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El café (Coffea arabica L.) es un cultivo ampliamente valorado en el mercado mundial. Toneladas de producto son trasegadas entre los mercados internacionales y se ha convertido en un recurso sumamente valioso. Sin embargo, la especie se ve amenazada por la alarmante diversidad genética reducida que se ha caracterizado recientemente entre sus poblaciones silvestres y variedades agronómicas. La baja diversidad genética dificulta el establecimiento de protocolos que faciliten una caracterización molecular adecuada de un genotipo determinado El desarrollo de métodos eficientes y escalables de identificación genotípica es necesario para acelerar los estudios de caracterización genómica de las diferentes accesiones y la validación del germoplasma de Coffea. En este trabajo se llevó a cabo un análisis de variabilidad nucleotídica en 22 loci del genoma de 19 accesiones de café mediante el análisis de fusión de alta resolución (HRM por sus siglas en inglés). Ciento tres posiciones mostraron variabilidad tanto a nivel interespecífico (15 loci) como entre variedades de la especie arábica (4 loci). Así mismo, se detectaron variantes en regiones no codificantes utilizando un marcador universal (ITS2) y en regiones codificantes en un gen implicado en la acumulación de sacarosa en el grano (SUS2). La mayoría de las variaciones fueron validadas por el análisis HRM, el cual demostró ser una técnica sensible y robusta para caracterizar el germoplasma e identificar variantes en genes de interés como CaKO1, SUS2, CcOAOMT1, así como establecer un método para aumentar la sensibilidad de identificación de variedades basado en la región ITS2. Es relevante explotar mecanismos para inducir variabilidad genética; y precisamente uno de ellos es la mutagénesis química inducida en cultivos in vitro embriogénicos. En este trabajo se analizó una población de 320 plantas de café (Coffea arabica L. var. Catuaí) mutagenizadas durante la propagación de callos embriogénicos con EMS (185,2 mM / 120 minutos) o azida de sodio (5 mM / 15 minutos). Se extrajo el ADN de las plantas mutagenizadas, a partir del cual se amplificaron mediante PCR anidado algunos genes de interés (CaKO, CaPOP, CaWRKY1, CCoAOMT1, ITS2, LOX1, SUS2, ABC, FLC). Utilizando un protocolo para el enriquecimiento de posibles alelos mutantes mediante COLD-PCR, se detectaron variaciones importantes en el perfil de fluorescencia vs temperatura de algunos productos de PCR (CaKO2_HRM_2 y ABC) al analizarlos por HRM- PCR. Sin embargo, no se detectaron variantes en las secuencias genómicas analizadas según la confirmación por secuenciación Sanger. Resulta esencial ampliar el número total de pares de bases analizadas o enfocar el escaneo en genes específicos. La roya del café (Hemileia vastatrix) representa un obstáculo para el establecimiento de las plantaciones del café en muchas regiones del planeta. Actualmente no existen fuentes de resistencia natural en el acervo genético de C. arabica, lo que obliga a los programas de mejoramiento genético a incorporar elementos genéticos externos de otras especies a través de la hibridación. Este fenómeno lleva a la depreciación de las variedades genotípicamente puras del café arábica. En este trabajo se establecieron ensayos de infección en segmentos foliares de plantas de café que derivaron de un proceso de mutagénesis química (azida de sodio 5 mM durante 15 minutos o EMS 185,2 mM durante 120 minutos) aplicada a cultivos embriogénicos. Un total de 163 plantas se inocularon con uredósporas del patógeno H. vastatrix. Los segmentos foliares fueron evaluados y analizados mediante un algoritmo para clasificar la severidad de la enfermedad en cada planta. La severidad de infección se comparó con los controles Catuaí y CR-95. Un grupo de once plantas mutagenizadas presentó valores de severidad de infección similares a la variedad CR-95. Finalmente, plantas candidatas fueron infectadas nuevamente para analizar la expresión génica de genes implicados en la respuesta temprana a la infección por roya. Se identificaron cerca de diez plantas con una respuesta diferencial a la infección del patógeno, mostrando menor severidad en el desarrollo de la enfermedad dentro del periodo evaluado. Ministerio de Ciencia, Tecnología y Telecomunicaciones de Costa Rica//MICITT/Costa Rica Centro Nacional de Alta Tecnología, Centro Nacional de Innovaciones Biotecnológicas///Costa Rica UCR::Vicerrectoría de Investigación::Sistema de Estudios de Posgrado::Ciencias Agroalimentarias::Maestría Académica en Ciencias Agrícolas y Recursos Naturales con énfasis en Biotecnología

[ES] La peroxidación lipídica es un proceso biológico que ocurre ininterrumpidamenteen nuestro cuerpo como resultado de la oxidación de la membrana celular por especies reactivas de oxígeno (EROs). La degradación de los ácidos grasos poliinsaturados conduce a aldehídos reactivos, como el malondialdehído o el 4-hidroxi-2-nonenal (4-HNE). El 4-HNE puede interactuar con las bases del ADN formando daños endógenos conocidos como aductos de tipo eteno (ε-aductos). Estas lesiones están presentes en muchos tejidos humanos inflamados, lo que los convierte en biomarcadores para detectar algunos tipos de cánceres. Además, estos daños ubicuos exhiben propiedades altamente mutagénicas e inducen transiciones o transversiones de bases en células de mamíferos. En consecuencia, la comprensión de su reparación es de gran interés. Las lesiones de tipo eteno pueden ser reparadas enzimáticamente por el AlkB mediante un mecanismo oxidativo que regenera la nucleobase nativa. Curiosamente, se ha demostrado que el eteno aducto 1-N2-eteno-2'-desoxiguanosina (εdG) puede reaccionar in vitro con oxígeno singlete (1 O2 ) dando lugar a la 2'-desoxiguanosina (dG). Con estos antecedentes, este trabajo aborda la fotoquímica de los aductos de tipo eteno para comprender mejor sus propiedades fotobiológicas y diseñar sistemas modelo para su reparación. Se utiliza el rosa de Bengala, un fotosensibilizador capaz de fotogenerar oxígeno singlete, y se conjuga a nanopartículas para aprovechar sus propiedades fotofísicas y fotobiológicas., [EN] Lipid peroxidation is a biological process that occurs uninterruptedly in our body because of cell membrane oxidation by reactive oxygen species (ROS). Polyunsaturated fatty acid degradation leads to reactive aldehydes, such as malondialdehyde or 4-hydroxy-2-nonenal (4-HNE). The 4-HNE can interact with DNA bases forming the endogenous damages known as etheno adducts (ε-adducts). These lesions are present in many inflamed human tissues, making them convenient biomarkers for some types of cancers. Moreover, these ubiquitous damages exhibit highly mutagenic properties and induce base transitions or transversions in mammal cells. Consequently, the understanding of their repair is of a great interest. The etheno lesions can be repaired enzymatically by the AlkB by means of an oxidative mechanism leading back to the native nucleobase. Interestingly, it has been shown that the etheno adduct 1-N2-etheno-2’-deoxyguanosine (εdG) can react in vitro with singlet oxygen (1 O2 ) giving rise to 2’- deoxyguanosine (dG). With this background, this work addresses the photochemistry of etheno adducts to better understand their photobiological properties and to design model systems for their repair. Rose Bengal, a photosensitizer, which can photogenerate singlet oxygen, is used. Its conjugation to nanoparticles is performed with the aim to enhance its photophysical and photobiological properties

Fil: Martínez Pérez, Elizabeth. Fundación Instituto Leloir. Laboratorio de Biología Estructural; Argentina. Martínez Pérez, E. (2021). Patrones mutacionales en cáncer. (Tesis de doctorado). Universidad Nacional de Quilmes, Bernal, Argentina. El cáncer es uno de los problemas de salud más importantes a nivel mundial y, a pesar de avances recientes en diagnóstico y terapia, la mortalidad sigue siendo inaceptablemente alta. Es la segunda causa de muerte con una estimación global de 14 millones de nuevos casos y 8.2 millones de muertes cada año. Es una enfermedad de evolución clonal, donde una célula adquiere mutaciones y/o alteraciones epigenéticas que la vuelven más apta. El resultado de un tratamiento está fuertemente determinado por las alteraciones en su genoma; de ahí la idea de las terapias personalizadas dirigidas a una o múltiples dianas moleculares. La terapia inmunológica ha demostrado buenos resultados en el tratamiento de algunos tumores, sin embargo solo un 35% de los pacientes se benefician de esta por lo que es necesario encontrar mejores marcadores para predecir su efectividad. El principal objetivo de esta tesis ha sido encontrar patrones entre las mutaciones en los pacientes con cáncer utilizando técnicas bioinformáticas y el análisis de datos públicamente disponibles. Hemos abordado tres temas, las relaciones entre las mutaciones por su utilidad en las terapias dirigidas, las mutaciones que generan resistencia a medicamentos y la carga mutacional total (TMB) como biomarcador de pacientes con beneficio clínico ante la inmunoterapia. Como resultados se obtuvieron relaciones entre mutaciones con significación estadística, algunas de ellas son excluyentes, mientras que otras son comutaciones. Tanto el tipo de relación como las mutaciones implicadas en ella son importantes al momento de seleccionar una terapia multi dirigida. Se encontraron 3 características de las mutaciones drivers (o sea causantes de la enfermedad), lo que nos permite sugerir mutaciones como drivers que aún no son consideradas como tal. Además, se determinó que la mayoría de las mutaciones de resistencia a drogas ocurren cerca del sitio de unión a la misma y en el caso de las quinasas también en el lazo de activación. Por último, se definieron paneles de genes tumor-específicos para predecir con mayor precisión el TMB. Estos paneles son más económicos que los paneles comerciales (Foundation-One y MSK-Impact) ya que requieren secuenciar menos pares de bases. Además contribuimos al estudio de proteínas desordenadas (o con regiones desordenadas) durante estadías en el exterior como colaboraciones. Cancer is one of the most important health problems in the world, and despite recent advances in diagnosis and therapy, mortality remains unacceptably high. It is the second leading cause of death with a global estimate of 14 million new cases and 8.2 million deaths each year. Cancer is a disease of clonal evolution, where cells acquire mutations and / or epigenetic alterations that give them adaptive advantages with respect to the normal cells. The goal of a treatment is strongly determined by the alterations in his/her genome; hence the idea of personalized therapies directed at one or multiple molecular targets. Immunotherapy has shown good results in the treatment of some tumors, however only 35% of patients benefit from it, so it is necessary to find better markers to predict its effectiveness. The main goal of this thesis has been to find patterns between mutations in cancer patients using bioinformatic techniques and the analysis of public available data. We have approached three problems: the relationships between mutations due to their usefulness in designing targeted therapies; the study of mutations that generate drug resistance; and the prediction of the total mutational burden (TMB) as a biomarker of patients immunotherapy benefit. Our results show a relationship between mutations with statistical significance some of them are mutually exclusive, while others co-occur. Knowing both, the type of relationship and the mutations are important to select a multi-targeted therapy. We found 3 characteristics of driver mutations that allow us to suggest new mutations as drivers not considered as such yet. By other hand, we determined that most of the drug resistance mutations occur near their binding site and, in the case of kinases also in the activation loop. Finally, tumor-specific gene panels were defined to accurately predict TMB. These panels are cheaper than currently used commercial panels (Foundation-One and MSK-Impact) as they require fewer base pairs to be sequenced. Also, we contribute to the study of disordered proteins (or with disordered regions) during my stays abroad in collaborative works.

