM e soro sangüíneo autólogo estéril. Foi realizada a contagem do anel celular em câmara de Neubauer e foi verificada sua viabilidade utilizando corante vital. Neste estudo foi verificado que no volume de MO colhido foi possível obter a média de 2,57 x 10(6) (± 1,56) CM kg-1 e a viabilidade celular foi superior a 90% (96,72 ± 2,9%). Conclui-se que a técnica de colheita de MO com agulha Steis com lavagem celular no meio contendo soro autólogo e Kit Bone Marrow e agulha Steis com lavagem celular no meio contendo soro autólogo permite obter um número ideal e indicado de CM viáveis. Esse número pode ser aplicado diretamente em lesões teciduais com objetivo de potencializar o processo de regeneração. In the present research a new protocol to harvest 10ml kg-1 femoral bone marrow (BM) was developed to allow isolation, quantification and to test the mononuclear cell (MC) fraction viability. Forty male or female stray dogs, aging and weighting around two years old and 10kg respectively, were submitted to aseptic bone marrow harvest in a surgical environment. To achieve an ideal cell count of MC, an anatomical Steis needle was used during the procedure, which favored the indicated volume harvest in a shorter period of time without interfering cellular viability. A bone marrow collection kit was also used to filter bone fragments while maintaining harvested MC integrity during blood packaging. Meanwhile BM harvesting was conducted, animals peripheral blood collection was performed (pre, trans and post-operatory) to hematological evaluations and autologous blood transfusion was made to overcome the increased hemoglobin fall that takes place in the initial harvesting moments. The harvested and filtered BM was slowly placed over a Histopaque density gradient (1.077g ml-1). The material was centrifuged at 440g x for 30 minutes. The cellular ring was harvested, washed and three times centrifuged in saline 0.9%, DMEM and autologous sterile serum. Cellular ring count was conducted in neubauer chamber and its viability was performed with vital dye. In this study was possible to notice that with the harvested BM volume an average of 2.57 x 10(6) (± 1.56) MC kg-1 was obtained and the cell viability was over 90% (96.72 ± 2.9%). It was concluded that the bone marrow kit and Steis needle with autologous serum cellular wash BM harvesting technique allow an ideal MC number isolation which can be administered in tissue lesions to enhance the regeneration process.

Muitos estudos têm avaliado o comportamento das ligaduras elásticas em relação às suas propriedades físicas. No entanto, a biocompatibilidade destes materiais não se apresenta bem documentada na literatura. O presente estudo teve como objetivo avaliar, in vitro, a viabilidade celular de macrófagos murinos J774 na presença de ligaduras elásticas de diferentes marcas e cores e, analisar o efeito destas ligaduras na produção de óxido nítrico (NO) produzido por estas células, com e sem ativação de interferon-gama (IFN-γ), uma citocina pró-inflamatória. Para cada tempo estudado, foram utilizados 6 elos de ligaduras elásticas de 3 marcas diferentes (Morelli, GAC e TP) nas cores prata e transparente após esterilização com óxido de etileno. As placas de cultura de 96 poços, utilizadas no experimento, foram divididas em 2 metades. A primeira foi preenchida pelas células J774 resuspensas em meio RPMI suplementado juntamente com os elos de cada tipo de ligadura e células controle. A segunda metade foi completada com outros 6 elos dos mesmos tipos de ligaduras mantidos em culturas juntamente com 10μl de IFN—γ (5 ng/ml) e grupo controle. As placas foram incubadas em diferentes intervalos de tempo: 24, 48 e 72 horas. As células foram submetidas à avaliação da viabilidade celular através da técnica do MTT [3 – (4,5-dimethylthiazol-2-yl) – diphenyl tetrazolium bromide] e os sobrenadantes foram coletados para a análise da produção de NO, utilizando-se o método de Griess. Para análise dos resultados foram utilizados os testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney. Na ausência do estímulo (IFN—γ), a