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La globalización ha generado redes de distribución más complejas y fragmentadas, que conllevan una mayor probabilidad de introducción y reemergencia de microorganismos alterantes y patógenos en alimentos. Tradicionalmente, los agentes microbiológicos patógenos y alterantes en alimentos se han identificado mediante métodos de aislamiento, y consecuente caracterización morfológica, fisiológica y bioquímica. Estos métodos son tediosos y precisan varios días para ser completados, por lo que no responden a las nuevas necesidades de una industria alimentaria global. Los nuevos desafíos en el control de la inocuidad alimentaria requieren de métodos de detección y caracterización precoz, no solo para reducir la morbilidad y la mortalidad relativas a las ETA, sino también para evitar pérdidas económicas tanto al productor como al distribuidor de alimentos. Por tanto, el principal objetivo de esta Tesis Doctoral ha sido desarrollar y optimizar protocolos de identificación y caracterización de bacterias alterantes y patógenos en alimentos, usando tecnologías de última generación (ómicas). Específicamente, el trabajo se ha centrado en el género Enterococcus debido a su naturaleza dual, y a un patógeno emergente como Raoultella ornithinolytica. Para ello se desarrollaron metodologías analíticas sensibles y precisas, basadas en la genómica y en la proteómica.

En este trabajo se propone realizar por primera vez en Argentina un análisis proteómico por espectrometría de masas de una falange humana con una alteración macroscópica proveniente de un conjunto arqueológico recuperado en el sitio Cueva de Plaza (Chubut, Argentina). Se presentan dos métodos de extracción de proteínas de restos óseos arqueológicos para ser analizadas con un espectrómetro de masas. Ambos métodos permitieron obtener resultados no excluyentes con información parcialmente redundante y complementaria. Se identificaron proteínas como colágenos, fibronectina, proteínas de cartílago, de hueso, de músculo y de sangre y conjuntos de proteínas asociadas al sistema inmune y a otras vías metabólicas, en menor cantidad. Las proteínas identificadas son consistentes con la existencia de un trauma en proceso de reparación en el elemento óseo analizado., In this work a proteomic analysis by mass spectrometry of a human phalanx with a macroscopic alteration found in Cueva de Plaza archaeological site (Chubut, Argentina) is proposed, representing the first time that such analysis has been carried out on archaeological materials in Argentina. Two methods of protein extraction from archaeological bone remains are presented and their results were analyzed with a mass spectrometer. Both methods yielded non-exclusive, partially redundant and complementary results. Collagens, fibronectin, proteins from cartilage, bone, muscle and blood and, to a lesser extent, proteins associated with the immune system and other metabolic pathways were identified. These proteins are consistent with the existence of a healing trauma process in the analyzed bone element., Asociación de Antropología Biológica Argentina

ilustraciones, fotografías, gráficas, tablas La sequía es uno de los factores ambientales que más limita el crecimiento de las plantas y se prevé que el cambio climático reduzca la disponibilidad de agua en varias zonas productivas. En esta investigación se caracterizó el efecto de la severidad del estrés hídrico en la recuperación, respuesta bioquímica, expresión de proteínas y rendimiento por tamaño de tubérculos en dos etapas de desarrollo de la papa var. Diacol Capiro (DC). Plantas de papa en etapa de diferenciación de tubérculos (DT) y máxima tuberización (MT) se les suspendió el riego hasta alcanzar estrés hídrico Leve (EL), Moderado (EM) y Severo (ES); además se contó con plantas control bien regadas (BR). Cuando las plantas alcanzaron cada nivel de estrés y luego de 24 horas de restablecer el riego (rehidratación), se midió la actividad de enzimas antioxidantes del ciclo Ascorbato-Glutatión y la concentración de pigmentos fotosintéticos, prolina, malondialdehído (MDA), flavonoides y almidón. En los tres niveles de estrés hídrico, tanto en MT como en DT se determinó concentración de nutrientes en savia y en tejido foliar, y en DT se determinaron los perfiles proteómicos y se identificaron las proteínas que presentaron mayor correlación con el potencial hídrico. Se encontró que la planta de papa var. DC durante ES incrementa en hoja la actividad de enzimas antioxidantes y la concentración de MDA, carotenoides, prolina y almidón, como una respuesta para proteger el aparato fotosintético. La capacidad de recuperación bioquímica de la planta fue mayor en MT que en DT, debido a la menor duración del estrés en MT (7 días) en comparación con DT (21 días). En la savia de la hoja se incrementó la concentración de K+ y NO3- en plantas con estrés hídrico en comparación con BR, lo que se asoció a procesos de ajuste osmótico. En tejido foliar se observó un incrementó en la concentración de N en plantas con estrés con respecto a plantas bien regadas y estuvo relacionado con la concentración de clorofilas, carotenoides y actividad de enzimas antioxidantes. El ES redujo el número y peso de tubérculos grandes y aumentó el de tubérculos pequeños. Finalmente se encontró que las proteínas Rubisco activasa, la subunidad IV B del centro de reacción del PSI y proteína estabilizadora de manganeso incrementaron con la severidad del estrés, mientras que las tres posibles isoformas de la subunidad I de Citrocromo oxidadasa (RY290, RY289 y RY285) se redujeron. Nuestros resultados brindan un entendimiento detallado de las respuestas bioquímicas y la reducción del rendimiento por tamaño de tubérculo en plantas de papa a medida que se incrementa la severidad del estrés hídrico. (Texto tomado de la fuente). Drought is one of the environmental factors that most limits plant growth and climate change is expected to reduce water availability in several productive areas. In this research, the effect of the severity of water stress on the biochemical response, protein expression and yield by tuber size in two stages of development of potato var. Diacol Capiro (DC). Potato plants in the stage of tuber differentiation (DT) and maximum tuberization (MT) were suspended from irrigation until they reached Mild (EL), Moderate (EM) and Severe (ES) water stress; In addition, there were well-watered control plants (BR). When the plants reached each stress level and after 24 hour of restoring irrigation (rehydration), the activity of antioxidant enzymes of the Ascorbate-Glutathione cycle and the concentration of photosynthetic pigments, proline, malondialdehyde (MDA), flavonoids and starch were measured. In the three levels of water stress, both in MT and in DT, the concentration of nutrients in sap and leaf tissue is prolonged, and in DT the proteomic profiles were determined and the proteins that appeared greater conformation with the water potential were identified. It was found that the potato plant var. DC during ES increases the activity of antioxidant enzymes and the concentration of MDA, carotenoids, proline, and starch in the leaf, as a response to protect the photosynthetic apparatus. The biochemical recovery capacity of the plant was higher in MT than in DT, due to the shorter duration of stress in MT (7 days) compared to DT (21 days). In the leaf sap, the concentration of K+ and NO3- increased in plants with water stress compared to BR, which was associated with osmotic adjustment processes. In leaf tissue, an increase in N concentration was decreased in stressed plants with respect to BR and was related to the concentration of chlorophylls, carotenoids, and antioxidant enzyme activity. ES reduced the number and yield of large tubers and increased that of small tubers. Finally, it was found that the proteins Rubisco activase, subunit IV B of the PSI reaction center and manganese stabilizer protein increased with the severity of stress, while the three possible isoforms of subunit I of Cytrochrome oxidadase (RY290, RY289 and RY285) is reduced. Our results provide a detailed understanding of the biochemical responses and yield reduction per tuber size in potato plants as the severity of water stress increases. MINCIENCIAS (antes COLCIENCIAS) es el Ministerio de Ciencia, Tecnología e Innovación de acuerdo a la Constitución y la ley Colombiana, como organismo para la gestión de la administración pública, rector del sector y del Sistema Nacional Ciencia, Tecnología e Innovación (SNCTI), encargado de formular, orientar, dirigir, coordinar, ejecutar, implementar y controlar la política del Estado en esta materia, teniendo concordancia con los planes y programas de desarrollo, de acuerdo a la presente Ley. AGROSAVIA es la corporación colombiana de investigación agropecuaria, entidad pública descentralizada de participación mixta sin ánimo de lucro, de carácter científico y técnico, cuyo propósito es trabajar en la generación del conocimiento científico y el desarrollo tecnológico agropecuario a través de la investigación científica, la adaptación de tecnologías, la transferencia y la asesoría con el fin de mejorar la competitividad de la producción, la equidad en la distribución de los beneficios de la tecnología, la sostenibilidad en el uso de los recursos naturales, el fortalecimiento de la capacidad científica y tecnológica de Colombia y, contribuir a elevar la calidad de vida de la población. Incluye anexos Maestría Magíster en Ciencias Agrarias Fisiología de cultivos Ciencias Agronómicas.Sede Bogotá

