Search

The presence of salts in the culture medium and the addition of phytohormones, necessary to break seed dormancy in the in vitro germination of passion fruit, can induce critical values of osmotic potential. This can change the membrane permeability of seeds, affecting the hydration rate, enzyme release, ion transport, pH, and inhibitor values, which may decrease germination percentage. The aim of this study was to evaluate different types of culture media, composed of other substances, combined with mechanical techniques of tegument removal to determine the most appropriate culture medium for the in vitro germination of Passiflora edulis (Sims flavicarpa Deg.) seeds obtained by open pollination. The experimental design was completely randomized in a 10 × 3 factorial scheme (10 culture media × three types of seed-intact, scarified, and cut), with eight replicates and five seeds per plot. Scarified seeds cultivated in a medium composed of a commercial substrate and gibberellic acid presented a higher percentage of germination than intact or cut seeds cultivated in different concentrations of Murashige & Skoog (MS) medium. Scarification is a satisfactory method for breaking the dormancy of passion fruit seeds, and commercial substrates Bioflora® enriched with gibberellic acid may replace in vitro germination. RESUMO A presença de sais no meio de cultura e a adição de fitohormônios, necessários para quebrar a dormência das sementes na germinação in vitro do maracujá, podem levar o potencial osmótico a níveis críticos. Isso pode alterar a permeabilidade da membrana das sementes, afetando a taxa de hidratação, a liberação de enzimas, o transporte iônico, o pH e os teores de inibidores, o que pode acarretar na diminuição do percentual de germinação. O objetivo desta pesquisa foi avaliar diversos tipos de meios de cultura, compostos por diferentes substâncias, combinados com técnicas mecânicas de remoção do tegumento, para determinar o tratamento mais adequado para a germinação in vitro de sementes de Passiflora edulis (Sims flavicarpa Deg.) obtidas por polinização aberta. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, em esquema fatorial 10 × 3 (10 meios de cultura × três tipos de sementes - intactas, escarificadas e cortadas), com oito repetições e cinco sementes por parcela. Sementes escarificadas cultivadas em meio composto de substrato comercial e ácido giberélico apresentaram taxa de germinação superior às sementes intactas ou cortadas cultivadas em diferentes concentrações de meio Murashige & Skoog (MS). A escarificação é um método satisfatório de quebra de dormência de sementes de maracujá e substratos comerciais Bioflora® enriquecidos com ácido giberélico podem substituir o meio MS na germinação in vitro.

Gerbera (Gerbera jamesonii Bolus ex Hook. F.; Asteraceae), is one of the most economically important ornamental plants due to its aesthetic value. In the present study, we established a micropropagation method for the large-scale production of quality planting material of gerbera ‘Pink Melody’. Eighty-six percent of the capitulum explants produced adventitious shoots (15.44 ± 0.34 shoots per capitulum) on Murashige and Skoogs (MS) medium containing 2 mg L−1 6-benzylaminopurine (BAP) after six weeks of incubation. The highest shoot multiplication rate (17 shoots per explant) was obtained on MS medium supplemented with BAP and meta-Topolin (each at 2 mg L−1) after eight weeks. The micro-shoots were successfully rooted (91.35%) on half-strength MS medium containing 2 mg L−1 indole-3-butyric acid (IBA) within four weeks. The micropropagated plantlets were acclimatized with a 97.5% survival rate and produced flowers with no visible morphological aberrations. RESUMO A Gérbera (Gerbera jamesonii Bolus ex Hook. F.; Asteraceae) é uma das plantas ornamentais economicamente mais importantes devido ao seu valor estético. No presente estudo, estabelecemos um método de micropropagação para a produção em larga escala de material de plantio de qualidade de gérbera ‘Pink Melody’. Oitenta e seis por cento dos explantes do capítulo produziram brotos adventícios (15,44 ± 0,34 brotos por capítulo) em meio Murashige e Skoogs (MS) contendo 2 mg L-1 de 6-benzilaminopurina (BAP) após seis semanas de incubação. A maior taxa de multiplicação de brotos (17 brotos por explante) foi obtida em meio MS suplementado com BAP e meta-Topolina (cada um a 2 mg L-1) após oito semanas. Os micro-brotações foram enraizados com sucesso (91,35%) em meio MS de meia força contendo 2 mg L-1 de ácido indol-3-butírico (AIB) em quatro semanas. As plântulas micropropagadas foram aclimatadas com uma taxa de sobrevivência de 97,5% e produziram flores sem aberrações morfológicas visíveis.

Esse trabalho objetivou avaliar o efeito do tipo de luz no cultivo in vitro de Eugenia involucrata. Os tratamentos consistiram do cultivo sob diodos emissores de luz (LEDs) de cor vermelho, azul, verde ou branco e lâmpadas fluorescentes. Nos cultivos sob LEDs branco e azul foram observadas as maiores médias de estabelecimento; sob o azul e lâmpadas fluorescentes, o maior número de folhas; sob o azul, o maior número de brotos; sob o branco, menor contaminação bacteriana; e sob o verde os piores resultados. LEDs azul, vermelho, branco e lâmpadas fluorescentes influenciam favoravelmente a propagação in vitro de E. involucrata.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais The plant tissue culture techniques includes a set in which each explant (cell, tissue or organ) is isolated under aseptic conditions on artificial nutrient medium. This process is based on the principle of totipotentiality cells, or any plant organism cell has all the genetic information necessary for the regeneration of a whole plant. Nevertheless, some plant species have difficulty germination is the case of Lavandula angustifolia, and an unevenness in the development of seedlings and plants in the field, due to natural variability resulting from sexual propagation. In this context, the in vitro culture can solve or minimize hot spots in seedling establishment with medicinal properties and production of essential oils or by micropropagation. Thus, three experiments were carried out in order to study the germination and early development of this species. In the first experiment evaluated the efficiency of use of hydrogen peroxide in the pretreatment of seed treated with different concentrations of gibberellic acid in vitro culture: 0.0; 1.0; 2.0 and 3.5 mg L-1. Then, we assessed the influence of using conventional lamps and growlux MS and LS media at concentrations of 50 and 100% of the salts. Finally, an assay which evaluated the effect of the new class of regulators comprising polyamines putrescine, spermine and spermidine concentrations in different under conventional lamps. In all experiments biometric characteristics such as number of leaves were evaluated, shoot length and root fresh weight, percentage of abnormal seedlings, survival rate and the kind of germination parameters such as germination, emergence rate, start time, end and average germination, sync, uncertainty. Best results were found when retracted the seeds with hydrogen peroxide and inoculated in medium containing 2.5 mg L -1 of gibberellic acid. The use of growlux lamps did not differ across conventional light bulbs in the evaluated characteristics, but it was identified that the species grows best in LS means . As for the polyamines found a generally favoring the germination, shoot and leaf number of lavender seedlings at 0.5 mg L-1 spermine. except when applied spermine generating fewer sheet in this condition. A cultura de tecidos vegetais compreende um conjunto de técnicas nas quais um explante (célula, tecido ou órgão) é isolado sob condições assépticas, em meio nutritivo artificial. Este processo baseia-se no princípio da totipotencialidade das células, ou seja, qualquer célula de organismo vegetal apresenta todas as informações genéticas necessárias à regeneração de uma planta completa. Algumas espécies vegetais entretanto apresentam dificuldade de germinação, como é o caso da Lavandula angustifolia, além de uma desuniformidade no desenvolvimento das mudas e das plantas à campo, devido à variabilidade natural resultante da propagação sexuada. Neste contexto, o cultivo in vitro pode resolver ou minimizar pontos críticos comuns no estabelecimento de plantas com propriedades medicinais e ou produtoras de óleos essenciais pelo processo de micropropagação. Dessa forma, foram realizados três experimentos no intuito de estudar o estabelecimento in vitro e desenvolvimento inicial dessa espécie. No primeiro experimento avaliou-se a eficiência da utilização de peróxido de hidrogênio no pré-tratamento de sementes inoculadas em meio de cultura com diferentes concentrações de ácido giberélico em cultivo in vitro: 0,0; 1,0; 2,0 e 3,5 mg L-1. No segundo, avaliou-se a influencia do uso das lâmpadas growlux e convencional em meios MS e LS nas concentrações de 50 e 100% dos sais. E por fim, avaliou-se o efeito da classe de reguladores de crescimento poliaminas que compreendem a putrescina, espermina e espermidina em diferentes concentrações. Em todos os experimentos foram avaliadas características biométricas como número de folhas, comprimentos de parte aérea e radicular, massa fresca, porcentagem de plântulas anormais, e os parâmetros da germinação da espécie como porcentagem de germinação e velocidade de emergência. Melhores resultados foram encontrados quando se aplicou pre- tratamento com peróxido de hidrogênio nas sementes com a posterior inoculação em meio contendo 2,5 mg L-1 de ácido giberélico. O uso de lâmpadas growlux não apresentou diferença frente as lâmpadas convencionais nas características avaliadas, porém foi identificado que a espécie desenvolve melhor em meio LS. Quanto ao uso das poliaminas verificou-se em geral um favorecimento da germinação, parte aérea e número de folhas das plântulas de lavanda na concentração de 0,5 mg L-1 exceto quando se aplicou espermina que gerou menor número de folhas nessa condição. Mestre em Agronomia

