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Fil: Giorgetti, Sofía Inés. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. El interferón alfa 2 humano recombinante (rhIFN-α2), agente antiviral empleado para el tratamiento de hepatitis B y C crónicas, es una citoquina de corta vida media en circulación. Esto constituye el principal factor responsable del fracaso de la terapia con rhIFN-α2 producido en bacterias, debido a los efectos tóxicos asociados a las elevadas dosis y frecuencia de administración requeridas. En nuestro laboratorio se han diseñado variantes del rhIFN-α2b de acción prolongada mediante su fusión a etiquetas peptídicas con diverso número de sitios potenciales de O-glicosilación. Una de ellas, GMOP-IFN, presenta perfil farmacocinético y actividad biológica mejorados con respecto a la citoquina original. No obstante, tratamientos prolongados con hIFN-α2 pueden dar lugar al desarrollo de anticuerpos anti-IFN que al unirse a la citoquina pueden alterar su farmacocinética o incluso inhibir su acción terapéutica. Este trabajo se centró en el análisis de la inmunogenicidad de GMOP-IFN y el desarrollo de variantes con inmunogenicidad reducida, sin impactar negativamente en su estructura y función biológica. Se aplicó un procedimiento de de-inmunización, empleando herramientas de predicción in silico para identificar aquellas regiones potencialmente inmunogénicas en GMOP-IFN, así como los cambios puntuales que conducirían a la reducción de su inmunogenicidad global, sin alterar su estructura y actividad biológica. Estas modificaciones fueron introducidas en cuatro variantes, dos de las cuales conservaron gran porcentaje de la actividad antiviral original. Ambas proteínas mantuvieron intactos los parámetros farmacocinéticos mejorados de GMOP-IFN con respecto a la citoquina comercial, exhibiendo además una inmunogenicidad ex vivo e in vivo inferior a la de la molécula original. Recombinant human interferon alpha 2 (rhIFN-α2) is a cytokine with extremely short plasma half-life, commonly administrated for the treatment of chronic Hepatitis C an B patients. Its reduced residence time in serum is responsible for the failure of the therapy with rhIFN-α2 produced in bacteria, due to the toxic effects associated with high dosages and frequency of administration. In our laboratory different variants of rhIFN-α2b with improved pharmacokinetic profiles have been designed by fusing the cytokine sequence to O-glycosylated peptide tags. One of these, GMOP-IFN, has shown improved pharmacokinetic profile and biological activity with respect to the original cytokine. However, prolonged treatments with rhIFN-α2 may lead to the generation of anti-IFN antibodies, which could neutralize the therapeutic effect of the cytokine or partially reduce its action. For this, we focused on the analysis of GMOP-IFN immunogenicity and the development of new therapeutic candidates with reduced antigenicity/immunogenicity, without affecting its structure and biological function. In silico prediction tools allowed the identification of potentially immunogenic regions in the GMOP-IFN sequence, as well as those point mutations that could lead to a reduction in the overall immunogenicity, which were then integrated into four de-immunized variants. Two of these variants preserved the original antiviral function and showed null antiproliferative activity, an additional favorable characteristic when considering the dramatic hematologic disorders associated with this rhIFN-α biological function. Moreover, pharmacokinetic parameters for both variants were similar to those of GMOP-IFN. Finally, both muteins exhibited reduced ex vivo and in vivo immunogenicity when compared to the original molecule. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica Universidad Nacional del Litoral

Fil: Gugliotta, Agustina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. En el presente trabajo de tesis se llevó a cabo la producción de IFN4N empleando células CHO-K1 y HEK293 como huéspedes y purificación. IFN4NCHO e IFN4NHEK fueron caracterizados en términos de su grado de glicosilación, farmacocinética y actividad biológica. El IFN4NCHO presentó una masa molecular aparente superior y N-glicanos altamente ramificados con un mayor contenido de ácido siálico respecto de la molécula obtenida a partir de HEK. Estudios de farmacocinética revelaron la existencia de diferencias significativas sólo en la etapa de absorción. Si bien ensayos de actividad biológica antiviral in vitro demostraron similitud entre ambas proteínas, la actividad antiproliferativa específica in vitro resultó dos veces superior para la variante obtenida en células HEK. El análisis de la actividad biológica antitumoral in vivo permitió confirmar estos resultados, demostrando la mayor potencia antitumoral del IFN4NHEK. Por otra parte se llevó a cabo la generación de nuevas muteínas hiperglicosiladas del hIFN-alfa2b, con el objetivo de optimizar la molécula IFN4N. El estudio de las nuevas moléculas permitió observar que el grado de glicosilación de las mismas se incrementó conforme aumentó el número de sitios potenciales para N-glicosilación, lo cual se tradujo en un incremento del tiempo de vida media plasmática. A su vez, las variantes carentes de la modificación R23N evidenciaron valores de ABE antiproliferativa in