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Submitted by FERNANDA FAGALI FRANCHI (fernanda.franchi@unesp.br) on 2020-07-07T20:56:47Z No. of bitstreams: 1 Tese_FernandaFagaliFranchi_15062020.pdf: 3070455 bytes, checksum: 00b07ca35da03351c7f3c54d6063713e (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-07-10T12:58:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 franchi_ff_dr_bot_par.pdf: 955666 bytes, checksum: fc014403ec666b64eef8fe7458009a6d (MD5) Made available in DSpace on 2020-07-10T12:58:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 franchi_ff_dr_bot_par.pdf: 955666 bytes, checksum: fc014403ec666b64eef8fe7458009a6d (MD5) Previous issue date: 2020-06-15 Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) A proteína plasmática A associada à gravidez (PAPP-A) é uma metaloprotease, que tem como função aumentar a biodisponibilidade do fator de crescimento semelhante a insulina tipo 1 (IGF-1), um peptídeo com diversas funções em prol do bom desenvolvimento oocitário e embrionário. Assim, a temática principal dessa tese foi utilizar a PAPP-A como um potencializador dos efeitos atribuídos ao IGF-1 durante a PIVE de bovinos. No primeiro artigo, investigamos o efeito da adição de PAPP-A durante a MIV suplementada com soro fetal bovino (SFB). Os complexos cumulus-oócitos (CCOs) foram maturados in vitro por 24 horas na presença ou ausência de SFB e, posteriormente, foram fertilizados e cultivados in vitro. Analisamos o conteúdo lipídico dos oócitos e blastocistos usando o corante Sudan-Black B, a taxa de blastocistos produzidos e a expressão gênica de 96 genes por RTqPCR. Não houve diferença no conteúdo lipídico dos oócitos e blastocistos avaliados, nem na taxa de blastocistos produzidos. No entanto, a presença de PAPP-A durante a MIV diminuiu a expressão de 22 genes relacionados à síntese de lipídeos, apoptose e estresse celular e qualidade embrionária nos blastocistos produzidos. No segundo artigo, os CCOs foram maturados (tratamento na MIV) ou os embriões cultivados (tratamento no CIV) por 24h com adição de IGF-1, IGF-1/PAPP-A, ou na ausência de ambos, em um ambiente estresse-induzido pela presença de menadiona. Avaliamos nos oócitos a progressão da meiose, concentração de espécies reativas de oxigênio (EROs) e o potencial de membrana mitocondrial por técnicas de coloração utilizando sondas específicas. Também analisamos as concentrações de glutationa total (GSH) nos CCOs, blastocistos e meios de MIV e CIV, além da taxa de blastocistos produzidos e a expressão gênica dos embriões por RTqPCR. A combinação IGF-1/PAPP-A resultou nas menores concentrações de EROs em oócitos e blastocistos e também modulou positivamente nos embriões genes envolvidos na defesa antioxidativa, metabolismo lipídico e qualidade embrionária, além de aumentar a taxa de blastocistos produzidos quando utilizadas na CIV. Assim, concluímos que o uso da PAPP-A, durante a PIVE de bovinos, foi efetivo como uma estratégia para maximizar as ações mediadas por IGF-1. Especificamente, reiteramos que a combinação IGF-1/PAPP-A teve efeitos mais marcantes, potencializando a proteção antioxidativa e a qualidade embrionária, além de aumentar quantitativamente o número de blastocistos produzidos em um ambiente estresse-induzido. Pregnancy-associated plasma protein-A (PAPP-A) is a metalloprotease which role is to increase insulin-like growth factor type 1 (IGF-1), a peptide with several beneficial functions for oocyte and embryo development. Thus, the thesis main subject was using the PAPP-A as an enhancer of IGF-1 attributed-effects during bovine in vitro production. In the first article, we investigated the effects of PAPP-A addition during IVM supplemented with fetal bovine serum (FBS). The cumulus-oocyte complexes (COCs) were in vitro matured for 24 hours in the presence or absence of FBS, and after, in vitro fertilized and cultured. We analyzed the oocytes and blastocysts lipid content by Sudan-Black B staining, the blastocysts yield, and the expression of 96 genes by RTqPCR. There was no difference in oocytes and blastocysts lipid content or in the blastocysts yield. However, the PAPP-A addition during IVM downregulated the expression of 22 genes related to lipid synthesis, apoptosis and cell stress, and embryonic quality in the blastocysts. In the second article, the COCs were matured (IVM treatment) or the embryos were cultured (IVC treatment) for 24 hours with IGF-1, IGF-1/PAPP-A addition, or in absence of both at a stress environment-induced by the menadione addition. We assessed the meiosis progression, reactive oxygen species (ROS) concentration and mitochondrial membrane potential levels in the oocytes using staining techniques. We also analyzed the concentrations of total glutathione (GSH) in COCs, blastocysts, and IVM and IVC media, besides the blastocysts yield and the expression of 96 genes by RTqPCR. The IGF-1/PAPP-A combination showed the lower ROS concentrations in oocytes and blastocysts and also positively modulated genes involved in antioxidative defense, lipid metabolism, and embryonic quality, besides increasing the blastocysts yield when used in IVC. Thus, we conclude the PAPP-A uses during bovine IVP was effective to improve the IGF-1 mediated-actions. Specifically, the IGF-1/PAPP-A shows the highlight effects, increasing antioxidative protection and embryonic quality, besides the number of blastocysts in a stress-induced environment. CNPq: 403063/2016‐7 FAPESP: 2013/11480-3; 2013/ 11480‐3; 2015/04505‐5; 2016/22812‐5; 2017/19679-4; 2018/06454-7 CAPES: 001