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais A mangabeira é uma fruteira importante para as regiões Nordeste e Centro-Oeste, pois garante o sustento e fornece alimento para milhares de famílias extrativistas. Entretanto, suas áreas naturais estão localizadas em algumas das regiões de maior antropização do país e, atualmente, a espécie está ameaçada de extinção, o que justifica a realização de estudos que possam resultar em estratégias para a sua conservação. O objetivo deste trabalho foi realizar a conservação in vitro de mangabeira pela técnica de crescimento lento. O trabalho foi conduzido no Laboratório de Biotecnologia, da Universidade Federal de Uberlândia. Para o estabelecimento in vitro, sementes de mangabeira foram desinfestadas com álcool 70% e hipoclorito de sódio 2,5% por 1 e 30 minutos, respectivamente, e enxaguadas com água destilada e autoclavada. Posteriormente, foram inoculadas em frascos de vidro, vedados por tampas plásticas, contendo 40 mL de meio MS suplementado com 2 g L-1 de carvão ativado, 7 g L-1 de ágar e pH a 5,7, sendo mantidos em temperatura de 25°C e fotoperíodo de 16 horas de luz, fornecida por lâmpadas fluorescentes brancas de 20 W. Para a conservação in vitro foram realizados três experimentos nos quais os segmentos nodais foram extraídos das plantas germinadas in vitro e inoculados em meio MS, com 7 g L-1 de ágar, diferindo da seguinte maneira: no primeiro testou-se o efeito de agentes osmóticos e doses (15, 20 e 25 g L-1 de manitol e 10, 20 e 40 g L-1 de sorbitol) mais uma testemunha (dose zero); no segundo, quatro concentrações de sacarose (0, 10, 20 e 30 g L- 1) e duas de ácido abscísico (0 e 0,5 mg L-1); e no terceiro, quatro meios de cultura (MS 100%, MS 50%, WPM 100% e WPM 50%) e duas temperaturas (25 e 20°C). Além disto, os dois primeiros experimentos foram repetidos com adição de 2 g L-1 de carvão ativado ao meio de conservação para comparar com os resultados obtidos em sua ausência. Aos 45 e 90 dias de conservação foram observadas a taxa de sobrevivência e o número de folhas verdes dos explantes. Para a recuperação do crescimento, os explantes foram transferidos para meio MS, contendo 7 g L-1 de ágar, 1 mg L-1 BAP, 1 mg L-1 de ANA e 2 g L-1 de carvão ativado. Aos 60 dias verificou-se a taxa de sobrevivência, número de folhas verdes, número de nós, comprimento da parte aérea e massa fresca dos segmentos nodais de mangabeira. Os resultados mostraram que o uso de 2 g L-1 de carvão ativado melhora a sobrevivência e desenvolvimento dos explantes. Houve redução do crescimento, porém baixas taxas de sobrevivência, quando se utilizou: o manitol, na presença do carvão; 0,5 mg L-1 de ABA, na ausência deste suplemento; e baixas concentrações de sacarose, independente do uso de carvão ativado. Explantes conservados em meio WPM com 50% da concentração de sais e temperatura de 20°C apresentam baixo metabolismo e respondem bem à etapa de recuperação do crescimento. The mangaba is an important fruit tree for the Northeast and Central West regions, because it ensures sustenance and provides food for thousands of extractive families. However its natural areas are located in some of the country’s regions of the greatest anthropization and, currently, the species is threatened with extinction, what justifies the achievement of studies that can result in strategies for its conservation. The objective of this work was to accomplish the in vitro conservation of mangaba by the slow growth technique. The work was conducted at the Biotechnology Laboratory of the University of Uberlândia. For the in vitro establishment, mangaba seeds were disinfested with 70% alcohol and 2.5% sodium hypochlorite for 1 and 30 minutes, respectively, and rinsed with distilled and autoclaved water. Afterwards, they were inoculated in glass jars, sealed with plastic lids, containing 40 mL of MS medium supplemented with 2 g L"1 of activated charcoal, 7 g L"1 of agar and pH of 5.7, which were kept at a temperature of 25°C and photoperiod of 16 hours of light provided by 20 W white fluorescent light bulbs. For the in vitro conservation were made three experiments in which the nodal segments were extracted from plants germinated in vitro and inoculated in MS medium with 7 g L"1 of agar, differing in the following way: the first one tested the effect of osmotic agents and doses (15, 20 and 25 g L"1 of mannitol and 10, 20 and 40 g L"1 of sorbitol) plus one control; the second one, four concentrations of sucrose (0, 10, 20 and 30 g L"1) and two of abscisic acid (0 and 0.5 mg L"1); and the third one, four culture media (100% MS, 50% MS, 100% WPM and 50% WPM) and two temperatures (25 and 20°C). Beyond that, the first two experiments were repeated with the addition of 2 g L"1 of activated charcoal to the conservation medium to compare with the results obtained in its absence. At 45 and 90 days of conservation the survival rate and the number of green leaves of the explants were observed. For growth recovery, the explants were transferred to MS medium containing 7 g L"1 of agar, 1 mg L"1 of BAP, 1 mg L"1 of NAA e 2 g L"1 of activated charcoal. At 60 days were verified the survival rate, number of green leaves, number of nodes, shoot length and fresh mass of nodal segments of mangaba. The results showed that the use of 2 g L"1 of activated charcoal improves the survival and development of the explants. There was a reduction in growth, but low survival rates, when was used: the mannitol in the presence of charcoal; 0.5 mg L"1 of ABA, in the absence of this supplement; and low concentrations of sucrose, regardless of the use of activated charcoal. Explants conserved in 50% WPM medium and temperature of 20°C exhibit low metabolism and a good response to growth recovery stage. Dissertação (Mestrado)