vitro superiores respecto del IFN4N. Los resultados de esta tesis revelan la importancia de encontrar el balance apropiado entre la actividad biológica in vitro y las propiedades farmacocinéticas para la obtención de un producto terapéutico innovador y efectivo. In the present thesis work IFN4N was produced in CHO and HEK cells and purified. IFN4NCHO and IFN4NHEK were characterized in terms of glycosylation, pharmacokinetics and biological activity. IFN4NCHO exhibited a higher average molecular mass and more acidic and ramified isoforms compared to IFN4NHEK. Regarding pharmacokinetic studies, IFN4NHEK reached maximum plasma concentration 3-times faster than IFN4NCHO, however their elimination profile did not differ significantly. Also, despite the in vitro antiviral specific biological activity of both proteins was the same, IFN4NHEK was more efficient as an antiproliferative agent in different tumor-derived cell lines. Accordingly, IFN4NHEK showed a higher in vivo antitumor activity in animal models. As part of this thesis work new muteins of rhIFN-alpha2b were designed and constructed in order to improve the glycosylation degree and, consequently, the pharmacokinetic properties, and the in vitro antiproliferative activity of IFN4N. The characterization of the muteins showed that the introduction of new N glycosylation sites resulted in the increment of their glycosylation degree. The in vitro biological characterization showed that variants lacking the mutation R23N presented an increased antiproliferative activity. The results of this thesis demonstrate that searching for an appropriate balance between the in vitro biological activity and the pharmacokinetic properties in the context of an adequate production host would constitute the basis to generate an innovative and effective therapeutic product. Universidad Nacional del Litoral Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas

Introducción: hasta hace poco, el tratamiento estándar de oro para la hepatitis C eran los interferones pegilados (Peg-IFN) en combinación con la ribavirina (RBV). Con la llegada de nuevos fármacos, se propuso evaluar los resultados del tratamiento y a los pacientes en espera de la nueva terapia. Materiales y métodos: este estudio analítico transversal evaluó el resultado del tratamiento en individuos con hepatitis C crónica, y luego comparó a individuos que tienen experiencia en no responder al tratamiento basado en interferón (IFN) con individuos sin experiencia de tratamiento previo. Resultados: el estudio incluyó 192 individuos. Entre 87 pacientes sometidos a tratamiento, se observaron bajas tasas de respuesta viral sostenida (RVS). La comparación de los 105 pacientes no tratados previamente y los 87 que habían recibido tratamiento con IFN previamente evidenció que entre los pacientes en espera de nuevas terapias, los individuos sin tratamiento previo presentaron mayor proporción de genotipo 1 (68% frente a 49%; p = 0,028), menores niveles de ALT (91,1 ± 73,0 frente a 126,0 ± 73,40 U/L; p = 017), de AST (70,1 ± 51,3 frente a 89,7 ± 47,40 U/L; p = 050), de GGT (85,3 ± 85,1 frente a 148,4 ± 123,9 U/L; p = 0,007) y menor proporción de fibrosis significativa (24,3 frente a 83,3; p

Objetivo: Describir la experiencia recogida durante el programa multidisciplinar, y en particular describir la incidencia de los trastornos psiquiátricos en pacientes con hepatitis C crónica (HCC) durante el tratamiento con interferon y ribavirina, y determinar la adherencia al tratamiento antiviral y la respuesta viral sobtenida (RVS). Material y métodos: Estudio observacional, descriptivo y retrospectivo realizado a partir de los datos recogidos durante el programa de dispensación ambulatoria de tratamiento antiviral. Se incluyó a todos los pacientes monoinfectados por el virus hepatitis C (VHC) que iniciaron tratamiento durante el 2010. El cribaje de los trastornos psiquiátricos se realizó mediante el Hospital Anxiety-Depression Scale (HADS) y el General Health Questionnaire (Goldberg) las semanas 0, 4, 12, 24, 48 y 72. La adherencia se evaluó mediante el recuento de dispensaciones y de la medicación sobrante del paciente y la exposición al fármaco según la regla 80/80/80. La respuesta virológica se determinó por el médico responsable de acuerdo a las definiciones estándar. Resultados: Se incluyeron 76 pacientes, 19 (25%) de los cuales tenían antecedentes psiquiátricos. La incidencia de trastornos psiquiátricos fue del 33% (n = 25). El pico de resultados anormales en los test fue en la semana 12. El 43% alcanzó RVS, sin diferencias entre ambos grupos (p > 0,05). La adherencia (96,0% y 96,8%, p > 0,05) y RVS (39% y 52%, p > 0,05) fueron similares en ambos subgrupos con y sin trastornos. Conclusiones: Los trastornos psiquiátricos no tuvieron impacto en la adherencia y la RVS. El seguimiento multidisciplinar durante el tratamiento de la hepatitis C crónica (HCC) puede contribuir a la detección precoz y manejo de los trastornos psiquiátricos y a mejorar la atención integral del paciente. Purpose: We aimed to describe the incidence of psychiatric disorders in a cohort of HCV infected patients treated with interferon and ribavirin, and their impact on treatment adherence and viral response rate (SVR). Materials and methods: Retrospective analysis of a cohort of HCV patients visited at an