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Resumen La determinación de anticuerpos anti-citoplasma de neutrófilos (ANCA) es utilizada en la clínica diaria como una herramienta diagnóstica en distintas formas de vasculitis de pequeños vasos (vasculitis asociadas a ANCA), incluyendo la granulomatosis con poliangeítis (antes: granulomatosis de Wegener), poliangeítis microscópica y granulomatosis eosinofílica con poliangeítis (antes: síndrome de Churg-Strauss), y como apoyo diagnóstico de colitis ulcerosa, colangitis esclerosante primaria y enfermedad de Crohn. Estos anticuerpos están dirigidos contra distintos epítopos antigénicos de diferentes proteínas presentes en el citoplasma del neutrófilo. La determinación de ANCA, habitualmente realizada por la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI), presenta cierto grado de complejidad en la definición de las imágenes de los diferentes patrones, variabilidad en la forma de trabajo y expresión de resultados. El 24 de octubre de 2018 en el marco del X Congreso Argentino de la Calidad en el Laboratorio Clínico y VIII Jornadas Latinoamericanas de la Calidad en el Laboratorio Clínico, en la Ciudad de Buenos Aires, se realizó una reunión de Armonización de la Determinación de ANCA por IFI con el objeto de presentar, discutir y consensuar los distintos aspectos que se presentan en esta técnica. Las propuestas iniciales fueron discutidas arribándose a recomendaciones generales para proporcionar estándares de trabajo e interpretación de imágenes con el objeto de disminuir la variabilidad de resultados entre los laboratorios clínico–inmunológicos. Abstract Anti-neutrophil cytoplasmic antibodies (ANCA) tests are widely used in daily clinical practice as a useful tool for the diagnosis of pathologies such as granulomatosis with polyangiitis, microscopic polyangiitis, pauci-immune necrotizing segmental glomerulonephritis and eosinophilic granulomatosis with polyangiitis, ulcerative colitis, primary sclerosing cholangitis, Crohn’s disease, etc. These antibodies are directed against different antigenic epitopes of various proteins which are present in the neutrophil cytoplasm. ANCA testing is usually carried out by using indirect immunofluorescence (IIF) method. The determination of ANCA presents some difficulties in the definition of the images of the different patterns, work protocols and result reports uniformity. The “Harmonization Conference on the Determination of ANCA by IIF” was held within the framework of the X Argentine Congress on Quality in the Clinical Laboratory and VIII Latin American Conference on Quality in the Clinical Laboratory, in Buenos Aires, Argentina, on October 24, 2018, in order to present, discuss and agree on different aspects of this method. Some initial proposals were discussed, arriving at general recommendations to provide standards of work and an image interpretation, with the aim of reducing the variability of results among the clinical-immunological laboratories. Resumo A determinação de anticorpos anti-citoplasma de neutrófilos (ANCA) é utilizada na prática clínica diária como um suporte diagnóstico para várias patologias, como granulomatose com poliangiite, poliangiite microscópica, glomerulonefrite segmentar necrotizante pauci-imune e granulomatose eosinofílica com poliangiite, poliarterite nodosa, colite ulcerosa, colangite esclerosante primária, doença de Crohn. Esses anticorpos são dirigidos contra diferentes epítopos antigênicos de diferentes proteínas presentes no citoplasma do neutrófilo. A determinação de ANCA, normalmente realizada pela técnica de imunofluorescência indireta IFI, apresenta certo grau de complexidade na definição das imagens dos diferentes padrões, variabilidade na forma de trabalho e expressão de resultados. Em 24 de outubro de 2018, no âmbito do X Congreso Argentino de la Calidad en el Laboratorio Clínico (X Congresso Argentino da Qualidade no Laboratório Clínico) e VIII Jornadas Latinoamericanas de la Calidad en el Laboratorio Clínico (VIII Jornadas Latino-americanas da Qualidade no Laboratório), na cidade de Buenos Aires, foi realizada uma Jornada de Harmonização da Determinação de ANCA pelo IFI a fim de apresentar, discutir e concordar sobre os diferentes aspectos que são apresentados nesta técnica. As propostas iniciais foram discutidas, chegando a recomendações gerais para fornecer padrões de trabalho e interpretação de imagens visando reduzir a variabilidade de resultados entre os laboratórios clínico–imunológicos.

The aim of this study was to diagnose the presence of Piscirickettsia salmonis in samples of coho salmon (Oncorhynchus kisutch) from fish farms in the Los Lagos Region, Chile, which presented outbreaks of piscirickettsiosis. In total, 19 fish with clinical signs of piscirickettsiosis were used. Smears of kidney, liver and splenic tissue and intestinal content were made, and processed using the indirect immunofluorescence test (IFAT) for the detection of P. salmonis through a commercial kit. The data obtained were subjected to the Cochran and McNemar Q test in the Chi square distribution. Higher positivity was found in the liver (68.4%) and kidney (52.6%). In addition, the bacterium was found in the faeces (47.4%), indicating that the elimination via the faeces of the agent is possible under farming conditions. By associating the kidney and liver results, only 78.9% of the fish positive for the bacteria could be detected, while by associating the liver, spleen and faeces results, 100% of the fish positive to P. salmonis can be detected., El objetivo de la investigación fue diagnosticar la presencia de Piscirickettsia salmonis en muestras de salmones coho (Oncorhynchus kisutch) provenientes de centros de cultivo de la Región de los Lagos, Chile, que presentaban brotes de piscirickettsiosis. Se emplearon 19 peces con signos clínicos de piscirickettsiosis. Se hicieron frotis de tejido renal, hepático, esplénico y de contenido intestinal que se procesaron mediante la prueba de inmunofluorescencia indirecta (IFI) para la detección de P. salmonis a través de un kit comercial. Los datos obtenidos se sometieron a la prueba de Q de Cochran y de McNemar en la distribución de Chi cuadrado. Se encontró mayor positividad en el hígado (68.4%) y riñón (52.6%). Además, se encontró la bacteria en las heces (47.4%), indicando que la eliminación vía fecal del agente es posible en condiciones de cultivo. Asociando los resultados de riñón e hígado solo de logra detectar el 78.9% de los peces positivos a la bacteria, en tanto que asociando los resultados de hígado, bazo y heces se logra detectar el 100% de los peces positivos a P. salmonis.