Achyrocline satureioides is a shrub native from South America. In popular medicine it is used in infusions such as digestive, carminative, antispasmodic, eupeptic and emmenagogue. However, its main use is as an ingredient in the liquor industry. Commercial exploitation is carried out through the collection of natural populations in an unsustainable way. The micropropagation of A. satureioides will allow its massive propagation and it will settle a base for its domestication. For this, a clone denominated as M1-5 was first propagated by cuttings. Subsequently, nodal segments obtained from young stems were disinfected by a standard method and cultured on MS medium. These shoots were used as a source of explants for subsequent assays. For its in vitro establishment MS medium and WPM were tested. Once the culture was established, the responses of the explants to increasing concentrations of 6-benzylaminopurine (BAP) (0.0; 0.5; 2.5 and 5.0 μM) with and without 0.05 μM α-naphthalene acetic acid (NAA) on WPM as basal medium were studied during 35 days. The proliferation of buds, the presence of callus and the number and length of the roots were evaluated. All of the “macela” cuttings in vivo propagated rooted and developed satisfactorily under the conditions tested. The application of 5.0 μM BAP alone generated the best multiplication rate, so it was selected as the multiplication medium. De novo shoots rooted spontaneously and finally, transferred to the greenhouse. Here in it was possible to establish a micropropagation protocol not only for the production of plantlets of selected clones but also for the application of biotechnological tools in the development of A. satureioides germplasm. Achyrocline satureioides é um arbusto nativo da América do Sul. Na medicina popular é usado em infusões como digestivo, carminativo, antiespasmódico, eupéptico e emenagogo. No entanto, seu principal uso é como ingrediente na indústria de bebidas. A exploração comercial é feita através da coleta em populações naturais, de modo extrativista e predatório. A micropropagação de A. satureioides permite a multiplicação massiva dessa espécie e é um reforço para sua domesticação e melhoramento. Para isso, um clone denominado M1-5 foi propagado por estacas. Posteriormente, segmentos nodais obtidos de hastes jovens, desse clone, foram desinfetados pelo método padrão e cultivados em frascos contendo meio MS. Essas brotações foram usadas como fonte de explantes para ensaios subsequentes. Testaram-se no estabelecimento in vitro, o meio MS e o WPM. Uma vez estabelecida a cultura in vitro, estudaram-se as respostas dos explantes em relação a concentrações crescentes 0; 0,5; 2,5 e 5,0 μM de 6-benzilaminopurina (BAP) e adição ou ausência de ácido α-naftaleno acético (ANA) 0,05 μM, em meio basal WPM. A cultura foi monitorada periodicamente por 35 dias, registrando a proliferação de gemas, a presença de calos e o número e comprimento das raízes. Todas as estacas da «macela» propagadas in vivo enraizaram-se e desenvolveram-se satisfatoriamente nas condições testadas. A aplicação de 5,0 μM de BAP por si só gerou a melhor taxa de multiplicação, razão pela qual foi estabelecida como a dose ideal de trabalho. Os brotos gerados de novo enraizaram espontaneamente e foram transferidos para casa de vegetação. Neste trabalho foi possível estabelecer um protocolo de micropropagação para propagação em larga escala de plataforma tecnológica, seja para a produção de mudas de clones selecionados, seja para a aplicação de ferramentas biotecnológicas no pré-melhoramento de germoplasma de “macela”. Achyrocline satureioides é um arbusto nativo da América do Sul. Na medicina popular é usado em infusões como digestivo, carminativo, antiespasmódico, eupéptico e emenagogo. No entanto, seu principal uso é como ingrediente na indústria de bebidas. A exploração comercial é feita através da coleta em populações naturais, de modo extrativista e predatório. A micropropagação de A. satureioides permite a multiplicação massiva dessa espécie e é um reforço para sua domesticação e melhoramento. Para isso, um clone denominado M1-5 foi propagado por estacas. Posteriormente, segmentos nodais obtidos de hastes jovens, desse clone, foram desinfetados pelo método padrão e cultivados em frascos contendo meio MS. Essas brotações foram usadas como fonte de explantes para ensaios subsequentes. Testaram-se no estabelecimento in vitro, o meio MS e o WPM. Uma vez estabelecida a cultura in vitro, estudaram-se as respostas dos explantes em relação a concentrações crescentes 0; 0,5; 2,5 e 5,0 μM de 6-enzilaminopurina (BAP) e adição ou ausência de ácido α-naftaleno acético (ANA) 0,05 μM, em meio basal WPM. A cultura foi monitorada periodicamente por 35 dias, registrando a proliferação de gemas, a presença de calos e o número e comprimento das raízes. Todas as estacas da «macela» propagadas in vivo enraizaram-se e desenvolveram-se satisfatoriamente nas condições testadas. A aplicação de 5,0 μM de BAP por si só gerou a melhor taxa de multiplicação, razão pela qual foi estabelecida como a dose ideal de trabalho. Os brotos gerados de novo enraizaram espontaneamente e foram transferidos para casa de vegetação. Neste trabalho foi possível estabelecer um protocolo de micropropagação para propagação em larga escala de plataforma tecnológica, seja para a produção de mudas de clones selecionados, seja para a aplicação de ferramentas biotecnológicas no pré-melhoramento de germoplasma de “macela” Instituto de Genética Fil: Guariniello, Julian. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Genética; Argentina Fil: Iannicelli, Jesica. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Genética; Argentina Fil: Peralta, Patricia Angelica. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Genética ; Argentina Fil: Escandon, Alejandro Salvio. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Genética; Argentina

The objective of this work was to evaluate how salt concentrations in media used for in vitro cultures affect the early development of “barueiro” (Dipteryx alata) seedlings obtained from the shoot apex. Two different in vitro culture media - Murashige & Skoog (MS) and wood plant medium (WPM) - in different salt concentrations (25, 50, 75, and 100%) were used. At 120 days, the D. alata seedlings in the MS medium, in its original concentration (100%), developed better than in other concentrations or in the WPM. Therefore, the MS medium was considered the most suitable for ensuring in vitro establishment because it provided greater root length (27.65 cm) and number of leaves per plant (26 leaves) than the other medium. Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar como concentrações de sais que compõe os principais meios utilizados em cultivo in vitro influenciam o desenvolvimento inicial de mudas de barueiro (Dipteryx alata), proveniente de ápice caulinar. Foram utilizados dois meios de cultivo in vitro - Murashige & Skoog (MS) e “wood plant medium” (WPM) - em diferentes concentrações de sais (25, 50, 75 e 100%). Aos 120 dias, as plântulas de D. alata no meio MS, em sua concentração original (100%), apresentaram melhor desenvolvimento que as em outras concentrações ou em meio WPM. Portanto, o meio MS mostrou ser o mais indicado para garantir o estabelecimento in vitro, uma vez que propiciou maior comprimento da raiz (27,65 cm) e número de folhas por planta (26 folhas) que o outro meio.

Lavender is an aromatic ornamental plant that is used widely in the perfume, pharmaceutical, cosmetical and food industries. That is why it is important to study ways to promote a production of lavender raw material. For this, four experiments were carried out in order to study the germination and initial in vitro development of lavender. In the first part the efficiency of the use of hydrogen peroxide in the pre-treatment of seeds inoculated in culture media with different concentrations of gibberellic acid was evaluated. Besides that, the influence of the use of Growlux lamps and white fluorescent lamps on plantlets cultivated in MS and LS media at salts concentrations of 50 and 100% was evaluated. Finally, the effect of the gibberellic acid, putrescine, spermine and spermidine in different concentrations was evaluated. Better results were estimated when hydrogen peroxide pretreatment was applied to the seeds with subsequent inoculation in a medium containing 2,5 mg L-1 of gibberellic acid. The use of Growlux lamps did not influence the characteristics observed when compared to the use of white fluorescent lamps, however it was concluded that the species develops more in a LS medium. Concerning the use of polyamines was found that germination, aerial part and number of leaves of the seedlings were generally favored at the concentration of 0,5 mg L-1 except when spermine was applied, which resulted in a lower number of leaves under this condition. RESUMO: Lavanda é uma planta ornamental aromática que é amplamente utilizada nas indústrias de perfumaria, farmacêutica, cosmética e alimentícia e por isso é importante estudar maneiras de promover a produção dessa matéria-prima. Para tanto, foram realizados quatro experimentos com o objetivo de estudar a germinação e o desenvolvimento inicial in vitro da lavanda. No primeiro experimento testou-se a eficiência do uso de peróxido de hidrogênio no pré-tratamento de sementes inoculadas em meios de cultura com diferentes concentrações de ácido giberélico. Além disso, foi avaliado a influência do uso de lâmpadas Growlux e de lâmpadas fluorescentes brancas em plântulas cultivadas nos meios MS e LS em concentrações de sais de 50 e 100%. Por fim, também estudou-se o efeito dos reguladores ácido giberélico, putrescina, espermina e espermidina em diferentes concentrações. Melhores resultados foram encontrados quando o pré-tratamento com peróxido de hidrogênio foi aplicado às sementes com posterior inoculação em meio contendo 2,5 mg L-1 de ácido giberélico. O uso de lâmpadas Growlux não influenciou as características avaliadas quando comparado ao uso de lâmpadas fluorescentes brancas, entretanto observou-se que as espécies se desenvolvem melhor em meio LS. Com relação ao uso de poliaminas, verificou-se que a germinação, parte aérea e número de folhas das plântulas foram favorecidas na concentração de 0,5 mg L-1, exceto quando se aplicou espermina, que resultou em menor número de folhas nessa condição.