Made available in DSpace on 2019-10-03T17:31:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2019. Added 1 bitstream(s) on 2021-07-14T17:52:38Z : No. of bitstreams: 1 S1809-68912019000100317.pdf: 1306660 bytes, checksum: 69e26a70584765b950d30bb4d64c8265 (MD5) Resumo O fator de crescimento transformador-β (TGF-β), um mediador do crescimento prostático, induz a angiogênese e inibe a proliferação celular. Neste estudo, esse marcador foi utilizado com o objetivo de avaliar sua imunomarcação no tecido normal e com lesões proliferativas benignas, pré-neoplásicas e neoplásicas da próstata canina. Para isso, foram selecionadas 54 glândulas com histomorfologia normal, hiperplasia prostática benigna (HPB) epitelial, HPB estromal, atrofia inflamatória proliferativa (PIA), neoplasia intraepitelial prostática (PIN) e carcinoma, utilizadas para a confecção de um bloco de microarranjo tecidual (Tissue Microarray - TMA). As lâminas de TMA foram submetidas à técnica de imunoistoquímica com o anticorpo anti-TGF-β, sendo avaliada a intensidade de imunomarcação nas células epiteliais e estromais. Houve imunomarcação de TGF-β no tecido normal e naqueles com lesões proliferativas. Maior imunomarcação de TGF-β foi constatada nas células do tecido prostático normal e com HPB, enquanto as células prostáticas com PIA, PIN e carcinoma exibiram menor imunomarcação dessa citocina, o que sugere a ação do TGF-β na manutenção da homeostase do tecido normal e com lesão proliferativa benigna e na progressão das lesões proliferativas pré-malignas e malignas da próstata canina. Abstract The transforming growth factor-β (TGF-β), a mediator of prostatic growth induces angiogenesis and inhibits cell proliferation. It was used in this study in order to evaluate its expression in normal prostatic tissue and those with benign proliferative lesions, pre-malignant and malignant prostatic diseases. A total of 54 glands with normal histomorphology, epithelial benign prostatic hyperplasia (BPH), stromal BPH, prostatic inflammatory atrophy (PIA), prostatic intraepithelial neoplasia (PIN), and adenocarcinoma were selected and used in the tissue microarray block (TMA). The TMA slides were subjected to the immunohistochemistry with anti-TGF-β and its staining intensity in epithelial and stromal cells was evaluated. There was TGF-β immunostaining by both normal tissues and those with proliferative lesions. Higher TGF-β immunostaining was observed in cells from normal prostatic tissues and with HPB, whereas prostatic cells with PIA, PIN and carcinoma exhibited lower immunostaining of this cytokine, suggesting the action of TGF-β in the maintenance of normal tissue homeostasis and with benign proliferative lesion and in the progression of pre-malignant and malignant proliferative lesions of the canine prostate. Universidade Federal de Goiá UNESP Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia UNESP Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia

Submitted by Micaella Gordon Gandolfi null (mi_gandolfi@hotmail.com) on 2016-07-25T20:02:15Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Gandolfi, M. G., 2016.pdf: 728438 bytes, checksum: c3ce5a45123f41a9925d82a1290eea4f (MD5) Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-07-27T17:45:56Z (GMT) Submitted by Micaella Gordon Gandolfi null (mi_gandolfi@hotmail.com) on 2016-07-27T22:48:22Z No. of bitstreams: 1 GANDOLFI, M.G. 2016.pdf: 745645 bytes, checksum: 6beb728797667d4a40634dd913dcf6c4 (MD5) Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-07-28T13:34:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 gandolfi_mg_me_bot_par.pdf: 379069 bytes, checksum: 26ab4ccfaf7f3aaddaa64c6ce01e13c2 (MD5) Made available in DSpace on 2016-07-28T13:34:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gandolfi_mg_me_bot_par.pdf: 379069 bytes, checksum: 26ab4ccfaf7f3aaddaa64c6ce01e13c2 (MD5) Previous issue date: 2016-07-22 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Neste estudo, tivemos como objetivo avaliar o efeito clínico do uso do plasma rico em plaquetas (PRP) alogênico, aquecido ou não aquecido, no tratamento de úlcera de córnea, utilizando-se o rato como modelo experimental. Para isso foram induzidas úlceras unilaterais na córnea esquerda de ratos (Rattus norvegicus, variedade albinus) (n=81), machos e fêmeas, os quais foram distribuídos de forma randomizada em três grupos (n=27): grupo controle (GC), o qual não recebeu nenhum tratamento tópico; grupo PRP aquecido (GA) e o grupo PRP (GP); ambos receberam tratamento tópico a cada oito horas, durante cinco dias. Cada grupo foi subdividido em três momentos, de acordo com o período final de avaliação, 24 horas (M1), três dias (M3) e cinco dias (M5). A avaliação clínica foi realizada considerando-se as variáveis opacidade, vascularização e reparação corneal. Foi dosado na córnea o PDGF-BB, utilizando-se o método de Elisa. Houve diminuição da opacidade corneal nos grupos tratados em relação ao GC, no M1, bem como menor tempo na reparação corneal dos grupos tratados quando comparado com GC. Quanto à vascularização, observou-se maior vascularização no M3 em comparação com o M1, apenas no GP. Entretanto não houve diferença na concentração de PDGF-BB, dentre os grupos e momentos. Conclui-se que a utilização de PRP alogênico, aquecido ou não, acelera a reparação corneal, bem como diminui a opacidade corneal; no entanto, não aumenta a concentração do PDGF-BB na córnea. This study aims to evaluate the clinical effect of the use of an allogeneic plateletrich plasma (PRP), heated or unheated, in the treatment of corneal ulcers. An experimental model of corneal ulcers were induced in 81 rats (Rattus norvegicus, Albinus variety), standardizing the left eye, distributing the rats randomly and blindly into three groups (n = 27): control group (CG), which received no topical treatment; heated PRP Group (GA) and PRP group (PG) which received topical treatment every eight hours for five days. Each group was divided at three different moments, according to the final evaluation moment, 24 hours (M1), three days (M3) and five days (M5). The opacity, vascularization and corneal repair were clinically evaluated. PDGF-BB was measured from the cornea, using ELISA method. There was a reduction of corneal opacity at M1 and M5 in animals treated with PRP (GA and GP) and decrease in corneal repair time, when compared to the control group. Also, a greater vascularization was noted in the GP in M3 compared to M1. The use of allogeneic PRP eyedrops, heated or not, accelerates the corneal repair as well as decreases the corneal opacity. However, the concentration of PDGF in the cornea did not alter in any treatment.