Resumen Introducción: La temprana detección viral en infecciones respiratorias agudas (IRA) es esencial para establecer una terapia apropiada y prevenir el contagio intrahospitalario. Objetivo: Comparar la eficacia de la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI) con la reacción de polimerasa en cadena (RPC) para identificar virus respiratorios en niños hospitalizados por IRA. Métodos: Se incluyeron 47 aspirados nasofaríngeos de niños ≤ 2 años con IRA. La IFI incluyó virus respiratorio sincicial (VRS), adenovirus, influenza A y B y parainfluenza. La RPC incluyó, además, la detección de metapneumovirus, enterovirus/rinovirus, bocavirus y coronavirus. Se estimó sensibilidad, especificidad, valor predictor positivo y negativo (VPP/VPN) y correlación kappa para VRS mediante IFI en comparación a la RPC. Resultados: La IFI detectó únicamente VRS (29; 61,7%). La RPC detectó diversos virus, entre ellos VRS en 26 casos (55,3%), seguido por bocavirus (29,8%), enterovirus/ rinovirus (21,3%), adenovirus (14,9%) y parainfluenza (4,3%) entre otros, con 35,5% de co-infección. La IFI presentó sensibilidad: 85,7%, especificidad: 73,6%, VPP: 82,7%, VPN: 77,7% y kappa: 0,5990 (IC 95%; 0,36360,8346) para VRS. Conclusión: La IFI presenta buena sensibilidad, pero moderada especificidad para VRS. Sin embargo, falla en la detección de otros virus respiratorios. La introducción de RPC permitiría mejorar el diagnóstico etiológico de las IRA de origen viral. Background: Early viral detection in acute respiratory infections (ARI) is essential to establish appropriate therapy and prevent nosocomial transmission. Objective: To compare the efficacy of indirect immunofluorescence technique (IIF) with the polymerase chain reaction (PCR) to identify respiratory viruses in children hospitalized for ARI. Methods: 47 nasopharyngeal aspirates of children ≤ 2 years with ARI were included. IFI included respiratory syncytial virus (RSV), adenovirus, influenza A and B and parainfluenza. PCR also included the detection of metapneumovirus, enterovirus/rhinovirus, bocavirus and coronavirus. Sensitivity, specificity, positive and negative predictive value (VPP/NPV) and kappa correlation for RSV were estimated by IIF compared to PCR. Results: The IIF detected only RSV (29; 61.7%). PCR detected several viruses, including RSV in 26 cases (55.3%), followed by bocavirus (29.8%), rhinovirus/enterovirus (21.3%), adenovirus (14.9%) and parainfluenza (4,3%) among others, with 35.5% of coinfection. The IIF presented sensitivity: 85.7%, specificity: 73.6%, PPV: 82.7%, NPV: 77.7% and kappa: 0.5990 (95% CI, 0.3636-0.8346) for RSV. Conclusion: The IIF presents good sensitivity, but moderate specificity for RSV. However, IIF fails to detect other respiratory viruses. The introduction of PCR would improve the etiological diagnosis of ARI of viral origin.

La enfermedad por arañazo de gato (EAG) es producida por Bartonella henselae.Afecta principalmente a ninos y el reservorio es el gato doméstico. El diagnóstico de laboratorio se basa en la detección de anticuerpos por inmunofluorescencia indirecta (IFI). El objetivo de este trabajo fue analizar la evidencia serológica de infección por B. henselae en pacientes pediátricos que reunían criterios clínicos/epidemiológicos para la sospecha de EAG. Se estudió a 92 pacientes; de acuerdo con los resultados serológicos, estos fueron categorizados en 4 grupos: 1) IgG (+)/IgM (+), 31,5% (n = 29);2) IgG (-)/IgM (+), 10,9% (n = 10);3) IgG (+)/IgM (-), 9,8% (n = 9), y 4) IgG (-)/IgM (-), 47,8% (n = 44). La divulgación de estos resultados intenta promover futuros trabajos que investiguen la seroprevalencia de Bartonella spp. en Argentina. Esto permitirá conocer la importancia de esta zoonosis en nuestra población y evaluar nuevos puntos de corte para esta técnica serológica. Cat scratch disease (CSD) is caused by Bartonella henselae, which mainly affects children. The cat is the reservoir. The laboratory diagnosis is based on the detection of antibodies by the Indirect Immunofluorescence (IFI) assay. The objective of this study was to analyze the serological evidence of B. henselae infection in pediatric patients that met the clini-cal/epidemiological criteria for suspected CSD. We studied 92 patients, who were categorized into four serological groups: 1) IgG (+)/IgM(+), 31,5% (n = 29); 2) IgG (-)/IgM(+), 10,9% (n = 10); 3) IgG (+)/IgM(-), 9,8% (n = 9); 4) IgG (-)/IgM(-), 47,8% (n = 44). These findings aim to promote future works for investigating the seroprevalence of Bartonella spp. in Argentina, which will allow us to know the importance of this zoonosis in our population and to evaluate new cut-off points of the technique.

El objetivo del presente estudio fue determinar, mediante la técnica de Inmunofluorescencia Indirecta (IFI), la frecuencia de anticuerpos frente a Neospora caninum en llamas de la comunidad ganadera de Lachocc, Huancavelica. Se tomó muestras de sangre de 98 llamas hembras adultas, mayores de un año. Los sueros se analizaron mediante IFI empleando un punto de corte de 1:100. Los sueros positivos fueron titulados con diluciones seriadas, determinándose una frecuencia de anticuerpos frente a N. caninum de 12.2% (12/98). De los 12 sueros positivos, el 75.0% (9) presentaron títulos de 1:100, el 16.7% (2) con 1:200 y el 8.3% (1) con 1:400. No se encontró asociación significativa entre las variables edad, antecedentes de abortos y número de partos con la presentación de serorreactores a N. caninum., The aim of this study was to determine, through the Indirect Immunofluorescence (IFAT) technique, the frequency of antibodies against Neospora caninum in llamas from the Livestock Association of Lachocc, Huancavelica. Blood samples were taken from 98 adult female llamas, older than one year. The sera were analysed by IFAT using a cut-off point of 1:100. The positive sera were titrated with serial dilutions, determining a frequency of antibodies against N. caninum of 12.2% (12/98). Of the 12 positive sera, 75.0% (9) had titres of 1:100, 16.7% (2) with 1:200 and 8.3% (1) with 1:400. No significant association was found between the variables age, history of abortions and parity with the presentation of seroreactors to N. caninum.

