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El cáncer de pulmón es la principal causa de defunciones por cáncer en nuestro país. Desafortunadamente, en la mayoría de los pacientes con adenocarcinoma de pulmón (LUAD) las terapias dirigidas no fueron exitosas. Por lo tanto, son necesarios nuevos biomarcadores y blancos terapéuticos para este tipo de cáncer. El metabolismo celular ha resurgido como un área prometedora para el tratamiento del cáncer. Las células tumorales presentan una reprogramación del metabolismo que sustenta la incrementada demanda de energía y de sustratos para la síntesis de macromoléculas. Las proteínas que unen ácidos grasos (FABPs) son proteínas citosólicas que unen ácidos grasos (FA) de cadena larga con gran afinidad. Se ha propuesto que las FABPs podrían transportar FA a diferentes compartimentos celulares dirigiéndolos así hacia su oxidación, utilización en síntesis de lípidos complejos y regulación de factores transcripcionales. FABP5, a diferencia de otras isoformas, ha sido asociada positivamente con el desarrollo de ciertos cánceres. Su rol como promotora tumoral está generalmente relacionado con su capacidad de translocar al núcleo y regular la expresión génica mediante la activación de Receptores Activados por Proliferadores Peroxisomales (PPARs). Sin embargo, su contribución en la progresión de LUAD y reprogramación metabólica no ha sido completamente esclarecida. En este estudio evaluamos la importancia de FABP5 en LUAD y su rol en el metabolismo lipídico de células tumorales. Utilizando herramientas bioinformáticas observamos que los niveles elevados de FABP5 se asocian con un peor pronóstico en pacientes con LUAD. La función de FABP5 en este tipo de cáncer se investigó en modelos con niveles alterados de FABP5 generados por inhibición genética/farmacológica y sobre expresión de la proteína en células A549. Ensayos de marcación con isótopos radioactivos en el knockdown o la inhibición de FABP5 mostraron una reducción de la incorporación de FA en lípidos complejos y lo opuesto se observó en el modelo de sobre expresión. Además, demostramos que FABP5 es requerida para la síntesis de novo de FA y regula la expresión de enzimas involucradas en la vía (incluyendo FASN y SCD-1). Contrariamente, en ningún modelo se encontró afectada la oxidación de FA. Entonces, FABP5 regula el metabolismo lipídico direccionando FA hacia la síntesis de lípidos complejos, mientras que no altera su catabolismo in vitro. Asimismo, un análisis de secuenciación masiva de ARN (RNA Seq) en células A549 tratadas con el inhibidor de FABP5 mostró profundos cambios en el transcriptoma. Este ensayo respalda los resultados observados en el metabolismo de FA y resalta el valor de FABP5 para el avance en el ciclo celular. En el mismo sentido, se demostró por citometría de flujo y Western Blot que la inhibición de FABP5 genera un arresto del ciclo celular en la fase G0/G1. Finalmente, en los modelos celulares con niveles alterados de FABP5 observamos que esta proteína es necesaria para la proliferación, adhesión y migración celular; e in vivo promueve el desarrollo tumoral en ratones nude. En conjunto, nuestros resultados sugieren que FABP5 es un punto clave en la regulación del metabolismo de lípidos y la progresión tumoral en LUAD, ubicándose como un probable blanco terapéutico para esta enfermedad., Facultad de Ciencias Exactas

En el presente trabajo estudiamos las vías de los receptores activados por proliferadores peroxisomales (PPAR) y del blanco mecanístico de rapamicina (mTOR) en la decidua de ratas Wistar en el período de post implantación temprana y su función a nivel decidual. Estas vías fueron evaluadas en ratas controles y en un modelo de diabetes pregestacional inducido por estreptozotocina. En este modelo de diabetes, realizamos tratamientos dietarios enriquecidos en ácidos grasos poliinsaturados (PUFAs), reguladores de los PPAR y mTOR, durante el período de post implantación temprana con el fin de evaluar su efecto sobre la vía de los PPAR y de mTOR y sobre la función histotrófica de la decidua en esta acotada etapa gestacional. En primer lugar, evidenciamos que existe una intercomunicación entre las vías de PPARγ, PPARδ y mTOR en la decidua de ratas sanas en el día 9 de preñez. En vinculación a la función histotrófica decidual, la inhibición de cada una de estas vías durante la post implantación temprana indujo alteraciones en las proteínas perilipina 2 (PLIN2) y proteína de unión a ácidos grasos 4 (FABP4), involucradas en la homeostasis lipídica y de relevancia para el proceso de decidualización. En el día 14 de preñez, la inhibición