ilutraciones, graficas Aunque la astrogliosis está relacionada con eventos neuroprotectores; su neurotoxicidad se ha correlacionado con enfermedades neurodegenerativas y otros desórdenes (Sofroniew & Vinters, 2010). Lo que ha aumentado la atención en el estudio de estas células. Sin embargo, los procesos de señalización y actividad metabólica relacionados con la neurotoxicidad aún son poco conocidos (González et al., 2020; Sofroniew, 2015), por lo que se han empleado modelos metabólicos a escala genómica (GEM) de astrocito para estudiar estas respuestas. Por lo tanto, en este trabajo se hace la contextualización de un GEM de astrocito humano integrando datos multiomicos con una nueva aproximación en combinación con el algoritmo iMAT, permitiendo incluir información de diversos procesos biológicos en el modelo (Karahalil, 2016; Vivek-Ananth & Samal, 2016). En consecuencia, el GEM resultante presenta una mayor cobertura del metabolismo y una capacidad predictiva superior en los escenarios simulados coincidiendo con lo reportado en la literatura. Además, durante la reconstrucción de este modelo se generaron dos algoritmos, uno permite integrar el proteoma y transcriptoma, mientras el otro corrige los desbalances estequiométricos presentes en el modelo. Finalmente, este modelo tiene el potencial de acelerar el estudio de la astrogliosis, permitiendo descifrar la relación entre el metabolismo del astrocito y la aparición de enfermedades neurodegenerativas mediante la generación de hipótesis y la predicción del desempeño de fármacos. (Texto tomado de la fuente) Even though astrogliosis is related to neuroprotective events; its neurotoxicity has been correlated with neurodegenerative diseases and other disorders (Sofroniew & Vinters, 2010). Which have shifted the attention towards the study of these cells. However, the related signaling processes and metabolic activity related to the neurotoxicity are still poorly known (González et al., 2020; Sofroniew, 2015), thus genome-scale metabolic models (GEMs) of astrocytes have been used to study this response, as they allow modelling metabolic interac- tions (Martín-Jiménez et al., 2017; Osorio et al., 2020). Therefore, in this work an astrocyte’s GEM is contextualized by integrating multi-omic data with a new approach in combination with the algorithm iMAT, which allows including information from various biological processes in the model (Karahalil, 2016; Vivek-Ananth & Samal, 2016). Thus, the resulting GEM presets a greater coverage of the metabolic net- work and a higher predictive capability in the simulated scenarios, which is in line with the reported data in the literature. In addition, during the reconstruction of this model two algorithms were generated, one integrates the proteome and transcriptome together, meanwhile the other corrects the stoichiometric imbalances present in the model. Finally, this model has the potential to accelerate the study of astrogliosis allowing to decipher the relationship between astrocyte metabolism and the appearance of neurodegenerative diseases by generating hypotheses and predicting drug performance. Maestría Magíster en Bioinformática Biología de sistemas

Trabajo de fin de Grado. Grado en Estadística. Curso académico 2021-2022., [ES]El sistema inmune es una red de órganos y células compleja, perfectamente integrada y coordinada a nivel corporal. Su desregulación da lugar a enfermedades como las leucemias. En este caso, la prevalencia de la leucemia linfocítica crónica (LLC) y la heterogeneidad de la enfermedad hace necesaria la búsqueda de nuevas perspectivas de análisis, como la que plantea la proteómica. Esta ciencia permite obtener una caracterización funcional de las proteínas junto con sus relaciones estructurales, y así conseguir un análisis más preciso de una patología clínica en concreto (Mojica Ph.D et al., 2003). En este estudio se trabaja con muestras de amígdalas de donde se obtienen los diferentes estadios del linfocito B y muestras de sangre de LLC con el objetivo de desarrollar flujos de trabajo sistemáticos para su caracterización proteómica en comparación con su contrapartida de células B normales y sanas.

[Resumen] El cáncer de ovario es una de las neoplasias malignas ginecológicas más letales a nivel mundial. Puesto que no se dispone de métodos para su detección precoz, la mayoría de las pacientes son diagnosticadas en estadíos avanzados (cuando ya existe metástasis), y los tratamientos actuales no son eficaces. Existe, por tanto, la necesidad urgente de investigar las causas subyacentes a la enfermedad, descubrir biomarcadores tempranos y desarrollar nuevos fármacos. Los exosomas son un tipo de vesículas extracelulares caracterizadas por presentar un contenido molecular muy diverso que pueden transferir a células adyacentes o distantes, desempeñando un papel clave en la regulación de multitud de procesos fisiológicos o patológicos. En distintos tipos de cáncer, entre los que se incluye el de ovario, se ha visto que las células cancerosas liberan más exosomas que las sanas y que transportan moléculas oncogénicas que participan en la progresión tumoral. Además, se encuentran altas concentraciones de exosomas en varios fluidos corporales, por lo que podrían ser útiles en biopsia líquida. Por otra parte, la proteína HMGB1 es foco de atención en la investigación del cáncer de ovario, se encuentra sobreexpresada en células tumorales ováricas y contribuye a una gran variedad de las características distintivas del cáncer. Bajo este contexto, el presente trabajo se centra en analizar la influencia de HMGB1 en el contenido proteico de exosomas derivados de células de cáncer de ovario. [Resumo] O cancro de ovario é unha das neoplasias malignas xinecolóxicas máis letais a nivel mundial. Debido a que non se dispón de métodos para a súa detección precoz, a maioría das pacientes son diagnosticadas en estadíos avanzados (cando xa existe metástases), e os tratamentos actuais non son eficaces. Existe, por tanto, a necesidade urxente de investigar as causas subxacentes á enfermidade, descubrir biomarcadores temperáns e desenvolver novos fármacos. Os exosomas son un tipo de vesículas extracelulares caracterizadas por presentar un contido molecular moi diverso que poden transferir a células adxacentes ou distantes, desempeñando un papel crave na regulación de multitude de procesos fisiolóxicos ou patolóxicos. En distintos tipos de cancro, entre os que se inclúe o de ovario, viuse que as células cancerosas liberan máis exosomas que as sas e que transportan moléculas oncoxénicas que participan na progresión tumoral. Ademais, atópanse altas concentracións de exosomas en varios fluídos corporais, polo que poderían ser útiles en biopsia líquida. Por outra banda, a proteína HMGB1 é foco de atención na investigación do cancro de ovario, atópase sobreexpresada en células tumorales ováricas e contribúe a unha gran variedade das características distintivas do cancro. Baixo este contexto, o presente traballo céntrase en analizar a influencia de HMGB1 no contido proteico de exosomas derivados de células de cancro de ovario. [Abstract] Ovarian cancer is one of the most lethal gynecological malignancies worldwide. Since there are no methods for early detection, most patients are diagnosed in advanced stages (when metastases already exist), and current treatments are not effective. There is therefore an urgent need to investigate the underlying causes of the disease, discover early biomarkers and develop new drugs. Exosomes are a type of extracellular vesicles characterized by having a very diverse molecular content that can be transferred to adjacent or distant cells, playing a key role in the regulation of many physiological or pathological processes. In different types of cancer, including ovarian cancer, it has been observed that cancer cells release more exosomes than healthy cells and that they transport oncogenic molecules that participate in tumor progression. Furthermore, high concentrations of exosomes are found in various body fluids, thus they could be useful in liquid biopsy. On the other hand, the HMGB1 protein is a focus of attention in ovarian cancer research, it is overexpressed in ovarian tumor cells and contributes to a wide variety of hallmarks of cancer. In this context, the present work focuses on analyzing the influence of HMGB1 on the protein content of exosomes derived from ovarian cancer cells. Traballo fin de mestrado (UDC.CIE). Bioloxía molecular, celular e xenética. Curso 2021/2022