El estudio tuvo como objetivo estimar la seroprevalencia de anticuerpos contra Anaplasma spp en estudiantes y personal del Hospital Clínico Veterinario Docente (HCVD) de la Escuela de Medicina Veterinaria de la Universidad Santo Tomás (UST), Talca, Chile. Se analizaron 58 muestras sanguíneas humanas mediante inmunofluorescencia indirecta (IFI) para IgG. Se utilizó el test exacto de Fischer o X2 para evaluar diferencias significativas (p, The objective of this study was to estimate the seroprevalence of antibodies against Anaplasma spp in students and staff of the Teaching Veterinary Clinical Hospital (HCVD) of the School of Veterinary Medicine of the University Santo Tomás (UST), Talca, Chile. Blood samples (n=58) were collected and analyzed by indirect immunofluorescence (IFI) for IgG. The exact Fischer or X2 test was used to evaluate significant differences (p

The seroreaction of Ehrlichia chaffeensis through the indirect immunofluorescence test (IFI) was determined in owners of dogs with a history of ehrlichiosis. In addition, the association with gender, age, exposure to ticks and level of contact with dogs was evaluated. The study was conducted between January and December 2009, where 95 people from Lima Metropolitan Region (Peru) were evaluated, regardless of gender, age or socioeconomic status, and whose dogs had a history of ehrlichiosis of less than one year. The results showed that 31.6% (30/95) of dog owners presented antibodies against E. chaffeensis. Besides, 38.7% (24/62) of the individuals younger than 40 years and 18.2% (6/33) of individuals older than 40 years were seropositive to E. chaffeensis (p

Se determinó la seropositividad contra Ehrlichia chaffeensis en propietarios de perros con antecedentes de ehrlichiosis mediante la prueba de inmunofluorescencia indirecta (IFI) y su asociación con el género, edad, exposición a garrapatas y nivel de contacto con los perros. El estudio se realizó entre enero de 2009 y diciembre de 2009, donde se evaluaron 95 personas de Lima Metropolitana (Perú), sin distinción de género, edad o condición socioeconómica y cuyos perros tenían historia de ehrlichiosis menor de un año. El 31.6% (30/95) presentaron anticuerpos contra E. chaffeensis. El 38.7% (24/62) de los individuos menores a 40 años y el 18.2% (6/33) de los individuos mayores a 40 años resultó ser seropositivo a E. chaffeensis (p, The seroreaction of Ehrlichia chaffeensis through the indirect immunofluorescence test (IFI) was determined in owners of dogs with a history of ehrlichiosis. In addition, the association with gender, age, exposure to ticks and level of contact with dogs was evaluated. The study was conducted between January and December 2009, where 95 people from Lima Metropolitan Region (Peru) were evaluated, regardless of gender, age or socioeconomic status, and whose dogs had a history of ehrlichiosis of less than one year. The results showed that 31.6% (30/95) of dog owners presented antibodies against E. chaffeensis. Besides, 38.7% (24/62) of the individuals younger than 40 years and 18.2% (6/33) of individuals older than 40 years were seropositive to E. chaffeensis (p

El objetivo del estudio fue determinar el rendimiento diagnóstico de la prueba de inmunofluorescencia indirecta (IFI) para la detección de anticuerpos contra HTLV-1. Se realizó un estudio de evaluación de prueba diagnóstica. Se usaron cultivos celulares MT2 infectados con HTLV-1 y K-562 sin infección, luego fueron sembrados, fijados en láminas para inmunofluorescencia y enfrentados a sueros. Se usaron 155 sueros (80 positivos para HTLV-1 y 75 positivos para otras enfermedades) procedentes de la seroteca del Instituto Nacional de Salud del Perú. Adicionalmente, se evaluó la repetibilidad (en el laboratorio) y reproducibilidad (en laboratorios de costa, sierra y selva) de la prueba. La prueba IFI para la detección de anticuerpos contra HTLV-1 tuvo una sensibilidad de 98,75% (IC 95%: 95,69-100%), una especificidad de 98,67% (IC 95%: 95,40-100%) y el índice de kappa de 0,975. No hubo falsos positivos ni falsos negativos; sin embargo, sí se obtuvo un resultado indeterminado y uno inespecífico. La prueba mostró 100% de concordancia en la repetibilidad y reproductibilidad. Concluimos que los resultados obtenidos son comparables a la prueba de referencia. La prueba de IFI presenta un buen rendimiento diagnóstico y sería de utilidad para la confirmación de HTLV-1. The objective of the study was to determine the diagnostic yield of the indirect immunofluorescence (IFI) test for the detection of antibodies against HTLV-1. A diagnostic test evaluation study was performed. HTLV-1-infected MT2 cells and HTLV-1-uninfected K-562 cells were cultured; then these cells were impregnated and fixed in sheets for immunofluorescence and faced to Peruvian sera. A total of 155 sera (80 HTLV-1-positive sera and 75 sera positive for other diseases) from the Peruvian Instituto Nacional de Salud were used. In addition, the parameters of repeatability (intra-laboratory) and reproducibility (in laboratories of the Peruvian coast, mountains and jungle) of the test were evaluated. The IFI test detected the presence of antibodies against HTLV-1 reaching a sensitivity of 98.75% (95% CI: 95.69 - 100.00%), a specificity of 98.67% (95% CI: 95.40 - 100.00%) and the Kappa index was 0.975. There were no false positives or false negatives; however, one undetermined result and one non-specific result were obtained. The test showed 100% qualitative agreement when performing the repeatability and reproducibility. The results obtained are comparable to the reference test. Therefore, the IFI test had a good diagnostic performance and would be useful for the confirmation of HTLV-1.