[Resumen]: Las librerías genómicas o genotecas contienen el genoma completo de un organismo determinado, digerido en fragmentos de distinta longitud e insertado en vectores de clonación, siendo un recurso continuo para el estudio de genes concretos. Existen distintas técnicas para aislar un gen específico a partir de una genoteca, en este trabajo se adaptó la estrategia del protocolo de mutagénesis dirigida con el objetivo de aislar un gen concreto, en este caso LAS2 de una genoteca doble híbrido de Saccharomyces cerevisiae. Para ello se obtuvo por PCR un fragmento de la región codificante del gen que fue empleado como megaprimer para aislar el clon que contiene LAS2 (SMP3). Se describen las sucesivas modificaciones para optimizar el protocolo hasta conseguir potenciales candidatos. El análisis por digestión enzimática indica que se obtuvieron al menos dos clones que contenían el gen deseado. [Resumo]: As librerías xenómicas ou xenotecas conteñen o xenoma completo dun determinado organismo, dixerido en fragmentos de distinta lonxitude e inserido en vectores de clonación, sendo un recurso continuo para o estudo de xenes concretos. Existen diferentes técnicas para illar un xene específico dunha xenoteca, neste traballo adaptouse a estratexia do protocolo de mutaxénese dirixida co obxectivo de illar un xene concreto, neste caso LAS2 (SMP3) dunha xenoteca dobre híbrido de Saccharomyces cerevisiae. Para iso conseguiuse mediante PCR un fragmento da rexión codificante do xene que empregouse como megaprimer para illar o clon que contén LAS2. Descríbense sucesivas modificacións para optimizar o protocolo ata obter posibles candidatos. A análise por dixestión enzimática indica que obtivéronse polo menos dous clons que contiñan o xene desexado. [Abstract]: Genomic libraries contain the complete genome of a particular organism, which has been digested into fragments of different lengths and inserted into cloning vectors, in order to be used as a continuous resource for the study of specific genes. There are different techniques to isolate an individual gene from a genomic library, in this work the strategy of the directed mutagenesis protocol has been adapted in order to isolate a specific gene, in this case LAS2 from two-hybrid Saccharomyces cerevisiae genomic library. With a view to achieving thus, a fragment of the coding region of the gene was obtained by PCR, which had been used as a megaprimer to isolate the clone containing LAS2 (SMP3). Successive modifications are described to optimize the protocol until potential candidates are obtained. Analysis by enzymatic digestion indicates that at least two clones containing the desired gene have been obtained. Traballo fin de grao (UDC.CIE). Bioloxía. Curso 2020/2021

Verónica Sosa: Laboratorio de Radiobiología, Dpto. de Biofísica. Facultad de Medicina, Universidad de la República, Montevideo – Uruguay. Correo electrónico: vsosa@fmed.edu.uy ORCID 0000- 0001-8071-7308. Valeria Contreras: Departamento de Neuropsicología. Instituto de Neurología - Hospital de Clínicas “Dr. Manuel Quintela” Facultad de Medicina, Universidad de la República, Montevideo – Uruguay. Correo electrónico: contrevale@hotmail.com ORCID 0000-0002-3044-5372 Lourdes Blanc: Laboratorio de Radiobiología, Dpto. de Biofísica. Facultad de Medicina, Universidad de la República, Montevideo – Uruguay. Correo electrónico: louverblanc@gmail.com ORCID 0000-0002-7213-0029 Eduardo Dellacassa: Laboratorio de Biotecnología de Aromas, Dpto. de Química Orgánica. Facultad de Química, Universidad de la República Montevideo – Uruguay. Correo electrónico: edellac@fq.edu.uy ORCID 0000-0002-4764-4212 Francisco Carrau: Área de Enología y Biotecnología de Fermentaciones. Dpto. Ciencia y Tecnología de Alimentos. Facultad de Química, Universidad de la República, Montevideo – Uruguay. Correo electrónico: fcarrau@fq.edu.uy ORCID 0000-0001- 7871-2284 Nelson Bracesco: Laboratorio de Radiobiología, Dpto. de Biofísica. Facultad de Medicina, Universidad de la República, Montevideo – Uruguay. Correo electrónico: nbracesco@fmed.edu.uy ORCID 0000-0001-5560-6200. Nota de contribución: Verónica Sosa: Concepción y diseño del estudio, realización de los experimentos, análisis e interpretación de los resultados, análisis estadísticos de los datos, elaboración de un borrador del manuscrito, escritura del manuscrito. Valeria Contreras: Concepción y diseño del estudio, realización de los experimentos, análisis e interpretación de los resultados, análisis estadísticos de los datos. Lourdes Blanc: Concepción y diseño del estudio. Eduardo Dellacassa: Análisis e interpretación de los datos o resultados, elaboración de un borrador del manuscrito, escritura del manuscrito. Francisco Carrau: Elaboración de un borrador del manuscrito, escritura del manuscrito. Nelson Bracesco: Concepción y diseño del estudio, análisis e interpretación de los resultados, elaboración de un borrador del manuscrito, escritura del manuscrito, supervisión del trabajo. El vino tinto variedad Vitis vinifera L. cv Tannat en los últimos años ha tomado relevancia por su alta concentración de polifenoles, esto le podría significar un rol protector sobre el genoma disminuyendo la formación de lesiones oxidativas. Los efectos a nivel celular de las radiaciones ionizantes en blancos como el ADN, componentes de cascadas de transducción de señales, resultan en lesiones letales, mutagénicas y recombinogénicas y en retardos en el ciclo celular. Se utilizó como modelo eucariota poblaciones de Saccharomyces cerevisiae en fase exponencial expuestas a radiación gamma (200 Gy) en presencia, o ausencia, de vino Tannat (10 % v/v) o de ácido tánico (60 µg/mL). Se estimaron las probabilidades de sobrevida y frecuencia mutagénica en distintas condiciones. Las muestras celulares expuestas a radiación ionizante presentaron una fracción de sobrevida de 0.21 ± 0.02 mientras que en las muestras irradiadas en presencia de vino Tannat o de ácido tánico la fracción de sobrevida fue de 0.33 ± 0.03 y 0.30 ± 0.03 respectivamente. Se observó en las poblaciones irradiadas un aumento significativo de la probabilidad de mutagénesis. En el caso de los tratamientos combinados se observó que la frecuencia mutagénica fue significativamente menor (gamma Tannat: 33%, gamma ácido tánico: 45% ). Estos resultados preliminares podrían indicar radioprotección moderada por parte de los compuestos estudiados, efecto que podría explicarse por las interacciones redox del ácido tánico y polifenoles contenidos en el vino con los radicales libres formados por las radiaciones ionizantes, además de la activación de vías de reparación genómica. The red wine variety Vitis vinifera L. cv Tannat in recent years has gained relevance due to its high concentration of polyphenols, this could mean a protective role on the genome, reducing the formation of oxidative lesions. The effects at the cellular level of ionizing radiation on targets such as DNA, components of signal transduction cascades, result in lethal, mutagenic and recombinogenic lesions and delays in the cell cycle. Exponential phase populations of Saccharomyces cerevisiae exposed to gamma radiation (200 Gy) in the presence or absence of Tannat wine (10% v / v) or tannic acid (60 µg / ml) were used as a eukaryotic model. The probabilities of survival and mutagenic frequency in different conditions were estimated. Cellular samples exposed to ionizing radiation presented a survival fraction of 0.21 ± 0.02, while in samples irradiated in the presence of Tannat wine or tannic acid, the survival fraction was 0.33 ± 0.03 and 0.30 ± 0.03 respectively. A significant increase in the probability of mutagenesis was observed in irradiated populations. In the case of the combined treatments, it was observed that the mutagenic frequency was significantly lower (Tannat gamma: 33%, Tannic acid gamma: 45%). These preliminary results could indicate moderate radioprotection by the compounds studied, an effect that could be explained by the redox interactions of tannic acid and polyphenols contained in wine with the free radicals formed by ionizing radiation, in addition to the activation of genomic repair pathways. A variedade de vinho tinto Vitis vinifera L. cv Tannat nos últimos anos tem ganhado relevância devido à sua alta concentração de polifenóis, o que pode significar um papel protetor do genoma, reduzindo a formação de lesões oxidativas. Os efeitos no nível celular da radiação ionizante em alvos como o DNA, componentes de cascatas de transdução de sinal, resultam em lesões letais, mutagênicas e recombinogênicas e atrasos no ciclo celular. Populações de fase exponencial de Saccharomyces cerevisiae expostas à radiação gama (200 Gy) na presença ou ausência de vinho Tannat (10% v / v) ou ácido tânico (60 µg / ml) foram utilizadas como modelo eucariótico. Foram estimadas as probabilidades de sobrevivência e frequência mutagênica em diferentes condições. As amostras celulares expostas à radiação ionizante apresentaram uma fração de sobrevivência de 0,21 ± 0,02, enquanto nas amostras irradiadas na presença de vinho Tannat ou ácido tânico, a fração de sobrevivência foi de 0,33 ± 0,03 e 0,30 ± 0,03, respectivamente. Um aumento significativo na probabilidade de mutagênese foi observado nas populações irradiadas. No caso dos tratamentos combinados, observou-se que a frequência mutagênica foi significativamente menor (Tannat gama: 33%, ácido tânico gama: 45%). Esses resultados preliminares podem indicar radioproteção moderada pelos compostos estudados, efeito que pode ser explicado pelas interações redox do ácido tânico e polifenóis contidos no vinho com os radicais livres formados pela radiação ionizante, além da ativação de vias de reparo genômico.