Una qüestió fonamental per al benestar és mantenir els animals clínicament sans, sense estrès, i correctament alimentats, sobretot durant la cria, per a millorar la producció i la qualitat dels productes derivats. Cal tenir en compte que l'estat nutricional i metabòlic de la mare és determinant per al creixement fetal, i que alteracions de la dieta canvien l'homeòstasi metabòlica de l'organisme. La restricció del creixement intrauterí (IUGR) es caracteritza per un dèficit en el creixement i en el pes a causa de la manca de nutrients, oxigen o alteracions a la placenta que provoquen manca de components essencials per al desenvolupament. A causa de la IUGR, el fetus adapta el seu metabolisme i fisiologia per sobreviure. La principal adaptació és el "brain-sparing", que prioritza el desenvolupament cerebral, però no en garanteix el desenvolupament normal ni la funció. Alhora, hi ha altres alteracions sistèmiques que afecten el metabolisme energètic, induint així l'aparició del "thrifty phenotype", responsable d'alteracions metabòliques que es prolonguen fins a l'edat adulta, augmentant la incidència de malalties metabòliques. Aquest treball consta de 4 estudis on es van analitzar les conseqüències de diferents canvis nutricionals aplicats a la mare gestant o directament sobre les cries. En tres es va utilitzar un model porcí de IUGR prestant especial atenció al sistema nerviós, on es va avaluar: l'efecte de la suplementació de la dieta materna amb l'antioxidant hidroxitirosol (HTX) a diferents edats prenatal i postnatal; l'efecte produït per la IUGR al cervell de fetus de 100 dies de gestació dels quals les seves mares havien estat tractades amb HTX; i l'efecte a llarg termini de la IUGR quan s'administra una dieta alta en greixos (HFD) als individus ja adults. Al primer estudi, es va analitzar el perfil de neurotransmissors en diverses àrees cerebrals, així com la morfologia de l'hipocamp mitjançant marcadors moleculars de neurones immadures i madures. Els resultats van mostrar que els efectes de la suplementació materna amb HTX estan restringits al període prenatal, ja que només es van observar canvis en fetus de 100 dies, i no es van observar efectes del HTX en porcs d'un mes i sis mesos, indicant que es necessita la presència contínua del HTX per a mantenir els seus efectes al cervell. La restricció calòrica a partir del segon trimestre de gestació afecta el desenvolupament fetal i indueix un menor pes en néixer, sent un bon model animal de IUGR. Els resultats del segon estudi van indicar que la IUGR modificava el perfil de neurotransmissors als fetus, així com el desenvolupament de l'hipocamp. La suplementació materna amb HTX va revertir aquests canvis, fent ambdues característiques més semblants als fetus no afectats per la IUGR. En tercer lloc, els animals afectats per la IUGR durant la gestació, quan tenien un any van respondre diferent a una HFD en comparació als animals control a causa del "thrifty phenotype": va augmentar la concentració d'aminoàcids lliures en plasma, però no la dels lípids. A la majoria d'àrees cerebrals va augmentar la concentració de serotonina, a diferència dels animals no afectats per la IUGR. En quant al proteoma de l'hipocamp, encara que la HFD va modificar diverses pathways de manera similar, en el grup IUGR també va afectar al splicing del mRNA, al transport vesicular i a la via mTOR. Finalment, es va avaluar l'efecte de la suplementació amb triptòfan a la dieta de vedells lactants, així com la seva funcionalitat per a millorar-ne el creixement i el desenvolupament. Els resultats van mostrar que la suplementació amb triptòfan no afectava al rendiment ni al comportament dels vedells durant el procés de deslletament, i tampoc va provocar canvis metabòlics. Una cuestión fundamental para el bienestar es mantener a los animales clínicamente sanos, sin estrés, y correctamente alimentados, sobre todo durante la cría, para mejorar la producción y la calidad de los productos derivados. Hay que tener en cuenta que el estado nutricional y metabólico de la madre es determinante para el crecimiento fetal, y que alteraciones en la dieta cambian la homeostasis metabólica del organismo. La restricción del crecimiento intrauterino (IUGR) se caracteriza por un déficit en el crecimiento y en el peso debido a la falta de nutrientes, oxígeno o alteraciones en la placenta que provocan carencia de componentes esenciales para el desarrollo. Debido a la IUGR, el feto adapta su metabolismo y fisiología para sobrevivir. La principal adaptación es el "brain-sparing", que prioriza el desarrollo cerebral, sin embargo, no garantiza su desarrollo normal ni su función. A su vez, hay otras alteraciones sistémicas que afectan el metabolismo energético, induciendo así la aparición del "thrifty phenotype", responsable de alteraciones metabólicas que se prolongan hasta la edad adulta, aumentando la incidencia de enfermedades metabólicas. Este trabajo consta de 4 estudios donde se analizaron las consecuencias de distintos cambios nutricionales aplicados a las madres gestantes o directamente sobre las crías. En tres de ellos se utilizó un modelo porcino de IUGR prestando especial atención al sistema nervioso, donde se evaluaron: el efecto de la suplementación de la dieta materna con el antioxidante hidroxitirosol (HTX) a diferentes edades prenatal y postnatal; el efecto producido por la IUGR en el cerebro de fetos de 100 días de gestación cuyas madres habían sido tratadas con HTX; y el efecto a largo plazo de la IUGR cuando se administra una dieta alta en grasas (HFD) a individuos ya adultos. En el primer estudio, se analizó el perfil de neurotransmisores en diversas áreas cerebrales, así como la morfología del hipocampo mediante marcadores moleculares de neuronas inmaduras y maduras. Los resultados mostraron que los efectos de la suplementación materna con HTX están restringidos al período prenatal, ya que solo se observaron cambios en fetos de 100 días, y no se observaron efectos del HTX en cerdos de 1 mes y 6 meses de edad, indicando que se necesita la presencia continua del HTX para mantener sus efectos en el cerebro. La restricción calórica a partir del segundo trimestre de gestación afecta al desarrollo fetal e induce menor peso al nacer, siendo un buen modelo animal de IUGR. Los resultados del segundo estudio indicaron que la IUGR modificó el perfil de neurotransmisores en los fetos, así como el desarrollo del hipocampo. La suplementación materna con HTX revertió estos cambios, haciendo ambas características más similares a los fetos no afectados por la IUGR. En tercer lugar, los animales afectados por la IUGR durante la gestación, cuando tenían un año respondieron diferente a una HFD en comparación a los animales control debido al "thrifty phenotype": aumentó la concentración de aminoácidos libres en plasma, pero no la de los lípidos. En la mayoría de las áreas cerebrales aumentó la concentración de serotonina, a diferencia de los animales no afectados por la IUGR. En cuanto al proteoma del hipocampo, aunque la HFD modificó varios pathways de manera similar, en el grupo IUGR también afectó al splicing del mRNA, al transporte vesicular y a la vía mTOR. Finalmente, se evaluó el efecto de la suplementación con triptófano en la dieta de terneros lactantes, así como su funcionalidad para mejorar su crecimiento y desarrollo. Los resultados mostraron que la suplementación con triptófano no afectaba al rendimiento ni al comportamiento de los terneros durante el proceso de destete, y tampoco provocó cambios metabólicos. A fundamental issue for animal welfare is to keep them clinically healthy, stress-free, and properly fed, especially during rearing, to improve production and quality of derived products. It must be considered that the nutritional and metabolic state of the mother is decisive for foetal growth, and that alterations in the diet change the metabolic homeostasis of the organism. Intrauterine growth restriction (IUGR) is characterized by a deficit in growth and weight due to a lack of nutrients, oxygen or an alteration in the placenta that causes a lack of essential components for development. Due to IUGR the foetus adapts its metabolism and physiology to survive. The main adaptation is "brain-sparing", which prioritizes brain development, however, it does not guarantee its normal development or function. In turn, there are other systemic alterations that affect energy metabolism, thus inducing the appearance of the "thrifty phenotype", responsible for metabolic alterations that last into adulthood, increasing the incidence of metabolic diseases. This work consists of 4 studies in which the consequences of different nutritional changes are analysed, whether applied to the pregnant mother or directly to the offspring. In three of them, a porcine IUGR model was used, paying special attention to the nervous system, where the following were evaluated: the effect of supplementing the maternal diet with the antioxidant hydroxytyrosol (HTX) at different prenatal and postnatal ages; the effect produced by IUGR in the brain of foetuses of 100 days of gestation whose mothers had been treated with HTX; and the long-term effect of IUGR when a high-fat diet (HFD) is administered to adult individuals. In the first study, the neurotransmitter profile in various brain areas was analysed, as well as the morphology of the hippocampus using molecular markers of immature and mature neurons. The results showed that the effects of maternal supplementation with HTX are restricted to the prenatal period, since changes were only observed in foetuses of 100 days, and no effects of HTX were observed in pigs of 1 month and 6 months of age, indicating that the continued presence of HTX is needed to maintain its effects in the brain. Caloric restriction from the second trimester of gestation affects foetal development and induces lower birth weight in new-borns, being a good animal model of IUGR. The results of the second study indicated that IUGR modified the neurotransmitter profile in foetuses, as well as the development of the hippocampus. Maternal HTX supplementation reversed these changes, making both characteristics more like foetuses unaffected by IUGR. Third, animals affected by IUGR during gestation, when they were one year old, responded differently to an HFD compared to the control animals due to the "thrifty phenotype": the concentration of free amino acids in plasma increased, but not that of the lipids. In most areas of the brain, the concentration of serotonin increased, unlike in animals not affected by IUGR. Regarding the hippocampal proteome, although HFD modified several pathways in a similar way, in the IUGR group it also affected mRNA splicing, vesicular transport and mTOR pathway. Finally, the effect of tryptophan supplementation in the diet of suckling calves, as well as its functionality to improve their growth and development, was evaluated. The results showed that tryptophan supplementation did not affect the performance or behaviour of the calves during the weaning process, nor did it cause metabolic changes.