Los objetivos de esta investigación fueron determinar la prevalencia de anticuerpos anti-E. canis y la detección molecular de E. canis, así como determinar el nivel de infestación y especies de garrapatas en perros de una comunidad rural del estado Aragua, Venezuela. Se recolectaron muestras sanguíneas de 110 perros domésticos y fueron evaluadas por inmunofluorescencia indirecta (IFI) y por la técnica de reacción en cadena de la polimerasa anidada (PCR). La seroprevalencia resultó en 77.3% y la detección molecular fue de 45.2%. El porcentaje de perros infestados por garrapatas fue de 69%, identificándose mayormente a Rhipicephalus sanguineus. Se determinó que 80% (68/85) de los perros seropositivos y el 32% (8/25) de los seronegativos estaban infestados por garrapatas (OR=8.5, IC 95%: 3.19-22.6; p

This study aimed to determine the possible presence ofPiscirickettsia salmonis in farmed rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) in the Mantaro river basin, Junin, Peru, by the indirect inmunofluorescence test (IFAT). Kidney and spleen samples were collected from 180 trout from three fish farms. All samples resulted negative to P. salmonis; however, some individuals showed clinical sings of disease as skin ulcer, melanosis, abdominal swelling and exophthalmoses. Also, in the internal organs was found petechial hemorrhage in liver, pyloric caeca and spleen, splenomegaly and pale liver. El objetivo de este estudio fue determinar la posible presencia de Piscirickettsia salmonis en truchas de cultivo (Oncorhynchus mykiss) en la cuenca del río Mantaro, Junín, Perú, mediante la prueba de inmunofluorescencia indirecta (IFI). Se obtuvieron 180 truchas en forma aleatoria de tres piscigranjas, se beneficiaron, se les realizó la necropsia y se recolectaron muestras de riñón y bazo. Los tejidos fueron sometidos a la prueba de inmunofluorescencia indirecta (IFI). Todas las muestras resultaron negativas a P. salmonis; sin embargo, se encontraron peces con signos clínicos de enfermedad como úlceras en la piel, melanosis, abultamiento del abdomen y exoftalmia; asimismo, en órganos internos se encontraron hemorragias petequiales en hígado, ciegos pilóricos y grasa abdominal, esplenomegalia y palidez hepática.

El objetivo de este estudio fue determinar la posible presencia de Piscirickettsia salmonis en truchas de cultivo (Oncorhynchus mykiss) en la cuenca del río Mantaro, Junín, Perú, mediante la prueba de inmunofluorescencia indirecta (IFI). Se obtuvieron 180 truchas en forma aleatoria de tres piscigranjas, se beneficiaron, se les realizó la necropsia y se recolectaron muestras de riñón y bazo. Los tejidos fueron sometidos a la prueba de inmunofluorescencia indirecta (IFI). Todas las muestras resultaron negativas a P. salmonis; sin embargo, se encontraron peces con signos clínicos de enfermedad como úlceras en la piel, melanosis, abultamiento del abdomen y exoftalmia; asimismo, en órganos internos se encontraron hemorragias petequiales en hígado, ciegos pilóricos y grasa abdominal, esplenomegalia y palidez hepática., This study aimed to determine the possible presence ofPiscirickettsia salmonis in farmed rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) in the Mantaro river basin, Junin, Peru, by the indirect inmunofluorescence test (IFAT). Kidney and spleen samples were collected from 180 trout from three fish farms. All samples resulted negative to P. salmonis; however, some individuals showed clinical sings of disease as skin ulcer, melanosis, abdominal swelling and exophthalmoses. Also, in the internal organs was found petechial hemorrhage in liver, pyloric caeca and spleen, splenomegaly and pale liver.

Con el objetivo de determinar la frecuencia de casos seropositivos a Bartonella henselae en niños con adenitis regional atendidos en un hospital nacional del Perú, se realizó un estudio trasversal en 106 niños con adenitis regional mayor de 1 cm de diámetro, de aparición aguda, con tiempo de enfermedad mayor de cinco días, atendidos en el Instituto Nacional de Salud del Niño durante el año 2012. Se definió seropositividad para B. henselae mediante el examen de inmunofluorescencia indirecta, siendo positivos 86 niños (81,1%) con una mediana de edad de 7 años, rango de 5 a 11; en el análisis bivariado se encontraron como factores asociados, edad mayor de 5 años, antecedentes de fiebre, adenopatía mayor de 4 cm y reporte de contacto con gato. En conclusión, los niños con adenitis regional atendidos en este hospital de referencia nacional presentaron una frecuencia alta de serología positiva para B. henselae In order to determine the frequency of seropositive cases of Bartonella henselae in children with regional adenitis treated in a national hospital in Peru, a cross-sectional study was conducted in 106 children with regional adenitis greater than 1 cm in diameter. The sample was selected from patients aged 5-11 years seen at the National Institute of Child Health for acute onset of regional adentitis, with more than five days of symptoms. B. henselae seropositivity was defined by indirect immunofluorescence test. We found that 86 children (81.1%) were positive for B.henselae. The median age of the patients was 7 years. In the bivariate analysis, the following associated factors were found: aged 5 years, history of fever, lymphadenopathy greater than 4 cm and reported contact with cat. In conclusion, children with regional adenitis treated in this national referral hospital showed a high frequency of positive serology for B. henselae

El objetivo del estudio fue determinar la seroprevalencia de Toxoplasma gondii y Neospora caninum en vicuñas de la provincia de la zona de Yauli, Junín, así como determinar el grado de concordancia entre las pruebas de inmunofluorescencia indirecta (IFI) y ELISA indirecta. Se recolectaron 79 muestras de sangre durante un «Chaku». Las frecuencias halladas para T. gondii fueron de 5.1 y 3.1% mediante las pruebas de ELISA indirecta e IFI, respectivamente, no encontrándose reacción seropositiva para N. caninum. Se encontró un valor de kappa de 0.85, pero el escaso número de muestras positivas impide inferir que la concordancia entre ambas pruebas sea buena. The objective of this study was to estimate the frequency of antibodies against Toxoplasma gondii and Neospora caninum in vicuñas in the Yauli province, Junín, Peru, and to determine the degree of concordance between the indirect immunofluorescence (IFA) and indirect ELISA test. A total of 79 blood samples were obtained during a «Chaku» (rodeo). The results showed a frequency of antibodies against T. gondii of 5.1 and 3.1% for indirect ELISA and IFA respectively, whereas none of the samples were positive to N. caninum. The kappa value was 0.85, but the small number of positive samples does not allowed inferring that the degree of concordance between the two test was good.