Papaya (Carica papaya L.) is a fruit tree of great economic and food interest worldwide. Its propagation can occur both sexually and asexually. Traditionally, it is propagated by seeds; however, vegetative propagation has been often used with the use of in vitro and ex vitro culture techniques. In vegetative propagation, the cutting method has been extensively explored. Research has also been developed using grafting. In recent years, papaya cultivation has also become a model for other fruit plants in the use of biotechnological techniques aiming applications ranging from germplasm conservation to genetic transformation of plants. Since the beginning of the 1970s, the culture of papaya tree tissues has been intensely studied, allowing greater control of in vitro development, especially for micropropagation, organogenesis and somatic embryogenesis techniques. Resumo O mamoeiro (Carica papaya L.) é uma fruteira de bastante interesse econômico e alimentar em todo o mundo. Sua propagação pode ocorrer tanto por via sexuada como assexuada. Tradicionalmente é propagado por sementes, entretanto, a propagação vegetativa vem sendo frequentemente utilizada com o uso de técnicas de cultura in vitro e ex vitro. Na propagação vegetativa o método de estaquia tem sido bastante explorado. Pesquisas também tem sido desenvolvidas utilizando-se a enxertia. A cultura do mamoeiro tem se tornado também, nos últimos anos, um modelo para outras fruteiras no que diz respeito ao uso de técnicas biotecnológicas, visando aplicações que vão da conservação de germoplasma a transformação genética de plantas. Desde o início da década de 70, a cultura de tecidos do mamoeiro vem sendo intensamente estudada, permitindo maior controle do desenvolvimento in vitro, especialmente para as técnicas de micropropagação, organogênese e embriogênese somática.

portuguesNeste estudo, realizamos BSA para identificar marcadores geneticos ligados a tolerância ao sal. Testamos a diversidade genetica entre quatro amostras de DNA volumoso de clones mutantes induzidos por EMS, e uma amostra de DNA volumoso de clone nao mutado de Petunia para tolerância a sal em culturas de calos in vitro usando marcadores RAPD e ISSR. Dos 36 primers RAPD e 16 ISSR identificados, 25 e 13 foram efetivamente usados para amplificar o DNA genomico de todas as cinco amostras, respectivamente. No total, foram obtidos 114 produtos de amplificacao RAPD, dos quais 28% eram polimorficos e 2% eram bandas especificas de genotipos. Dos 64 produtos de amplificacao ISSR obtidos, 51% eram polimorficos e 1% eram bandas especificas de genotipo. Os resultados deste estudo indicam a existencia de dois padroes de segregacao distorcida entre os marcadores estudados. O primeiro indica as diferencas entre os clones nao mutantes de Petunia e seus mutantes putativos. O segundo foi observado apenas entre mutantes putativos e mutantes putativos testados quanto a tolerância ao sal em cultura in vitro. Tanto a analise RAPD quanto a ISSR detectaram com sucesso a associacao com alteracoes induzidas por mutagenese quimica e salinidade. Alem disso, nossos resultados indicam que o metodo BSA pode ser util na deteccao rapida de marcadores moleculares para posterior selecao assistida por marcadores. Palavras-chave: analise segregante a granel; mutagenese quimica; ISSR; RAPD; Petunia × atkinsiana D. Don; estresse salino; cultura de tecidos. EnglishIn this study, we performed BSA to identify genetic markers linked to salt tolerance. We tested the genetic diversity among four bulked DNA samples of EMS induced mutant clones and one bulked DNA sample of non-mutated clone of Petunia for salt tolerance in in vitro callus cultures using RAPD and ISSR markers. Out of the 36 RAPD and 16 ISSR primers identified, 25 and 13 were effectively used to amplify genomic DNA of all the five bulked samples, respectively. In total, 114 RAPD amplifications products were obtained, of which 28% were polymorphic and 2% were genotype-specific bands. Out of the 64 ISSR amplification products obtained, 51% were polymorphic and 1% was genotype-specific bands. Results of this study indicated the existence of two patterns of distorted segregation among the studied markers. The first one indicates the differences between non-mutated clones of Petunia and its putative mutants. The second one was observed only between putative mutants and putative mutants tested for salt tolerance in in vitro culture. Both RAPD and ISSR analysis successfully detected the association with changes induced by chemical mutagenesis and salinity. Furthermore, our results indicate that BSA method can be useful in the rapid detection of molecular markers for further marker-assisted selection. Key words: bulk segregant analysis; chemical mutagenesis; ISSR; RAPD; Petunia × atkinsiana D. Don; salt stress; tissue culture.

Oil palm is a woody monocot of economic importance due to high oil production from its fruits. Currently, the conventional method most used to propagate oil palm is seed germination, but success is limited by long time requirements and low germination percentage. An alternative for large-scale propagation of oil palm is the biotechnological technique of somatic embryogenesis. The rooting of plants germinated from somatic embryos is a difficult step, yet it is of great importance for later acclimatization and success in propagation. The aim of this study was to evaluate the effect of the auxins indole acetic acid (IAA) and indole butyric acid (IBA) on the rooting of somatic embryos of Tenera hybrid oil palm. Plants obtained by somatic embryogenesis were inoculated in modified MS medium with 10% sucrose and 0.6% agar and supplemented with IAA or IBA at concentrations of 5 µM, 10 µM, and 15 µM, and the absence of growth regulators. After 120 days, the presence of roots, root type, length of the longest root, number of roots, number of leaves, and shoot length were analyzed. Growth regulators were favorable to rooting; plants cultivated with IBA growth regulator at 15 µM showed higher rooting percentage (87%) and better results for the parameters of number of roots (1.33) and shoot length (9.83). RESUMO O dendezeiro é uma monocotiledônea, lenhosa e oleaginosa de elevada importância econômica, devido à alta produção de óleo por seus frutos. A germinação das sementes é, atualmente, o método convencional mais utilizado para a propagação do dendezeiro, porém, o sucesso por meio dessa via é limitado pela demora e a baixa porcentagem de germinação. Uma alternativa para a propagação em larga escala do dendezeiro é a técnica biotecnológica de embriogênese somática, mas o enraizamento das plantas germinadas a partir dos embriões somáticos é uma etapa difícil e de grande importância para posterior aclimatização e sucesso na propagação. Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar o efeito das auxinas ácido indol acético (AIA) e ácido indol-butírico (AIB) no enraizamento de embriões somáticos de dendezeiro híbrido Tenera. Plantas obtidas via embriogênese somática foram inoculadas em meio MS modificado, com 10% de sacarose e 0,6% de ágar e suplementado com AIA ou AIB, nas concentrações 5 µM, 10 µM, 15 µM e na ausência de regulador de crescimento. Depois de 120 dias foram analisados os parâmetros presença de raiz, tipo de raiz, comprimento da maior raiz, número de folhas e comprimento da parte aérea. A presença de reguladores de crescimento foi favorável ao enraizamento, tendo as plantas cultivadas com o regulador de crescimento AIB na concentração de 15 µM apresentado maior porcentagem de enraizamento (87%) e melhores resultados para os parâmetros número de raízes (1,33) e comprimento da parte aérea (9,83).