El constante incremento de la prevalencia de la obesidad a nivel mundial, que está alcanzando dimensiones epidémicas, constituye un grave problema de salud pública, debido al desarrollo de comorbilidades graves asociadas a esta patología, como la resistencia a insulina (IR), diabetes tipo 2 (T2D), enfermedad de hígado graso no alcohólico (NAFLD), dislipemias, enfermedades cardiovasculares, asma, hipertensión arterial, hipercolesterolemia, accidentes cerebrovasculares, artritis, enfermedades neurodegenerativas e incluso ciertos tipos de cáncer. Durante el desarrollo de la obesidad, ocurre un desequilibrio entre el gasto energético y la ingesta calórica producido por múltiples factores complejos y variables entre los que encuentran el sexo, la edad, el ambiente socio-cultural, una alimentación descontrolada –asociada, o no, a procesos emocionales–, y la actividad física. Independientemente del/los factor/es que provocan el desarrollo de obesidad, la disfunción del tejido adiposo subyace como causa biológica principal asociada a esta enfermedad. El tejido adiposo es un órgano de gran complejidad, siendo esencial para el mantenimiento de la homeostasis energética del organismo por su papel como responsable del almacenamiento del exceso de energía y su posterior movilización según demandas energéticas. Además, tras el descubrimiento de la leptina en 1994, el tejido adiposo pasó a ser reconocido como un órgano endocrino productor de hormonas, citoquinas, factores de crecimiento y factores vasoactivos, denominados en su conjunto como adipoquinas, que regulan desde la homeostasis energética, hasta la ingesta, la inflamación, la reproducción o el crecimiento celular. Si nos centramos en el tejido adiposo blanco (de aquí en adelante, denominado tejido adiposo), se distribuye fundamentalmente en dos localizaciones principales: depósito subcutáneo (SC) y depósito omental (OM), con diferencias celulares, fisiológicas, metabólicas y funcionales. Por ello, hay que destacar la importancia del estudio de las características de cada depósito del tejido adiposo ya que su distribución −independientemente de la cantidad de grasa corporal total− es un factor de riesgo para el desarrollo de las comorbilidades de la obesidad. Así, el incremento del depósito OM se asocia con un mayor riesgo cardiovascular, mientras que la acumulación de grasa en el depósito SC se relaciona con un perfil protector desde el punto de vista metabólico. No obstante, la remodelación y disfunción de cada depósito también puede contribuir a la fisiopatología de la enfermedad metabólica relacionada con la obesidad. En concreto, las alteraciones en la adipogénesis del depósito SC se han relacionado con la falta de expansibilidad de dicho tejido y, con ello, al desarrollo de las complicaciones metabólicas asociadas a la obesidad. En este contexto, el exceso de energía existente en condiciones de obesidad conlleva a una expansión patológica del tejido adiposo que conduce a otros procesos patogénicos en este tejido, entre los que se encuentran una desregulación del metabolismo glucídico y lipídico, aparición de estrés oxidativo y del retículo endoplasmático y un estado inflamatorio. Además, cuando se alcanza el límite de expansión del tejido adiposo, no es posible acumular más lípidos en este órgano, induciendo el depósito ectópico de grasa en otros tejidos involucrados en el mantenimiento de la homeostasis de la glucosa, un evento comúnmente definido como lipotoxicidad. La acumulación excesiva de lípidos en tejidos ectópicos conduce, en gran medida, al desarrollo de resistencia a insulina, siendo probablemente el contribuyente principal −junto a la inflamación− de la aparición de complicaciones metabólicas en los sujetos con obesidad. A pesar de las múltiples evidencias que se han encontrado sobre la relación entre la disfunción del tejido adiposo y la aparición de enfermedades metabólicas –como la obesidad, la resistencia a insulina y la diabetes tipo 2–, aún se desconocen muchos de los mecanismos subyacentes y rutas biológicas que se alteran en el tejido adiposo y promueven el desarrollo de estas condiciones patológicas. Los últimos avances en la identificación de marcadores de disfunción del tejido adiposo en obesidad y su asociación con enfermedades metabólicas han sido posibles gracias, en parte, a las técnicas ómicas, incluyendo estudios genómicos, transcriptómicos y proteómicos en modelos animales y humanos en condiciones de obesidad. En el grupo donde se ha desarrollado esta Tesis Doctoral, se han llevado a cabo varios estudios proteómicos de tejido adiposo y de sus principales componentes: fracción del estroma vascular, precursores y adipocitos que se alteran en obesidad con o sin resistencia a insulina (IR) o diabetes tipo 2 (T2D) o también, en repuesta a la pérdida de peso tras cirugía bariátrica. Sin embargo, a pesar de los avances realizados en la identificación de nuevos marcadores de la disfunción del tejido adiposo en obesidad, son necesarios nuevos estudios que estén centrados no solo en los posibles cambios cuantitativos que puedan sufrir las proteínas, sino también en su localización y, especialmente, en el estado funcional/disfuncional de dichas proteínas. En este sentido, el estudio de las modificaciones postraduccionales de las proteínas puede proporcionar vías adicionales de identificación de biomarcadores potenciales que puedan ser útiles para el establecimiento de nuevas alternativas biomédicas. Actualmente, se acepta que la diferencia en complejidad que existe entre el genoma y el proteoma se debe, en gran parte, a las modificaciones postraduccionales (MPTs) que sufren las proteínas, ya que de los 25.000 genes aproximadamente que tiene el ser humano, se codifica un número final estimado de 1 millón de proteínas. La gran mayoría de proteínas están reguladas por MPTs (fosforilación, acetilación, carbonilación…) de las que poco se sabe en el tejido adiposo en obesidad. Por ello, esta Tesis Doctoral ha tenido como objetivo explorar, identificar y caracterizar nuevos posibles marcadores del tejido adiposo regulados funcionalmente por modificaciones postraduccionales, una reversible –acetilación− y otra, irreversible – carbonilación−, e implicados en el desarrollo y progresión de enfermedad metabólica (IR y T2D) en condiciones de obesidad. En concreto, la acetilación es una de las MPTs que más se ha relacionado con la obesidad, diabetes y cáncer, así como con enfermedades cardiovasculares y neurodegenerativas. En esta Tesis Doctoral se describe, por primera vez, el perfil de proteínas acetiladas (acetiloma) del tejido adiposo humano de los dos principales depósitos (subcutáneo y omental) bajo condiciones fisiológicas (individuos delgados) y en condiciones patológicas (obesidad y resistencia a insulina). Estos estudios muestran que el 25% del proteoma total del tejido adiposo humano está regulado por acetilación, demostrando la gran importancia que tiene esta MPT en el funcionamiento de este órgano. Al analizar el perfil de acetilación de proteínas específicas en los distintos grupos de sujetos estudiados, se observó que la obesidad y la resistencia a insulina afectan de manera depósito-dependiente a la acetilación de proteínas en el tejido adiposo. La reducción total del estado de acetilación, así como la alteración de los niveles de acetilación en enzimas clave del metabolismo energético observadas entre individuos delgados y obesos con normoglucemia (Ob-NG) o resistencia a insulina (Ob-IR), podrían contribuir a la disfunción de los adipocitos y al desarrollo de enfermedades metabólicas asociadas a la obesidad. Como se ha mencionado, el análisis del acetiloma mostró la existencia de diferentes patrones de acetilación entre los dos depósitos principales de tejido adiposo, SC y OM, destacando la complejidad molecular de este tejido. En concreto, este análisis mostró cambios en la acetilación de la chaperona lipídica y adipoquina, FABP4, en el depósito SC en relación con la resistencia a la insulina, revelando así un posible biomarcador de expansión disfuncional específica de depósito. Estudios previos han demostrado que FABP4 podría ser un marcador de resistencia a insulina debido a sus altos niveles circulantes en individuos obesos con resistencia a insulina. FABP4 interviene en la captación, almacenamiento y movilización de ácidos grasos, además de participar en la regulación transcripcional mediada por lípidos en el núcleo y ejercer una acción señalizadora como adipoquina. La alteración de FABP4 en obesidad podría relacionarse con la acumulación alterada de lípidos que ocurre en el tejido adiposo en estas condiciones, debido a su papel en la modulación del metabolismo lipídico en los adipocitos. Sin embargo, se desconoce si esta función podría estar modulada por acetilación, lo que podría ayudar a definir realmente a FABP4 como biomarcador de estas patologías. Nuestros resultados indicaron que los cambios en el perfil de acetilación de FABP4 regulan su ubicación celular y alteran las funciones intracelulares de FABP4 (control de adipogénesis y de las rutas lipolítica/lipogénica), indicando la existencia de una regulación cualitativa, más allá de la cantidad de proteína disponible, que impacta en su función. Por tanto, no solo la proteína en sí, sino también su estado de acetilación, podrían constituir dianas terapéuticas en obesidad y resistencia a insulina. or otra parte, en la patogénesis de la obesidad, resistencia a insulina y diabetes tipo 2, juega un papel fundamental el estrés oxidativo, el cual se produce como consecuencia de un acúmulo citotóxico de especies reactivas de oxígeno (ROS). El exceso de ROS provoca daño celular como consecuencia de la inducción de procesos como la peroxidación de lípidos o la carbonilación de proteínas. Así, en esta Tesis Doctoral hemos explorado este último proceso, describiendo, por primera vez, el perfil diferencial de proteínas carboniladas (carboniloma) del tejido adiposo humano de los dos depósitos de grasa, subcutáneo y omental, en sujetos con obesidad y diferente grado de sensibilidad a insulina –sujetos con obesidad y normoglucemia (Ob-NG), con obesidad y resistencia a insulina (Ob-IR) o con obesidad y diabetes tipo 2 (Ob-T2D)–. Nuestros resultados proteómicos evidenciaron diferencias específicas de depósito en el carboniloma del tejido adiposo, proporcionando nuevos conocimientos sobre la participación del tejido adiposo omental en el desarrollo de resistencia a insulina asociada a la obesidad. En concreto, nuestros resultados proteómicos mostraron un patrón de carbonilación diferencial de la transferrina entre los sujetos Ob-NG vs. Ob-IR y Ob-T2D en el depósito SC y OM, encontrando un aumento significativo de la transferrina carbonilada en pacientes Ob-IR vs. Ob-NG en el depósito OM. Adicionalmente, debido a la relación entre el metabolismo glucídico y del hierro analizamos la homeostasis del hierro en el tejido adiposo de nuestros sujetos de estudio, no encontrando diferencias significativas en el contenido de hierro total entre los grupos. Sin embargo, se encontraron cambios en la distribución del receptor de transferrina en adipocitos condiciones de exposición al ambiente existente en diabetes (i.e., exposición a medios condicionados procedentes de pacientes que desarrollan T2D) que podrían asociarse a una alteración en su unión con la transferrina. También identificamos los sitios potenciales de interacción entre transferrina y su receptor susceptibles de modificar dicha interacción. Así, nuestros estudios mostraron que la internalización del receptor de transferrina se altera en respuesta a un ambiente inductor de T2D, lo que sugiere que en el desarrollo de T2D podría contribuir, al menos en parte, la carbonilación de un residuo específico de la transferrina, P74, modificando sus propiedades electrostáticas y, por tanto, comprometiendo su unión con su receptor. En conjunto, estos resultados muestran la posible relación entre la carbonilación de proteínas y la desregulación de la homeostasis del hierro que tiene lugar en condiciones de obesidad y enfermedad metabólica. Por último, los estudios proteómicos en general, y de MPTs en particular, tienen limitaciones en cuanto a la falta de herramientas (por ejemplo, anticuerpos específicos de residuos, o inducción de MPTs en residuos específicos de proteínas concretas) que permitan profundizar para el diseño de estrategias de prevención o terapéuticas. En este contexto, la nanomedicina aparece como una línea de trabajo futuro para el diseño de estas estrategias, una línea que aún no ha sido muy explorada en relación al tejido adiposo en particular. Existe, por tanto, la necesidad de buscar nuevas estrategias metodológicas en este ámbito, tales como el uso de los quantum dots. En concreto, ya hay quantum dots conjugadas con proteínas comerciales (Qdot™ Streptavidin Sampler Kit, por ejemplo) para aplicaciones como Western blot, citometría de flujo, adquisición de imágenes por microscopía confocal e incluso en flujos de trabajo de purificación para lograr el fraccionamiento deseado. En esta Tesis Doctoral se llevó a cabo, por primera vez, un estudio comparativo in vitro totalmente paralelo del comportamiento de dos tipos de quantum dots, CQDs (carbon-based quantum dots) y SQDs (semiconductor quantum dots) en preadipocitos, como precursor del tipo celular maduro del tejido adiposo y por tanto, elemento fundamental en la expansión de dicho tejido. Nuestros resultados mostraron que las CQDs podrían ser una buena herramienta para la caracterización y posible aplicación biomédica de proteínas de interés en condiciones de obesidad y resistencia a insulina, como FABP4 o transferrina, las cuales son reguladas funcionalmente por modificaciones postraduccionales. Más aún, independientemente del tipo de nanopartícula, hay que tener en cuenta la influencia de los distintos componentes del microentorno celular (i.e, medio de cultivo), ya que pueden alterar las características sintéticas de las mismas, otorgándoles nuevas propiedades biológicas que repercuten en su comportamiento a nivel celular. Estos resultados, por tanto, abren una nueva línea de futuro para el desarrollo no solo de estudios de caracterización básicos, sino para la puesta a punto de nuevas herramientas con aplicación potencial en el campo de la obesidad.