Las rickettsiosis transmitidas por garrapatas son afecciones de distribución mundial, que por diferentes motivos se pueden considerar emergentes y reemergentes. Hasta hace escasos años la única rickettsiosis transmitida por garrapatas en Latinoamérica era la infección por Rickettsia rickettsii, pero en la actualidad y fundamentalmente, gracias a la incorporación de nuevas herramientas para el diagnóstico microbiológico como la reacción en cadena de la polimerasa y secuenciación o el cultivo celular rápido en tubo cerrado, se han descrito e involucrado otras especies de Rickettsia en la producción de patología humana. En estas guías se detallan y describen las diferentes técnicas utilizadas para el diagnóstico microbiológico de las rickettsiosis. Además, se incluye una sección en la que se detallan las especies más importantes de garrapatas duras relacionadas con las rickettsiosis en Latinoamérica, con claves para su clasificación taxonómica. Tick-borne rickettsioses are worldwide infectious diseases that are considered emerging and re-emerging. Until recently the only tick-borne rickettsiosis present in Latin America was Rickettsia rickettsii infection, but to date, with the incorporation of new tools as PCR and sequencing and the quick cellular close tube cultures (Shell-vial), new species has been involved as human pathogens. In these guidelines, we offer an update of the microbiological assays for diagnosing rickettsioses. Besides we have included a section in which the most important hard ticks involved in human rickettsioses in Latinoamerica are detailed.

Toxoplasma gondii y Neospora caninum son causantes de enfermedades neuromusculares en canes. El objetivo de este estudio de Caso-Control fue encontrar la asociación entre la presencia de anticuerpos contra N. caninum y T. gondii en canes con signos clínicos neuromusculares. Se colectó muestras de sangre a 96 y 120 canes con y sin signos clínicos de afección neuromuscular, respectivamente. Los sueros se analizaron con la prueba de Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) para la detección de anticuerpos (IgG), donde los sueros con fluorescencia completa del taquizoíto en la dilución 1:50 fueron considerados positivos. La frecuencia para T. gondii fue de 24.0 ± 8.5% (23/96) y de 3.3 ± 3.1 (4/120) para canes con y sin afecciones neuromusculares, respectivamente, y para N. caninum fue de 5.2 ± 4.4 (5/96) y de 1.7 ± 2.5 (2/120) para canes con y sin afecciones neuromusculares, respectivamente. Se observó asociación significativa entre la afección neuromuscular y la presencia de anticuerpos anti-T. gondii, mas no así con anticuerpos anti-N. caninum. Toxoplasma gondii and Neospora caninum can cause neuromuscular disorders in dogs. The aim of the Case-Control study was to determine the association between antibodies anti N. caninum and anti-T. gondii in dogs with neuromuscular disorders. Blood samples were collected in 96 and 120 dogs with and without clinical signs of neuromuscular disorders respectively. Serum samples were analyzed by the indirect immunofluorescence test (IFI) for the detection of IgG antibodies, considering positive the sera showing complete fluorescence of the tachyzoite in the dilution 1:50. The frequency for T. gondii was 24.0 ± 8.5% (23/96) and 3.3 ± 3.1 (4/120) for dogs with and without signs of neuromuscular disorders, and for N. caninum was 5.2 ± 4.4 (5/96) and 1.7 ± 2.5 (2/120) for dogs with and without signs of neuromuscular disorders, respectively. There was a significant association between neuromuscular disorders and the presence of anti-T. gondii antibodies but not in the case of the presence of anti-N. caninum antibodies.

El objetivo del presente estudio fue medir el grado de concordancia entre las técnicas de hemaglutinación indirecta (HAI) y la inmunofluorescencia indirecta (IFI) para la detección de Toxoplasma gondii en ovinos. Se colectaron 310 sueros de ovinos hembras de diferentes edades del Fundo Santa María, distrito de Nuñoa, provincia de Melgar, Puno. Se halló un valor deKappa (K) igual al 24% indicando un grado de asociación entre ambas técnicas del tipo regular. Con la prueba de Mc Nemar se encontró que existen diferencias significativas entre ambas, no siendo reemplazable una por la otra. La seroprevalencia para T. gondii fue de 50.3 ± 5.6%, por el método de HAI, y 88.1 ± 3.6%, por el método de IFI. La frecuencia por edades en animales 3 años fue de 23.2, 33.3, 52.1 y58.7%, por elmétodo deHAI, yde 72.0, 90.0, 91.2 y90.5%, por elmétodo de IFI, respectivamente., The objective of this study was to measure the degree of concordance between the Indirect hemaglutination (HAI) and Indirect immunofluorescence (IFI) tests for Toxoplasma gondii detection in sheep. Atotal of 310 sera were collected from ewes of different ages at Fundo SantaMaría, district ofNuñoa, province ofMelgar, Puno. TheKappa (K) value was 24%, showing that the degree of association between both techniques was of a regular type. TheMcNemar test showed significative differences between both tests, so one cannot replace the other. The seroprevalence for T. gondii was 50.3 ± 5.6% through HAI test and 88.1 ± 3.5%through IFI test. Seroprevalence in animals 3 years of age was 23.2, 33.3, 52.1, and 58.7% through HAI test and 72.0, 90.0, 91.2, and 90.5% respectively through IFI test.