de la vía de mTOR durante el acotado período de la post implantación temprana se asoció con un fuerte aumento en la tasa de reabsorciones, mientras que la inhibición de PPARγ y la inhibición de PPARδ se asociaron con alteraciones en el crecimiento decidual, fetal y/o placentario. En el modelo de diabetes pregestacional evaluado, se observó en la decidua en el día 9 de preñez una menor actividad de las vías de mTOR y PPARα y una mayor actividad de la vía de PPARγ, sin encontrarse cambios en los niveles proteicos de PPARδ. Esta desregulación observada en cada una de las vías fue prevenida de manera parcial o total a través de tratamientos dietarios enriquecidos 6% en aceite de girasol (rico en PUFAs n-6) y 6% en aceite de chía (rico en PUFAs n-3), administrados únicamente en la post implantación temprana. El efecto benéfico de ambas dietas sobre las vías de los PPAR y de mTOR se vieron reflejadas en la regulación del almacenamiento y transporte de lípidos, en el contenido glucogénico de la decidua, en marcadores de función decidual y en la remodelación tisular de este tejido. De esta manera, los tratamientos dietarios enriquecidos en PUFAs n-6 y n-3 administrados durante la post implantación temprana fueron capaces de prevenir alteraciones en las vías de los PPAR y de mTOR vinculadas a fallas en la función histotrófica de la decidua en el día 9 de preñez. Por último, encontramos en el día 14 de preñez un menor crecimiento decidual, fetal y placentario en ratas con diabetes pregestacional. Las dietas enriquecidas en 6% de aceite de girasol y 6% de aceite de chía administradas exclusivamente durante la post implantación temprana fueron capaces de prevenir diferencialmente las alteraciones observadas en la decidua, el feto y la placenta de ratas con diabetes pregestacional en el día 14 de preñez. En conjunto, en este trabajo de tesis identificamos una intercomunicación entre las vías de los PPAR y de mTOR que regula la función histotrófica de la decidua de rata de día 9 de preñez. Fallas de estas vías durante la post implantación temprana dan lugar a alteraciones en el crecimiento decidual, fetal y placentario evidentes en el día 14 de preñez. La diabetes materna indujo alteraciones en la función decidual histotrófica y en el proceso de decidualización en el día 9 de preñez. La desregulación de las vías de mTOR y de los PPAR evidenciadas en el día 9 de preñez se asociaron a un menor crecimiento fetal, decidual y placentario en el día 14 de preñez. El período de post implantación temprana constituye un momento clave en la regulación de las anomalías observadas, dado que tratamientos maternos enriquecidos en PUFAs n-6 y n-3 lograron prevenir de forma parcial o total dichas anomalías al ser administradas en esta acotada etapa gestacional. Los efectos benéficos de los tratamientos maternos administrados únicamente durante la post implantación temprana fueron evidentes en el crecimiento feto-placentario en etapas posteriores de la gestación que cursa con diabetes pregestacional. In this work we studied in the decidua from Wistar rats the peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) and the mammalian target of rapamycin (mTOR) pathways during early postimplantation and their effect on the histotrophic function of the decidua. The PPARs and mTOR pathways were evaluated in control rats and in a model of pregestational diabetes induced by streptozotocin. In this diabetic rat model we administrated dietary treatments enriched in polyunsaturated fatty acids (PUFAs), PPAR and mTOR regulators, during the postimplantation period in order to demonstrate their effects on PPAR and mTOR pathways and on the histotrophic function of the decidua during this gestational stage. In first place, we found a crosstalk between the PPARγ, the PPARδ and the mTOR pathways in the decidua from healthy rats on day 9 of pregnancy. The inhibition of each pathway during early postimplantation induced defects related to the histotrophic function of the decidua. These defects included alterations in perilipin 2 (PLIN2) and fatty acid binding protein 4 (FABP4) levels, proteins involved in lipid homeostasis and relevant for decidualization. On day 14 of pregnancy, the inhibition of the mTOR pathway during the short period corresponding to the postimplantation stage was associated with a strong increase in the resorption rate, while the PPARγ inhibition and the PPARδ inhibition were associated with alterations in the decidual, fetal and placental growth. By evaluating an experimental model of pregestational diabetes induced by streptozotocin, we found a reduction on the activity of