El tromboembolismo venoso (TEV) es el término conjunto que se adopta para incluir la trombosis venosa profunda (TVP) y el tromboembolismo pulmonar (TEP). El TEV es la tercera enfermedad cardiovascular más común, por detrás del infarto de miocardio y el ictus, y tiene una incidencia aproximada de entre 1-2 casos por 1.000 individuos/año. Estudios de tendencia han mostrado que la incidencia del TEV ha aumentado en las últimas décadas y que es muy probable que lo siga haciendo en los próximos años. El TEV es una enfermedad multifactorial, en la que están implicados tanto factores de riesgo hereditarios como adquiridos. Entre los factores hereditarios, la carga genética se asocia con una alta heredabilidad, cercana al 60%. Desórdenes de pérdida de función, como la deficiencia de antitrombina, de proteína C y de proteína S, o de ganancia de función, como el Factor V Leiden o la mutación en el gen de la protrombina son algunas de las condiciones más importantes y recurrentes entre los factores genéticos asociados al TEV. En cuanto a los factores de riesgo adquiridos, los periodos largos de inmovilización, el embarazo y la existencia de otras patologías como el cáncer, son algunos de los que más contribuyen al aumento del riesgo trombótico. A pesar de esto, un 40% de los pacientes cursan la enfermedad sin factores de riesgo descritos, por lo que gran parte de su fisiopatología sigue siendo aún desconocida. Por esta razón, el objetivo principal de esta tesis doctoral es la búsqueda de nuevos biomarcadores específicos de TEV, que nos ayuden a entender mejor la aparición de esta enfermedad. Para ello, hemos llevado a cabo una aproximación proteómica, una metabolómica y una lipidómica, en las que, mediante espectrometría de masas, hemos analizado el plasma sanguíneo de pacientes con TEV y de controles sanos con la finalidad de detectar moléculas diferencialmente expresadas entre ambos grupos de estudio. Hemos identificado diversos perfiles moleculares, tanto proteicos, como metabólicos y lipídicos asociados con la existencia de TEV e incluso algunas de estas moléculas han sido validadas en una segunda fase del estudio, en una cohorte diferente y mediante técnicas inmunoanalíticas. Además, varios de estos biomarcadores mostraron tener impacto sobre una de las pruebas que mejor exhiben el estado coagulativo del plasma sanguíneo, como es el test de generación de trombina (TGT). Como fortalezas de nuestro estudio podríamos destacar la evaluación clínica exhaustiva de los pacientes, con un diagnóstico objetivo de TEV, la ausencia de factores de riesgo tanto en pacientes como en controles y la inclusión de pacientes al menos 6 meses después del evento trombótico, en fase estable y una vez la terapia anticoagulante ya ha finalizado. Además, muchas de las moléculas estudiadas son fácilmente cuantificables en los laboratorios de rutina, lo que les otorga la capacidad de ser fácilmente trasladables a la práctica clínica. La identificación de nuevas moléculas relacionadas con la fisiopatología del TEV podría abrir nuevas vías hacia una mejora de los actuales métodos de diagnóstico, pronóstico, monitorización y estratificación, y hacia una tromboprofilaxis más personalizada.

La equinococosis quística, o hidatidosis, es la zoonosis causada por el cestodo parásito Echinococcus granulosus sensu lato (s.l.). En hospederos intermediarios, se ha sugerido que la calidad de la respuesta de anticuerpos sería relevante en los fenómenos de resistencia y/o susceptibilidad a la infección. En este sentido, respuestas inmunes direccionadas hacia determinados antígenos parasitarios podrían ofrecer altos niveles de protección. Por ello, nos planteamos identificar antígenos protectores presentes en el tegumento de los protoscoleces de E. granulosus s.l. y diseñar péptidos derivados de los mismos como candidatos vacunales. Sin embargo, dada la escasa información disponible sobre aspectos básicos de la biología y bioquímica del parásito necesarios para cumplir con nuestro objetivo, realizamos en primer lugar, una caracterización del tegumento para luego utilizar dicha información como base del diseño vacunal. En este sentido, describimos al tegumento no solo como una barrera física frente a los componentes celulares y solubles del sistema inmune del hospedero, sino también como una estructura que participa activamente en la interacción con su sistema inmune; ya sea mediante procesos de detoxificación, de respuesta al estrés, de liberación de componentes inmunomoduladores y/o de excreción de vesículas extracelulares. Por otro lado, caracterizamos la respuesta inmune humoral desarrollada naturalmente por los ratones C57Bl/6, la cual es capaz de limitar el establecimiento de la infección. Así, mostramos que una respuesta de anticuerpos direccionada hacia un repertorio limitado de antígenos parasitarios, con una alta producción de anticuerpos IgG2a/c e IgG2b, es capaz de inducir la muerte parasitaria. A partir de estos resultados, identificamos siete de los antígenos parasitarios potencialmente protectores, y diseñamos in silico seis péptidos derivados de ellos como candidatos vacunales. Dos de estos péptidos mostraron la capacidad de inducir anticuerpos específicos con actividad anti-parasitaria in vitro, así como de generar niveles significativos de protección en el modelo murino de infección secundaria.

Las plaquetas se emplean en distintos ámbitos clínicos por su capacidad de detener hemorragias, pero también por participar en inflamación y regeneración de heridas. En esta tesis doctoral se evalúa el proteoma de las vesículas extracelulares liberadas por los concentrados de plaquetas durante el almacenamiento con el fin de identificar marcadores de lesión plaquetaria. Además, se incluye un exhaustivo estudio proteómico del secretoma liberado por las membranas de fibrina ricas en plaquetas y leucocitos (L-PRF) empleadas para acelerar la cicatrización de heridas. A su vez se analiza el efecto del secretoma sobre fibroblastos, osteoblastos y células madre mesenquimales, implicados en procesos de regeneración de heridas, aportando conocimiento sobre el potencial terapéutico de las membranas L-PRF. 2023-02-23