outpatient pharmacy service (OPS). We included all adult patients monoinfected with HCV who had initiated treatment in 2010. Monitoring of psychiatric disorders was assessed at weeks 0, 4, 12, 24, 48, and 72 through the self-administered questionnaires Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS) and General Health Questionnaire (Goldberg). Adherence to treatment was assessed by counting of drug dispensations and patient reporting and drug exposure with the 80/80/80 rule. Virologic response was determined by the physician according to standard definitions. Results: Among 76 included patients, 19 (25%) had a preexisting psychiatric disorder. The incidence of confirmed psychiatric disorders was 33% (n=25), with a peak of abnormal results in the tests by week 12. Overall, 43% of patients achieved an SVR. There were not significant differences between strict adherence and SVR in patients with or without medically confirmed disorders (96.0% vs 96,8%; p = NS) and SVR (39% vs 52%; p = NS], respectively. Conclusions: Psychiatric side effects had no effect on adherence to treatment nor on attainment of SVR. Multidisciplinary monitoring provided during the treatment of hepatitis C can contribute to early detection and management of psychiatric disorders and to improve integrated patient care.

El virus de la hepatitis C (VHC) es la principal causa de patología hepática El tratamiento habitual para la infección crónica del VHC es la combinación de interferón (IFN) pegilado alfa y ribavirina. Los efectos adversos psiquiátricos asociados a dicho tratamiento son: ansiedad, depresión, manía, delirium y psicosis (aunque ésta es poco habitual). Los pacientes con enfermedades mentales graves y/o adicciones a sustancias presentan respuestas virológicas al tratamiento para la infección por VHC similares a la población general. No existen datos definitivos que avalen que estos pacientes no puedan ser tratados e incluso retratados aún cuando el tratamiento inicial no haya sido eficaz o hayan sufrido descompensaciones psicóticas atribuibles al mismo, aunque sí se aconseja hospitalizar al paciente para poder hacer un control más estrecho. Los pacientes diagnosticados de psicosis crónica no deben ser excluidos si están estables psicopatológicamente, realizan un seguimiento psiquiátrico regular, presentan una buena adherencia al tratamiento y disfrutan de un ambiente contenedor. La decisión debe tomarse de forma individualizada. El tratamiento de los síntomas psicóticos producidos por el tratamiento con IFN alfa y ribavirina consiste en cesar el tratamiento antiviral e introducir antipsicóticos. En la mayoría de los casos los síntomas remiten, pero hay descritos casos resistentes. Hepatitis C virus (HCV) is the principal cause of hepatic pathology. The usual treatment for chronic HCV infection is the combination of alpha pegylated interferon and ribavirine. The psychiatric adverse effects associated to this treatment are: anxiety, depression, mania, delirium and psychosis (although this one is less common). Patients with severe mental illness, with or without substance abuse problems, display virological responses to the treatment for HCV infection similar to general population. There are not definitive data to support that these patients can not be treated or even re-treated although the initial treatment had not been effective or if they had suffered psychotic decompensations attributable to it. However it is recommended to hospitalize the patient to have a tighter control. Patients with chronic psychosis diagnosis must not be excluded if they are psychopatological stable, they do psychiatric monitoring regularly, they have good treatment adherence and they live in a supportive environment. The decision must be made individually. The treatment of psychiatric symptoms produced by alpha interpheron and ribavirine consists in stopping antiviral treatment and introducing antipsychotic medication. In most cases, the symptoms are reduced, although several resistant cases have been described.

Introducción: bexaroteno es un rexinoide aprobado en el tratamiento de estadios tempranos y avanzados del linfoma cutáneo de células T (LCCT). Caso Clínico: el presente reporte de casos mostramos los resultados del empleo de bexaroteno en dosis bajas más fototerapia o Interferon alfa 9 millones en el tratamiento del LCCT. Ocho pacientes fueron tratados, cinco fueron Micosis fungoides, dos Linfoma Epidermotrópico CD8 agresivo y uno fue un Síndrome Sézary. La respuesta global fue del 62.5% (5/8) y la duración media de respuesta fue de 20 meses. El bexaroteno en dosis bajas en combinación a fototerapia o interferon alfa 2a puede ser efectivo en el tratamiento del LCCT. Introduction: Bexarotene is a rexinoid compound that is approved for use in the therapy for early and advanced stage cutaneous T-cell lymphoma (CTCL). Clinical Cases: We present in this report the results of the use of low-dose bexarotene plus phototherapy or alpha-interferon, nine million units, in the treatment of CTCL. Eight patients were treated, five had mycosis fungoides, two had CD-8 epidermothropic aggressive lymphoma. The overall response rate was 62.5% (5/8), and the mean duration of response was 20 months. Low-dose bexarotene combined with phototherapy or alpha-interferon may be effective in the treatment of CTCL.