Resumo: Para padronização de uma técnica manual para a obtenção de plasma rico em plaquetas (PRP) autólogo em bovinos com custo reduzido (método manual) e de boa qualidade (capacidade de concentrar plaquetas, alta concentração de fatores de crescimento e contaminação reduzida com leucócitos e eritrócitos), que poderá ser utilizado como um agente modulador da resposta imune de vacas com diferentes enfermidades, 450 ml de sangue total de nove vacas clinicamente saudáveis e com perfil hematológico normal foi coletado em bolsas de sangue CPDA-1 e processado dentro de quatro horas após a coleta. O sangue foi separado em alíquotas para avaliar 8 protocolos (P) de centrifugação dupla que variaram quanto a velocidade e o tempo de centrifugação. A contagem de plaquetas, eritrócitos e leucócitos na suspensão obtida (PRP) foi realizada pelo método manual em câmara de Neubauer: P5 (400g e 800g ambos durante 10 min) foi o protocolo com maior número de plaquetas, seguido por P3 (120g e 473g ambos durante 10 min), P4 (300g e 640g durante 10 min cada), P6 (640g durante 10 min e 640g durante 5 min), P8 (640g durante 5 min e 120g durante 10 min) e P7 (720g e 720g durante 5 min) e diferentes (p0.05) P3 (120g e 473g ambos durante 10 min), P4 (300g e 640g durante 10 min cada), P6 (640g durante 10 min e 640g durante 5 min), P8 (640g durante 5 min e 120g durante 10 min) and P7 (720g and 720g both for 5 min) and different (p

Training is known to induce several adaptations. Physiological and biochemical changes induced by exercise training are already demonstrated in specific literature and therefore already well known. On the other hand, scanty data concerning intracellular signaling molecules and pathways, as well, are available. Here, we provided a recent literature review, about the differences in the models adopted by endurance and resistance training to induce their own specific skeletal muscle adaptations.

Submitted by Celso Magalhaes (celsomagalhaes@ufrrj.br) on 2019-08-08T18:02:41Z No. of bitstreams: 1 2014 - Ana Paula Lopes Marques.pdf: 1816680 bytes, checksum: ecb7f8715862ba762300dd9b0f3aecb5 (MD5) Made available in DSpace on 2019-08-08T18:02:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014 - Ana Paula Lopes Marques.pdf: 1816680 bytes, checksum: ecb7f8715862ba762300dd9b0f3aecb5 (MD5) Previous issue date: 2014-11-17 Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES Aimed to standardize a manual technique for obtaining autologous platelet-rich plasma (PRP) in cattle for use in clinical practice. Blood (450 mL) from nine cows was divided into aliquots for test eight protocols (double centrifugation) which varied as the speed and time of centrifugation. All protocols (P1 to P8) were efficient to concentrate platelets being P5 and P8 the most concentrated platelets (890.53 ? 277.14 and 702.23 ? 298.8% compared to whole blood) (p>0.05). Comparing with the P5, P8 showed a higher number of leukocytes and obtained higher concentration of TGF-?1 (2422.67 ? 509.97 pg/mL) (p 0.05), confirming the importance of the second centrifugation with greater speed and time, and platelet activation to obtain better results. In vivo assays from intramammary application of PRP in cows with subclinical mastitis was observed systemic effect, has changed the red blood cells and was mobilizing blood leukocytes with consequent increase in somatic cells, but reduced oxidative stress in the gland suggesting positive actions of PRP as chemotactic agent and reduced deleterious activity in the tissues Objetivou-se padronizar uma t?cnica manual para a obten??o de plasma rico em plaquetas (PRP) aut?logo em bovinos para uso na rotina cl?nica. O sangue (450 mL) de nove vacas foi separado em al?quotas para avaliar 8 protocolos de centrifuga??o dupla que variaram quanto a velocidade e o tempo de centrifuga??o. Todos os protocolos (P1 a P8) foram eficientes em concentrar plaquetas sendo P5 e P8 os que mais se destacaram na concentra??o de plaquetas (890,53 ? 277,14 e 702,23 ? 298,8 % em rela??o ao sangue total) (p>0,05). Ao se comparar com o P5, o P8 apresentou maior n?mero de leuc?citos e obteve maior concentra??o de TGF-?1 (2422,67 ? 509,97 pg/mL) (p0,05), confirmando a import?ncia da segunda centrifuga??o com maior velocidade e tempo e a ativa??o plaquet?ria para obten??o de melhores resultados. Nos ensaios in vivo a partir de aplica??o intramam?ria de PRP em vacas com mastite subcl?nica houve efeito sist?mico, alterou-se hematimetria e ocorreu mobiliza??o de leuc?citos sangu?neos com consequente aumento das c?lulas som?ticas, mas reduzido estresse oxidativo na gl?ndula sugerindo atua??o positiva do PRP como agente quimiot?tico de atividade delet?ria nos tecidos reduzida