Through genetic improvement, improved plant species can be acquired, with induced mutagenesis being one of the techniques used, for which ethyl methane sulfonate is used as a chemical agent. The janeiro grass Eriochloa polystachya belongs to the Poaceas, distributed throughout South America with high nutritional value and of great importance for livestock feeding, in the same way, it is susceptible to insect pests such as Spittlebug. Therefore, the objective of this research project was to evaluate the effect of Ethyl-Methosulfonate in E. polystachya to the attack of Spittlebug under greenhouse conditions. The experimental design methodology was used, the grass was sown by stolons in germinating trays to determine the LD 50. The information was analyzed through the Complete Random Design, with Probit linear regression in ten treatments and three repetitions, where the percentage variable of mortality presented high significance. Then the agronomic behavior presented by the janeiro grass impregnated with the different doses and at different times was evaluated, for this, data such as plant height, stem diameter, number of leaves, width and length of the leaf were taken, the information was analyzed at through InfoStat, which presented high significance. Finally, Janeiro grass plants with characteristics of resistance to spittle attack were selected, for which descriptors were used that allowed us to record the number of spittlebugs, severity and growth vigor. The results obtained showed in the linear regression that the LD 50 at 24 hours was adjusted to a dose of 0.49% EMS while at 48 hours it was 0.32%, presenting a better R2 = 79.62. On the other hand, in the agronomic behavior, it was evidenced that T3 with doses of 0.50% and at 24 hours together with T7 with doses of 0.25% at 48 hours, presented high significance and were statistically superior to the other treatments under study. Regarding the selection of janeiro grass tolerant to the attack of Spittlebug, it was observed that the treatment T5 and T10 whose doses were at 1% concentration of EMS, showed a lower number of spittlebugs present, therefore, they were treatments that did not present any damage. In contrast, treatments with a lower dose of EMS showed mild and moderate damage, with spittlebug populations of less than 20 individuals. Through genetic improvement, improved plant species can be acquired, with induced mutagenesis being one of the techniques used, for which ethyl methane sulfonate is used as a chemical agent. The janeiro grass Eriochloa polystachya belongs to the Poaceas, distributed throughout South America with high nutritional value and of great importance for livestock feeding, in the same way, it is susceptible to insect pests such as Spittlebug. Therefore, the objective of this research project was to evaluate the effect of Ethyl-Methosulfonate in E. polystachya to the attack of Spittlebug under greenhouse conditions. The experimental design methodology was used, the grass was sown by stolons in germinating trays to determine the LD 50. The information was analyzed through the Complete Random Design, with Probit linear regression in ten treatments and three repetitions, where the percentage variable of mortality presented high significance. Then the agronomic behavior presented by the janeiro grass impregnated with the different doses and at different times was evaluated, for this, data such as plant height, stem diameter, number of leaves, width and length of the leaf were taken, the information was analyzed at through InfoStat, which presented high significance. Finally, Janeiro grass plants with characteristics of resistance to spittle attack were selected, for which descriptors were used that allowed us to record the number of spittlebugs, severity and growth vigor. The results obtained showed in the linear regression that the LD 50 at 24 hours was adjusted to a dose of 0.49% EMS while at 48 hours it was 0.32%, presenting a better R2 = 79.62. On the other hand, in the agronomic behavior, it was evidenced that T3 with doses of 0.50% and at 24 hours together with T7 with doses of 0.25% at 48 hours, presented high significance and were statistically superior to the other treatments under study. Regarding the selection of janeiro grass tolerant to the attack of Spittlebug, it was observed that the treatment T5 and T10 whose doses were at 1% concentration of EMS, showed a lower number of spittlebugs present, therefore, they were treatments that did not present any damage. In contrast, treatments with a lower dose of EMS showed mild and moderate damage, with spittlebug populations of less than 20 individuals. A través del mejoramiento genético se pueden adquirir especies de vegetales mejoradas, siendo la mutagénesis inducida una de las técnicas empleadas, para ello se utiliza el metano sulfonato de etilo como agente químico. El pasto janeiro Eriochloa polystachya pertenece a las Poaceas, distribuida por todo América del Sur con alto valor nutritivo y de gran importancia para la alimentación del ganado de la misma manera presenta susceptibilidad a insectos plagas como el Salivazo. Por lo tanto, el objetivo de este proyecto de investigación fue Evaluar el efecto del Etil – metasulfonato en E. polystachya al ataque del Salivazo bajo condiciones de invernadero. Se utilizó la metodología de diseño experimental, el pasto fue sembrado por estolones en bandejas germinadoras para determinar el DL 50. La información fue analizada mediante el Diseño Completo al Azar, con regresión lineal Probit en diez tratamientos y tres repeticiones, donde la variable porcentaje de mortalidad presento alta significancia. Luego se evaluó el comportamiento agronómico que presento el pasto janeiro impregnado con las diferentes dosis y a diferentes tiempos, para ello se tomaron datos como altura de planta, diámetro del tallo, número de hojas, ancho y largo de la hoja, la información fue analizadas a través de InfoStat, cuyas presentaron alta significancia. Finalmente se seleccionó plantas de pasto Janeiro con características de resistencia al ataque de salivazo, para lo cual se utilizó descriptores que nos permitieron registrar el número de salivazo, severidad y el vigor del crecimiento. Los resultados obtenidos mostraron en la regresión lineal que el DL 50 a 24 horas se ajustó a dosis de 0,49 % EMS mientras que a 48 horas fue de 0,32 %, presentando un mejor R2= 79,62. Por otra parte en el comportamiento agronómico se evidencio que el T3 con dosis de 0.50 % y a 24 horas junto con el T7 con dosis de 0,25 % a 48 horas, presentaron alta significancia y fueron estadísticamente superior a los demás tratamientos en estudio. Respecto a selección del pasto janeiro tolerante al ataque del Salivazo, se observó que el tratamiento T5 y T10 cuyas dosis fueron al 1% de concentración de EMS, manifestaron menor número de salivazos presentes, por lo tanto, fueron tratamientos que no presentaron ningún daño. Por el contrario, los tratamientos con menor dosis de EMS mostraron daños leves y moderados, con poblaciones de salivazo menor a 20 individuos.

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2020 Pseudomonas aeruginosa es capaz de explotar mecanismos de resistencia intrínsecos y adquiridos para resistir a casi todos los antibióticos actualmente utilizados. Se ha propuesto que la resistencia mediada por mutaciones puede verse estimulada por la presencia de cepas hipermutadoras, las cuales presentan tasas de mutación incrementadas debido a deficiencias en los sistemas de reparación de ADN. En bacterias, la mutagénesis representa uno de los mecanismos principales involucrados en la generación de variabilidad genética, por lo que el control y ajuste de la tasa de mutación resultan fundamentales para la optimización de procesos adaptativos. Las infecciones respiratorias crónicas producidas por P. aeruginosa en pacientes con fibrosis quística (FQ) constituyen un excelente modelo natural para estudiar evolución bacteriana, en el que las células hipermutadoras prevalecen a una frecuencia significativamente mayor a las encontradas en otro tipo de infecciones o en el ambiente, incrementando los desafíos terapéuticos para combatirlas. Durante el transcurso de vida de un paciente con FQ, se administra una amplia batería de antibióticos tendientes a combatir las infecciones bacterianas, sin embargo, como contrapartida, los mismos ejercen una presión de selección que promueve la generación de resistencia y la consecuente adaptación y persistencia de la bacteria. Existe un gran interés y se han logrado grandes avances para entender los mecanismos mutacionales que generan resistencia en P. aeruginosa. Sin embargo, hasta el momento no se ha estudiado la implicancia de la diversidad genética poblacional en la resistencia bacteriana ni tampoco su evolución in vivo a largo plazo en un mismo paciente, en el que sea posible considerar el efecto de altas tasas de mutación bacteriana y el tratamiento antibiótico recibido. El presente trabajo de tesis tuvo como primer objetivo estudiar la evolución del resistoma mutacional de un linaje hipermutador de P. aeruginosa combinando un análisis longitudinal y transversal de aislados clínicos colectados de un paciente FQ, a lo largo de 20 años de infección crónica. Como segundo objetivo, el trabajo estuvo abocado a investigar la evolución de la enzima β-lactamasa AmpC, considerada el principal mecanismo de resistencia a antibióticos β-lactámicos en P. aeruginosa. Este último objetivo se abordó a través de una caracterización a nivel fenotípico, molecular y estructural de AmpC en poblaciones bacterianas del mismo linaje hipermutador de P. aeruginosa abarcando ahora un período de 26 años de infección crónica. Finalmente se indagó en la diversidad genética de ampC en poblaciones de P. aeruginosa obtenidas a partir de una cohorte de 24 pacientes adultos FQ lo que permitió asimismo investigar la asociación entre la mutagénesis en este gen y el fenotipo hipermutador en el contexto de las infecciones pulmonares crónicas. Los resultados obtenidos demuestran que en la historia evolutiva del linaje hipermutador bajo estudio, signada por una selección negativa y acumulación de miles de mutaciones a nivel del genoma global, particularmente aquellas mutaciones acumuladas en los genes de resistencia fueron seleccionadas positivamente en directa correlación con la fuerte presión ejercida por el tratamiento con antibióticos. Durante el progreso de la infección, el linaje bacteriano mostró un incremento progresivo de la resistencia antibiótica, configurándose poblaciones genotípicamente diversas en las que sublinajes coexistentes convergieron a un perfil de multiresistencia (MDR). Dichos sublinajes emergieron por evolución paralela a través de diferentes vías evolutivas que afectaron genes de las mismas categorías funcionales. De manera interesante, ampC y ftsI, que codifican para la β-lactamasa AmpC y la proteína de unión a penicilina PBP-3, respectivamente, estuvieron dentro de los genes más frecuentemente mutados. De hecho, ambos genes fueron objeto de múltiples eventos mutacionales, los cuales dieron lugar a la coexistencia de alelos altamente diversos que podrían constituir la base de los niveles de resistencia a β-lactámicos en los aislados clínicos del paciente. Esta observación motivó el estudio de la evolución de AmpC, lográndose evidenciar que las variantes ampC evolucionadas confieren elevados niveles de resistencia a una batería de antibióticos β-lactámicos incluyendo la cefalosporina de 5ta generación ceftolozano, a la cual la población bacteriana nunca estuvo expuesta. Asimismo, los estudios de cinética-enzimática demostraron que las distintas variantes AmpC poseen una eficiencia catalítica mejorada, fundamentalmente hacia cefalosporinas incluyendo ceftolozano. Por su parte, los estudios de simulación por dinámica molecular arrojaron resultados sobre modificaciones estructurales claves en la enzima que permitirían una ampliación de la entrada al bolsillo de unión a sustrato, favoreciendo el correcto acomodamiento de cefalosporinas y monobactámicos con cadenas laterales R1 más voluminosas. Los estudios en poblaciones de aislados de P. aeruginosa obtenidos de diferentes pacientes con FQ confirmaron el rol fundamental de las mutaciones específicas en ampC analizadas en este trabajo, determinado por su alta frecuencia de emergencia y selección. Por último, los resultados permitieron determinar una correlación significativa entre el número de mutaciones en ampC y el fenotipo hipermutador, aportando evidencias que permiten por primera vez asociar la hipermutabilidad con mutaciones adaptativas in vivo. En conclusión, los resultados obtenidos en el presente trabajo de tesis demuestran cómo la dinámica del tratamiento antibiótico que recibe un paciente con FQ constituye una fuerza selectiva que conduce a la adaptación de P. aeruginosa hacia un perfil MDR. En un contexto de altas presiones selectivas, las cepas hipermutadoras, además de impulsar la evolución de la resistencia antibiótica a través de la mutación simultánea de varios genes, favorece la emergencia de alelos adaptativos novedosos agrupando mutaciones beneficiosas y/o compensatorias en un mismo gen, que en el caso particular del tratamiento con β-lactámicos implica mutaciones repetidas en el gen ampC, expandiendo así las estrategias de persistencia de P. aeruginosa 2022-11-30 Fil: Colque, Claudia Antonella. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Fil: Smania, Andrea María. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina. Fil: Smania, Andrea María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. Fil: Sola, Claudia Del Valle. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Fil: Sola, Claudia Del Valle. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Fil: Becerra, María Cecilia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Farmacia; Argentina. Fil: Becerra, María Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; Argentina. Fil: Saka, Héctor Alex. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Fil: Saka, Héctor Alex. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica e Inmunología; Argentina. Fil: Power, Pablo. Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología; Argentina. Fil: Power, Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina.