the mTOR and PPARα pathways and an increased in the PPARγ pathway in the rat decidua on day 9 of pregnancy. No changes were found in PPARδ protein levels in the decidua from diabetic rats. The observed deregulation on the evaluated pathways were partially or totally prevented by maternal diets enriched in 6% sunflower oil (rich in PUFAs n-6) and 6% chia oil (rich in PUFAs n-3) administrated only during the post implantation period. The beneficial effect of both diets on PPAR and mTOR pathways were evident in the regulation of proteins involved in lipid storage and transport, in the glycogenic content of the decidua, in markers of decidual function and in the tissue remodeling of the decidua. Thus, the dietary treatments enriched in PUFAs n-6 and PUFAs n-3 administrated during the post implantation period were able to prevent the observed alterations in the PPARs and mTOR pathways associated with impairments in the histotrophic function of the decidua. On day 14 of pregnancy, we found that the rats with pregestational diabetes showed reduced decidual, fetal and placental growth. Both diets enriched in 6% sunflower oil and 6% chia oil administrated during early postimplantation were able to differentially prevent the growth of the decidua, the fetus and the placenta in diabetic rats on day 14 of pregnancy. In conclusion, in the evaluated experimental model, we found a crosstalk between PPARs and mTOR pathways in the rat decidua on day 9 of pregnancy. These pathways were involved in the regulation of the histotrophic function of the decidua and to alterations in the decidual, fetal and placental growth on day 9 of pregancy. Maternal diabetes induced alterations on histotrophic decidual function and on decidualization on day 9 of pregnancy. These alterations were evident through the deregulation of the mTOR and PPARs pathways and were associated with a reduction in the decidual, fetal and placental growth on day 14 of pregnancy. The postimplantation is a key period in the regulation of the observed alterations. Of note, the maternal treatments enriched in PUFAs n-6 and n-3 administrated during the short postimplantation stage partially or totally prevented these alterations. The beneficial effects of maternal treatments administered only during early postimplantation were evident in feto-placental growth in later stages of gestation in rats with pregestational diabetes. Fil: Roberti, Sabrina Lorena. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Se desarrolló un modelo de diabetes mellitus gestacional (grupo GDM) mediante programación intrauterina en la cría de ratas con diabetes moderada. Los animales gestantes del grupo GDM presentaron, además de hiperglucemia, un aumento en los niveles plasmáticos de insulina y de triglicéridos en relación con el grupo control. Los fetos provenientes del grupo GDM también presentaron hiperglucemia e hiperinsulinemia, junto a un incremento del peso fetal, respecto al grupo control. Se estudió el hígado de fetos de 21 días de preñez (gestación a término). Los fetos del grupo GDM presentaron alteraciones sexo-dependientes en los niveles de lípidos hepáticos y en la expresión de los receptores activados por proliferadores peroxisomales (PPAR): PPARγ y PPARδ, que se acompañaron con alteraciones en la expresión de enzimas blanco de los PPAR involucradas en el anabolismo y/o catabolismo de lípidos. Se evaluó el efecto del tratamiento dietario materno con un suplemento de aceite de oliva durante la gestación en las ratas que desarrollarían GDM. Este tratamiento no logró prevenir la inducción de la diabetes gestacional, pero disminuyó los niveles de triglicéridos plasmáticos maternos y redujo el peso fetal a valores similares al control. A su vez, el tratamiento dietario materno en ratas con GDM reguló la acumulación lipídica y redujo algunos parámetros pro-oxidantes/pro-inflamatorios que se encontraban elevados en el hígado fetal. Este tratamiento, también redujo los elevados niveles de PPARγ y PPARδ en el hígado fetal del grupo GDM, como así también la expresión de sus enzimas blanco que regulan el metabolismo lipídico. Esta reducción se vinculó a una menor expresión de dos de los co-activadores de los PPAR, PGC-1α y SRC-1. Otro aspecto de interés fue estudiar la posible regulación epigenética de los PPAR. Se estudió la expresión de los microRNAs, miR-130a y miR-9, reguladores de PPARγ y PPARδ respectivamente. Evidenciamos de manera sexo-dependiente una reducción en la expresión de ambos microRNAs, los cuales estarían asociados a los elevados niveles de PPARγ y PPARδ, y a la consecuente alteración de los niveles de lípidos