This research work objective was to optimize the micropropagation of potato cultivars through the use of new light sources in the growth rooms. Treatments consisted of three potato cultivars (Asterix, Catucha and Macaca), and five light sources (blue, green and red LEDs; Growlux and white fluorescent lamps). The explants consisted of nodal segments containing one bud, isolated from plantlets grown in vitro . The experimental design was completely randomized arranged in a 3x5 factorial, with eight replications. Each experimental unity consisted of a flask with five explants. Three 28-day consecutive subcultures were carried out in MS semi-solid medium, in growth-room under controlled conditions (temperature = 25 + 2 oC; photoperiod = 16 hours; light intensity = 20 μmol m -2 s -1 ). At the end of each subculture, the bud number per plantlet, plantlet length and internode length were evaluated. After the third subculture, the concentrations of carotenoids and a- and b- chlorophylls were also determined. Different micropropagation efficiencies were found among potato cultivars grown in vitro conditions: ‘Macaca’ was the most and ‘Catucha’ the least responsive cultivar. The growth room light sources differently affected the potato plantlet development: red and green LEDs were the most and least recommended for plantlet development, based on the results of bud number per plantlet, plantlet length, and leaflet concentrations of a- and b- chlorophylls and carotenoids.

Nursery trees of stone fruits (Prunus spp.) are traditionally produced by union of two distinct genotypes - the rootstock and the scion - which, by grafting, form a composite plant that will be maintained throughout of all plant life. In Brazil, the rootstocks are predominantly seed propagated and therefore usually results in heterogeneous trees for vigor and edaphic adaptation. However, with advances in rootstock breeding programs that released cultivars and certification in several countries (notably in Europe), the system will come gradually evolving for vegetative propagation (cuttings and tissue culture) and use of seeds of selected rootstocks with specific characteristics and potted nursery trees production. For scion cultivar propagation, the budding system (with its many variations) has predominantly been adopted in major producing countries. This review had as objective to comment main propagation methods adopted for rootstocks and scion in peach, nectarine and plum, and recent technical progress obtained as well as the needs of improvement for nursery tree production. RESUMO Mudas de frutíferas de caroço (Prunus spp.) são tradicionalmente produzidas pela união de dois genótipos distintos - o porta-enxerto e a cultivar copa - que, por meio da enxertia, formam uma planta composta. No Brasil, os porta-enxertos são predominantemente obtidos de sementes, normalmente resultando em plantas com heterogeneidade de suas características. Com os avanços nos programas de melhoramento genético de porta-enxertos, lançamentos de cultivares e programas de certificação de mudas em diversos países (notadamente na Europa), o sistema vêm gradativamente evoluindo para a propagação vegetativa (estaquia e cultura de tecidos), uso de sementes de genótipos selecionados com características específicas e produção de mudas em embalagens. Para a propagação das cultivares copa, a enxertia (com suas diversas variações) têm sido predominantemente adotada nos principais países produtores. O objetivo desta revisão bibliográfica é abordar os principais métodos de propagação adotados para porta-enxertos e para copas em pessegueiro, nectarineira e ameixeira, e os avanços técnicos obtidos, bem como as necessidades de melhorias para a produção de mudas de qualidade.

O objetivo deste trabalho foi determinar a concentração de manitol para a germinação e crescimento mínimo in vitro do coqueiro (Cocos nucifera). Os seguintes acessos foram utilizados: Anão-vermelho-do brasil-de-gramame (BRDG), Anão-amarelo-da-malásia (MYD), Gigante-do-brasil-praia-do-forte (BRA), Gigante-da-polinésia (PYT) e Gigante-de-rennel (RIT). Os embriões foram colocados em meio de cultura Y3 a diferentes concentrações de manitol (0, 0,1, 0,2, 0,3 e 0,4 mol L-1). Verificou-se inibição do crescimento da parte aérea na presença de 0,1, 0,2 e 0,3 mol L-1, para MYD e BRDG, e de 0,1 e 0,2 mol L-1, para PYT, BRA e RIT. O uso do manitol é uma estratégia promissora para a conservação por crescimento mínimo.

Brotações com pequeno alongamento poderão apresentar reduzida formação de raízes se forem diretamente cultivadas em meios de enraizamento ou, ainda, resultar em mudas de baixa qualidade para aclimatização. No presente estudo, objetivou-se avaliar o alongamento in vitro de genótipos de Eucalyptus dunnii sob diferentes concentrações de Ácido Giberélico (GA3). Segmentos nodais foram cultivados em meio nutritivo MS reduzido à metade da concentração de sais (¹/2 MS) suplementado com 0,5 mg L-1 de Ácido alfa-Naftaleno Acético (ANA), 0,1 mg L-1 de 6-Benzilaminopurina (BAP), e variando-se o GA3, conforme tratamentos. Utilizou-se delineamento inteiramente casualizado, em arranjo bifatorial 6 x 4, resultante da combinação de seis genótipos e quatro concentrações de GA3 (0,0; 0,2; 0,4 e 0,8 mg L-1). Após 30 dias de cultivo in vitro, foram efetuadas as avaliações. Para a maioria dos genótipos, a ausência de GA3 resultou no maior número de brotações alongadas por explante e maior comprimento de gemas alongadas. Em geral, os genótipos que apresentaram maior número de brotações também tiveram brotações maiores. Com o emprego da maior concentração testada de GA3, observou-se mais de 50% de calogênese em um dos genótipos e intensidade diferenciada nos demais. GA3 não apresenta efeito no alongamento in vitro de Eucalyptus dunnii e, inclusive, em sua presença os genótipos reduzem o número de brotações alongadas e o comprimento das brotações, aumentando a formação de calos. Os genótipos de Eucalyptus dunnii avaliados apresentam desempenho in vitro diferenciado em relação ao alongamento, o qual é passível de seleção. Shoots that have short lengths may present low percentage of survival if they are directly grown on rooting media, or give rise to low quality seedlings for the acclimatization phase. The objective of this study was to evaluate the in vitro elongation of Eucalyptus dunnii minicuttings under different concentrations of giberellic acid. Minicuttings were prepared and inoculated under aseptic conditions on MS nutritive medium with half of the salt concentration (¹/2 MS). We used fixed concentrations of NAA (0.5 mg L-1) and BAP (0.1 mg L-1) varying GA3 according to the treatment. The experiment was conducted in a randomized design, using a 6 x 4 factorial scheme, where the levels of factor "A" refer to different genotypes and the levels of factor B, the concentrations of GA3 (0.0; 0.2; 0.4, and 0.8 mg L-1), each replicate was composed of a flask containing three explants. Thirty days after in vitro culture, evaluations were performed. For most genotypes, the absence of GA3 produced the highest number of elongated shoots for explant and a longer length of elongated shoots. In general, genotypes with the highest number of shoots also had larger shoots. The non-addition of GA3 to the nutritive medium did not promote calli formation, reaching over 50% in the use of higher concentration of GA3 tested (0.80 mg L-1). The calli formation was different in different genotypes. Gibberellic acid (GA3) has no effect on in vitro elongation of Eucalyptus dunnii. In the presence of GA3 genotypes reduce the number of elongated shoots and shoot length, increasing the formation of calli. The genotypes of Eucalyptus dunnii evaluated present differently in relation to in vitro elongation, which is able to be selected.