Tesis para obtener el grado de Magister Scientiae en Genética Vegetal, de la Universidad Nacional de Rosario, en diciembre de 2020 El mejoramiento genético de caña azúcar se enfrenta a su complejo genoma, la estrecha base genética y la baja fertilidad de los cultivares modernos que dificultan la obtención de genotipos superiores. La mutagénesis in vitro es una herramienta alternativa para generar variabilidad genética, combinando la variación somaclonal generada por el cultivo in vitro y la inducción de mutaciones. Por otro lado, la embriogénesis somática es una excelente vía de regeneración de plantas mutantes, ya que disminuye la frecuencia de aparición de quimeras. En caña de azúcar, la formación de callos embriogénicos y la regeneración de plantas varían según el genotipo. En este trabajo, se estudió la respuesta a la embriogénesis somática de cinco genotipos desarrollados y/o seleccionados por el Programa de Mejoramiento Genético de Caña de azúcar de INTA, con el objetivo de identificar genotipos adecuados para la aplicación de mutagénesis in vitro. Los genotipos mostraron una gran variabilidad en su respuesta a las diferentes etapas de cultivo in vitro. Cuatro de los genotipos de INTA formaron callos embriogénicos y regeneraron plantas con alta capacidad de aclimatación y supervivencia en el campo. El cultivar INTA CP 98-828 mostró la mejor respuesta y fue seleccionado para los tratamientos mutagénicos. La optimización de la dosis de mutágeno adecuada es un paso fundamental en la mutagénesis in vitro. En este estudio, se expusieron callos embriogénicos del genotipo INTA CP 98-828 a diferentes dosis (0, 8, 16, 32 y 48 mM) de etil metanosulfonato (EMS) durante 3 h para inducir variación genética. Los resultados mostraron diferencias significativas en la capacidad de recuperación, la sensibilidad de los callos al mutágeno y la capacidad de regeneración entre las dosis de EMS evaluadas. Las concentraciones de EMS ≤ 32 mM fueron adecuadas para regenerar un número óptimo de plantas normales en el cv. INTA CP 98-828, encontrándose por debajo de las DL50 determinadas para la regeneración de plantas y recuperación de callos embriogénicos. Las cuatro poblaciones (0, 8, 16 y 32) de somaclones y/o plantas mutantes obtenidas se evaluaron fenotípicamente a campo, para una exploración preliminar de la variación genética generada mediante el cultivo in vitro y/o la aplicación de EMS. Los resultados demostraron que la dosis 32 mM presentó mayor variabilidad genética entre las dosis de EMS, con valores medios a altos de heredabilidad en sentido amplio, sin un efecto en detrimento de los caracteres culturales y de calidad evaluados, incluso con incrementos de la media poblacional respecto al genotipo wild type en algunos atributos. Estos resultados presentan la posibilidad de aprovechar este enfoque para introducir nuevas variantes genéticas en el Programa de Mejoramiento Genético de Caña de azúcar de INTA. The sugarcane genome complexity, the narrow genetic base and poor fertility are limitations for conventional breeding. In vitro mutagenesis is an alternative tool to generate variability involving both somaclonal variation and inducted mutations. Furthermore, somatic embryogenesis offers an efficient way for avoiding chimera occurrence but it is highly genotype-dependent. In this study, somatic embryogenesis response of five INTA genotypes was investigated in order to achieve an efficient in vitro mutagenesis. Four out of five INTA genotypes were able to form embryogenic calluses and regenerated plants. The cv. INTA CP 98-828 showed the best in vitro response and it was selected for mutagen treatments. Embryogenic calluses were exposed to different doses of EMS to induce genetic variation. EMS concentrations ≤ 32 mM were suitable to regenerate an optimum number of plants. Four somaclonal-mutant plants populations were phenotypically evaluated in the field for a preliminary assessment of genetic variation generated by in vitro mutagenesis. Field assessments evidenced that the 32 mM EMS dose showed the highest genetic variability without a detrimental effect on agronomic and quality traits. These results show the prospect of exploiting this approach in INTA Sugarcane Breeding Program. EEA Famaillá Fil: Di Pauli, Valentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Famaillá; Argentina

Las técnicas de mutagénesis o inducción de mutaciones en plantas son técnicas muy utilizadas por los fitomejoradores con el objetivo de generar diversidad genética. Esta diversidad puede afectar diversos caracteres de utilidad agronómica como: el rendimiento, la calidad, la resistencia a plagas y enfermedades, y la tolerancia a estreses abióticos, como el estrés hídrico y la salinidad, y además, la tolerancia a herbicidas. El estudio de las técnicas de mutaciones inducidas en plantas comenzó en la década de 1920 y el primer logro comercial fue en 1936. Hoy en día existen más de 3275 cultivares mutantes liberados oficialmente en más de 220 especies de cultivos en todo el mundo (http://mvd.iaea.org/). EEA Reconquista Fil: Winkler, Horacio Martín. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Reconquista; Argentina Fil: Cereijo, Antonela Estefanía. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Reconquista; Argentina Fil: Muchut, Robertino José. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Reconquista; Argentina Fil: Dileo, Pablo Nahuel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Reconquista; Argentina Fil: Scarpin, Gonzalo Joel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Reconquista; Argentina Fil: Lorenzini, Fernando. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Reconquista; Argentina Fil: Roeschlin, Roxana Andrea. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Reconquista; Argentina Fil: Paytas, Marcelo Javier. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Reconquista; Argentina Fil: Landau, Alejandra Mabel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Genética; Argentina

For decades, synthetic chemists have sought to make industrial-scale catalysts as efficient and exceptionally selective as enzymes are in biological systems but, unfortunately, this task has proven evasive. Efforts then focused on making enzymes useful for the industry, and protein engineering had the task of adapting natural enzymes to work in conditions of industrial-scale processes. The approach called directed evolution is one of the models used to carry this out. Inspired by the natural evolution of species, this model proposes to evolve enzymes in an accelerated way, within the laboratory, in such a way that the manipulated enzyme exhibits the properties desired for its industrial application. Directed evolution is responsible, for example, for the industrial-scale production of enzymes included in household detergents and of the enzymes used by the pharmaceutical industry for the generation of intermediates, which are synthesized by microorganisms that express the mutated enzyme evolved in the laboratory. Today, these enzymes, some in industrial use and many others still in the exploratory stage, can catalyze very efficiently synthetic processes that form even non-natural compounds such as organosilanes and organoboranes. Durante décadas, los químicos sintéticos han buscado que los catalizadores usados a escala industrial sean tan eficientes y excepcionalmente selectivos como lo son las enzimas en sistemas biológicos. Ante el poco éxito conseguido, los esfuerzos más recientes se han enfocado en convertir las enzimas naturalesen catalizadores útiles para la industria, y la ingeniería de proteínas ha tenido la tarea de adaptarlas a las condiciones de trabajo de los procesos a escala industrial. El enfoque denominado evolución dirigida es uno de los modelos utilizados para llevar esto a cabo. Inspirado en la evolución natural de las especies, este modelo propone evolucionar enzimas de forma acelerada, dentro del laboratorio, de manera que la enzima manipulada presente las propiedades deseadas para su aplicación industrial. La evolución dirigida es responsable, por ejemplo, de la producción a escala industrial de enzimas incluidas en los detergentes domésticos, y de las enzimas utilizadas por la industria farmacéutica para la generación de intermediarios, que son sintetizados por microorganismos que expresan la enzima mutada desarrollada en el laboratorio. Hoy en día, estasenzimas, algunas de uso industrial y muchas otras aún en fase exploratoria, pueden catalizar con alta eficiencia procesos sintéticos que forman incluso compuestos no naturales de organosilicioy organoboro.