viabilidade celular nos grupos de ligaduras foi maior no período final da avaliação em relação ao grupo controle. No entanto, 3 grupos de ligaduras (Morelli prata, Morelli transparente e GAC prata) exibiram proliferação significativa em 72 horas. As ligaduras da marca TP Orthodontics (prata e transparente) não influenciaram de forma significativa a viabilidade celular e a produção de NO. Embora a ligadura Morelli prata tenha estimulado as células J774 a realizarem uma maior produção de NO, os outros tipos de ligaduras nos diferentes tempos avaliados não apresentaram diferenças significativas na produção de óxido nítrico em relação às células controle. Na presença do IFN-γ, houve uma redução significativa da viabilidade celular no tempo 48 horas para o grupo das ligaduras Morelli e GAC. Entretanto, uma média de viabilidade superior ao apresentado pelas células controle foi observada em todos os grupos de ligaduras no tempo 72 horas, sendo significativa para o grupo das ligaduras GAC transparente. O grupo das ligaduras TP foi o que apresentou comportamento semelhante ao grupo controle, apesar das ligaduras TP prata terem apresentado menor viabilidade em 24 horas. O IFN-γ proporcionou aumento significativo na produção de NO em todos os grupos no período final em relação ao inicial. As ligaduras Morelli transparente e GAC (prata e transparente) demonstraram a menor produção desta molécula nos 3 tempos analisados. Although the physical properties of elastic ligatures have been the subject of several studies, the biocompatibility of these materials has not been well documented in the literature. This study was an in vitro investigation of the cellular viability of the murine macrophage J774 cell line in the presence of elastomeric ligatures of different brands and colors, and of nitric oxide (NO) production of these cells both, under the presence of such ligatures, and under the influence of a proinflammatory cytokine: gamma-interferon. After sterilization with ethylene oxide, 6 chains of ligatures of 3 different brands (Morelli, GAC e TP) and colors (silver and transparent) were used at each study time. The 96-well culture plates used in the experiment were divided in 2 halves. The first was filled with J774 cells resuspended in supplemented RPMI medium, along with the chains of each kind of ligature and control cells. The second half was filled with another 6 chains of the same kinds of ligatures, kept in J774 cell cultures in supplemented RPMI medium, along with 10μl of IFN-γ (5 ng/ml) and control cells. The plates were incubated at 24, 48, and 72 hours. The MTT [3 – (4,5-dimethylthiazol-2-yl) – diphenyl tetrazolium bromide] technique was used for cellular viability assessment, and the supernatants were collected for NO production analysis with the Griess method. Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests were used to analyze the results. Cellular viability in the elastomeric groups was higher at the final time point in relation to the control group. However, 3 elastomeric groups (silver Morelli, transparent Morelli and silver GAC) showed significant proliferation after 72 hours. TP-ligature-exposed cells had the same behavior of controls, no significant changes in cellular viability and NO production being found. Although silver Morelli ligatures led to higher NO production, the other types of ligatures did not significantly affect NO production, as compared to control cells. In the presence of IFN-γ, Morelli and GAC ligatures led to a significant reduction of cellular viability after 48 hours. Yet a viability mean higher than that seen in control cells was observed for all ligatures after 72 hours, with transparent GAC showing significant proliferation. Cells exposed to TP ligatures had the same behavior of controls, although silver TP ligatures led to lower viability at 24 hours. Nitric oxide production was significantly greater in all groups at the final time point in relation to the initial time point. The transparent Morelli and silver and transparent GAC showed the smallest NO production at the 3 study time points.