The aim of this research was to evaluate the use of light emitting diodes (LEDs) instead of white fluorescent lamps as light source and adequate growth-medium sucrose concentration for sugarcane micropropagation (Saccharum officinarum L.). Sugarcane (RB 872552 variety) bud explants were evaluated during the multiplication and rooting phases under controlled growth-room conditions. Different light sources (blue, red and green LEDs; Growlux and white fluorescent lamps) and different medium sucrose concentrations (0; 15; 30 and 45g L-1) were used, maintaining constant light intensity (20µmol m-2 s-1), photoperiod (16h) and temperature (25+2°C). The experiment was a completely randomized design, and treatments were arranged in a 5x4 factorial (five light sources and four medium sucrose concentrations) with six replications. Sugarcane bud growth was satisfactory under the three LED types studied. The presence of sucrose in growth media was essential for bud multiplication and rooting. Nevertheless, each light source requires the respective medium sucrose concentration adjustment for best results. Red LEDs provided a significantly high multiplication rate (although not the highest) with 8.5 buds per sub-culture and 34.9g L-1 of sucrose; also, the highest bud length (33.3mm) and the best plantlet acclimatization. Therefore, LED sources can advantageously substitute fluorescent lamps in laboratories of sugarcane micropropagation.

The tissue culture can contribute to the propagation of several economic species, such as the bromeliads. This research aimed at evaluating the auxins type and concentration in the in vitro and ex vitro rhizogenesis of Neoregelia concentrica bromeliad. N. concentrica shoots were induced in a growth medium with 15.0 µM of 6-benzylaminopurine, for 80 days, followed by sub-cultivation in phytoregulator-free medium, for 45 days. In the in vitro rhizogenesis, the shoots grew in a medium supplemented with indole-3-butyric acid (IBA) or naphthalene-acetic acid (NAA), at the concentrations of 0.0 µM, 1.0 µM, 2.0 µM, 3.0 µM and 4.0 µM. In the ex vitro rhizogenesis, the bases of shoots were immersed, for 60 minutes, in IBA or NAA solutions, at the concentrations of 0.0 µM, 5.0 µM, 10.0 µM and 15.0 µM. After immersion, the shoots were planted in plastic trays with vermiculite. At the end of each rhizogenesis method, the phytotechnical parameters analysis was carried out. For the in vitro rhizogenesis, a higher number of roots were observed when the shoots were cultivated in concentrations higher than 1.0 µM of NAA, when compared to the IBA. However, the rooting rate differed only at 30 days after the in vitro growth, with a higher root induction in the shoots grown with NAA. At 60 days, the rooting rate was higher than 90% and statistically similar in all treatments. In the ex vitro rhizogenesis, a better formation of the rooting system was observed when 5.0 µM of IBA was applied, with higher rooting averages and number of roots. A cultura de tecidos pode contribuir na propagação de várias espécies de interesse comercial, como as bromeliáceas. Objetivou-se avaliar o tipo e a concentração de auxinas na rizogênese in vitro e ex vitro da bromélia Neoregelia concentrica. Brotos de N. concentrica foram induzidos em meio de cultivo com 15,0 µM de 6-benzilaminopurina, por 80 dias, com posterior subcultivo em meio isento de fitorreguladores, por 45 dias. Na rizogênese in vitro, os brotos foram cultivados em meios suplementados com ácido indol-3-butírico (AIB) ou ácido-naftaleno-acético (ANA), nas concentrações de 0,0 µM; 1,0 µM; 2,0 µM; 3,0 µM; e 4,0 µM. Para a rizogênese ex vitro, os brotos tiveram suas bases imersas, por 60 minutos, em solução de AIB ou ANA, nas concentrações de 0,0 µM; 5,0 µM; 10,0 µM; e 15,0 µM. Após imersão, os brotos foram plantados em bandejas plásticas contendo vermiculita. Ao final de cada método de rizogênese, foi realizada a análise de parâmetros fitotécnicos. Na rizogênese in vitro, observou-se maior número de raízes quando os brotos foram cultivados com concentrações superiores a 1,0 µM de ANA, em relação ao AIB. Contudo, a percentagem de enraizamento diferiu apenas aos 30 dias de cultivo in vitro, com maior indução de raízes nos brotos cultivados com ANA. Aos 60 dias, o enraizamento foi superior a 90% e estatisticamente semelhante em todos os tratamentos. Na rizogênese ex vitro, observou-se melhor formação do sistema radicular quando aplicados 5,0 µM de AIB, com as maiores médias para enraizamento e número de raízes.

The substrate must promote the growth of the plants, being an important component during the acclimatization of micropropagated plants. The aim of this research was to evaluate the effects of different substrates during the acclimatization of fox grape cv. Bordô. The experiment was carried out at the greenhouse during February and March of 2009. Five substrates were tested: Plantmax® HT, Plantmax® HT: Coconut fiber (7,5:2,5 v/v), Plantmax® HT: Coconut fiber (1:1 v/v), Plantmax® HT: Coconut fiber (2,5:7,5 v/v) and Coconut fiber. The process of acclimatization consisted of three phases. After 20 days of in vitro culture, it was removed the PVC film (Polyvinyl chloride) that covered the flasks and after two days, flasks had lids partial opening for two hours at the growth room conditions. The plants were transferred for the different substrates and placed in a greenhouse with intermittent nebulization during 16 days proceeded by 20 days of daily manual irrigation. The best substrate for acclimatization of fox grape cv. Bordô was Plantmax® HT, benefitting the formation of roots and aerial part of the plants. The coconut fiber must not be used alone as substrate or in larger proportions than 25% in the mixture with Plantmax® HT., O substrato deve promover o crescimento das plantas, sendo um componente importante durante a aclimatação das plantas micropropagadas. O objetivo desta pesquisa foi avaliar os efeitos de diferentes substratos durante a aclimatação da uva de raposa cv. Bordô. O experimento foi realizado em casa de vegetação nos meses de fevereiro e março de 2009. Cinco substratos foram testados: Plantmax® HT, Plantmax® HT: fibra de coco (7,5: 2,5 v / v), Plantmax® HT: fibra de coco ( 1: 1 v / v), Plantmax® HT: fibra de coco (2,5: 7,5 v / v) e fibra de coco. O processo de aclimatação consistiu em três fases. Após 20 dias de cultura in vitro, foi removido o filme de PVC (cloreto de polivinil) que cobria os frascos e após dois dias, os frascos tinham tampas abrindo parcialmente por duas horas nas condições da sala de crescimento. As plantas foram transferidas para os diferentes substratos e colocadas em casa de vegetação com nebulização intermitente durante 16 dias seguidos por 20 dias de irrigação manual diária. O melhor substrato para aclimatação da uva de raposa cv. O Bordô foi o Plantmax® HT, beneficiando a formação de raízes e parte aérea das plantas. A fibra de coco não deve ser usada sozinha como substrato ou em proporções maiores que 25% na mistura com Plantmax® HT.

Objetivou-se com este trabalho determinar o melhor substrato e o tempo ideal de aclimatização em plantas de abacaxizeiro cv. Smooth Cayenne e comparar anatomicamente plântulas in vitro e aclimatizadas. Gemas foram inoculadas em meio MS + 6,66 µM de BAP e, após três subcultivos, as brotações foram transferidas para meio MS, por 30 dias. Os meios foram solidificados com 0,7% de ágar e tiveram seu pH ajustado para 5,8 antes da autoclavagem (120 ºC por 20 minutos). A incubação foi em sala de crescimento (25 ± 1 ºC, irradiância de 35 μmol m-2 s-1 e fotoperíodo de 16 h). Os brotos obtidos in vitro foram transplantados para tubetes, em casa de vegetação, contendo os seguintes substratos: T1- Plantmax® + húmus, T2- Plantmax® + vermiculita e T3- Plantmax®. Cortes anatômicos foram efetuados em folhas de propágulos mantidos in vitro e em plantas com 20, 40 e 60 dias de aclimatização nos diferentes substratos. A utilização do substrato Plantmax® + húmus na aclimatização propiciou maior desenvolvimento das mudas micropropagadas. A partir de 40 dias da aclimatização, as plantas apresentaram características anatômicas que podem favorecer a sua adaptação às condições de campo. This study aimed to determine the optimal substrate and ideal time for acclimatization in plants of the 'Smooth Cayenne' pineapple and compare anatomically plantlets cultivated in vitro with acclimatized plants. Shoots were inoculated on MS with BAP (6.66 µM). After three subcultures, the buds were transferred to MS medium for 30 days. The media were solidified with 0.7% agar, and the pH adjusted to 5.8 before autoclaving (120ºC for 20 minutes). Cultures were kept in a growth room (25±1ºC, irradiance of 35 μmol m-² s-¹ and 16 hours photoperiod). The shoots obtained in vitro were transplanted into plastic pots in a greenhouse, containing the following substrates: T1- Plantmax® + húmus (P + H), T2-Plantmax® + vermiculite (P + V) and T3-Plantmax® (P). Anatomical cuts were made on leaves of plants maintained in vitro and plants with 20, 40 and 60 days of acclimatization on different substrates. The use of Plantmax® + húmus substrate provided greater development in the acclimatization of plants. From 40 days of acclimatization, the plants showed anatomical features that may facilitate the adaptation to field conditions.