Existen múltiples bacterias que pueden metabolizar selenito a selenio, no obstante, en muchos casos no se conocen bien los mecanismos mediante los cuales estos microorganismos llevan a cabo este proceso, siendo Pseudomonas putida KT2440 uno de ellos. A través de técnicas de mutagénesis, cinéticas de crecimiento y análisis de proteínas de una dimensión, en este estudio, reportamos un grupo de genes que están involucrados en el metabolismo del selenio en P. putida. Nuestros resultados apuntan a 4 módulos funcionales interconectados: 1) abastecimiento de poder reductor y bloques de construcción para precursores (SucA pp4189, D2HGDH pp5154, PutA pp49472 2) sistemas de catálisis (Gqr pp3998, CysI & siroheme pp2371, pp3999, ccmF pp4322); 3) manejo de subproductos tóxicos (SodB pp0915); 4) síntesis y reparación de membrana (LdcA pp4799, MsbA pp4935, Wzy pp4936). Además, en este proyecto, se realizó la identificación de 3 cepas mutantes capaces de realizar la transformación del selenito a velocidades superiores que la cepa silvestre (FT FIS σ-54 pp0051; Pdo2 pp0052; Sqr/Rho pp0053). Estos últimos genes están anotados como elementos relacionados con el metabolismo del azufre. La gran capacidad de generar poder reductor y la versatilidad metabólica P. putida KT2440 hacen a este microorganismo una bacteria idónea para catalizar procesos de reducción como la biosíntesis de selenio a partir de selenito. UCR::Vicerrectoría de Investigación::Sistema de Estudios de Posgrado::Ciencias Básicas::Maestría Académica en Biología con énfasis en Genética y Biología Molecular

Mutaciones en el gen pncA son la mayor causa de resistencia a pirazinamida (PZA), pero existen mecanismos alternativos que también aportan resistencia. El objetivo del estudio fue estandarizar la técnica de complementación del gen pncA en Mycobacterium tuberculosis H37Rv pncA-KO para evaluar el efecto de las mutaciones en el gen pncA sobre parámetros fenótipicos, en un escenario controlado por la variabilidad genética de los aislados clínicos de donde provienen los genes pncA mutantes. Se generaron cepas complementadas con genes pncA WT y mutantes D49N, H51R, G78C y F94L a través del sistema de expresión pNIT-1 para evaluar la actividad PZAsa mediante la prueba de Wayne cuantitativa, nivel de expresión del gen pncA y susceptibilidad a PZA usando concentraciones graduales de PZA en condiciones no inducida e inducida. El sistema de expresión pNIT-pncA restauró el fenotipo de la cepa pncA-KO y los plásmidos se mantuvieron estables intracelularmente durante el período de observación que duró 18 semanas. Los niveles de expresión basal resultaron constantes y similares al de la cepa H37Rv. La cepa pncA WT complementada mostró actividad PZAsa y Concentración Mínima Inhibitoria de PZA similar al de la cepa H37Rv. Sin embargo, las cepas pncA mutantes complementadas fueron resistentes a PZA en ambas condiciones y la sobreexpresión de los genes pncA mutantes permitió verificar la pérdida total o parcial de la actividad PZAsa.

Tesis Univ. Granada. Departamento de Microbiología. Leída el 26 de septiembre de 2006

Fil: Boccardo, Noelia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular; Argentina Boccardo, N. A. (2018). Desarrollo de nuevos vectores para la obtención de plantas transplastómicas resistentes a patógenos. (Tesis de doctorado). Universidad Nacional de Quilmes, Bernal, Argentina. En el marco de este trabajo de tesis doctoral, se encaró el desarrollo de un novedoso sistema de expresión de proteínas heterólogas mediante transformación del genoma plastídico, para ser utilizado con diferentes aplicaciones, entre ellas obtener plantas resistentes a patógenos. Por un lado, nos propusimos obtener un sistema inducible de expresión de proteínas heterólogas en el cloroplasto, que incluye elementos de Quorum sensing (QS) bacterianos. Esta estrategia nos permitiría obtener plantas resistentes a patógenos mediante la expresión de proteínas con actividad antimicrobiana, inducidas por las homoserin lactonas (AHLs) producidas por los patógenos que infectan la planta. Además, se evaluó la posibilidad de expresar en los plástidos proteínas relacionadas a la patogénesis (PR) como estrategia para obtener plantas resistentes a diversos patógenos y finalmente decidimos transformar el genoma plastídico de N. benthamiana, para ser utilizada como planta modelo en estudios con patógenos para los cuáles N. tabacum es no hospedante. Se diseñaron y desarrollaron los vectores del sistema inducible por AHLs, señales químicas involucradas en el mecanismo de QS bacteriano. En los vectores desarrollados la activación de la expresión génica está bajo el control del promotor del gen LasB, que responde a los reguladores transcripcionales LasR y RhlR cuando estos se encuentran en presencia de las AHLs correspondientes, y permitiendo la expresión de la secuencia codificante uid-A (codifica la proteína reportera β-glucuronidasa). Se comprobó la integración de la construcción genética y la correcta expresión de los reguladores LasR y RhlR en las plantas transplastómicas. Mediante la aplicación exógena de AHLs sintéticas a plantas transplastómicas se visualizó la inducción del sistema, sin embargo, no se pudo reproducir este resultado. Desafortunadamente no se pudo visualizar actividad β-glucuronidasa en las plantas transgenicas que expresan los reguladores transcripcionales LasR y RhlR. Se caracterizaron molecularmente, y se evaluó la efectividad frente a patógenos, de las plantas transplastómicas de tabaco transformadas con construcciones diseñadas para acumular las proteínas PR AP24 y β-1,3-glucanasa en el estroma de los plástidos (utrAP24-Gluc). Se demostró que estas plantas poseen una alta resistencia frente al ataque de hongos y oomicetes en condiciones de invernadero y de campo. Con estos resultados alentadores, actualmente estamos realizando experimentos de bombardeo con el plaásmido utrAP24-Gluc para la transformación del genoma plastídico de papa. Finalmente se estableció la metodología para la transformación de cloroplastos de N. benthamiana con el vector pBSW-utrGUS diseñado para transformar N. tabacum. Se obtuvieron las primeras plantas transplastómicas que expresan la proteína reportera GUS que están siendo analizadas. En la actualidad, se están realizando ensayos de transformación del genoma plastídico de N. benthamiana con el plásmido utrAP24-Gluc, con el objetivo de generar una nueva herramienta para evaluar estrategias de resistencia a patógenos para los cuáles el tabaco no es un modelo adecuado.

Resumen La biotecnología ha sido utilizada desde hace miles de años para obtener beneficios para el ser humano. Desde mucho antes los seres humanos han utilizado técnicas como la hibridación, mutagénesis y poliploidía, generando cambios a nivel genético para obtener características deseables Actualmente es posible utilizar la ingeniería genética para modificar o transferir genes de un organismo a otro con el fin de obtener productos con ciertas ventajas respecto a su contraparte convencional. Las técnicas de ingeniería genética se iniciaron desde hace 30 años a nivel de investigación y hace ya 20 años se comercializan a gran escala productos generados mediante ellas. A pesar que se han generado diversas observaciones en cuanto a su inocuidad y bioseguridad por ciertos sectores de la sociedad, a la fecha hay múltiples estudios con gran respaldo científico que garantizan su uso seguro en diversas partes del mundo. En estos se concluye de manera general, que a nivel ambiental y de salud humana, no existen diferencias entre el mejoramiento convencional y el mejoramiento por ingeniería genética. El desarrollo de alimentos mejorados mediante biotecnología está acompañado por estrictas normas de bioseguridad y marcos regulatorios, los cuales involucran análisis de riesgo con pruebas de larga duración para asegurar la inocuidad del alimento. Abstract Biotechnology has been used for thousands of years to obtain benefits for humans. Long before humans have used techniques such as hybridization, mutagenesis and polyploidy, generating changes at the genetic level to obtain desirable characteristics is now possible to use genetic engineering to modify or transfer genes from one organism to another in order to obtain products with certain advantages over its conventional counterpart. Genetic engineering techniques were started 30 years ago at the level of research and 20 years ago generated products are marketed on a large scale through them. Although several observations have been made regarding their safety and biosafety by certain sectors of society, to date there are many studies with great scientific support that guarantee their safe use in many parts of the world. In these we conclude generally that to environmental and human health level, there is no difference between conventional breeding and improvement engineered. The crops and food improvement through biotechnology is accompanied by strict standards and regulatory biosafety frameworks, which involve risk analysis with long-term tests to ensure food safety.

Fil: Caramello, Cynthia Soledad. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Fil: Jorge, María Josefa. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales y Agrimensura; Argentina. Fil: Jorge, Nelly Lidia. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales y Agrimensura; Argentina. Fil: Jorge, Lilian Cristina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. El uso generalizado del glifosato ha sido objeto de numerosas controversias, ya que la exposición prolongada a bajas concentraciones de este agroquímico podría dar lugar a efectos no deseados o nocivos. Ello favorecería la aparición de patologías en el mediano y largo plazo, lo que aumenta progresivamente el riesgo de exposición en seres humanos y animales, a través del consumo de agua y alimentos contaminados. Teniendo en cuenta esta premisa, el objetivo del trabajo fue evaluar el posible efecto mutagénico del herbicida a través de la prueba de aberraciones cromosómicas en peces de la especie Prochilodus lineatus. Los peces fueron expuestos a 0,1 ug/l de glifosato durante 70 días. Después de este período una muestra de la porción anterior del riñón fue extraída para el análisis de aberraciones cromosómicas (AC). En los individuos expuestos al pesticida se registró mayor número de AC. El análisis estadístico de los datos mostró diferencias significativas entre los grupos control y tratado. Los resultados sugieren la existencia de una respuesta genética causada por la exposición y el contacto de los especímenes con el herbicida. The widespread use of glyphosate has been subject of numerous controversies since the prolonged exposure to low concentrations of this substance could lead to toxic effects. Then, the appearance of pathologies in medium and long term progressively will increase because of the exposure of people and animals through the consumption of contaminated water or food. Considering this, the aim of this study was to evaluate the potential mutagenicity of glyphosate herbicide in fish (Prochilodus lineatus) using the test of chromosome aberrations. The fish were exposed to 0,1 ug/l of glyphosate for 70 days. After this period, samples of the anterior portion of the kidney were extracted for chromosomal aberrations (CAs) analysis. A greater number of CAs (gaps, breaks, stickiness, endomitosis, fragmentations, and pulverizations) were observed in individuals exposed to the pesticide. The statistical analysis of the data showed significant differences between the control and treated groups. In this way, the results suggested the existence of a genetic response as a consequence of pesticide exposure in fish.