OBJETIVO: Identificar polimorfismos genéticos do fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF), posições +936C/T e -2578C/A, em mulheres com pré-eclâmpsia. MÉTODOS:Trata-se de um estudo transversal,constituído por 80 mulheres distribuídas em dois grupos: pré-eclâmpsia e grupo controle. A caracterização da amostra foi realizada mediante entrevista pré-estruturadae complementada por dados transcritos dos prontuários. Para identificação dos polimorfismos foi realizada extração de DNA, amplificação das sequências pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) com primers específicos e análise por Polimorfismos de Comprimentos de Fragmentos de Restrição (RFLP). A análise estatística dos resultados foi realizada de forma descritiva e pelo teste do . O modelo de regressão logística múltipla foi utilizado para determinar o efeito dos polimorfismos na pré-eclampsia. RESULTADOS: Evidenciou-se uma maior frequência do alelo T do polimorfismo VEGF +936C/T nas pacientes com pré-eclâmpsia, embora com diferença não significativa.A presença do alelo A do VEGF -2578C/A foi maior no grupo controle, com diferença significativa. CONCLUSÕES: Não foi observada associação significativa do polimorfismo VEGF +936C/T com a pré-eclâmpsia. Para o polimorfismo VEGF -2578C/A observa-se diferença significativa entre os grupos, sendo o alelo A mais frequente no controle, sugerindo a possibilidade da portadora do alelo A apresentar menor suscetibilidade para o desenvolvimento de pré-eclâmpsia. PURPOSE: To identify genetic polymorphisms of endothelial growth factor (VEGF), positions +936C/T and -2578C/A, in women with pre-eclampsia. METHODS: This was a cross-sectional study conducted on 80 women divided into two groups: pre-eclampsia and control. The sample was characterized using a pre-structured interview and data transcribed from the medical records. DNA extraction, amplification of sequences by the Polymerase Chain Reaction (PCR) with specific primers and polymorphism analysis of Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) were performed to identify polymorphisms. The statistical analysis was performedin a descriptive manner and using the test. The multiple logistic regression model was used to determine the effect of polymorphisms on pre-eclampsia. RESULTS:Ahigher frequency of the T allele of theVEGF +936C/T polymorphism was observedin patients with pre-eclampsia, but with no significant difference. The presence of allele A of the VEGF -2578C/A was significantly higher in the control group. CONCLUSIONS:No significant association was observed between VEGF +936C/Tpolymorphism andpre-eclampsia. For the VEGF -2578C/A polymorphism a significant differencewas observed between thecontrol and pre-eclampsia group, with allele A being the most frequent in the control, suggesting the possibility that carriers of allele A have lower susceptibility to the development of pre-eclampsia.

Orientador: Valéria Helena Alves Cagnon Quitete Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A reposição androgênica representa uma alternativa para minimizar os efeitos prejudiciais do desequilíbrio hormonal em homens senis, embora seus efeitos sobre o desenvolvimento de doenças prostáticas ainda seja assunto controvertido. Assim, o objetivo deste estudo foi caracterizar aspectos estruturais e moleculares do lobo ventral da próstata de ratos senis frente à reposição de hormônios esteróides, relacionando as alterações decorrentes da terapia hormonal a possíveis condições de lesões prostáticas. Ratos machos (Sprague- Dawley) foram divididos em um grupo Jovem (JOV) (4 meses), que recebeu óleo de amendoim (5 mL/Kg, s.c.), e grupos senis (10 meses), submetidos aos tratamentos: grupo Senil (SEN): óleo de amendoim (5 mL/Kg, s.c.); grupo Testosterona (TEST): cipionato de testosterona (5 mg/Kg, s.c.); grupo Estrógeno (EST): 17?-estradiol (25 ?g/Kg, s.c.); grupo Castrado (CAS): castração cirúrgica; grupo Castrado-Testosterona (CT): castração e após 30 dias tratamento similar ao grupo TEST; grupo Castrado-Estrógeno (CE): castração e após 30 dias tratamento similar ao grupo EST. Após 30 dias de tratamento, foram coletadas amostras de sangue, para dosagens hormonais séricas, e do lobo ventral, para análises em microscopias de luz e eletrônica de transmissão, morfométricas, imunohistoquímicas e Western Blotting. As moléculas investigadas foram: distroglicanas ? e ? (?-DG e ?-DG), receptor do fator de crescimento homólogo à insulina tipo I (IGFR-1), metaloproteinase-9 de matriz (MMP-9), fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) e endostatina. Redução dos níveis séricos de testosterona foi verificada na senescência, com aumento destes após a reposição hormonal no grupo TEST. O estroma do grupo SEN apresentou hipertrofia e células inflamatórias. Após a reposição hormonal na senescência ou frente à castração, verificou-se atrofia no epitélio, células epiteliais com halo citoplasmático claro ao redor do núcleo, microácinos e manutenção do estroma hipertrófico com células inflamatórias. Diminuição dos níveis das DGs foi verificada na senescência, sendo que após a terapia hormonal ocorreu aumento dos níveis protéicos dessas moléculas, especialmente nos grupos que receberam estradiol. Aumento do IGFR-1 e da MMP-9, bem como distribuição diferencial dessas moléculas no compartimento epitelial, foram observados nos grupos submetidos à reposição hormonal e no grupo CAS. O grupo SEN caracterizou acréscimo dos níveis de VEGF, sendo o inverso observado para a endostatina. A terapia hormonal e a castração levaram à elevação dos níveis de VEGF, sobretudo nos grupos EST, CAS e CE. Em oposição, a endostatina demonstrou-se aumentada especialmente nos grupos submetidos à reposição de testosterona. Os presentes resultados sugeriram que o desequilíbrio entre andrógenos e estrógenos verificado na senescência foi acentuado após a terapia hormonal e a castração, potencializando as alterações estruturais associadas a esse período e rompendo o equilíbrio das sinalizações parácrinas prostáticas, com aumento simultâneo de IGFR-1 e MMP-9 e