In micropropagation, especially for mangaba tree botanical variety of Northeastern Brazil, limiting aspects such as ethylene accumulation in the cultivation flask and loss of vigor in subcultures have been observed. This study was aimed at assessing the technical and scientific knowledge of the in vitro propagation of botanical mangaba tree variety and at improving the micropropagation protocol, establishing the in vitro cultivation time, the best type of flask sealing and explant at different micropropagation stages. For the establishment phase and for the first and second subcultures, the MS medium with 3% sucrose and 0.6% agar, supplemented with 1 mg L-1 IAA and 1 mg L-1 BA was used. Evaluations were performed at 30, 50 and 65 days of in vitro cultivation. The best types of flask sealing for the establishment phase were the PVC film and Para-film® and for the first subculture the Para-film® seal. In the second subculture the PVC film and Para-film® seals promoted the best growth. The median and basal nodal segments presented the best performance in the first subculture. No significant effect of explant type was observed in the second subculture. The ideal subculture interval in the establishment phase and the first and second subcultures is 50 days. Na micropropagação, especialmente para mangaba, variedade botânica da árvore do Nordeste do Brasil, aspectos limitantes, como acúmulo de etileno no recipiente de cultivo e perda de vigor em subculturas têm sido observados. Neste estudo, objetivou-se avaliar o conhecimento técnico e científico da propagação in vitro de mangabeira, variedade botânica do Nordeste do Brasil, e melhorar o protocolo de micropropagação, o melhor tipo de vedação frasco e explante em diferentes etapas. Para a fase de estabelecimento e para as subculturas primeiro e segundo, foi utlizado o meio MS com 3% de sacarose e agar 0,6%, suplementado com 1 mg L-1 de AIA e 1 mg L-1 de BAP. As avaliações foram realizadas aos 30, 50 e 65 dias de cultivo in vitro. Os melhores tipos de vedação para a fase de estabelecimento foram o filme PVC e Para-filme® e, para o primeiro subcultivo, o Para-filme®. No segundo subcultivo, o filme PVC e Para-filme® promoveram o melhor crescimento in vitro. Os segmentos nodais médio e basal apresentaram melhor desempenho no primeiro subcultivo. Nenhum efeito significativo do tipo de explante foi observado no segundo subcultivo. O intervalo de tempo ideal para as fases de estabelecimento, primeiro e segundo subcultivos é de 50 dias.

Em batata, a cultura de tecidos é utilizada para recuperar cultivares infectadas por viroses, entretanto, o cultivo in vitro pode conduzir à variação somaclonal. O presente estudo teve como objetivos identificar somaclones e avaliar o efeito do tipo de explante e do tempo de subcultivo sobre a ocorrência de variantes somaclonais nas cultivares 'Asterix' e 'Macaca'. Tubérculos produzidos em plantas regeneradas por organogênese direta e indireta de explantes derivados do cultivo de ápices caulinares de clones em subcultivo há 12 (clone novo) ou 70 (clone velho) meses em meio nutritivo MS e cultivadas em campo foram avaliados em relação a seis descritores mínimos da batata. As médias observadas foram comparadas aos padrões descritos para as cultivares e somente foram consideradas somaclones aquelas que foram enquadradas em uma classe fenotípica diferente do padrão da cultivar respectiva. Em 'Asterix' e 'Macaca' ocorreram somaclones em quatro e dois descritores, respectivamente, contudo, apenas no formato e cor da polpa do tubérculo, houve variação somaclonal, simultaneamente, nas duas cultivares. Variantes somaclonais podem ser identificadas pelo uso dos descritores mínimos de tubérculo. 'Asterix' e 'Macaca' são, igualmente, suscetíveis à ocorrência de variação somaclonal, mas esse fenômeno afeta de maneira diferenciada os descritores mínimos nas duas cultivares. O tempo de subcultivo age diferencialmente sobre as características morfoagronômicas.Doze meses de subcultivo já são suficientes para originar somaclones. Segmentos apicais caulinares e segmentos nodais, originados por organogênese direta ou indireta, são explantes igualmente instáveis para a produção de batata-semente. In potato, tissue culture is used to retrieve cultivars infected by viruses, however, in vitro culture can lead to somaclonal variation. This study aimed to identify somaclones and evaluate the effect of type of explant and subculture time on the occurrence of somaclonal variants in cultivars 'Asterix' and 'Macaca'. Tubers produced in plants regenerated by direct and indirect organogenesis of shoot apical and nodal segments derived from the culture of shoot tips of clones in subculture for 12 (young clone) or 70 (old clone) months in nutritive medium MS and cultivated in field were assessed in six minima descriptors of the potato. The averages were compared to patterns described for the cultivars and somaclones were considered only those that were framed in a different phenotypic class from standard of cultivar. In 'Asterix' and 'Macaca' somaclonal variants were observed in four and two descriptors, respectively, however, only in the tuber shape and flesh color occurred somaclonal variation simultaneously in both cultivars. Moreover, remained stable the depth of the eyes and the greening of the tuber. Somaclonal variants can be identified by use of minima descriptors of tuber. 'Asterix' and 'Macaca' are equally susceptible to somaclonal variation. Twelve months of subculture is enough to cause somaclones in both cultivars. Shoot apical and nodal segments derived by direct or indirect organogenesis, are explants equally unstable to the production of seed potatoes.