La exposición crónica a grandes cantidades de ácido palmítico (pal) causa daño celular y muerte, un fenómeno que se conoce como lipotoxicidad. La acumulación de pal en el cerebro induce las características distintivas de algunas enfermedades neurodegenerativas (NDs), y causa daño en los diferentes tipos de células cerebrales; particularmente los astrocitos reaccionan volviéndose reactivos e induciendo un bloqueo inicial de la autofagia que, acompañado de otras alteraciones como la inflamación o el estrés de retículo endoplásmico, disminuye la viabilidad de los astrocitos. Al tener diversas funciones en el sistema nervioso como captación de glutamato, soporte metabólico y estructural para el cerebro, liberación de factores neurotróficos y participación en la respuesta inmune en el cerebro, entre otras, es importante la búsqueda de estrategias que permitan proteger a los astrocitos del efecto lipotóxico de pal. Diferentes compuestos esteroidales han sido estudiados como agentes efectivos en el control de enfermedades inflamatorias, sin embargo, su prescripción es limitada debido a efectos adversos como el aumento de la incidencia de cáncer de útero y mama. Algunos esteroides sintetizados en el sistema nervioso llamados “neuroesteroides”, tienen propiedades neuroprotectoras, que son de particular interés en el tratamiento de enfermedades como demencia, isquemia, trauma cráneo encefálico, epilepsia, enfermedad de Alzheimer (EA) y Parkinson (EP). Debido a estos efectos protectores a nivel cerebral, la investigación se ha centrado en fármacos que generen esos efectos protectores de los estrógenos, pero sin aumentar la incidencia de cáncer de útero y mama, entre estos fármacos se han destacado los (SERMs) por su sigla en inglés Selective Estrogen Receptor Modulators y los (STEARs) por su sigla en inglés Specific Tissue Estrogenic Activity Regulators. Entre estos últimos se resalta la tibolona, un fármaco que cuenta con amplios estudios de sus efectos en la salud y siendo promisorio como agente neuroprotector. A pesar de que existen amplias investigaciones en neurodegeneración y al tener en cuenta que son enfermedades que pueden activar diferentes vías de señalización haciendo necesarios estudios menos reduccionistas para entender estas enfermedades. Hasta la fecha no se tienen suficientes aproximaciones que evalúen desde una perspectiva holística los cambios a nivel de productos funcionales de proteoma que tienen lugar durante el daño lipotóxico por pal, que nos permitan identificar biomarcadores y proteínas o rutas metabólicas como posibles blancos de terapias, o que 11 analicen la respuesta a compuestos que potencialmente tienen actividad neuroprotectora con el objetivo de identificar proteínas y sus rutas metabólicas asociadas, relevantes en el proceso de neuroprotección. Asimismo, en la actualidad son escasos los medicamentos o tratamientos efectivos para los procesos neurodegenerativos típicos de estas lesiones, y más allá, es limitado el entendimiento del daño lipotóxico y la respuesta protectora de la tibolona en los diferentes tipos de células del cerebro (neuronas, oligodendrocitos, microglía y astrocitos), haciendo relevante su estudio como posible agente neuroprotector ante un daño lipotóxico inducido por pal. En general, existe la necesidad de mejorar la calidad de vida de dichos pacientes, aliviar los costos asociados tanto a los diferentes proveedores de salud y las familias que asumen gran parte de los cuidados y del soporte económico. Considerando este panorama que impone un claro problema de investigación, en este estudio se realizó un análisis proteómico exhaustivo del daño lipotóxico desencadeno por pal y la evaluación del efecto neuroprotector del esteroide sintético tibolona, en una línea celular de astrocitos humanos. Los resultados indican la expresión diferencial de proteínas no consideradas anteriormente como las principales causas de daño por pal en los astrocitos humanos. También, se identificaron 27 proteínas expresadas diferencialmente con alto grado de conectividad. A partir del desarrollo del presente estudio, se encontró que pal alteró la expresión de proteínas vinculadas a la síntesis y transporte de proteínas, respuesta viral, y la tibolona moduló la expresión de algunas de esas proteínas a niveles similares a los del control, evito disrupciones de la autofagia y redujo la expresión de proteínas vinculadas a señales proapoptóticas, demostrando así que la tibolona podría revertir algunas de las alteraciones a nivel de proteínas generada por pal en los astrocitos humanos. Colciencias Pontificia Universidad Javeriana Chronic exposure to large amounts of palmitic acid (pal) causes cell damage and death, a phenomenon known as lipotoxicity. The accumulation of pal in the brain induces the distinctive characteristics of some neurodegenerative diseases (NDs) and causes damage in the different types of brain cells; particularly astrocytes that become reactive and inducing an initial block of autophagy that, accompanied by other alterations such as inflammation or endoplasmic reticulum stress, decrease the viability of astrocytes. As it has various functions in the nervous system such 12 as glutamate uptake, metabolic and structural support for the brain, the release of neurotrophic factors, and participation in the immune response in the brain, among others, it is important to search for strategies to protect astrocytes of the lipotoxic effect of pal. Different steroidal compounds have been studied as effective agents in the control of inflammatory diseases, however, their prescription is limited due to adverse effects such as the increase in the incidence of uterine and breast cancer. Some steroids synthesized in the nervous system called "neurosteroids" have neuroprotective properties, which are of particular interest in the treatment of diseases such as dementia, ischemia, head trauma, epilepsy, Alzheimer's disease (AD), and Parkinson's disease (PD). Due to these protective effects at the brain level, research has focused on drugs that generate these protective effects of estrogens, but without increasing the incidence of uterine and breast cancer, among these drugs the Selective Estrogen Receptor Modulators (SERMs) and the Specific Tissue Estrogenic Activity Regulators (STEARs) have been highlighted. Among the latter, tibolone stands out, a drug that has extensive studies of its effects on health and is promising as a neuroprotective agent. Even though there is extensive research in neurodegeneration and considering that they are diseases that can activate different signaling pathways, making less reductionist studies necessary to understand these diseases. To date, there are not enough approaches that evaluate from a holistic perspective the changes at the level of functional proteome products that take place during lipotoxic damage by pal, which allow us to identify biomarkers and proteins or metabolic pathways as possible targets for therapies, or that analyze the response to compounds that potentially have a neuroprotective activity to identify proteins and their associated metabolic pathways, relevant in the neuroprotection process. Likewise, effective drugs or treatments for the neurodegenerative processes typical of these lesions are currently scarce, and the understanding of lipotoxic damage and the protective response of tibolone in different types of brain cells (neurons, oligodendrocytes, microglia, and astrocytes), making its study relevant as a possible neuroprotective agent against lipotoxic damage induced by pal. In general, there is a need to improve the quality of life of these patients, alleviate the costs associated with both the different health providers and the families that assume a large part of the 13 care and financial support. Considering this panorama that imposes a clear research problem, in this study an exhaustive proteomic analysis of the lipotoxic damage triggered by pal and the evaluation of the neuroprotective effect of the synthetic steroid tibolone, in a human astrocyte cell line, was carried out. The results indicate the differential expression of proteins not previously considered as the main causes of pal damage in human astrocytes. Also, 27 differentially expressed proteins with a high degree of connectivity were identified. From the development of the present study, it was found that pal altered the expression of proteins linked to protein synthesis and transport, viral response, and tibolone modulated the expression of some of these proteins at levels similar to those of the control, avoiding disruptions of autophagy and reduced the expression of proteins linked to pro-apoptotic signals, thus demonstrating that tibolone could reverse some of the protein-level alterations generated by pal in human astrocytes. Magíster en Ciencias Biológicas Maestría https://orcid.org/0000-0003-1531-3862 https://scholar.google.com/citations?user=cRxUANEAAAAJ&hl=es https://scienti.minciencias.gov.co/cvlac/visualizador/generarCurriculoCv.do?cod_rh=0001656241

Los trastornos relacionados con sustancias han sido consistentemente asociados con la presencia de alteraciones en las funciones cognitivas y ejecutivas, que se relacionan con el funcionamiento diario, justificando la aplicación de programas de rehabilitación neuropsicológica en el tratamiento. El objetivo principalde esta tesis fue el estudio de la relación entre perfiles neuropsicológicos, sintomatológicos, patrones moleculares en saliva y eficacia del juego terapéutico El Trisquel en una muestra de pacientes con trastornos relacionados con sustancias. Este trabajo contiene el diseño y desarrollo del programa de intervención en formato de juego de mesa El Trisquel y de otros programas de rehabilitación, el estudio del proceso de toma de decisiones en pacientes con trastornos relacionados con sustancias y el análisis de las diferencias entre hombres y mujeres, y los estudios de eficacia del juego terapéutico El Trisquel en pacientes con trastornos relacionados con sustancias y con trastornos del espectro de la esquizofrenia y otros trastornos psicóticos.

El cáncer de tiroides es el cáncer endocrino más frecuente. Este tipo de cáncer incluye diferentes categorías la mayoría de comportamiento clínico relativamente indolente. Aunque los carcinomas bien diferenciados papilar y folicular suelen ser poco agresivos, en ocasiones pueden comportarse de una forma inusualmente agresiva y/o transformarse (desdiferenciarse) en carcinomas menos diferenciados. Por otra parte el carcinoma indiferenciado (anaplásico) es una de las formas más letales de cáncer humano. En este proyecto de tesis doctoral se pretende una mejor caracterización de los cánceres de la glándula tiroides humana mediante el empleo de técnicas proteómicas, comparando los perfiles proteicos expresados por los tumores tiroideos primarios.

[Resumen]: La osteoartritis (OA) es caracterizada por la degradación progresiva del cartílago articular, cambios en el hueso subcondral acompañados de una alteración en la membrana sinovial; involucra las articulaciones móviles el cual limita la movilidad de ellas. Se reconoce como una enfermedad multifactorial donde distintas causas son capaces de generar y perpetuar el daño sobre el cartílago articular. Una de las limitaciones que presenta el diagnóstico de OA es que se realiza cuando el paciente tiene un daño articular considerable. Como resultado de dicha degradación se liberan fragmentos de estas macromoléculas al líquido sinovial. La determinación de los niveles de estos fragmentos, llamados biomarcadores, podría ser útil con objeto de estandarizar su empleo como procedimiento diagnóstico y pronóstico en la enfermedad degenerativa articular. El uso de biomarcadores como diagnóstico temprano de la enfermedad, sería de gran importancia por su abordaje en la enfermedad antes del comienzo de la sintomatología, evaluación de la progresión y pronóstico. Los biomarcadores se pueden obtener de fluidos corporales en cualquier etapa de la enfermedad para su estudio. Una caracterización molecular detallada del líquido sinovial podría identificar proteínas asociadas con la patogénesis, que se pueden desarrollar como biomarcadores para la evaluación de la enfermedad en etapas tempranas y su progresión. La aplicación de técnicas proteómicas para la búsqueda de nuevos biomarcadores pretende generar información de valor clínico acerca de la susceptibilidad, diagnóstico, pronóstico y terapia. La búsqueda e identificación de los biomarcadores en este trabajo se realiza en base a metodologías proteómicas por medio de espectrometría de masas. Se analizaron 20 muestras de pacientes diagnosticados con OA y un grupo control de líquido sinovial realizando un análisis proteómico utilizando cromatografía liquida acoplada a un espectrómetro de masas de alta resolución timsTOF Pro para la identificación y cuantificación de proteínas. Para el análisis de los datos se ha usado el software PEAKS. Se han identificado aproximadamente un total de 765 proteínas totales y un total de 585 grupo de proteínas. Se cuantificaron 12 proteínas en las muestras de líquido sinovial comparando los grados de OA con controles sanos utilizando un test de ANOVA (p