geração de fatores pró e anti-angiogênicos em resposta ao tratamento com estrógenos e andrógenos, respectivamente. Assim, concluiu-se que a terapia hormonal, apesar de seus efeitos positivos sobre as DGs, gerou microambiente prostático reativo, caracterizado por aumento de um fator mitogênico e da remodelação tecidual bem como por desequilíbrio da angiogênese, o que possivelmente comprometeu a função do órgão e o predispôs a desordens glandulares Abstract: Androgen replacement is an alternative to minimize the harmful effects of hormonal imbalance in elderly men, even though its influence on the development of prostatic diseases is unclear. Thus, the aim herewith was to characterize structural and molecular features of the ventral prostate of senile rats submitted to steroid hormone replacement, relating the alterations resulting from hormonal therapy to possible prostatic lesions. Male rats (Sprague-Dawley) were divided into Young group (YNG) (4 months old rats), which received peanut oil (5 mL/Kg, s.c.), and senile groups (10 months old rats), submitted to the treatments: Senile group (SEN): peanut oil (5 mL/Kg, s.c.); Testosterone group (TEST): testosterone cipionate (5 mg/Kg, s.c.); Estrogen group (EST): 17?-estradiol (25 ?g/Kg, s.c.); Castrated group (CAS): surgical castration; Castrated-Testosterone group (CT): castration and after 30 days treatment similar to TEST group; Castrated-Estrogen group (CE): castration and after 30 days treatment similar to EST group. After 30 days treatment, blood samples were collected for hormonal analysis and ventral prostate samples were processed for light and transmission electronic microscopies, morphometric, immunohistochemical and Western Blotting analysis. The investigated molecules were alfa and beta dystroglycans (?DG and ?DG), insulin-like growth factor receptor-1 (IGFR-1), matrix metalloproteinase-9 (MMP-9), vascular endothelial growth factor (VEGF) and endostatin. Decreased serum testosterone levels were verified in senescence, with an increase after hormonal replacement in the TEST group. Hypertrophied stroma with inflammatory cells was seen in the SEN group. After hormonal therapy in the senescence or following castration, atrophic and pale cytoplasmatic epithelial cells, microacini and hypertrophied stroma were observed. Decreased DG levels were verified in senescence, but there was an increase of these levels following hormonal therapy, especially in the groups treated with estradiol. Increased IGFR- 1 and MMP-9 protein levels and differential distribution of these molecules were observed in epithelial compartment in those groups which received hormone replacement and in the CAS group. SEN group showed increased VEGF levels in contrast to decreased endostatin levels. Hormonal therapy and castration led to raised VEGF levels, mainly in EST, CAS and CE groups. On the other hand, endostatin was increased especially in those groups submitted to testosterone replacement. The present results suggested that the imbalance between androgens and estrogens in senescence was enhanced after hormone replacement and castration, intensifying structural changes associated with this period. Also, there was a disruption of prostatic paracrine signaling balance, with simultaneous increase of IGFR-1 and MMP-9 and generation of pro and anti-angiogenic factors in response to treatment with estrogens and androgens, respectively. Thus, it could be concluded that despite its positive effects on DGs levels, hormonal therapy created a reactive prostatic microenvironment, characterized by increase of a mitogenic factor and tissue remodelling as well as prostatic angiogenesis imbalance, which could compromise glandular functions and lead to the emergence of prostatic lesions Mestrado Anatomia Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-05T19:36:24Z No. of bitstreams: 1 Solange Maria Diniz Bizzo Tese completa.pdf: 1422294 bytes, checksum: 6979335db1ed3f149081ed4e79c6297c (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-05T19:36:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Solange Maria Diniz Bizzo Tese completa.pdf: 1422294 bytes, checksum: 6979335db1ed3f149081ed4e79c6297c (MD5) Previous issue date: 2010-01-29 Epithelial ovarian carcinogenesis has been the focus of scientific studies in developed world. The ovarian tumor angiogenesis is a multifactorial process that results in pro-angiogenic products. Among them, vascular endothelial growth factor (VEGF) is predominant. This study aimed to relate VEGF levels in peritoneal fluids, peripheric plasma and pelvic infundibular plasma to debulking levels in patients operated on for epithelial ovarian carcinoma (EOC), formulate a probabilistic model for debulking and use these measurements to estimate the probability of the outcome of debulking. Moreover, it was created a new variable called burden of VEGF. For step-wise procedure, cytoreduction was better described by of burden VEGF, but missed Normality of residuals, so the adequacy of a mathematical model was not possible. Nevertheless, the ROC curve provided an area under the curve of 0.84, with sensitivity of 71.4 % and especificity varying from 69.5 to 73,9%. The optimal cutoff point was 15.52 log of picograms of VEGF burden. An odds-ratio for optimal cytoreduction described by the VEGF burden was 11 (CI= 2.59; 46.78). In the group with advanced stages (III & IV), the OR