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Fil: Giorgetti, Sofía Inés. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. El interferón alfa 2 humano recombinante (rhIFN-α2), agente antiviral empleado para el tratamiento de hepatitis B y C crónicas, es una citoquina de corta vida media en circulación. Esto constituye el principal factor responsable del fracaso de la terapia con rhIFN-α2 producido en bacterias, debido a los efectos tóxicos asociados a las elevadas dosis y frecuencia de administración requeridas. En nuestro laboratorio se han diseñado variantes del rhIFN-α2b de acción prolongada mediante su fusión a etiquetas peptídicas con diverso número de sitios potenciales de O-glicosilación. Una de ellas, GMOP-IFN, presenta perfil farmacocinético y actividad biológica mejorados con respecto a la citoquina original. No obstante, tratamientos prolongados con hIFN-α2 pueden dar lugar al desarrollo de anticuerpos anti-IFN que al unirse a la citoquina pueden alterar su farmacocinética o incluso inhibir su acción terapéutica. Este trabajo se centró en el análisis de la inmunogenicidad de GMOP-IFN y el desarrollo de variantes con inmunogenicidad reducida, sin impactar negativamente en su estructura y función biológica. Se aplicó un procedimiento de de-inmunización, empleando herramientas de predicción in silico para identificar aquellas regiones potencialmente inmunogénicas en GMOP-IFN, así como los cambios puntuales que conducirían a la reducción de su inmunogenicidad global, sin alterar su estructura y actividad biológica. Estas modificaciones fueron introducidas en cuatro variantes, dos de las cuales conservaron gran porcentaje de la actividad antiviral original. Ambas proteínas mantuvieron intactos los parámetros farmacocinéticos mejorados de GMOP-IFN con respecto a la citoquina comercial, exhibiendo además una inmunogenicidad ex vivo e in vivo inferior a la de la molécula original. Recombinant human interferon alpha 2 (rhIFN-α2) is a cytokine with extremely short plasma half-life, commonly administrated for the treatment of chronic Hepatitis C an B patients. Its reduced residence time in serum is responsible for the failure of the therapy with rhIFN-α2 produced in bacteria, due to the toxic effects associated with high dosages and frequency of administration. In our laboratory different variants of rhIFN-α2b with improved pharmacokinetic profiles have been designed by fusing the cytokine sequence to O-glycosylated peptide tags. One of these, GMOP-IFN, has shown improved pharmacokinetic profile and biological activity with respect to the original cytokine. However, prolonged treatments with rhIFN-α2 may lead to the generation of anti-IFN antibodies, which could neutralize the therapeutic effect of the cytokine or partially reduce its action. For this, we focused on the analysis of GMOP-IFN immunogenicity and the development of new therapeutic candidates with reduced antigenicity/immunogenicity, without affecting its structure and biological function. In silico prediction tools allowed the identification of potentially immunogenic regions in the GMOP-IFN sequence, as well as those point mutations that could lead to a reduction in the overall immunogenicity, which were then integrated into four de-immunized variants. Two of these variants preserved the original antiviral function and showed null antiproliferative activity, an additional favorable characteristic when considering the dramatic hematologic disorders associated with this rhIFN-α biological function. Moreover, pharmacokinetic parameters for both variants were similar to those of GMOP-IFN. Finally, both muteins exhibited reduced ex vivo and in vivo immunogenicity when compared to the original molecule. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica Universidad Nacional del Litoral

A 43 year old man presented with asymptomatic elevation of alanine aminotransferase (ALT) and no relevant past history. The patient denied being a chronic alcohol drinker. Work-up revealed an active hepatitis C, and liver biopsy showed active inflammation. Treatment was started with interferon-alfa and ribavirin. During the 48 weeks of treatment, the patient developed positive thyroid antibodies with varying level of thyrotropin (TSH) and thyroid hormones. At follow-up after treatment, the patient continued with hyperthyroidism due to Graves' disease. Autoimmune thyroiditis is a common complication of using interferon in patients with hepatitis C. In some cases, it is presented as hyperthyroidism because of Graves' disease. Thyroid function and thyroid antibodies should be evaluated before and during treatment with interferon. Se reporta el caso de un varón de 43 años de edad, sin antecedentes patológicos de importancia, que acudió por elevación asintomática de la alanino aminotransferasa (ALT). El paciente negó ser bebedor crónico de alcohol. Se hizo el diagnóstico serológico de infección activa por hepatitis C y la biopsia de hígado reveló inflamación crónica activa. Con estos resultados, se inició tratamiento con interferón-alfa y ribavirina. Durante el tratamiento de 48 semanas, el paciente presentó anticuerpos antitiroideos positivos con variaciones en sus niveles de tirotropina (TSH) y hormonas tiroideas. En el seguimiento postratamiento, el paciente continuó con hipertiroidismo por enfermedad de Graves. La tiroiditis autoinmune es una complicación frecuente del uso de interferón en pacientes con hepatitis C. En algunos casos se presenta como hipertiroidismo por enfermedad de Graves. Se debe evaluar la función tiroidea y los anticuerpos antitiroideos antes y durante el tratamiento con interferón.