La babesiosis es una enfermedad del ganado bovino transmitida por la garrapata Rhipicephalus (Boophilus) microplus y causada por los parásitos protozoarios Babesia bovis y B. bigemina. Una zona se considera epizootiológicamente estable frente a Babesia spp, cuando el 75% de los bovinos entre las edades de 3 a 9 meses son serorreactivos (IgG) frente a Babesia bovis y Babesia bigemina y no hay evidencia de signos clínicos. El objetivo de esta investigación fue determinar la seroprevalencia de Babesia bovis y Babesia bigemina en el ganado bovino de la hacienda Vegas de la Clara (Universidad de Antioquia, Gómez Plata, Antioquia), por medio de inmunofluorescencia indirecta. Se diseñó un estudio descriptivo prospectivo con análisis de corte transversal. Fue evaluada toda la población bovina de la hacienda Vegas de la Clara (n = 118). Las muestras fueron evaluadas por inmunofluorescencia indirecta para la detección de anticuerpos tipo IgG específicos contra Babesia bovis y B. bigemina. La serorreactividad obtenida en los bovinos evaluados, para al menos una especie de Babesia fue del 89,8%, para Babesia bovis del 83,8%, mientras que para B. bigemina del 61%. Se obtuvo una relación estadísticamente significativa entre la serorreactividad para B. bigemina y la frecuencia del tratamiento garrapaticida. La serorreactividad indica estabilidad enzoótica en el hato para B. bovis, mientras que para B. bigemina se encontró que la frecuencia del tratamiento garrapaticida interrumpe su ciclo de transmisión. Babesiosis is a cattle disease transmitted by Rhipicephalus (Boophilus) microplus ticks and caused by protozoan parasites Babesia bovis and Babesia bigemina. An area is considered as epizootiologically stable to Babesia spp when 75% of the cattle between the ages of 3 to 9 months are seroreactive (IgG) against Babesia bovis and Babesia bigemina, and there is no clinical evidence. The purpose of this study was to determine the seroprevalence of Babesia bovis and Babesia bigemina in cattle at the Vegas de la Clara Farm (Antioquia University, Gómez Plata, Antioquia) through indirect immunofluorescence. A prospective descriptive study with cross-sectional analysis was designed and the entire bovine population of the Clara Vegas Farm (n = 118) was evaluated. All samples were evaluated through indirect immunofluorescence in order to detect specific IgG antibodies against B. bovis and B. bigemina. The seroreactivity obtained in the evaluated bovines for at least one species of Babesia was of 89.8%, of 83.8% for Babesia bovis and of 61% for B. bigemina. A statistically significant relationship was obtained between the seroreactivity for B. bigemina and the frequency of acaricide treatment. Seroreactivity indicates enzootic stability in the herd for B. bovis, whereas for B. bigemina it was found that the frequency of acaricide treatment interrupts its transmission cycle.

Made available in DSpace on 2016-07-07T12:35:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-07T12:44:45Z : No. of bitstreams: 1 ISSN0102-5716-2011-18-02-284-296.pdf: 280450 bytes, checksum: 317316b426e39a3a068dd9cd6db81bf8 (MD5) A Leishmaniose é uma infecção zoonótica, causada por diferentes espécies de Leishmania, afetando vários tipos de mamíferos. Recentes investigações têm demonstrado a participação dos gatos na cadeia epidemiológica desta enfermidade. Foram analisadas 317 amostras sanguíneas de gatos domésticos para verificar a ocorrência desta infecção. O material era proveniente da área metropolitana de Assunção e dos Departamentos de Cordillera e Paraguarí, obtidas por visitas domiciliares, ou de gatos de rua submetidos à eutanásia no Centro Nacional Antirábico do Paraguai, pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). 57 gatos (18%) eram provenientes de área rural, e 260 (82%) da área urbana. Com relação a idade, 69 gatos (21,8%) tinham menos de 1 ano, 219 (69,1%) entre 1 e 5 anos, 27 (8,5%) entre 6 e 10 anos e 2 (0,6%) animais tinham mais de 10 anos. Com relação ao sexo, 184 (58%) eram fêmeas e 133 (42%) machos. Apenas 4 (1,3%) gatos eram de raça pura Siamés, e os demais 313 felinos (98,73%) eram mestiços. A análise dos resultados revelou que 3 (0,94%) animais apresentaram anticorpos anti-Leishmania pela RIFI, sendo 1 gato com título 1:40 e 2 gatos com título 1:80. Não houve associação estatisticamente significativa (p  0,05) entre a sorologia e os fatores de risco ligados ao animal, ao habitat e ao manejo dos gatos. De acordo com os resultados obtidos pode-se concluir que até o momento, os gatos não representam importância na cadeia epidemiológica da Leishmaniose visceral, ao comparar com a espécie canina, que de maneira geral apresenta uma maior soroprevalência nas investigações soroepidemiológicas nas diferentes regiões do Paraguai, fato que revela a importância de estudos mais profundos quanto ao papel destes animais na transmissão da Leishmaniose visceral. Leishmaniasis is a zoonotic infection caused by different species of Leishmania, affecting many types of mammals. Recent investigations have shown the involvement of cats in the epidemiological chain of this disease. Blood samples from 317 domestic cats were analyzed to determine the occurrence of this infection. The samples were from the metropolitan area of Asuncion and the Department of Paraguarí, obtained by home visits or by stray cats euthanized at the National Rabies Paraguay, and were tested by Immunofluorescence Antobody Test (IFAT). 57 cats (18%) were from rural area, and 260 (82%) from urban area. Regarding age, 69 cats (21.8%) were less than 1 year, 219 (69.1%) had between 1 and 5 years, 27 (8.5%) between 6 and 10 years and 2 (0.6 %) animals had more than 10 years. Regarding gender, 184 (58%) were females and 133 (42%) males. Only 4 (1.3%) cats were purebred Siamese, and the other 313 (98.73%) were crossbred. The results revealed that three (0.94%) animals presented anti-Leishmania antibodies by IFAT, 1 presenting titre 40 and 2 titre 80. No association was statistically significant (p

Objetivo Evaluar el desempeño de las pruebas empleadas en Colombia para el diagnóstico de la leishmaniasis visceral canina y adaptar una técnica de Western blot empleando animales experimental y naturalmente infectados. Metodología Se obtuvieron sueros de 10 perros infectados experimentalmente con L. infantum, 5 perros infectados naturalmente, 16 perros sanos, 26 de reacción cruzada (infectados con Babesia canis, Erhlichia canis, Dirofilaria immitis, Trypanosoma cruzi, Leishmania (Viannia) spp.), 40 de zonas no endémicas y 150 de zona endémica. Todos fueron evaluados mediante las pruebas de inmunofluorescencia indirecta (IFI), ELISA y Western blot (WB). Resultados Se encontró que IFI tuvo el mayor porcentaje de positividad en los perros infectados (73 %) mientras que el menor porcentaje de falsos positivos se obtuvo por WB (2,5 %). La prueba de ELISA fue la menos eficiente. Fueron reconocidas 24 fracciones antigénicas, las bandas de 29, 34, 50, 69, 75, 86, 99 y 123 kDa fueron responsables de reacciones inespecíficas en los sueros de perros sanos, de zona no endémica y de reacción cruzada. Las bandas por debajo de 29 kDa mostraron ser potencialmente diagnósticas, especialmente la fracción de 13 kDa. Conclusiones Los métodos directos y serológicos pueden subdiagnosticar la infección por Leishmania, solamente un constructo que combine tanto pruebas directas como indirectas sería la forma más eficiente de diagnóstico