En el presente trabajo abordamos la implantación embrionaria en ratas controles ydiabéticas desde el punto de vista del fenómeno vasoactivo que conlleva. Las prostaglandinas son necesarias para permitir la implantación de losembriones en el lumen, ya sea incrementando el flujo sanguíneo y lavasodilatación del útero durante la decidualización endometrial, como regulando Ia actividad contráctil del tejido miometrial. El óxido nítrico ha sido reconocido como agente vasodilatador y miorrelajante, yparte de su efecto es mediado a través de la regulación de la síntesis deprostaglandinas en diversos procesos fisiológicos. Se ha determinado variaciones en la síntesis uterina de prostaglandinas y deóxido nítrico en la preñez temprana en la rata, y se ha establecido una relacióncausal entre ambos mecanismos fisiológicos durante la implantación embrionaria. En el útero dichos agentes vasoactivos aumentan durante los días peri-implantatoriosde la preñez, como resultado de la combinación de la acción de losesteroides ováricos y de agentes locales derivados del embrión o de la madre. Las isoformas Cab-dependiente y Cap-independiente de la enzima sintetizadorade óxido nítrico son las responsables del incremento en la actividad enzimática enel día de la implantación. La inhibición de la síntesis intraluminal de óxido nítricoreduce el número de embriones implantados en un 50%, probablemente alterandola adecuada irrigación sanguínea al sitio de implantación. También se determinóque la producción uterina de prostaglandina E y qu depende tanto de laproducción de óxido nítrico como de señales embrionarias tempranas. Nuestros resultados indican además, que la acción vasoactiva del óxido nítrico yde las prostaglandinas puede modularse de manera tal de compensaralteraciones metabólicas en la rata diabética de tipo no-insulino-dependiente, ypermitir que el proceso implantatorio ocurra eficientemente en esta patología. This thesis addresses the process of embryo implantation in control and diabeticrats focusing in the vasoactive changes it involves. We have established the roleof prostaglandins and nitric oxide. The first group of molecules is required to allowembryo implantation in the uterine lumen, by increasing uterine blood flow andvasodilatation during endometrial decidualization and by regulating the contractileactivity of the miometrial tissue. On the other hand, nitric oxide, a recognizedvasodilating and muscular relaxing agent, exerts part of its effects in severalphysiological processes by modulating prostaglandin synthesis. In the presentwork we have determined the existence of significant changes in the uterinesynthesis of prostaglandins and nitric oxide during the early pregnancy in the ratand we have established a causal relationship between both mechanisms duringthe embryonic implantation. The observed increase in the concentration of these vasoactive agents in theuterus takes places in the peri-implantation days, as a result of the combinedaction of ovarian steroids and local factors derived either from the embryo or thematernal tissue. Both the Cap-dependent and independent isoforms of the nitricoxide synthetase are responsible for the increase in enzymatic activity in theimplantation day. The relevant role played by nitric oxide is revealed by the factthat inhibition of uterine nitric oxide synthesis reduces the number of implantedembryos by 50%, probably because it alters the appropriate blood supply to theimplantation site. In addition, it was determined that the production ofprostaglandin E and an depends both on the production of nitric oxide and onearly embryonic signals. Our studies also indicate that the vasoactive effect of nitric oxide andprostaglandins is modified in the non-insulin dependent diabetic rat in such a wayas to compensate the metabolic alterations that this pathology involves, thusallowing an efficient embryo implantation. Fil: Novaro, Virginia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Cryoglobulinemia is a systemic disorder in which the blood contains inmunoglobulins that reversibly precipitate in the cold, giving rise to immune complex deposition that may cause small vessel vasculitis. A strong association with Hepatitis C has been made in the latest years. We describe a patient with hepatitis C and Cryoglobulinemia who wazzu developed one of the most severe crises with clinical manifestations of gangrene in feet and upper extremities. Patient ended with amputation of the lower limbs. His life was saved with plasmapheresis, use of frozen plasma, steroids, heparin and alfa interferon. In this article we report the case and we do a review of the literature on cryoglobulinemia. (Rev Med Hered 1997;8:183-188).