en el hígado de fetos del grupo GDM. Además, se estudiaron los niveles del miR-122, el microRNA con mayor expresión en el hígado, implicado en varios aspectos importantes de la fisiopatología hepática. Los niveles del miR-122 se encontraron alterados, en forma sexo-dependiente, en el hígado fetal del grupo GDM, evidenciándose a su vez que la expresión de este microRNA estaría regulada por la actividad del receptor nuclear PPARγ. En conjunto, estos resultados sugieren que las alteraciones en el metabolismo lipídico hepático fetal observadas en el grupo GDM estarían asociadas a una desregulación en la función de los PPAR. El tratamiento dietario materno con aceite de oliva fue capaz de regular la expresión de los PPAR y de las enzimas hepáticas fetales involucradas en el metabolismo lipídico, probablemente mejorando la función hepática en la vida adulta de la descendencia. An experimental model of gestational diabetes mellitus (GDM group) was developed by intrauterine programming in the offspring of mild diabetic rats. Pregnant rats in the GDM group showed not only hyperglycemia, but also hyperinsulinemia and hypertriglyceridemia. The fetuses from the GDM group also showed hyperglycemia and hyperinsulinemia, and had increased weight when compared to controls. The fetal liver was studied on the day 21 of gestation, corresponding to term pregnancy. The fetuses of the GDM group showed sex-dependent alterations in the levels of hepatic lipids and in the expression of peroxisome proliferator activated receptors (PPARs): PPARγ and PPARδ. These anomalies were associated with alterations in the expression of PPAR target enzymes involved in lipid anabolism and/or catabolism. A maternal treatment with olive oil during the gestation of the rats that would develop GDM was evaluated. This dietary treatment was not able to prevent the development of GDM, but led to a decrease in the levels of triglycerides in maternal plasma and in the fetal weight to values similar to those of the controls. Moreover, the maternal treatment with olive oil in the GDM group regulated the lipid levels in the fetal liver and reduced some of the pro-oxidant/pro-inflammatory parameters that were increased in the fetal liver. Also, the maternal treatment with olive oil reduced the expression of PPARγ and PPARδ in the fetal liver in the GDM group, as well as the expression of enzymes that regulate the lipid metabolism and are targets of PPARs. This reduction was related to the reduced levels of PGC-1α and SRC-1, coactivators of the nuclear receptors PPAR. We were also interested in addressing a putative epigenetic regulation of PPARs. Thus, we analyzed the expression of two microRNAs, miR-130a and miR-9, negative regulators of PPARγ and PPARδ in the fetal liver, respectively. We observed a sexdependent reduction in both microRNAs, alterations possibly related to the increased levels of PPARγ and PPARδ and the consequent alterations in lipid levels induced in the fetal liver of the GDM group. In addition, we studied the levels of miR-122, the microRNA with greater expression in the liver, involved in several important aspects of the physiopathology of this organ. We found sex-dependent alterations in the levels of miR-122 in the fetal liver of the GDM group, and also found that the expression of this microRNA can be regulated by the activity of the nuclear receptor PPARγ. Altogether, these results suggest that the alterations of the lipid metabolism in the fetal liver from the GDM group are related to a deregulation in PPARs function. The maternal dietary treatment with olive oil was able to regulate the expression of PPARs and the hepatic fetal enzymes involved in the lipid metabolism in the fetal liver of the GDM group, probably improving the hepatic function in the adult life of the offspring. Fil: Fornés, Daiana Débora. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Se desarrolló un modelo de diabetes mellitus gestacional (grupo GDM) mediante programación intrauterina en la cría de ratas con diabetes moderada. Los animales gestantes del grupo GDM presentaron, además de hiperglucemia, un aumento en los niveles plasmáticos de insulina y de triglicéridos en relación con el grupo control. Los fetos provenientes del grupo GDM también presentaron hiperglucemia e hiperinsulinemia, junto a un incremento del peso fetal, respecto al grupo control. Se estudió el hígado de fetos de 21 días de preñez (gestación a término). Los fetos del grupo GDM presentaron alteraciones sexo-dependientes en los niveles de lípidos hepáticos y en la expresión de los receptores activados por proliferadores peroxisomales (PPAR): PPARg y PPARd, que se acompañaron con alteraciones en la expresión de enzimas blanco de los PPAR involucradas en el anabolismo y/o catabolismo de lípidos. Se evaluó el efecto del tratamiento dietario materno con un suplemento de aceite de oliva durante la gestación en las ratas que desarrollarían GDM. Este tratamiento no logró prevenir la inducción de la diabetes gestacional, pero disminuyó los niveles de triglicéridos plasmáticos maternos y redujo el peso fetal a valores similares al control. A su vez, el tratamiento dietario materno en ratas con GDM reguló la acumulación lipídica y redujo algunos parámetros pro-oxidantes/pro-inflamatorios que se encontraban elevados en el hígado fetal. Este tratamiento, también redujo los elevados niveles de PPARg y PPARd en el hígado fetal del grupo GDM, como así también la expresión de sus enzimas blanco que regulan el metabolismo lipídico. Esta reducción se vinculó a una menor expresión de dos de los co-activadores de los PPAR, PGC-1α y SRC-1. Otro aspecto de interés fue estudiar la posible regulación epigenética de los PPAR. Se estudió la expresión de los microRNAs, miR-130a y miR-9, reguladores de PPARg y PPARd respectivamente. Evidenciamos de manera sexo-dependiente una reducción en la expresión de ambos microRNAs, los cuales estarían asociados a los elevados niveles de PPARg y PPARd, y a la consecuente alteración de los niveles de lípidos en el hígado de fetos del grupo GDM. Además, se estudiaron los niveles del miR-122, el microRNA con mayor expresión en el hígado, implicado en varios aspectos importantes de la fisiopatología 3 hepática. Los niveles del miR-122 se encontraron alterados, en forma sexo-dependiente, en el hígado fetal del grupo GDM, evidenciándose a su vez que la expresión de este microRNA estaría regulada por la actividad del receptor nuclear PPARg. En conjunto, estos resultados sugieren que las alteraciones en el metabolismo lipídico hepático fetal observadas en el grupo GDM estarían asociadas a una desregulación en la función de los PPAR. El tratamiento dietario materno con aceite de oliva fue capaz de regular la expresión de los PPAR y de las enzimas hepáticas fetales involucradas en el metabolismo lipídico, probablemente mejorando la función hepática en la vida adulta de la descendencia. An experimental model of gestational diabetes mellitus (GDM group) was developed by intrauterine programming in the offspring of mild diabetic rats. Pregnant rats in the GDM group showed not only hyperglycemia, but also hyperinsulinemia and hypertriglyceridemia. The fetuses from the GDM group also showed hyperglycemia and hyperinsulinemia, and had increased weight when compared to controls. The fetal liver was studied on the day 21 of gestation, corresponding to term pregnancy. The fetuses of the GDM group showed sex-dependent alterations in the levels of hepatic lipids and in the expression of peroxisome proliferator activated receptors (PPARs): PPARg and PPARd. These anomalies were associated with alterations in the expression of PPAR target enzymes involved in lipid anabolism and/or catabolism. A maternal treatment with olive oil during the gestation of the rats that would develop GDM was evaluated. This dietary treatment was not able to prevent the development of GDM, but led to a decrease in the levels of triglycerides in maternal plasma and in the fetal weight to values similar to those of the controls. Moreover, the maternal treatment with olive oil in the GDM group regulated the lipid levels in the fetal liver and reduced some of the pro-oxidant/pro-inflammatory parameters that were increased in the fetal liver. Also, the maternal treatment with olive oil reduced the expression of PPARg and PPARd in the fetal liver in the GDM group, as well as the expression of enzymes that regulate the lipid metabolism and are targets of PPARs. This reduction was related to the reduced levels of PGC-1α and SRC-1, coactivators of the nuclear receptors PPAR. We were also interested in addressing a putative epigenetic regulation of PPARs. Thus, we analyzed the expression of two microRNAs, miR-130a and miR-9, negative regulators of PPARg and PPARd in the fetal liver, respectively. We observed a 5 sex-dependent reduction in both microRNAs, alterations possibly related to the increased levels of PPARγ and PPARδ and the consequent alterations in lipid levels induced in the fetal liver of the GDM group. In addition, we studied the levels of miR122, the microRNA with greater expression in the liver, involved in several important aspects of the physiopathology of this organ. We found sex-dependent alterations in