Objetivo: Determinar si la interacción del virus del herpes simple tipo 2 con diferentes factores epidemiológicos, tiene influencia en las lesiones premalignas y malignas del cuello uterino. Ambiente: Ambulatorios de Los Olivos, Cujicito, Salud Maracaibo, La Victoria y la consulta de Patología de Cuello Uterino del Hospital "Manuel Noriega Trigo", (Seguro Social), Maracaibo. Métodos: Cincuenta y tres pacientes con neoplasia intraepitelial cervical y 10 controles fueron analizadas. Se tomó un hisopado cervical para la determinación del virus del herpes simple tipo 2 mediante la técnica de la inmunofluorescencia indirecta y para el virus del papiloma humano por la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa. Resultados: La presencia del virus del herpes simple-2 fue del 27,65 % (n=18) de las pacientes. Las pacientes con lesiones premalignas del cerviz (n = 48) y las pacientes del grupo control (n = 10) presentaron un 27,1 % y 30 % de positividad al virus del herpes simple-2, respectivamente. No se encontró ninguna asociación entre el virus del herpes simple-2 y la neoplasia intraepitelial cervical. Conclusiones: El virus del herpes simple-2 no está asociado a las lesiones premalignas del cuello uterino. Objective: To determine if the interaction of herpes simplex virus type 2 with different epidemiological factors, had influence in premalignant and malignant lesions of uterine cervix. Setting: Out-patient clinic of Los Olivos, Cujicito, Salud Maracaibo, La Victoria and out patient cervical pathology clinic, "Manuel Noriega Trigo" Hospital, IVSS, Maracaibo. Methods: Fifty three patients with cervical intraepithelial neoplasia and 10 control patients were studied. A cervical swab sample was obtained for determination of the herpes simplex virus type 2 using an indirect immunofluorescense method and for the human papillomavirus with the polymerase chain reaction technique. Results: The presence of herpes simplex virus type 2 was 27.65 % (n=18) of patients. Patients with cervical premalignant lesions (n = 48) and patients of control group (n = 10) presented 27.1 % and 30 % of positivity of herpes simplex virus type 2, respectively. There was no association between herpes simplex virus type 2 and cervical intraepithelial neoplasia. Conclusions: The herpes simplex virus type 2 is not associated to premalignany lesions of uterine cervix.

El objetivo del estudio fue cuantificar la seroprevalencia de Toxoplasma gondii enalpacas de comunidades alpaqueras de los distritos de Maranganí, Pitumarca, Checacupey San Pablo, en la provincia de Canchis, Cusco. Se recolectaron 272 muestras de sangreen marzo del 2003 para la detección de anticuerpos contra T. gondii mediante la prueba deinmunofluorescencia indirecta (IFI). Se encontró una seroprevalencia moderada de 35.7 ±5.7%. No se encontró asociación entre las variables distrito, sexo, raza y la respuesta a laprueba de IFI. Sin embargo, se encontró una asociación significativa entre la edad y larespuesta a la prueba. La seroprevalencia del presente estudio concuerda con resultadosobtenidos en camélidos sudamericanos en otras zonas del sur del Perú, The objective of the present study was to determine the seroprevalence ofToxoplasma gondii in alpacas of communities from the districts of Maranganí, Pitumarca,Checacupe and San Pablo, located in the province of Canchis, department of Cusco. Atotal of 272 blood samples were collected in March 2003, for the detection of antibodiesagainst T. gondii by the indirect immunofluorescence test (IFAT). The resultingseroprevalence was 35.7 ± 5.7%, without significant differences due to district, sex, andbreed; however, there was a significant association between age and IFAT value. Theresults of the present study agreed with other studies conducted in South Americancamelids in different localities in the south of Peru.

Background: Celiac patients are at high risk of developing insulin-dependent diabetes mellitus, a condition that has a long pre-diabetic period. During this lapse, anti-islet cell antibodies serve as markers for future disease. This may be related with the duration of the exposure to gluten. Aim: To test the hypothesis that long term adherence to a gluten free diet decreases the frequency of risk markers for insulin dependent diabetes mellitus during adolescence and early adulthood. Patients and methods: 158 celiac patients were classified as: G1, (n=30 patients) studied at the time of diagnosis; G2 (n=97 patients) exposed to gluten as a result of non compliance with the gluten free diet and, G3 (n=31 patients) who had maintained a long term, strict gluten free diet. Isotype IgG anti-islet cell antibodies were detected by indirect immunofluorescence using monkey pancreas; results were reported in Juvenile Diabetes Foundation (JDF) units. Results: Celiac patients exposed to a gluten containing diet had a significantly higher prevalence of anti-islet cell antibodies than those who had been exposed only briefly (p

A retrospective study by means of indirect immunofluorescence was carried out to detect IgM antibodies against Chlamydia pneumoniae and Mycoplasma pneumoniae in seronegative patients for Hantavirus, with characteristics symptoms of atypical pneumonia. The final results indicate that the prevalence of C. pneumoniae reaches 8,6% and M. pneumoniae is equivalent to 17,1% of the patients studied. By this we can be aware of the importance of these agents in our media, and the necessity of having rapid laboratory techniques that allow an opportune differential diagnosis in pulmonary syndrome for Hantavirus and other pathologies that cause similar symptoms, mainly atypical pneumonia

The purpose of this communication is to present two cases of Chagas’ disease in a familial group of a index case, coming from the Arequipa region in southwestern Peru, an endemic area. The case suffered sudden death because of chagasic cardiomyopathy in an area free triatomines in Department Ica. His sister and his nephew showed IgG specific antibodies anti - Trypanosoma cruzi detected by enzime-linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect immunofluorescence assay (IFA), both households had lived in an endemic valley (Vitor-Arequipa). Our results underscore the importance of the epidemiological survey in the familial group of the chronic case in low risk-areas.