was 6 (CI= 1.15; 31.22). Apart from the small number of cases, this new variable might help to determine situations where cytoreductive surgery leaves behind the cornerstone of primary treatment of CEO and the chemotherapic induction comes to have main role in chemical cytoreduction prior to surgery in these cases. A carcinogênese epitelial ovariana tem sido foco de estudos científicos em todo o mundo desenvolvido. A angiogênese tumoral ovariana é um processo multifatorial que resulta em vários produtos pró-angiogênicos. Entre eles, o fator de crescimento vascular endotelial (VEGF) é predominante. Os objetivos deste estudo foram relacionar as dosagens do VEGF dos fluidos peritoneais, do plasma periférico e do infundíbulo pélvico aos níveis de citorredução em pacientes operadas de adenocarcinoma epitelial de ovário (CEO); formular um modelo probabilístico de citorredução e utilizar estas dosagens para estimar a probabilidade do desfecho de citorredução. Além disto, foi criada uma nova variável chamada carga de VEGF. Pelo procedimento step-wise a citorredução foi melhor descrita pela carga de VEGF, mas faltou Normalidade aos resíduos, não sendo possível a adequação de um modelo matemático. Porém, a curva ROC, forneceu uma área sob a curva de 0,84, com sensibilidade de 71,4 % e especificidade variando de 69,5 a 73,9%. O ponto de corte ótimo foi 15,52 log de picograma de carga de VEGF. A odds-ratio (OR) calculada para citorredução ótima descrita pela carga de VEGF foi de 11 (IC= 2,59 ; 46,78). No grupo com estágio avançado (III e IV), a OR foi de 6 (IC= 1,15; 31,22). Apesar do pequeno número de casos, esta nova variável pode vir a ser um auxiliar na determinação de situações onde cirurgia citorredutora deixa de ser a pedra fundamental do tratamento primário do CEO e a indução quimioterápica passe a ter o principal papel na citorredução química antes da cirugia nestes casos.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-06Bitstream added on 2014-06-13T19:24:33Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_ks_dr_jabo.pdf: 9693100 bytes, checksum: cbce02641faf86a0db97373d5c457eff (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) O aumento da glândula prostática canina com o envelhecimento pode ser decorrente de uma proliferação excessiva do estroma e epitélio acinar, uma diminuição na taxa de apoptose, entre outros. Esses processos celulares são mediados por hormônios, fatores de crescimento e proteínas, dentre elas podemos citar as proteínas CYR61 e p-ERK1/2 e os fatores de crescimento EGF, TGF- e EGFr. Próstatas originadas de 29 cães, com pesos variando entre 6 a 40 kg, foram retiradas, lavadas e pesadas e o volume medido, os valores variaram em 3,8 a 130 g e 2,4 a 90 cm3 respectivamente. Dos fragmentos avaliados 55,17% apresentaram diagnóstico de HPB-ep e 5,75% apresentaram diagnóstico normal. Exames de IHQ foram realizados e para a proteína CYR61 houve uma forte imunorreatividade nas FML, MLA e núcleo das células epiteliais dos fragmentos avaliados. Houve diferenças estatísticas entre grupos de HPB quanto a fração da área de marcação, no exame de W.B. a proteína teve como peso molecular médio 37,72 kDa. Quanto ao EGF houve uma predominância de marcação na FML e núcleo das células epiteliais, os pesos moleculares médio deste fator de crescimento foi de 47,03 e 41,65 kDa nos fragmentos prostáticos avaliados. O TGF- teve imunorreatividade nas FML e citoplasma das células epiteliais, e no exame de W.B. houve 2 bandas de pesos moleculares médios de 52,23 e 38,88 kDa. O receptor de membrana EGFr apresentou imunorreatividade nas FML e núcleo das células epiteliais, no W.B. houve apenas uma banda visível de peso molecular médio de 48,49 kDa. A proteína p-ERK1/2 esteve predominante nas FML e núcleo das células e no W.B. apresentou 3 bandas de pesos moleculares médios de 42,61; 39,56 e 37,26 kDa. Houve correlação positiva entre as proteínas e os fatores de crescimento. The canine prostate gland enlargement also aging could be resulting of excessive stroma and acinar epithelium proliferation, reduced apoptosis, among other. These cellular mechanisms are mediated by hormones, growth factors and proteins, like the proteins CYR61 and p-ERK1/2 and the growth factors EGF, TGF- e EGFr. Prostate from 29 dogs, weighing 6 to 40 kg, were collected, washed, wheighed and volume was measured, with average from 3,8 to 130 g and 2,4 to 90 cm3 respectively. Approximately 55,17% of samples were diagnosed with HPB-ep and 5,75% were normal. IHQ exams were accomplished and high CYR61 immunoreactivity in SMF, ASM and epithelial cells nucleus was observed. There were statistical differences between BHP groups related to immunoreactivity area, by means of W. B. and the mean molecular weight was 37,72 kDa. By analyzing EGF, immunoreactivity in SMF epithelial cells nucleus was prevalent, the mean molecular weights was 47,03 41,65 kDa. TGF- presented immunoreactivity in SMF and epithelial cells cytoplasm and W.B. showed two bands with mean weight 52,23 and 38,88 kDa. The EGFr membrane receptor presented immunoreactivity in SMF and epithelial cells nucleus, W.B. showed only one visible band with mean molecular weight 48,49 kDa. The p-ERK1/2 protein was prevalent in SMF and cell nucleus, W.B. showed three bands with mean molecular weights 42, 61; 39,56 and 37,26 kDa. There was positive correlation between proteins and growth factors.