Líneas mutantes de las generaciones M2 y M5 de P. acutifolius A. Gray, se evaluaron a nivel fenotípico y morfo-fisiológico. Se establecieron en un DCA, las poblaciones M2 (176 líneas) y los genotipos de los cuales se originaron, G40159-G40068 (control), y se evaluaron mediante el uso de descriptores morfológicos. Seis líneas mutantes de la generación M5 se establecieron en un BCA-P, se evaluaron caracteres morfo-fisiológicos bajo condiciones de estrés por sequía para la posterior selección de líneas promisorias. En M2 se encontró que la mutagénesis generó cambios en longitud de entrenudos, número de flores, semillas/planta y vaina/planta, expresados en coeficientes de variación altos (40.16, 48.16, 23.40, y 29.08% respectivamente) y también en el número de hojas primarias, longitud nudos, diámetro de tallo y semillas/planta (p=0.001). El análisis de agrupamiento reveló que la diversidad morfológica conformó 16 grupos. Para M5, las características morfofisiológicas permitieron la selección de las líneas 187, 38 y 109 como superiores por rendimiento y por su tolerancia a la sequía, a la línea 109. Las características morfológicas y morfo-fisiológicas evidenciaron líneas mutantes superiores con características positivas para el avance generacional y para el mejoramiento genético de la especie. //Abstract: Mutant lines of M2 and M5 generations of P. acutifolius A. Gray, were evaluated at phenotypic and morpho-physiological level, M2 population (176 lines) and the genotypes of origin G40159-G40068 (control), were established in a CA desing and evaluated using morphological descriptors. Six mutant lines of M5 generation were established in a BCA-P desing and evaluated measuring morphophysiological characters under drought stress conditions and the subsequent selection of promissory lines was realized. Mutagenesis in M2 generated changes in internode length, number of flowers, seeds per plant and pod per plant, and were expressed by high variation coefficient (40.16, 48.16, 23.40, and 29.08% respectively) and also in the number of primary leaves, knot length, stem diameter and seeds per plant (p = 0.001), clustering analysis revealed 16 groups from morphological diversity. For M5 the morpho-physiological characteristics allowed to select lines 187, 38 and 109 as superior lines and for their tolerance to drought was selected the 109. The morphological and morpho-physiological characteristics evidenced superior mutant lines with positive characteristics for the generational advance and for the genetic improvement of the species. Maestría

Phaseolus acutifolius A. Gray, conocido comúnmente como fríjol tépari, es una especie del norte de México y sur de Estados Unidos, que, por su tolerancia a altas temperaturas y condiciones de sequía, representa un cultivo promisorio ante el cambio climático. Sin embargo, debido a la baja diversidad genética de las accesiones cultivadas se ha requerido implementar alternativas como la inducción de mutaciones con etilmetano sulfonato (EMS) con el fin generar nuevas variantes en características de interés agronómico. Para evaluar el estado de la variación genética en las líneas mutantes de las generaciones M5 y M6 se utilizaron marcadores moleculares AFLP’s con los que se determinó que existen variaciones considerables en los mutantes revelando que la mutagénesis con EMS funcionó exitosamente, además la diferenciación genética entre los materiales permitió establecer las agrupaciones de las diferentes líneas mutantes de acuerdo a su origen, lo que indicó un avance en estabilización genética de las líneas. //Abstract: Phaseolus acutifolius A. Gray, known as tepary bean, is a species from northern Mexico and southern United States. It has high temperature tolerance and drought conditions, representing a promising crop to the climate change. However, due to its low genetic diversity in cultivated accetions, it has been necessary to implement alternatives such as the induction of mutations with ethyl methane sulfonate (EMS) in order to generate new variations in interesting agronomic traits. AFLP molecular markers were used to evaluate the genetic variation in mutant populations of the M5 and M6 generations. This revealed considerable variations in the mutants and showed that EMS mutagenesis worked successfully. A marked genetic differentiation was also found among mutant plants that have advanced towards the formation of lines. This indicates a progress in the genetic stabilization of the mutant lines. Maestría

El Ensayo de Ames es una prueba bacteriana de reversión de la mutación utilizado para la evaluación de la mutagenicidad y la antimutagenicidad de diversas sustancias y ha sido fuente de muchos estudios desde hace muchos años. La antimutagenicidad es la capacidad de determinadas sustancias de inhibir parcial o totalmente la presencia de agentes mutágénicos en la célula. Las plantas han sido referentes de muchos de las drogas actualmente comerciales y muchas de ellas son consumidas en estado puro por la población. El ensayo de Ames resultó ser una herramienta efectiva para la evaluación de la mutagenicidad y antimutagenicidad de la hierba medicinal Baccharis articulata (Lam.) Persoon (Carqueja). B. articulata (Lam.) Persoon, es una hierba silvestre utilizada muy frecuentemente en la medicina folclórica popular en la Argentina y en Sudamérica. La infusión de carqueja, es ampliamente consumida para el tratamiento de afecciones gastrointestinales, por su capacidad antiespasmódica y colagoga. En esta Tesis Doctoral, se realizó la caracterización botánica, química (HPLC, actividad antioxidante), toxicidad, mutagenica y antimutagénica del extracto acuoso de B. articulata (Lam.) Persoon. Para ello se realizó un extracto acuoso de B. articulata (EAB), que se consideró como una infusión, como la consumida por la población. Se determinaron los compuestos fenólicos mediante la técnica de HPLC, así como la actividad antioxidante (EC50) mediante la técnica de DPPH (2, 2- difenyl1-picrylhydrazyl). Para evaluar la muagenicidad y antimutagenicidad se empleó el Ensayo de Ames, con dos variables el método de incorporación en placa y el de pre-incubación. Se seleccionaron como cepas testigo la cepa de Salmonella typhimurium TA98 y TA100. Como mutágenos diagnóstico los mutágenos de acción directa sobre las cepas TA98 y TA100, el 2-nitrofluoreno y la azida sódica respectivamente. Como mutágeno de acción indirecta el pro-mutágeno 2-aminofluoreno, con activación metabólica, para las cepas TA98 y TA100. Los resultados cromatográficos determinaron que el EAB, contenía el compuesto fenólico ácido clorogénico en una concentración de 2,05 mg/ml. La actividad antioxidante del EAB resulto ser de CE50= 101,86 µg/ml. Los resultados determinaron que el EAB, no resultó tóxico ni mutagénico. Los ensayos de antimutagenicidad evidenciaron que el EAB, tenía capacidad inhibitoria frente a los mutágenos ensayados, las cepas seleccionadas y los métodos ensayados. Se realizaron los ensayos para determinar la capacidad antioxidante , mutagénica y antimutagénica del ácido clorogénico, principal polofenol determinado. Los resultados mostraron que la actividad antioxidante del ácido clorogénico fue de una CE50= 0,269 µg/ml. El ácido clorogénico resultó ser no tóxico ni mutagénico. Los resultados determinaron que esta hierba posee capacidad antimutagénica en las concentraciones ensayadas frente a los mutágenos diagnótico seleccionados. Se concluyó que el EAB a través de un mecanismo antioxidante, reforzado por la presencia del ácido clorogénico y otros compuestos, contribuirían a la capacidad antimutagenica encontrada. Fil: Genorosa Rodríguez, María de las Nieves. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; Argentina Fil: Giannuzzi, Leda. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; Argentina

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2017 La mutagénesis es uno de los mecanismos esenciales involucrados en la generación de variabilidad genética y en la adquisición de fenotipos adaptativos en bacterias. En este sentido, frente a cambios ambientales repentinos o en la colonización de nuevos nichos ecológicos, un incremento en la tasa de mutación aumenta la probabilidad de adquirir aquellos fenotipos beneficiosos, constituyendo de esta manera una estrategia clave para la adaptación. Particularmente, las infecciones pulmonares crónicas causadas por Pseudomonas aeruginosa en pacientes con fibrosis quística (FQ) exhiben una alta prevalencia de cepas con una tasa de mutación espontánea incrementada, denominadas hipermutadoras, fundamentalmente asociada a la emergencia de mutantes deficientes en el sistema de reparación de bases apareadas incorrectamente (MRS). En este contexto, P. aeruginosa se desarrolla en las vías aéreas del pulmón FQ en un estilo de vida denominado biofilm, en donde las bacterias crecen adheridas a la mucosa respiratoria a través de una matríz de exopolisacáridos por ellas producida y exhiben características morfológicas y metabólicas diferentes a las expresadas durante el crecimiento planctónico. Este estilo de vida está asociado a un proceso de diversificación que implica la emergencia, selección y fijación de múltiples variantes fenotípicas a través de la adquisición de mutaciones beneficiosas. En contrapartida, durante la etapa de dispersión del biofilm, la cual consiste en el desprendimiento de las células desde el biofilm maduro, se produce una reversión de parte de estos rasgos adaptativos y las células vuelven a un estadío de vida planctónico, brindando la posibilidad de colonizar nuevos nichos y propagar la infección. Así, los procesos de formación y dispersión de biofilms suponen la emergencia y reversión de morfotipos específicamente adaptados. Debido a que ambos fenómenos estarían basados en mecanismos mutagénicos, un incremento en la tasa de mutación podría resultar beneficioso y favorecer el proceso completo. Dentro de este marco teórico, el objetivo principal de este estudio consistió en estudiar la flexibilidad de P. aeruginosa para diversificar y revertir en forma sucesiva a fenotipos característicos del crecimiento en biofilms y al mismo tiempo estudiar cuál es la implicancia de la hipermutabilidad en dicho proceso. Para ello, se utilizó como modelo al fenotipo de colonias pequeñas (SCV) de P. aeruginosa, uno de los morfotipos adaptados e hiperproductores de biofilms, el cual fue ensayado en cuanto a su emergencia y reversión en un ensayo de evolución in vitro experimental. Este ensayo fue realizado de manera repetida y sucesiva, analizando en paralelo líneas evolutivas independientemente fundadas a partir de un ancestro normomutador e hipermutador común. Los resultados obtenidos demuestran que la flexibilidad en la conversión y reversión sucesiva al fenotipo SCV se encuentra favorecida ante un aumento en la tasa de mutación. En este sentido, el proceso de diversificación fenotípica así como el valor de frecuencia de reversión del fenotipo SCV fueron notablemente mayores en cepas hipermutadoras respecto a la cepa normomutadora, incluso cuando las propiedades fenotípicas de las SCV y sus respectivas variantes revertidas y ancestrales fueron similares. Mediante análisis de genómica estructural comparativa, se determinó que la base molecular que subyace al proceso de conversión/reversión SCV consiste en la regulación de los niveles intracelulares del segundo mensajero c-di-GMP, existiendo un marcado paralelismo evolutivo y una fuerte selección positiva, tanto en las líneas WT como en las hipermutadoras, para la mutagénesis de los sistemas de transducción wsp e yfi. En todos los casos, las mutaciones en estos sistemas se adquieren de un modo compensatorio, determinando el incremento y la disminución de los niveles de c-di-GMP en cada ciclo de conversión y reversión, respectivamente. Interesantemente, a medida que los ciclos evolutivos avanzan las líneas normomutadoras muestran a partir del ciclo 5 de evolución una fuerte restricción genética, evidenciada como una caída significativa en la frecuencia de conversión SCV. Esta restricción no fue observada para las líneas hipermutadoras, las cuales evolucionaron hasta el ciclo de evolución 16 inclusive. A partir del ciclo 5 de evolución, estas líneas muestran la adquisición de mutaciones en otras enzimas y reguladores involucrados en el metabolismo del c-di-GMP, las cuales no serían suficientes para adaptarse al esquema impuesto sosteniendo puramente un mecanismo de mutaciones compensatorias. La presencia de mutaciones de tipo inserción/deleción en secuencias repetidas pequeñas (SSR) de G:C en algunos genes implicados en la regulación de los niveles de este segundo mensajero, abren la posibilidad de que la mayor flexibilidad y adaptabilidad de las líneas hipermutadoras se base a su vez en un mecanismo de conversión y reversión de una misma mutación (“switch on/off mutations”), el que, a manera de un interruptor genético, permitiría la variación fenotípica de manera indefinida. El presente trabajo constituye un importante aporte para el conocimiento de la implicancia de la hipermutabilidad, por deficiencia en el MRS, en la adaptabilidad de P. aeruginosa, la cual subyace la notable versatilidad que esta especie bacteriana despliega para prosperar en un sin número de ambientes diferentes y, como patógeno oportunista, persistir en las vías aéreas de pacientes con FQ a lo largo de la vida del paciente sin poder ser erradicada por ninguna terapia hasta el momento conocida. Fil: Tobares, Romina Alín. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Fil: Smania, Andrea María. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina. Fil. Smania, Andrea María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. Fil: Sotomayor, Claudia Elena. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Fil: Sotomayor, Claudia Elena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Fil: Becerra, María Cecilia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Ciencias Farmacéuticas; Argentina. Fil: Becerra, María Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; Argentina. Fil: Bocco, José Luis. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Fil: Bocco, José Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Fil: Studdert, Claudia Alicia. Universidad Nacional del Litoral; Argentina. Fil: Studdert, Claudia Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Agrobiotecnología del Litoral; Argentina.