Bartonella spp son bacilos Gran negativos aerobios, difíciles de aislar con los medios empleados habitualmente en los laboratorios, considerados patógenos humanos emergentes. Desde 1993, tres especies del género Bartonella (B. quintana, B. henselae y B. elizabethae) se han descrito como agentes causales de endocarditis bacteriana. En el presente trabajo se describe el caso de una paciente de 43 años, con valvulopatía previa de posible origen reumático y dueña de gatos, que sufrió una endocarditis infecciosa por B. henselae sobre válvula aórtica. La paciente presentó un título de IgG frente a B. henselae de 1/4096 y de 1/256 frente a B. quintana detectándose IgM frente a ambas bacterias a título débil (1/64 y 1/32 respectivamente). La paciente fue tratada con antibióticos durante 12 semanas y sometida a recambio válvular ante la grave lesión existente en la válvula aórtica. En tejido endocárdico procedente de la válvula escindida se detectó DNA de B. henselae (reacción en cadena de la polimerasa). La evolución clínica fue buena. El diagnóstico de infección por Bartonella spp debe ser considerado en todos los pacientes con endocarditis infecciosa y hemocultivo negativo, y en particular B. henselae en pacientes con valvulopatía previa y contacto habitual con gatos Bartonella spp are small Gram-negative rods, aerobic and highly fastidious. They are difficult to culture, in the routine bacterial cultures. They are considered as emergent human pathogens. Since 1993, three species of Bartonella (B. quintana, B. henselae, and B. elizabethae) have been described as causative agents of infectious endocarditis. In this paper we describe the case of a 43 year-old woman with a previous valvular heart disease, probably of rheumatic origin, owner of cats, that suffered an infectious endocarditis by Bartonella henselae in the aortic valve. This patient presented IgG titers against B. henselae of 1/4096 and against B. quintana of 1/256. She also had low IgM titers against B. henselae and B. quintana: 1/64 and 1/32, respectively. The patient received antibiotics for 12 weeks and suffered a valvular replacement due to the severe lesion on the aortic valve. On the endocardic tissue of the removed valve DNA of B. henselae was detected (polymerase chain reaction-based assay). Clinical evolution of the patient was good. Diagnosis of Bartonella spp infection must be considered in every patient with infectious endocarditis and negative blood cultures, and particularly B. henselae in patients with previous válvular heart disease and regular contact with cats

Evidence of past exposure to i. pneumcphila was evaluated in a 1 20 chiiean subjects less than 20 yeais old stratified by socioeconomic background and age. Serum samples were analyzed for /. pneumophila antibodies by indirect immunofluorescence using serogroup 1 to 6 antigens; tilers equal or greatci than 1:64 were considered positive. Overall, 1 2 out of 1 20 samples (10%) were positive for (. pneumcphila antibodies and different prevalence rates were recorded among individuals of low [0/40], middle (2/40; 5%} and high j 10/40; 25%) socioeconomic groups. The highest liters observed in this heallhy population based survey were 1:128. High socioeconomic background is associated with highest prevalence of anfi-i. pneumophila antibodies in chilean population.

Disímiles son los métodos serológicos empleados para la determinación de anticuerpos IgG anti-Toxoplasma gondii en diferentes muestras de estudio. El objetivo es realizar una comparación entre el método de Inmunofluorescencia Indirecta y el Toxoplasma látex porBrunella para demostrar cual es el método más sensible y específico para determinar seroprevalencia de anticuerpos IgG anti- Toxoplasma gondii en neonatos asistidos en la Sala de Neonatología del Hospital Valdimir Ilich Lenin. Se analizaron 30 muestras de sueros de niños recién nacidos asistidos en este Servicio por las dos pruebas, de ellas se conformaron dos grupos de trabajo. Los resultados demostraron que la prueba de Inmunofluorescencia Indirecta es la más útil para este diagnóstico, coincidiendo con investigaciones similares realizadas.

Con el fin de determinar las clases de anticuerpo producido contra el parásito y la cinética de los mismos en relación a la evolución de la infección, se estudiaron los sueros de 133 pacientes infectados con Leishmania del complejo braziliensis. Se utilizó la prueba de inmunofluorescencia indirecta y amastigotas de L. mexicana amazonensis como antígeno. En los sueros obtenidos al momento de consultar para el diagnóstico se encontró IgM en 54 de los sueros absorbidos con Straphylococcus aureus Cowan I y en 5 de los no absorbidos. La IgM sólo se encontro en los sueros de pacientes con tiempo devolución de las lesiones < o = de 2 meses. la IgG se detectó en todos los sueros no absorbidos. Los sueros tomados durante recurrencia y después de cicatrización sólo presentaron IgG. El uso combinado de la prueba de Montenegro y/o título de IgM específico, aumentó el porcentage de pacientes con un diagnóstico inmunológico positivo en aquéllos cuyas lesiones tenían un tiempo de evolución menor de 2 meses. En los sueros de los 10 individuos sanos no se detectó inmunoglobulina específica a Leishmania y ninguno presentó reacción positiva a la prueba de Montenegro. Entre los 16 pacientes con otra etiología, 3 con esporotricosis, mostraron en su suero IgG reactiva con Leishmania pero ninguno incluyendo 2 con menos de dos meses de evolución de las lesiones presentó IgM. concluimos que en pacientes infectados con L. braziliensis la presencia de IgM e IgG específica a Leishmania esta asociado con el tiempo de evolución de las lesiones y el estado primario recurrente de la infección; demás la detección de IgM anti-Leishmania combinada con la respuesta de Mn sería de potencial utilidad en el diagnóstico clínico de la leishmaniasis tegumentaria temprana. Leishmania-specific immunoglobulin subclass response was evaluated in 133 patients infected with Leishmania braziliensis. The indirect immunofluorescent antibody test (IFAT) was employed with amastigotes of L. mexicana amazonensis as antigen. Among the 133 sera obtained at consultation fo rdiagnosis of active lesions, IgM was detected in 54 following absorption with Staphylococcus aureus Cowan strain I, and in 5 sera prior to absorption. IgM reactive with Leishmania antigen was only found in sera from patients whose lesions had envolved over past two months or less. Leishmania-specific IgG was detected in all sera prior to absorption. Sera obtained at the time of recurrence of after complete healing of lesions presented only specific IgC. The combined use of the Montenegro skin test and specific IgM increased the sensitivity of immunodiagnostic methods in patients with lesions of less than 2 months duration. Normal control volunteers were negative for specific IgM and unreactive to Montenegro skin testin. Among 16 patients with non-leishmanial lesion, 3 with sporotrichosis showed IgG reactive with Leishmania; none, including 4 with lesions of less than two months duration, showed specific IgM. We conclude that in patients infected with L. brasiliensis the presence of specific IgG and IgM is associated with the time of lesion evolution and the primary or recurrent nature of the lesions. In addition, the combined use of IgM titer and Montenegro reactivity is of potential utility in the diagnosis of early lesions.