El cáncer de próstata (PCa) es el segundo tipo de cáncer más común en los hombres y es la sexta causa principal de muerte relacionada con el cáncer en los hombres a nivel mundial. En Argentina es la tercera causa de muerte por cáncer, perteneciendo a la lista de países con incidencia intermedia-alta de PCa. La mortalidad en el 70-80% de los pacientes con PCa está ligada a la enfermedad metastásica ósea y la adquisición de un fenotipo invasivo. La terapia de privación de andrógenos (ADT) es el tratamiento estándar de primera línea para el PCa metastásico. Sin embargo, la progresión a un estado resistente a la castración (CRPC, del inglés Cancer Resistant Prostate Cancer) sigue siendo inevitable en la mayoría de los casos. Para los hombres con PCa recién diagnosticado, el predictor más fuerte de PCa es el grupo de grado (GG) basado en la puntuación de Gleason (GS, del inglés Gleason score). El GG agrupa histológicamente el PCa y presupone un resultado clínico para cada grado. Sin embargo, en muchos casos el resultado no se ajusta a estas expectativas y suele estar más comprometido. Entre el 25 y el 50% de las biopsias con ciertos GG provienen de hombres con PCa de grado más alto. Esto se conoce en inglés como "upgrading" entre la biopsia y la prostatectomía, lo que indica que los pacientes diagnosticados con PCa indolente pueden tener cánceres de mayor grado y, por ende, de mayor riesgo. Por lo tanto, el manejo eficiente del PCa debe abarcar no solo un diagnóstico temprano preciso, sino también la identificación de factores pronóstico que ayuden a prever el resultado para todos los casos individuales. Los biomarcadores clínicos, genómicos y/o radiológicos son la clave para una adecuada estratificación del riesgo. Actualmente, se están desarrollando biomarcadores genómicos para la detección de subtipos de enfermedades letales, el seguimiento de la recurrencia del PCa después de los tratamientos iniciales, el pronóstico y la predicción de la eficacia del fármaco. Sin embargo, para demostrar la utilidad clínica, los biomarcadores moleculares pronóstico potencialmente novedosos deberán proporcionar un valor agregado e independiente del PSA, el estadio patológico y el GG. El objetivo general de esta tesis fue identificar nuevos biomarcadores para la estratificación del riesgo del PCa, con la mira en aquellos que podrían comportarse independientemente del GG y reconocer, de esta manera, GG intermedios que pueden tener más probabilidades de progresar. Estos biomarcadores moleculares podrían mejorar la predicción de enfermedades letales y proporcionar información sobre los mecanismos biológicos que subyacen a la fuerte relación del GS y la progresión de la enfer medad. En este estudio, llevamos a cabo un análisis por espectrometría de masas (LC ESI-MS/MS) para identificar proteomas de muestras de adenocarcinomas de próstata e hiperplasias benignas de próstata humana, fijadas en formalina y embebidas en parafina (FFPE), con datos del estadio de enfermedad, el GS y la edad del paciente. Luego, seleccionamos proteínas enriquecidas en muestras de PCa en comparación con muestras de BPH (set de datos de proteínas enriquecidas en PCa, n = 109), y validamos dichas proteínas mediante un análisis bioinformático exhaustivo, utilizando bases de datos públicas (32 sets de datos, n = 5.974). Al analizar en dichos sets de datos los niveles de ARNm correspondientes a las proteínas enriquecidas en muestras FFPE de PCa, los siguientes genes resultaron estar sobre-expresados en PCa en comparación con la glándula prostática normal: SLC12A2, DDAH1, GDF15, APOE, NDRG1 e YWHAZ. Luego, analizamos la relevancia clínica de dichos candidatos utilizando sets de datos que contienen datos de expresión génica, sobrevida general (OS, del inglés Overall survival), sobrevida libre de recaída bioquímica (RFS, del inglés Relapse-free survival) y sobrevida específica de la enfermedad (DSS, del inglés Disease-specific survival). Los análisis univariables realizados utilizando el set de datos de Sboner, revelaron una asociación entre una mayor expresión de APOE, YWHAZ y NDRG1 y una disminución en la OS. Al realizar análisis multivariables, solo YWHAZ/14-3-3ζ/δ y NDRG1 mostraron independencia del GS, la edad al momento del diagnóstico y la fusión TMPRSS2-ERG en pacientes con PCa. Estos dos genes permitieron clasificar a los pacientes con PCa en pacientes con riesgo de progresión de la enfermedad bajo, intermedio y alto. A su vez, este patrón también se observó con significancia estadística para el GS 7. Al estratificar a los pacientes con GS 7 en GS 7 (3 + 4) y GS 7 (4 + 3) de acuerdo con la clasificación actual GG 2 y GG 3, una vez más las curvas de KM evidenciaron el poder de YWHAZ para predecir una disminución en la OS de los pacientes para ambos grupos. Resultados similares se obtuvieron al analizar la RFS y la DSS de pacientes con PCa. Posteriormente, continuamos el análisis utilizando el set de datos de Jenkins que contiene información de DSS. El análisis de las curvas ROC mostró que, aunque NDRG1 no superó al GS como predictor de muerte en pacientes con PCa, el modelo que incluye GS + NDRG1 mejoró el valor predictivo de la enfermedad agresiva en comparación con el GS solo más allá de los 120 meses posteriores al diagnóstico. En cambio, YWHAZ superó al GS como factor pronóstico de la DSS a partir de los 60 meses posteriores al diagnóstico inicial. En esta primera parte, demostramos el papel de YWHAZ/14-3-3ζ/δ como un fuerte predictor de muerte independiente del GS en pacientes con PCa. YWHAZ/14-3-3ζ/δ podría ser una herramienta prometedora si se tienen en cuenta las dificultades que presenta el PCa en el momento de la toma de decisiones. Paralelamente, nos propusimos como objetivo analizar potenciales interacciones entre los biomarcadores identificados y la proteína anti-inflamatoria HO-1 en PCa. La hemo oxigenasa 1 (HO-1), enzima limitante en la degradación del grupo hemo, representa un evento esencial en las respuestas celulares a las agresiones pro-oxidativas y pro-inflamatorias. Previamente trabajos de nuestro laboratorio documentaron que HO-1 tiene un fuerte efecto antitumoral in vivo e in vitro. Ensayos por LC ESI-MS/MS identificaron a 14-3-3ζ/δ, la proteína codificada por el gen de YWHAZ, como una proteína interactora de HO-1. Dicha interacción fue validada mediante ensayos de co-inmunoprecipitación y co-localización. Considerando: 1) el aumento de la expresión de YWHAZ en tejido tumoral prostático comparado con el tejido normal; 2) la disminución en la OS, RFS y DSS observada en pacientes con PCa con alta expresión de YWHAZ; y 3) su interacción con HO-1; nos propusimos estudiar si la alteración de la expresión de estos dos genes en conjunto podría repercutir en la RFS. El estudio de datos clínicos de pacientes con PCa sometidos a prostatectomía radical permitió determinar que dichos factores se comportan de manera independiente a la hora de predecir el riesgo de recaída bioquímica. En resumen, los resultados obtenidos en este trabajo de tesis identifican a YWHAZ como un biomarcador pronóstico de muerte de pacientes con PCa, independiente de los parámetros clínico-patológicos asociados a la enfermedad. A su vez, reportamos la interacción entre 14-3-3ζ/δ y HO-1 principalmente en el núcleo, y demostramos que, aunque dichos factores se comportan de manera independiente a la hora de predecir el riesgo de recaída bioquímica en pacientes con PCa sometidos a prostatectomía radical, los pacientes con alta expresión de YWHAZ que a su vez poseen alta expresión de HMOX1 parecerían mostrar un leve aumento de la RFS en comparación con aquellos con baja expresión de HMOX1. Prostate cancer (PCa) is the second most common type of cancer in men and is the sixth leading cause of cancer-related death in men worldwide. In Argentina, it is the third cause of cancer mortality, belonging to the list of countries with an intermediate-high incidence of PCa. Mortality in 70-80% of patients with PCa is linked to metastatic bone disease and the acquisition of an invasive phenotype. Androgen deprivation therapy (ADT) is the standard first-line treatment for metastatic PCa. However, progression to a castration-resistant state (Cancer Resistant Prostate Cancer, CRPC) remains unavoidable in most cases. For men with newly diagnosed PCa, the strongest predictor is the Grade Group (GG) based on the Gleason score (GS). The GG system histologically groups PCa and presupposes an outcome for each grade within certain margins. However, in many cases the outcome does not conform to these expectations and is usually more compromised. Because of tumor heterogeneity that is inadequately captured by the biopsies, between 25% and 50% of biopsies with certain GG come from men with higher-grade PCa. This is known as “upgrading” between biopsy and prostatectomy, indicating that patients diagnosed with indolent PCa might have higher-grade and subsequently higher risk cancers. Hence, efficient PCa management should encompass not only early accurate diagnosis but also the identification of prognostic factors which help in foreseeing the outcome for all individual cases. Clinical, genomic and/or radiological biomarkers are the key to appropriate risk stratification. Genomic biomarkers are being developed for screening for lethal disease subtypes, monitoring of PCa recurrence after initial treatments, prognosis, and prediction of drug efficacy. However, to prove clinical utility, potentially novel prognostic molecular markers will need to provide added, independent value, in multivariable analysis, beyond PSA, pathologic stage and GG. The objective of our study was to identify novel biomarkers for risk stratification of PCa with an eye toward those that could behave independently from GS and further recognize intermediate GSs that may be more likely to progress. These molecular biomarkers might improve prediction of lethal disease and provide insight into the biological mechanisms underlying the strong relation of GS and disease progression. In this study, we undertook an in-depth mass spectrometry approach LC ESI-MS/MS to profile proteomes from formalin fixed paraffin embedded (FFPE) specimens of prostate adenocarcinomas and benign prostate hyperplasias (BPHs), with available disease stage, GS, and patient age. We then selected proteins enriched in PCa samples compared with BPH samples (PCa enriched protein dataset, n=109), and validated the selected potential candidates with integrative bioinformatics analysis of public database repositories (32 datasets, n=5,974). Initially, we merged our proteomics data with large gene expression datasets. When analyzing the candidates in these datasets, the following gene transcripts appeared to be increased in PCa compared with the normal prostate gland: SLC12A2, DDAH1, GDF15, APOE, NDRG1, and YWHAZ. We further assessed their clinical significance with large PCa datasets containing transcriptomic, overall survival (OS), relapse-free survival (RFS), and disease-specific survival (DSS), and refined markers that could predict PCa survival. The univariable analyses performed on the Sboner dataset, revealed a positive association of increased expression of APOE, YWHAZ, and NDRG1 with poor OS. When performing multivariable analyses, only YWHAZ and NDRG1 showed independence from GS, age at diagnosis and TMPRSS2-ERG fusion in PCa patients. These two genes were able to categorize PCa patients in low, intermediate and high risk of disease progression. Moreover, this pattern was also observed with statistical significance for GS 7. Further, we split the GS 7 patients in GS 7 (3+4) and GS 7 (4+3) in line with the current classification GG 2 and GG 3, and once more, the KM curves still evidenced the power of YWHAZ to predict a worse outcome for both groups. Similar results were obtained when analyzing the RFS and DSS of PCa patients. We furthered the analysis using the Jenkins dataset that contains DSS. The ROC analysis showed that, although NDRG1 did not outperform GS, the model including GS + NDRG1 improved the predictive value of aggressive disease compared with GS alone beyond 120 months post-diagnosis. In the case of YWHAZ, this factor outperformed GS beyond 60 months post-diagnosis. Interestingly, the ROC curves did not showcase improved predictive value when adding GS to the YWHAZ model, further ascertaining this factor as a potential prognostic tool in the clinic. We hereby state the relevance of YWHAZ/14-3-3ζ/δ in PCa showcasing its role as an independent strong predictor of death that outperforms GS. YWHAZ/14-3-3ζ/δ could be a promising tool when taking into consideration the difficulties that PCa presents at the time of decision making. In parallel, we sought potential interactions between the identified biomarkers and the anti-inflammatory protein HO-1 in PCa. Heme oxygenase 1 (HO-1), the limiting enzyme in heme degradation, represents an essential event in cellular responses to pro-oxidative and pro-inflammatory insults. Reports from our laboratory documented that HO-1 has a strong anti-tumoral effect in vivo and in vitro. LC ESI-MS/MS analysis of HO-1 interactome in PCa cells identified 14-3-3ζ/δ (the protein encoded by the YWHAZ) as an interactor protein of HO-1. This interaction was validated by co-immunoprecipitation and co-localization assays. Considering: 1) the increase in the expression of YWHAZ in PCa tissues vs. normal tissue; 2) the decrease in OS, RFS, and DSS observed in patients with PCa with high YWHAZ expression; and 3) its interaction with HO-1; we set out to analyze whether expression alterations for these two genes together could affect RFS. Results indicated that that these factors behaved independently when predicting the risk of biochemical relapse of PCa patients. In summary, the results obtained in this thesis showcase YWHAZ as a prognostic biomarker of aggressiveness in PCa, independent from the clinico-pathological parameters associated to the disease. Further, we report the novel interaction between 14-3-3ζ/δ and HO-1, mainly in the cell nuclei, and demonstrated that, although both factors behave independently from each other when analyzing the RFS of patients that had undergone radical prostatectomy, patients with high expression of YWHAZ that also had high expression of HMOX1 showed an increased RFS compared to patients with low expression of HMOX1. Fil: Lage Vickers, Sofía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