the levels of miR-122 in the fetal liver of the GDM group, and also found that the expression of this microRNA can be regulated by the activity of the nuclear receptor PPARγ. Altogether, these results suggest that the alterations of the lipid metabolism in the fetal liver from the GDM group are related to a deregulation in PPARs function. The maternal dietary treatment with olive oil was able to regulate the expression of PPARs and the hepatic fetal enzymes involved in the lipid metabolism in the fetal liver of the GDM group, probably improving the hepatic function in the adult life of the offspring. Fil: Fornes, Daiana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Laboratorio de Reproducción y Metabolismo; Argentina

Dadas las alteraciones metabólicas inducidas por la diabetes materna y la capacidad de los receptores nucleares PPAR de regular el metabolismo lipídico, se propuso como objetivo evaluar los niveles de lípidos y PPAR en la placenta de pacientes sanas y con diabetes tipo 2, y determinar si la activación de los PPAR regula los niveles y peroxidación lipídica en dichos tejidos. Metodología: las placentas se obtuvieron luego del alumbramiento, se determinaron los niveles de lípidos mediante cromatografía, los niveles de PPAR mediante Western blot y la peroxidación lipídica mediante la cuantificación de TBARS. Resultados: se evidenciaron mayores niveles de lípidos y menores niveles de PPAR_ y PPARaen placenta de pacientes diabéticas en relación con el control (P

La superfamilia de receptores de hormonas nucleares, es un amplio grupo de proteínas cuya función es actuar como factores de transcripción para modular, de manera positiva o negativa, la expresión de genes involucrados en procesos de diferenciación, crecimiento, reproducción y metabolismo. Dada su participación en procesos fisiológicos claves, las disfunciones asociadas con estos receptores tienen enormes implicaciones en enfermedades de elevada importancia en salud pública como la enfermedad cardiovascular, la diabetes mellitus tipo 2 y el cáncer, entre otras. En este trabajo se revisan algunos aspectos de esta superfamilia de proteínas, incluyendo su estructura, relación con el metabolismo de lípidos e implicaciones cardiovasculares. El trabajo se enfoca en los receptores activados por el proliferador del peroxisoma (PPAR), aunque se da una breve mirada a los receptores X hepáticos (LXR). Nuclear hormone receptors superfamily are a wide group of proteins which function is to act as transcription factors in order to modulate in a positive or negative way the expression of genes involved in differentiation processes, growth, reproduction and metabolism. Given its participation in key pathologic processes, the disfunctions associated to these receptors have huge implications in diseases of great importance in public health such as cardiovascular disease, diabetes mellitus type 2, and cancer between others. Some aspects of this protein superfamily are reviewed in this study, including its structure, relationship with lipid metabolism and cardiovascular implications. This study focuses on the peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR), and briefly on the liver X receptors (LXR).

[cat] L'enzim carnitina palmitoïltransferasa1 (CPT1), localitzat a la membrana mitocondrial externa, constitueix el principal punt de control de l'entrada d'àcids grassos de cadena llarga (LCFA) al mitocondri i és clau en el manteniment d'àcids grassos circulants. Existeixen tres isotips descrits (CPT1A, CPT1B i CPT1C) que codifiquen per enzims amb diferents característiques cinètiques i patrons d'expressió. 1.- Mecanismes de control transcripcional del gen CPT1B humà. El promotor humà de la CPT1B inclou un element de resposta a PPAR i un lloc d'unió a MEF-2. Hem investigat el paper d'aquests elements de resposta i la possible interacció entre PPARα i MEF2C en la regulació transcripcional d'aquest promotor. Dels resultats obtinguts podem concloure que la resposta del promotor a PPARα depèn: del context cel·lular, de l'element de resposta a MEF-2 i de la disposició espacial d'aquest respecte al PPRE. La combinació d'aquests elements cis en el promotor de la CPT1B indueix l'expressió màxima del gen en resposta a diferents senyals. La concurrència de senyals metabòlics i miogènics en aquest promotor genera una conformació transcripcional permissiva d'aquest promotor que porta a una activació sinèrgica del promotor en aquells teixits on es troben els corresponents factors de transcripció (MEF2C, PPARα/RXRα) i el substrat metabòlic de l'enzim, els àcids grassos que activen PPARα. En la mateixa una regió promotor una zona rica en GC capaç d'unir Sp1 ha resultat fonamental per l'expressió basal del gen i per la transactivació per PPARα però no per la de PPARδ. 