Objetivo. Establecer valores de referencia en los niveles de TSH y T4 libre, para las líneas de ponedoras Hy-Line W-36 y Lohmann Brown-Classic, asimismo, comparar los niveles de hormonas tiroideas en suero sanguíneo entre estas dos líneas. Materiales y métodos. Se obtuvo suero en ayunas de 100 gallinas ponedoras (50 Hy-Line W-36 y 50 Lohmann Brown-Classic) de 25 semanas de edad, y se determinaron los niveles de TSH y T4 libre mediante inmunoensayo enzimático. Resultados. Los valores de TSH para la línea Hy-Line W-36 (uUI/ml) fueron: promedio, mínimo, máximo y desviación estándar de 0,09, 0,00, 0,82, 0,15, respectivamente. Para la línea Lohmann Brown-Classic (uUI/ml) fueron: 0,29; 0,00; 4,98; 0,78, respectivamente. El valor P del test F es mayor o igual a 0,05, por lo cual no hay diferencia estadísticamente significativa, con una confidencia del 95% para la TSH entre líneas. Los valores de T4 libre para la línea Hy-Line W-36 en ng/dl fueron: promedio, mínimo, máximo y desviación estándar de 0,95, 0,11, 2,00, 0,53, respectivamente, mientras que los valores encontrados para la línea Lohmann Brown-Classic en ng/dl fueron: 1,54, 0,21, 2,58, 0,49, respectivamente. El valor P del test F es inferior a 0,05, evidenciando diferencia estadísticamente significativa, con una confidencia del 95% para T4 libre entre líneas. Conclusión. Se observó diferencia estadística para los niveles de T4 libre entre las líneas estudiadas; esto podría explicarse ya que la línea semi-pesada (Lohman Brown-Classic) deposita una mayor cantidad de grasa en el organismo, influyendo en el aumento de los niveles de T4 para esta y no para la línea liviana Hy-Line W-36. Se aportan valores de referencia para las dos líneas comerciales de ponedoras evaluadas. Objective. To establish reference values for TSH and free T4, in two lines of laying hens (Hy-Line W-36 and Lohmann Brown-Classic),as well as to compare the thyroid hormone levels in serum between those two lines. Materials and methods. One hundred, 25 weeks of age laying fasting hens serum (50 Hy-Line W-36 and 50 Lohmann Brown-Classic) was obtained and TSH and free T4 levels were measured using enzymatic inmunoessay. Results. The values obtained for TSH for High-Line W-36 (uUI/ml) were: mean, minimal, maximal, and standard deviation, 0.09, 0.00, 0.82, 0.15 respectively. For the Lohmann Brown-Classic (uUI/ml) the values were, 0.29, 0.00, 4.98, 0.78, respectively. The P value of test F was greater or equal to 0.05 reason why there is not statistical significant difference, with a 95% confidence for TSH between the lines studied. The free T4 values obtained for Hy-Line W-36 in ng/dl were mean, minimal, maximal, and standard deviation of 0.95, 0.11, 2.00, 0.53 respectively while the values found for the Lohmann Brown-Classic line in ng/dl were 1.54, 0.21, 2.58, 0.49 respectively. The P value for the F test was inferior to 0.05, showing statistically significant difference with a 95% confidence for free T4 between the lines studied. Conclusion. Statistical difference was observed for free T4 between the two studied lines. This could be explained because the semi-heavy line (Lohman Brown-Classic) deposits a higher quantity of fattening in the organism influencing the increase of T4 levels for this line and not for the light Hy-Line W-36. Reference values for the two laying hens studied lines are presented.