POLLI, S. THE EXPRESSION OF EARLY PRIMARY GENE PROTEINS, FOS AND JUN FAMILY PROTEINS, IN RAT ADRENAL PRIMARY CULTURES TREATED WITH ACTH AND FGF2. (2007) 90fl MASTER thesis in Morphofunctionals Sciences, ICB. Universidade de Sao Paulo, Sao Paulo. There are evidences that in vivo the adrenocorticotropic hormone (ACTH) displays an important role in the balance of proliferation and cellular death in the adrenal gland, besides its steroidogenic function. The early response gene proteins, among them Fos and Jun family, are components of the transcription factor AP-1 that, depending on its composition, could be related with proliferation, differentiation or cellular death. Different experimental models have been used to study the action of ACTH in the adrenal gland and the in vitro system is one of them. In this work we have been used adrenocortex cells of rat primary cultures, Glomerulosas and Fasciculata/Reticularis cells to evaluate, by immunocytochemistry and immunoblotting, the effects of ACTH and fibroblast growth factor (FGF2) in the expression of c-Fos, FosB, Fra1, Fra2, c-Jun, JunB and JunD proteins, and in such wise as to predict the composition of AP1 complex. The results of this study showed that ACTH and FGF2 treatments modify the expression pattern of these proteins, inducing mainly a consistent and expressive increase of JunB protein expression in the ACTH-treated cells, suggesting an AP1 composition with JunB/c-Fos or FosB, which are compatible with a negative regulator of cell cycle progression. On the other hand, FGF2 treatments indicate the composition of c-Jun/c-Fos or FosB or Fra-2 complexes, which suggest a complex related with induction of proliferation. These results are in agreement with the biological effects observed in rat adrenal primary culture treated with ACTH and FGF2, respectively, inhibition and cellular proliferation. On the whole, these results contribute to explain one of the probable mechanisms by which ACTH proceed as an anti-mitogenic factor in normal adrenal cell cultures. KeyWord: rat adrenal culture cells, Fos and Jun proteins, ACTH, FGF2. LISTA DE ABREVIATURAS AP-1 – Activator Protein 1 ATF Activing Transcriptor Factor BSA Bovine Serum Albumin Cdks Cyclin Dependent Kinase CKIs CDK Inhibitors CRF – Corticotropin-Releasing Hormone CRFr Corticotropin-Releasing Hormone Receptor CRE – cAMP Response Element CREB cAMP Response-Element Binding-Protein cAMP Cyclic Monophosfate of Adenosine DNA Deoxyribonucleic Acid DMEM – Meio Eagle Modificado por Dulbecco ERK Extracellular Signal-Regulated kinases FGF2 – Fibroblast Growth Factor 2 GABA Gamma-Aminobutyric Acid HPA Hypothalamus-Pituitary-Adrenal JNK – Jun NH2-Terminal Kinases MAPK – Mitogen Activated Protein Kinases MC2r – Melanocortin Receptor PDGF Platelet-Derived Growth Factor P450scc Cholesterol Side-Chain Cleavage PKA – Protein Kinase A RNA Ribonucleic Acid SFB – Serum Fetal Bovine TRE PMA Responsive Element

Os glicocorticóides (GC) são drogas de escolha no tratamento clínico da polipose nasossinusal conforme recomendação da literatura. Entretanto, seus mecanismos de ação nas regressões dos sintomas clínicos e dos pólipos não são totalmente compreendidos. Sabe-se que a administração tópica e ou sistêmica dos glicocorticóides leva a variações na expressão de citocinas, quimiocinas e linfocinas, além das alterações celulares. Assim, os GC suprimem a expressão de citocinas pró-inflamatórias, de quimiocinas, de moléculas de adesão, além de estimular a transcrição de citocinas antiinflamatórias. Citocinas pró-fibróticas como a IL-11, fator básico de crescimento do fibroblasto (b-FGF) e fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), relacionados com o crescimento do pólipo, também são suprimidos pela ação do GC. Tal ação depende fundamentalmente da interação com os seus receptores (GR), pois alguns indivíduos apresentam algum grau de resistência celular ao seu efeito, que parece estar relacionada com a presença da isoforma b do GR. Genes envolvidos nas fases de produção de imunoglobulinas, apresentação e processamento do antígeno também sofrem ação dos GC de forma variada. OBJETIVOS: Fazer uma revisão da literatura sobre os mecanismos de ação do GC na PNS. CONCLUSÃO: A compreensão desses mecanismos implicará no desenvolvimento de drogas mais eficazes na sua terapêutica. Glucocorticoids (GC) are the drugs of choice for the clinical treatment of nasal polyposis, according to the medical literature. Its mechanism of action in the regression of clinical symptoms and polyps, however, is not fully understood. The topical and/or systemic use of glucocorticoids lead to variable expression of cytokines, chemokines and lymphokines, as well as changes in cells. It is known that GC suppresses the expression of pro-inflammatory cytokines, chemokines and adhesion molecules such as ICAM-1 and E-selectin; GC also stimulate the transcription of anti-inflammatory cytokines such as TGF-b. GC suppress pro-fibrotic cytokines related to polyp growth, such as IL-11, the basic fibroblast growth factor (b-FGF), and the vascular endotelial growth factor (VEGF). The action of GC depends fundamentally on their interaction with receptors (GR); certain subjects have a degree of resistance to its effect, which appears to be related with the presence of a b isoform of GR. GC also act variably on the genes involved in immunoglobulin production, presentation, and antigen processing. AIM: We present a review of the literature on the mechanisms of GC action in nasal polyosis. CONCLUSION: Understanding the mechanism of action of GC in nasal polyposis will aid in the development of new, more efficient, drugs.