[ES] La exportación nuclear del mRNA está coordinada con las diferentes etapas de la expresión génica. En las células de los organismos eucariotas existen diferentes orgánulos donde se realizan las funciones celulares, incluyendo el crecimiento, desarrollo y diferenciación celular. En el núcleo celular es donde se encuentra la información genética almacenada en el DNA, y donde ocurre la replicación y reparación del DNA, la transcripción y el procesamiento del RNA. La traducción de las proteínas ocurre exclusivamente en el citoplasma. Por ello, a través del complejo de poro nuclear, el mRNA y otras macromoléculas se transportan al citoplasma. Hay proteínas adaptadoras del transporte de mRNA que actúan como un sistema de control para prevenir una incorrecta exportación nuclear causada por un mal procesamiento o ensamblaje de las ribonucleoproteínas. En este proyecto se pretenden generar mutantes puntuales de una serie de construcciones de Mip6, proteínas celulares de unión a la proteína Mex67, un elemento fundamental en la exportación del RNA desde el núcleo al citoplasma. Se generarán una serie de mutantes por biología molecular para poder proceder a su sobreexpresión y purificación. Según las cantidades obtenidas se procederán a distintos tipos de caracterización biofísica. En primer lugar se procederá a la obtención de mutantes de una supuesta secuencia de exportación nuclear (NES) con el objetivo de validarla como tal. La presencia o no de un NES en Mip6, proteína de unión a Mex67 tiene importantes implicaciones funcionales en su biología y en la interpretación de sus asociaciones con Mex67. También se procederá a la sobreexpresión y purificación de la unidad mínima de interacción de Mip6 con Mex67 con el objetivo de iniciar series de cristalización para poder resolver su estructura cristalina en un futuro. Por otra parte, mediante técnicas de clonaje se pretende caracterizar las proteínas Mex67 y Dbp5, dos proteínas involucradas en el transporte nuclear., [EN] The nuclear export of mRNAs is coordinated with different steps of gene expression. Eukaryotic organisms have a physical and functional compartmentalization of the cells into organelles that are the sites where cellular activities occur, including growth, development, and differentiation. Genetic information is stored in the cell nucleus in the form of chromosomal DNA, in this compartment, DNA replication and repair, transcription of genes, and RNA processing occur. Protein translation occurs exclusively in the cytoplasm. Thus, mRNAs and other macromolecules are transported into the cytoplasm through the NPC. There are adaptor proteins to control and prevent an improperly processed or assembled ribonucleoproteins. Mip6 is a protein that interacts with the protein Mex67, which is a component of the nuclear pore involved in nuclear mRNA export from the nucleus to the cytoplasm. It aims to generate different mutants by molecular biology to overexpress and purify these constructs. Depending on the quantities of protein obtained, different types of biophysical characterization will be carried out. The first step is to obtain the mutants of a determinate nuclear export sequence (NES) in order to validate it as such. The presence of NES in Mip6 has important functional implications in her biology and in the characterization of their associations with Mex67. Moreover, the overexpression and purification of the minimal interaction unit of Mip6 with Mex67 is going to be done with the objective to make crystallization series to be able to solve its crystalline structure in the future. Furthermore, cloning techniques used in this work will provide a characterization of Mex67 and Dbp5 proteins, which are two proteins involved in nuclear transport.

Fil: Tubio, María Gabriela. Universidad Nacional de Quilmes; Argentina. Tubio, M. G. (2019). Debate sobre la toxicidad del herbicida glifosato en Argentina. Análisis de un diferendo. (Tesis de maestría). Universidad Nacional de Quilmes: Bernal, Argentina. ¿Son las reglas, que dentro de esta sociedad se consideran apropiados para juzgar la toxicidad del herbicida glifosato, imparciales o bien defienden intereses económicos? Con el objetivo de encontrar respuesta a esta pregunta, analizamos el debate sobre la toxicidad del glifosato en Argentina desde dos perspectivas teóricas in dependientes, alcanzando luego, una visión integradora de ambos abordajes, capaz no sólo de reunir las argumentaciones provenientes de cada análisis en particular, sino además, de revelar información no visibilizada desde cada perspectiva en particular. Desde un abordaje constructivista-relativista analizamos cómo los distintos actores involucrados percibieron distintos problemas frente a las denuncias asentadas por intoxicaciones con glifosato, cómo cada uno fue construyendo su propia relación problema-solución y fue evaluando, a modo de construcción sociotécnica, el funcionamiento del glifosato como artefacto tecnológico. Desde una segunda perspectiva y siguiendo algunas conceptualizaciones propuestas por Lyotard en El Diferendo (Lyotard, 1991), analizamos cómo las relaciones de poder dan forma a lo que llamamos protocolos establecidos para determinar la toxicidad de una sustancia y cómo, esta imposición de sentido sobre algunos conceptos científicos, transformaron lo que a priori pudiera haberse pensado como una Controversia, en un Diferendo.

Cuello, M. (2018). El cambio tecnológico en la producción sojera argentina : análisis de la difusión del paradigma de las TICs y la conformación de un Sistema Nacional de Innovación (1995-2014). (Tesis de posgrado). Bernal, Argentina : Universidad Nacional de Quilmes. La transformación del agro argentino de los últimos casi 20 años responde a un cambio tecnológico revolucionario, donde la soja RR nuclea un grupo de tecnologías que impactan directamente en el sector, con efectos en la productividad, recaudación impositiva, entre otros. Este trabajo de tesis se propone estudiar este cambio tecnológico desde una interpretación neoschumpeteriana centrado en la actual revolución informática. Asimismo, se hace una construcción del Sistema Nacional de Innovación formado en torno a estas tecnologías, aspecto que resultó fundamental para su difusión y expansión en el sector. Esta mirada comprende un aporte novedoso al campo de estudio, enriqueciendo de esta manera los conocimientos ligados a la transformación productiva del sector agrícola ocurrido durante el período referido.

"En este trabajo se propone caracterizar mediante mutagénesis de sitio la contribución de las estructuras: asa – P, asa intracelular S4 – S5 y segmento S6 del dominio DIII, sobre la inactivación lenta del canal de sodio de músculo esquelético de rata Nav1.4. Nosotros deducimos que las regiones de bisagra juegan un papel importante en el acoplamiento conformacional entre el dominio sensor de voltaje y el poro en canales iónicos dependientes de voltaje. Nuestros resultados determinan que, glicina 1148 en la asa intracelular S4–S5, lisina 1237 en la asa–P, glicina 1275 y asparagina 1281 en el segmento S6, situados en el dominio DIII están implicados en la inactivación lenta en el canal de sodio rNav1.4, consistente con una inactivación tipo C observada en canales de potasio, y la participación de estas estructuras en la inactivación lenta es independiente de la inactivación rápida."