2.- Relació estructura/funció de l'enzim CPT1 de porc. A nivell cinètic, les CPT1A mostren una alta afinitat per la carnitina i una baixa sensibilitat al malonil-CoA mentre que les CPT1B presenten característiques contràries. Una excepció a aquesta relació és la CPT1A de porc (PLCPT1) que es comporta com una quimera natural entre els isotips A i B, presentant afinitats pels substrats similars a les CPT1A i una IC50 pel malonil-CoA típica de les CPT1B. Utilitzant quimeres entre la CPT1A de rata i la CPT1A de porc hem demostrat que l'extrem C-terminal de les CPT1A es comporta com un únic domini que dicta la sensibilitat total a malonil-CoA de l'enzim. El grau de sensibilitat a l'inhibidor ve determinat per l'estructura adoptada per aquest domini. Utilitzant mutants delecionats hem mostrat que la sensibilitat a malonil-CoA també depèn de la interacció d'aquest únic domini carboxil amb els primers 18 aminoàcids de la proteïna. D'aquests resultats podem concloure que les CPt1A de rata i porc presenten diferent sensibilitats a malonil-CoA perquè els primers 18 aminoàcids dels enzims interaccionen diferent amb el domini C-terminal. Hem aïllat l'isotip muscular de la CPT1 de porc (PMCPT1), una proteïna de 772 aminoàcids molt similar a les CPT1B. Expressada en Pichia pastoris la CPt1B de porc ha resultat ser un enzim amb característiques cinètiques pròximes a les CPT1A. 3.- Efecte de C75 sobre el sistema CPT. Els enzims CPT1 i CPT2 són components del sistema llançadora CPT. Aquest sistema es troba finament regulat pels nivells de malonil-CoA, un inhibidor reversible de la CPT1. Per la seva capacitat d'inhibir la sintasa d'àcids grassos (FAS), el C75 és capaç d'incrementar els nivells intracel·lular de malonil-CoA intracel·lular. Paradoxalment també activa l'oxidació d'àcids grassos de cadena llarga. Per tal d'identificar la diana exacta del C75 en el sistema CPT vam analitzar l'activitat enzimàtica de CPT1A, CPT1B i CPT2 davant el tractament amb C75. Els resultats d'aquests experiments indiquen que el C75 actua sobre el sistema CPT activant CPT1A, CPT1B i CPT2 de manera independent de malonil-CoA., [eng] The outer mitochondrial membrane enzyme carnitine palmitoyltransferase1 (CPTI) catalyzes the initial and regulatory step in the β-oxidation of long-chain fatty acids. There are three characterized isotypes: CPT1A, CPT1B and CPT1C. The human CPT1B promoter includes a functional PPAR responsive element and a myocite-specific site that binds MEF2C. We investigated the roles of these sites and the potential interaction between PPARα and MEF2C regulating this promoter. The combination of cis elements in the promoter of the CPT1B maximally induces the expression of this gene in response to a combination of signals. The concurrence of myogenic and metabolic signals generates a transcriptionally permissive conformation of the promoter that gives rise to a synergistic transcription of the gene in tissues containing the corresponding transcription factors and fatty acids that activate PPARα. Kinetic hallmarks of the CPT1A are high affinity for carnitine and low sensitivity to malonyl-CoA inhibition, while the opposite characteristics are intrinsic to the CPT1B isotype. Pig and rat CPT1A share common Km values for their substrates but differ in their sensitivity to malonyl-CoA inhibition. Using chimeras between rat CPT1A and pig CPT1A, we show that the C-terminal region behaves as a single domain, which dictates the overall malonyl-CoA sensitivity of this enzyme. Using deletion mutation analysis, we show that malonyl-CoA sensitivity also depends on the interaction of this single domain with the first 18 N-terminal amino acid residues. Pig and rat CPT1A have different malonyl-CoA sensitivity, because the first 18 N-terminal amino acids interact differently with the C-terminal domain. Pig CPT1B is a protein of 772 amino acids that shares extensive sequence identity with CPT1B. Expressed in Pichia pastoris, pig CPT1B shows kinetic characteristics similar to those of the CPT1A isotype. CPT1 and CPT2 enzymes are components of the CPT shuttle system. This system is tightly regulated by malonyl-CoA. Because of its ability to inhibit fatty acid synthase, C75 is able to increase malonyl-CoA intracellular levels. Paradoxically it also activates β-oxidation. To identify the exact target of C75 within the CPT system, we expressed CPT1 and CPT2 in Pichia pastoris. We show that C75 acts on recombinant CPT1A, CPT1B and CPT2.