A sobrevivência de Pectobacterium atrosepticum e de Ralstonia solanacearum foi avaliada em veículo à base de goma xantana (GX), um polímero biológico, e de goma xantana acrescida de polivinilpirrolidona (PVP), um polímero sintético. As culturas, após crescimento até 10(11) ufc mL-1 foram injetadas junto a essas formulações e a sobrevivência avaliada em diferentes condições de armazenamento: em temperatura ambiente, em refrigerador (4ºC) e em freezer (-20ºC), por 36 meses. A concentração de células viáveis foi realizada através de diluições seriadas. A patogenicidade foi avaliada em plantas hospedeiras e em iscas. Os resultados permitem observar que a concentração de células viáveis decresceu ao longo do tempo, mantendo-se entre 10³ e 10(4) ufc mL-1 ao final de três anos, exceto para a formulação à base de GX e armazenamento à -20°C, que se mostrou ineficiente para ambas as bactérias. Conclui-se, que os polímeros avaliados mostraram-se eficientes em preservar e manter as características bioquímicas e fisiológicas das bactérias Pectobacterium atrosepticum e de Ralstonia solanacearum. The survival of Pectobacterium atrosepticum and Ralstonia solanacearum was evaluated in biopolymer carrier xanthan gum (GX) and xanthan gum together with polymer synthetic polyvinylpyrrolidone (PVP). The cultures after growing up to 10(11) ufc mL-1 were injected into the plolymers carriers. The survival of the bacteria was evaluated at room temperature, refrigerator (4ºC) and freezer (-20ºC) for 36 months. The evaluation of viability of the preserved bacteria was carried through seriate dilutions using drop method. The pathogenicity was observed in plant hosts and through baits. The results allow observing that the concentration of viable cells decreased along the time mainting to 10³ and 10(4) ufc mL-1 for three years with exception, of the formulation to the base of GX and storage the -20°C, that was inefficient for preservation of both the tested bacteria. The polymers applied persevering and mainting the characteristic biochemical and physiological of the bacteria showing efficient to preservation.

O controle de produtos de origem animal está diretamente associado à sanidade animal e à saúde pública. Na suspeita de mastite, tanto bacteriana quanto micótica, o congelamento de amostras de leite permite aumentar o período de tempo para análise microbiológica, permitindo um correto diagnóstico laboratorial. As leveduras são os principais agentes ambientais envolvidos na mastite micótica. O objetivo do presente trabalho foi verificar se o congelamento afeta a recuperação de leveduras potencialmente presentes no leite. Foram utilizados seis isolados: Rhodotorula sp. (L1), Geotrichum sp. (L2), Cryptococcus sp. (L3), Candida tropicalis (L4) e Candida albicans (L5), oriundos de leite in natura, e um isolado de C. parapsilosis (ATCC 22019). Após a inoculação experimental, as amostras foram congeladas durante 10 dias, 3, 6 e 8 semanas. O congelamento do leite por períodos superiores a 10 dias causou redução no número de células viáveis. Sugerimos que sejam utilizados períodos mais curtos de congelamento para a análise micológica do leite. The control of animal products is directly linked to the animal sanity and public health. When suspecting mastitis, either bacterial or mycotic, freezing milk samples increases the period of time for a microbiological analysis, thus allowing a correct laboratorial diagnosis. Yeasts are the main environmental agents involved in mycotic mastitis. The objective of the present work was to verify if freezing affects the recovery of yeasts present in the milk. Six isolates were used: Rhodotorula sp. (L1), Geotrichum sp. (L2), Cryptococcus sp. (L3), Candida tropicalis (L4) and Candida albicans (L5), isolated from milk in natura, and one C. parapsilosis (ATCC 22019) isolate. After experimental inoculation, the samples were frozen during 10 days, 3, 6 and 8 weeks. Milk freezing for periods longer than 10 days caused a reduction in the number of viable cells. We suggest that shorter freezing periods are used for the mycological analysis of milk.

O presente trabalho teve como objetivos determinar a influência de células ovarianas no desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais, avaliar a viabilidade das células ovarianas em monocamada e a influência do soro na manutenção de folículos pré-antrais in vitro. Folículos pré-antrais (FPs) e células ovarianas foram isolados de ovários de fetos bovinos, com idade entre 6 e 8 meses de gestação, oriundos de matadouro. Células ovarianas em monocamada foram cultivadas em meio TCM-199, e a viabilidade celular, após o cultivo na presença ou ausência de FSH, foi determinada com o corante vital azul de tripan. FPs foram distribuidos em quatro tratamentos e cultivados em TCM-199 modificado, contendo soro de novilho castrado (SNC), SNC em monocamada de células ovarianas (MCO), MCO com FSH ou meio definido com álcool polivinílico (PVA) como macromolécula. A viabilidade celular não foi afetada em conseqüência da presença ou ausência de FSH. No entanto, houve um incremento significativo no tamanho dos FPs cultivados na presença de SNC, MCO e FSH (P