Fil: Abelleyro, Miguel Martín. Instituto de Medicina Experimental; Argentina Abelleyro, M. M. (2016). Grandes rearreglos del cromosoma X: el modelo de hemofilia. (Tesis de doctorado). Universidad Nacional de Quilmes, Bernal, Argentina. Después de la revolución científica y tecnológica que atravesó la genética médica en los últimos años, el gran desafío que hoy enfrenta es hacer llegar sus beneficios a todos los estratos de la sociedad. La hemofilia, coagulopatía hereditaria ligada al cromosoma X (X), afecta a uno de cada 5000 varones hemicigotas en todas las poblaciones humanas y muy raramente a las mujeres portadoras. Mutaciones deletéreas en el gen del F8 (187kb, 26 exones) causan hemofilia A (HA) que es cinco veces más frecuente que la hemofilia B (HB) causada por defectos en el F9 (33kb, 8 exones). Esta diversidad de tamaño y complejidad del F8 y F9, y la heterogeneidad de defectos genéticos que los afectan, determinaron que la hemofilia sea una enfermedad modelo para el diagnóstico molecular, para los desarrollos terapéuticos y para los estudios de correlación genotipo-fenotipo. La mutación más importante en hemofilia es la inversión del intrón 22 (Inv22), la causa del 42% de las HA severas (actividad del FVIII:C99%) y cinco como no portadoras (Pc

Tesis presentada para optar al grado de Doctor en Ciencias Aplicadas, en la Universidad Nacional de Luján, en 2016 En los últimos años el incremento de la agricultura provocó un reordenamiento territorial de la ganadería hacia regiones extrapampeanas con ambientes más restrictivos. El “Gatton Panic” (Panicum maximum Jacq. cv. Gatton) fue introducido en la Argentina a fines de la década del 70 y, en la actualidad, es la forrajera megatérmica más difundida en el NOA. El cultivar posee un gran potencial de producción (6-9 Tn MS/ha), alto valor forrajero (60% Dig. MS, 12% PB) y es tolerante al pastoreo y a la sombra, por lo que se adapta bien a los sistemas silvopastoriles. Su principal limitante es la sensibilidad al estrés abiótico (bajas temperaturas, salinidad y sequía). Incrementar su tolerancia a tales condiciones aumentaría la superficie implantada y las opciones de siembra mejorando la oferta forrajera. Sin embargo, la falta o desconocimiento de la variabilidad en los materiales presentes en el país sumado a su complejo sistema reproductivo (apomixis) dificultan el mejoramiento. El desarrollo y la aplicación de técnicas biotecnológicas permitirá aumentar su variabilidad genética, hacer más eficientes los programas de mejoramiento y colaborar en el desarrollo de un mercado de cultivares de origen nacional que fortalecerá la sustentabilidad de la expansión ganadera en la región. En primer lugar, para esta tesis se dispuso de una muestra de semillas comerciales cuya calidad fue confirmada mediante citogenética (2n=32), test de viabilidad por tetrazolio (67,3%) y poder germinativo (29,7%). Tambien se estudiaron metodologías para quebrar la dormición y para la desinfección de las semillas. Luego, se sembró un stand de plantas en invernáculo y evaluó la capacidad de regeneración in vitro de diversos explantes del cultivar (semillas maduras, tallos e inflorescencias inmaduras) bajo distintas concentraciones y combinaciones hormonales. Así, se ajustó un protocolo de embriogénesis somática a partir de inflorescencias inmaduras (R0) sembradas en un medio MS con 5 mg/l 2,4 D y 0,15 mg/l BAP. De este modo, se obtuvo un 85,32% de inducción de callos y un 15,13% de callos embriogénicos, los cuales fueron repicados a un medio con 1 mg/l Kin y 1 mg/l Ga3, donde regeneró un 2% de plantas completas. Tambien se registraron problemas de oscurecimiento de callos y albinismo (10%). A los 50-65 días se obtuvieron 132 plantas entre las cuales se observó un individuo variegado que no transmitió su fenotipo a la progenie. El mismo protocolo también fue exitoso con el cultivar “Green Panic” (P. máximum var. trichoglume cv. Petrie) pero con menor eficiencia. Por otro lado, se estudió el tratamiento de semillas con dos agentes mutagénicos (EMS y rayos x) a diferentes concentraciones y condiciones de trabajo. Se calculó la DL50 y la eficiencia (estimada como la proporción de mutaciones clorofílicas en la M2 en relación a la frecuencia de efectos indeseables, como letalidad o nivel de daño de las plantas M1) de cada mutágeno. Se ajustó un protocolo de mutagénesis química sobre semillas secas tratadas con una solución de EMS al 3‰ durante 18 h (eficiencia=0,083). Del mismo modo, se ajustó un protocolo de mutagénesis con rayos x exponiendo semillas prehumedecidas en agua (16h) a 120 Gy (eficiencia=0,058). Ambos protocolos son complementarios. Tales herramientas servirán para generar variabilidad. Luego, en búsqueda de un método de selección se analizó la respuesta de la germinación del cultivar comercial ante condiciones artificiales de sequía y salinidad (concentraciones isosmóticas de manitol y NaCl). De este modo, se observó que la reducción del potencial afectó el porcentaje, la velocidad y el tiempo medio de germinación del cultivar. Asimismo, el tratamiento con NaCl generó un efecto detrimental aditivo debido a su componente iónico. Una concentración de 76 mM NaCl aprox. (ψo=-0,28 Mpa) redujo la germinación en un 50%. De la misma manera, se analizó el crecimiento de plántulas cultivadas en hidroponia bajo diferentes concentraciones de NaCl. Se reveló que a partir de los 100 mM NaCl (ψo=-0,36 MPa) en la solución de riego las plántulas evidenciaron signos notorios de estrés salino (fase iónica) (caída brusca en la tasa de expansión foliar en las hojas jóvenes y puntas senescidas en las hojas adultas) al sexto día de iniciado el tratamiento. En consecuencia, se redujo un 30,5% el área foliar acumulada, un 29,5% la altura y un 46,4% la biomasa seca acumulada a la finalización del ensayo. Tales concentraciones servirán como parámetro para la selección in vitro e in vivo de nuevos individuos tolerantes en sus diferentes etapas fenológicas. Por último, se realizó una transferencia exitosa de SSR diseñados en otras especies poáceas que permitió diferenciar al cultivar “Green Panic” del “Gatton Panic”. La adaptación de un mayor número de SSR podrá utilizarse como herramienta para la detección molecular de variabilidad genética. In recent years the increase in agriculture caused a territorial reorganization of livestock towards "extra pampeanas" regions that have more restrictive environments. "Gatton Panic" (Panicum maximum Jacq. cv. Gatton) is the warm forage specie most cultivated in the NOA but it has growth limitations. Improve its abiotic stress tolerance (to drought and/or salinity, for example) could increase forage implanted area and meat production, enriching the national forage seed market. The absence or lack of variability in the genetic material of Argentina and its complex reproductive system (apomixis) promoted the application of non-conventional breeding tools. In this thesis two mutagenesis protocols were adjusted. Dry seeds were treated with 3 ‰ EMS solution for about 18 h (efficiency = 0.083), and moistened seeds (16 h on H2O) were exposed to 120 Gy x-rays (efficiency = 0.058). These dosis have showed higher efficiency according to germination rates and growth of seedlings. Both methods are complementary. Furthermore, a somatic embryogenesis protocol from immature inflorescences, which had not been reported in the literature, was developed. Regenerants from Gatton Panic and Green Panic were obtained. Cases of albinism and a variegated plant were reported but that phenotype was not transmitted to the offspring. Under artificial drought conditions (low osmotic potentials) the percentage, velocity and average time of germination were affected. An additive effect of salt treatments was observed due to ionic component. A concentration of 76 mM NaCl (7.6 dS/m) approx. (Ψo = -0.28 Mpa) reduced the germination by 50%. Likewise, the seedlings growing at 100 mM NaCl (ψo = -0.36 MPa) under hydroponic system began experimenting salt stress (phase change) at the sixst day after treatment starts, showing a 30.5% reduction in leaf area, 29.5% in height and 46.4% of dry biomass at the end of the trial. Such concentrations could be used for the selection of new tolerant individuals at different phenological stages under "in vitro" or "in vivo" systems. Finally, a successful transferability of SSRs designed from filogenetically related Grass species was achieved, allowing us to differentiate the Green Panic of Gatton Panic. The adaptation of more SSRs will allow it to be used as a tool for molecular detection of genetic variability. Instituto de Genética Fil: Guariniello, Julian. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Genética; Argentina

La información genética en la discapacidad intelectual es valiosa porque puede establecer una explicación causal. Esta información evita consultas adicionales y muchos tipos de análisis genéticos; permite el acceso temprano a servicios comunitarios que pueden mejorar el trastorno cognitivo o de comportamiento; aporta estimaciones de riesgos de recurrencia para toma de decisiones reproductivas y permite entender el pronóstico y necesidades futuras. Numerosas trastornos genéticos humanos resultan de alteraciones cromosómicas no balanceadas, en las que hay o una ganancia o una pérdida de material genético neto. Tradicionalmente, los citogenetistas detectaban este tipo de alteraciones mediante el análisis del cariotipo de los pacientes en cuestión, analizando los patrones en banda en los cromosomas (1).Gracias a este tipo de técnicas de detección molecular pudieron ser descritos diversos síndromes entre los que se puede destacar el Sindrome de DiGeorge o el Sindrome de Prader-Willi como los más frecuentes. Sin embargo, en los últimos años, el desarrollo de nuevas tecnologías ha permitido importantes avances en el diagnostico citogenético y en el papel que desempeñan las variaciones en el número de copias de segmentos genómicos en la variabilidad genética y en la patogénesis de enfermedades. Entre las muchas de estas técnicas novedosas podemos encontrar, por ejemplo, la técnica FISH (fluorescence in situ hybridization) que a través de marcados fluorescente permite encontrar posiciones exactas de secuencias específicas de DNA en los cromosomas. Aún más eficiente y útil (y la técnica utilizada en el estudio del paciente que se presenta), es el uso de microarrays de hibridación genómica comparativa (aCGH). Esta técnica permite realizar un screening en todo el genoma en busca de variaciones en el número de copias. (1), Otro, Grado en Medicina

[ES] Se transformará una cepa multirresistente de E. faecium con un plásmido (pZXL5) que contiene un transoposón que codifica para resistencia a gentamicina y se inserta aleatoriamente en el genoma de la bacteria. las bacterias que hayan insertado el transposón en el genoma bacteriano. Se crecerán 20 de las colonias identificadas, se extraerá su DNA y mediante Shouthern Blot se comprobará que la inserción ha sido aleatoria y que únicamente una copia del transposón se ha insertado en el cromosoma. Seguidamente se utilizará la secuenciación masiva para detectar el lugar de inserción del transposón en el cromosoma con una mezcla bacteriana que contenga aproximadamente 108 mutantes. Posteriormente serán infectados ratones. Dos días tras la infección se tomarán muestras del intestino, se extraerá su DNA y se analizarán los sitios de inserción del transposón en el cromosoma. A partir de estos datos definirán aquellos genes que pudieran ser importantes para la colonización intestinal de Enterococo, [EN] The aim of this work is to elaborate an appropriate methodology to identify genes encoded by multidrug-resistant strains of Enteroccus faecium which are necessary for colonization of the intestinal tract. In order to do so, a mutagenesis system by transposition and massive sequencing will be used. The strain E1162 Enterococcus faecium will be transformed with the pZXL5 plasmid which contains a gentamicin resistant coding transposon that will be randomly inserted into the bacterial genome. The pZXL5 plasmid is temperature sensitive making it unable to replicate at temperatures above 30ºC. The strain transformed with the plasmid will be grown in medium with gentamicin at a temperature above 30ºC, obtaining only those bacteria where the transposon was randomly inserted in the genome. Finally, by massive sequencing technique, the transposon insertion site in the chromosome will be identified and the relative abundance of mutants will be measured.