Objetivo: Comparar a expressão gênica (mRNA) e protéica dos protooncogenes c-fos, c-myc e c-jun em miométrio normal e mioma humanos. Métodos: Foi realizado um estudo do tipo caso-controle. O material foi coletado de 12 pacientes submetidas a histerectomia no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. A expressão do mRNA específi co para c-myc, c-fos, c-jun e β-microglobulina foi avaliada pela técnica de RT-PCR, utilizando primers específi cos para cada gene. A expressão protéica destes protooncogenes foi avaliada através de Western blot com anticorpos específi cos. Resultados: Não houve diferença signifi cativa para expressão gênica desses protooncogenes entre miométrio normal e mioma (c-myc: 0,87 ± 0,08 vs 0,87 ± 0,08, p = 0,952; c-fos: 1,10 ± 0,17 vs 1,01 ± 0,11, p = 0,21; c-jun: 1,03 ± 0,12 vs 0,96 ± 0,09, p = 0,168, respectivamente). Não houve diferença signifi cativa para expressão protéica desses protooncogenes entre miométrio normal e mioma (c-myc: 1,36 ± 0,48 vs 1,53 ± 0,29, p = 0,569; c-fos: 8,85 ± 5,5 vs 6,56 ± 4,22, p = 0,434; e c-jun: 6,47 ± 3,04 vs 5,42 ± 2,03, p = 0,266, respectivamente). Conclusão: A expressão gênica (transcrição) e a expressão protéica (tradução) dos protooncogenes c-myc, c-fos e c-jun em mioma e miométrio normal são semelhantes. Uterine myomas are common benign tumors of the female genital tract. The expression of growth factor signal transduction cascade components including the protooncogenes c-myc, c-fos, and c-jun seem to be involved in the development of myomas. Purpose: To compare the gene (mRNA) and protein expression of the protooncogenes c-fos, c-myc, and c-jun in human normal myometrium and leiomyoma. Method: A case-control study was performed. Samples were collected from 12 patients submitted to hysterectomy at the Hospital de Clínicas at Porto Alegre. The expression of the specifi c mRNA for c-myc, c-fos, c-jun, and β-microglobulin was assessed through the RT-PCR technique, using specifi c primers to each gene. The protein expression of these protooncogenes was evaluated through the Western blot technique with specifi c antibodies. Results: No statistically signifi cant difference was observed in the gene expression for these protooncogenes between normal myometrium and leiomyoma (c-myc: 0,87 ± 0,08 vs 0,87 ± 0,08, p = 0,952; c-fos: 1,10 ± 0,17 vs 1,01 ± 0,11, p = 0,21; c-jun: 1,03 ± 0,12 vs 0,96 ± 0,09, p = 0,168, respectively). No statiscally signifi cant difference was observed for the protein expression of these protooncogenes between normal myometrium and leiomyoma (c-myc: 1,36 ± 0,48 vs 1,53 ± 0,29, p = 0,569; c-fos: 8,85 ± 5,5 vs 6,56 ± 4,22, p = 0,434; e c-jun: 6,47 ± 3,04 vs 5,42 ± 2,03, p = 0,266, respectively). Conclusion: No difference was observed in the gene expression (transcription) nor in the protein expression (translation) of the protooncogenes c-myc, c-fos, and c-jun between leiomyoma and myometrium.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-09-09Bitstream added on 2014-06-13T20:05:26Z : No. of bitstreams: 1 martins_mc_dr_arafo.pdf: 2338184 bytes, checksum: d19d1faa6e5b721d78be39854a2bfb47 (MD5) O propósito do presente estudo foi o de avaliar histomorfometricamente a neoformação óssea da região posterior de maxila após os procedimentos cirúrgicos de elevação de seio maxilar e enxerto ósseo autógeno inlay associado ou não ao Plasma Rico em Plaquetas, em dois períodos de tempo: 6 e 8 meses. Foram selecionados 20 pacientes, com idade média de 42 anos, em boas condições de saúde geral. Os pacientes foram divididos, aleatoriamente em três grupos sendo: Grupo 1: enxerto ósseo autógeno e biópsia da área 8 meses após a cirurgia, 4 pacientes (grupo controle). Grupo 2: enxerto ósseo autógeno associado ao plasma rico em plaquetas e biópsia da área 6 meses após a cirurgia, 8 pacientes. Grupo 3: enxerto ósseo autógeno associado ao plasma rico em plaquetas e biópsia da área 8 meses após a cirurgia, 8 pacientes. Encontrou-se diferenças significantes nos períodos (G2 vs G3) em relação ao tecido ósseo (p=0,05) e em relação aos tecidos não calcificados (p=0,045), e nos tratamento (G1 vs G3) em relação a presença de material de enxerto (p=0,041). Baseado nos resultados obtidos, pôde-se concluir que em relação à quantidade e qualidade do tecido ósseo formado o uso do Plasma Rico em Plaquetas não apresentou benefícios adicionais à utilização do osso autógeno nos procedimentos cirúrgicos de elevação de seio maxilar. The aim of the present study was to evaluated, histologic and histomorphometrically, bone formation after maxillary sinus floor augmentation by grafting with an association of PRP and autogenous bone from the symphyseal area. Out of 20 patients were used in this study, and they were distributed in three groups, G1: control - autogenous bone graft, 8 months healing period, G2 - autogenous bone graft and PRP, 6 months healing period, and G3: autogenous bone graft and PRP, 8 months healing period. Before surgery the blood was collected and proper stored, until PRP preparation. Subantral augmentation was performed and the graft was collected. The blood was centrifuged, the concentrate platelet-rich plasma layer was removed and associated to the autogenous graft. The mixture assumed a gel-like consistency, which was used to fill the sinus. After the period healing, implants were placed and core biopsies were taken from the area. Routine histological processing and staining were performed. There were no significant differences between the treatments (G1 vs G3). In regard to the healing period (G2 vs G3) we found significant differences due to bone (p=0,05) and non-calcified tissues (p=0,045), in regard to the type of treatment (G1 vs G3) we found significant differences due to the presence of grafted material (p=0,041). Within the limits of this study the association of PRP and autogenous bone did not bring any additional benefits in regard to bone formation.