La multifuncionalidad de proteínas se refiere a su habilidad para llevar a cabo un cabo dos o más funciones biológicas. El objetivo de este trabajo fue examinar con herramientas bioinformáticas la relación entre proteínas multifuncionales y enfermedades humanas, tomando en cuenta los mecanismos moleculares de la enfermedad y su interacción con dianas farmacológicas. La aproximación tomada involucraba evaluar estadísticamente la asociación entre enfermedades humanas y proteínas multifuncionales, y revisar bases de datos de interacción de proteínas para analizar la interacción local entre ellas y un análisis funcional de las proteínas de estas redes. No se observaron suficientes evidencias para afirmar que el número de clases funcionales de proteínas moonlighting en humanos es distinto al resto de los organismos. Sí se obtuvo suficiente información para sugerir que las proteínas moonlighting son propensas a estar involucradas en enfermedades humanas. Además, se hicieron análisis de redes de interacción de proteínas moonlighting involucradas en enfermedades humanas, y se encontraron 7 grupos de interacción. También se hizo un análisis de términos GO de cada grupo asociado a enfermedades, para una caracterización de los procesos biológicos, funcione moleculares y compartimientos celulares donde se encontraban. Se encontraron redes de interacción proteína-proteína para los grupos de interacción asociados a enfermedades, y se hizo un acoplamiento molecular entre proteínas pertenecientes a uno de los grupos. Se puede concluir que en las proteínas moonlighting humanas asociadas a enfermedades existen redes de interacción de tamaño considerable que tienen conexiones entre sí. Estudios de Máster Protein multifunctionality refers to their ability to carry out two or more biological functions. The objective of this work was to examine with bioinformatics tools the relationship between multifunctional proteins and human diseases, considering the molecular mechanisms of the disease and its interaction with drug targets. The approach taken involved statistically evaluating the association between human diseases and multifunctional proteins and reviewing protein interaction databases to analyze the local interaction between them and a functional analysis of the proteins in these networks. Not enough evidence was observed to affirm that the number of functional classes of moonlighting proteins in humans is different from other organisms. Enough information was btained to suggest that moonlighting proteins are likely to be involved in human disease. In addition, analysis of interaction networks of moonlighting proteins involved in human diseases were made, and 7 interaction groups were found. An analysis of GO terms of each group associated with diseases was also done, for a characterization of the biological processes, molecular functions, and cellular compartments where they were found. Protein-protein interaction networks were found for the disease-associated interaction groups, and a molecular coupling was made between proteins belonging to one of the groups. It can be concluded that in human moonlighting proteins associated with diseases there are interaction networks of considerable size that have connections between them. La multifuncionalitat de proteïnes es refereix a la seva habilitat per dur a terme un terme dues o més funcions biològiques. L'objectiu d'aquest treball va ser examinar amb eines bioinformàtiques la relació entre proteïnes multifuncionals i malalties humanes, tenint en compte els mecanismes moleculars de la malaltia i la seva interacció amb dianes farmacològiques. L'aproximació presa involucrava avaluar estadísticament l'associació entre malalties humanes i proteïnes multifuncionals, i revisar bases de dades d'interacció de proteïnes per analitzar la interacció local entre elles i una anàlisi funcional de les proteïnes d'aquestes xarxes. No es van observar suficients evidències per afirmar que el nombre de classes funcionals de proteïnes moonlighting en humans és diferent a la resta dels organismes. Sí que es va obtenir suficient informació per suggerir que les proteïnes moonlighting són propenses a estar involucrades en malalties humanes. A més, es van fer anàlisis de xarxes d'interacció de proteïnes moonlighting involucrades en malalties humanes, i es van trobar 7 grups d'interacció. També es va fer una anàlisi de termes GO de cada grup associat a malalties, per a una caracterització dels processos biològics, funcioni moleculars i compartiments cel·lulars on es trobaven. Es van trobar xarxes d'interacció proteïna-proteïna per als grups d'interacció associats a malalties, i es va fer un acoblament molecular entre proteïnes pertanyents a un dels grups. Es pot concloure que en les proteïnes moonlighting humanes associades a malalties existeixen xarxes d'interacció de mida considerable que tenen connexions entre si.

Los biomarcadores son moléculas alteradas en condiciones patológicas que resultan herramientas objetivas y cuantificables muy útiles para el diagnóstico de una determinada enfermedad o la respuesta a una terapia específica. En lo relacionado al consumo de cannabis y sus posibles efectos adversos a nivel neuronal, la búsqueda de biomarcadores se ha visto frenada por la imposibilidad de obtener muestras cerebrales de pacientes vivos. En el presente trabajo se va a analizar un novedoso sistema in vitro basado en el uso de precursores neuronales (pro-neuronas) obtenidos del neuroepitelio olfativo de individuos adultos que han consumido cannabis durante la adolescencia. Se persigue la identificación de proteínas diferencialmente expresadas entre células de consumidores de cannabis y células obtenidas de individuos sanos. Para ello se emplearán herramientas proteómicas, fundamentalmente electroforesis en geles de acrilamida y espectrometría de masas para la detección e identificación de proteínas diferencialmente expresadas. Se utilizarán varias herramientas bioinformáticas para el procesamiento e interpretación de los datos resultantes.

La fibromialgia es una forma de reumatismo no articular de etiología desconocida que se ha relacionado con un incremento en el nivel de estrés oxidativo y con alteraciones inflamatorias. La proteómica permite el analisis con gran sensibilidad de las proteínas en muestras complejas, y puede ser clave como herramienta de diagnóstico clínico. El aceite de oliva virgen extra (AOVE) y el hidroxitirosol (HT) poseen numerosas propiedades beneficiosas como capacidad antioxidante y antiinflamatoria. En esta tesis, mediante proteómica, se han caracterizado los cambios moleculares asociados a la FM en plasma y en fibroblastos dermales, así como el efecto que sobre ellos ejercen el AOVE y el HT. Los resultados obtenidos han confirmado la implicación en FM de procesos biológicos relacionados con la inflamación y el metabolismo lipídico, entre otros, así como la acción normalizadora que sobre estos ejercen el AOVE y el HT. Tesis Univ. Jaén. Departamento de Biología Experimental