Neste trabalho, objetivou-se verificar a influência de diferentes concentrações do meio MS no estabelecimento in vitro de segmentos apicais caulinares (80-100 mm) de canafístula isolados, a partir de plântulas germinadas em condições assépticas. As concentrações de sais de 50, 75, 100, 125 e 150% do meio de cultivo MS, foram suplementadas com 30 g L-1 de sacarose, 100 mg L-1 de mio-inositol, 7 g L-1 de ágar e o pH, ajustado para 5,7. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado, com 20 repetições, cada uma consistindo de um frasco contendo um explante. As culturas foram mantidas por 60 dias em sala de cultivo sob fotoperíodo de 16 horas, intensidade luminosa de 20 µmol m-2 s-1 e temperatura de 25±2ºC. Não houve efeito das diferentes concentrações do meio MS para a maioria das variáveis, sendo observadas elevadas médias gerais de sobrevivência (98%) e de estabelecimento (98%) in vitro. O maior número de folhas (2,8) ocorreu na diluição de 75%, com redução a partir dessa diluição. Nessa mesma concentração, houve a máxima calogênese, que foi diminuindo até não ser observada sob 125% da composição original; a 150% houve, novamente, presença de calos. Não ocorreu enraizamento de explantes durante o cultivo in vitro. Considerando-se o conjunto das variáveis avaliadas e, adicionalmente, que a presença de calos não é desejável, recomenda-se o emprego da concentração original de sais do meio de cultivo MS no estabelecimento in vitro de segmentos apicais caulinares de canafístula. The objective of this study was to evaluate the influence of several concentrations of MS medium on in vitro establishment of Peltophorum dubium shoot apical segments (80-100 mm) isolated from seedlings germinated under aseptic conditions. The salts concentrations 50, 75, 100, 125 and 150% of MS medium, were supplemented with 30 g L-1 sucrose, 100 mg L-1 of myo-inositol, 7 g L-1 agar and pH adjusted to 5.7. The experimental design was completely randomized, with 20 replications, each consisting of a vial containing one explant. The cultures were maintained for 60 days in culture room under 16-hour photoperiod, light intensity of 20 µmol m-2 s-1 and temperature of 25±2ºC. There was no effect of different concentrations of MS medium for most variables. High average of in vitro survival (98%) and establishment (98%) were observed. The largest number of leaves (2.8) occurred at a dilution of 75%, decreasing from this point. At the same concentration the highest callus induction was observed, which was decreasing until not be observed under 125% of original composition; at 150% there was, again, the presence of calli. It was not observed rooting of explants during in vitro cultivation. Considering the set of variables and, additionally, that the presence of calli is not desirable, it is recommended the use of the original concentration of salts from the MS nutrient medium for the in vitro establishment of P. dubium shoot apicals segments.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de diferentes fontes de silício durante a fase de enraizamento in vitro de bananeira 'Maçã' por meio de análise fisiológica, fitotécnica e ultraestrutural. Foram utilizados propágulos já estabelecidos in vitro e inoculados em meio MURASHIGE & SKOOG (MS), adicionado de 30g L-1 de sacarose, 1mg L-1 de ANA (ácido naftalenoacético) e solidificado com 1,8g L-1 de PhytagelTM. Foram testadas três fontes de silicato acrescidas ao meio MS, silicato de sódio, silicato de potássio e silicato de cálcio, na dosagem de 1g L-1 e o meio MS sem silicato como testemunha. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado, com quinze repetições. Os propágulos foram mantidos por 45 dias em sala de crescimento, sob condições controladas. Verificou-se aumento nos teores de clorofila a, b e total na presença de silicato de cálcio. A suplementação do meio de cultura com silicato de sódio promoveu aumento de comprimento, massa fresca e seca de parte aérea. O silício proporciona adequado desenvolvimento das plântulas. The objective of the research was to evaluate the effect of different sources of silicon during the in vitro rooting phase of 'Maçã' banana tree by means of physiological, phytotechnical and ultrastructural analysis. It was used propagules already established in vitro which were inoculated in MURASHIGE & SKOOG (MS) medium, added of 30g L-1 of sucrose, 1mg L-1 of NAA (naphthalene acetic acid) and solidified with 1.8g L-1 of PhytagelTM. It was tested three sources of silicate added to MS medium, sodium silicate, potassium silicate and calcium silicate, at a dose of 1g L-1 and MS medium without silicate as a witness. The experimental design was completely randomized with fifteen replicates. The propagules were kept for 45 days in a growth room under controlled conditions. There was an increase in levels of chlorophyll a, b and total in the presence of calcium silicate. Supplementation of culture medium with sodium silicate promoted increase in length, fresh and dry weight of shoots. The silicon provides adequate seedling development.

O melhoramento genético do cafeeiro mediante técnicas convencionais é trabalhoso e demorado. A biotecnologia oferece estratégias alternativas para auxiliar na multiplicação e no desenvolvimento de novas variedades com resistência a estresses bióticos e abióticos, melhor qualidade de bebida e maturação mais uniforme dos frutos. As técnicas de cultura de tecidos têm possibilitado a obtenção de grande número de plantas e a garantia da uniformidade genética do material. O emprego de marcadores moleculares, principalmente através da seleção assistida, facilitou o rápido progresso do melhoramento genético da cultura, assim como a transformação genética, via cultura e fusão de protoplastos, biobalística ou mediada por Agrobacterium sp. Esta revisão objetiva sumarizar o histórico, situação atual e perspectivas da biotecnologia no melhoramento genético do cafeeiro. Genetic improvement of coffee through classical breeding is laborious and time consuming. Biotechnology offers alternative strategies to assist multiplication and development of new and improved coffee varieties, including those resistant to biotic and abiotic stresses, with better cup quality, and with uniform fruit maturation. Tissue culture techniques have enabled the production of a large number of plants with genetic uniformity. The use of molecular markers, especially through assisted selection, led to rapid progress of coffee plant breeding, as well as the use of genetic transformation by protoplasts culture and fusion, biobalistics, or Agrobacterium-mediated. This review provides a summary of biotechnology history, current situation and directions applied to the genetic improvement of coffee plant.

Transformação genética é considerada uma importante ferramenta auxiliar no melhoramento genético de plantas cítricas. Entretanto, a eficiência de transformação pode variar em função de diversos fatores, incluindo a própria construção gênica utilizada. Este trabalho buscou avaliar a eficiência de transformação genética de plantas de citrange 'Carrizo' [Poncirus trifoliata (L.) Raf. x Citrus sinensis (L.) Osbeck] com duas construções gênicas diferentes contendo o gene uidA (GUS) sob o controle dos promotores Arabidopsis thaliana phloem protein 2 (AtPhP2) e Arabidopsis thaliana sucrose transporter 2 (AtSuT2). Segmentos de epicótilo de plântulas germinadas in vitro foram utilizados como explantes. O gene nptII, que confere resistência ao antibiótico canamicina, foi utilizado nas construções gênicas como agente de seleção para regeneração de plantas transgênicas. O ensaio histoquímico com X-GLUC foi realizado em todas as brotações regeneradas para verificar a expressão do gene uidA. Dos 4.790 segmentos de epicótilo utilizados, registrou-se a regeneração de 366 brotações com reação positiva no ensaio histoquímico, as quais foram enxertadas em porta-enxertos cultivados in vitro. Cinco dessas brotações, de cada construção gênica, foram selecionadas para análise da PCR, com primers específicos para amplificação da sequência do gene uidA. A inserção do transgene foi confirmada por PCR em todas as brotações selecionadas. A eficiência de transformação e o número de brotos escapes, avaliada pelo teste histoquímico, variaram em função das construções gênicas utilizadas. Genetic transformation is considered an important tool to be applied in citrus genetic improvement. However, transformation efficiency may vary according to several factors, including the genetic construction utilized. This work aimed to evaluate the transformation efficiency of 'Carrizo' citrange [Poncirus trifoliata (L.) Raf. x Citrus sinensis (L.) Osbeck], containing two different gene constructions including the uidA (GUS) gene controlled by the promoters Arabidopsis thaliana phloem protein 2 (AtPhP2) and Arabidopsis thaliana sucrose transporter 2 (AtSuT2). Epicotil segments from in vitro germinated seedlings were used as explants. The nptII gene, which confers resistance to the antibiotic kanamycin, was used in the constructions as a selection agent to regenerate transgenic plants. X-GLUC histochemical analysis was performed in all regenerated shoots in order to verify the expression of the uidA gene. From the 4790 epicotyl segments utilized, 366 shoots had a positive reaction in the histochemical analysis, and were further grafted on in vitro grown rootstocks. Five out of these shoots, from each gene construction, were selected to perform PCR analysis, with specific primers for uidA gene sequence amplification. All selected plants evaluated by PCR confirmed gene integration. Transformation efficiency and number of non-transformed shoots, evaluated by histochemical analysis, varied among gene constructions utilized

A Macrosyphonia velame é uma planta medicinal do Cerrado, pertencente à família Apocynaceae, e conhecida popularmente como velame branco. Extratos de raízes de velame são utilizados pela população como depurativo e anti-sifilítico. Este trabalho teve como objetivo desenvolver o protocolo de micropropagação de M. velame, com vistas à conservação da espécie em Banco do Germoplasma in vitro. Sementes foram coletadas nos municípios de Sacramento, Tapira e Araxá, MG, e utilizadas como fonte de explantes. Segmentos nodais de plântulas axênicas foram transferidos para meio MS/2 suplementado com BAP, Cinetina, 2ip e TDZ em diferentes concentrações (0,25; 5,0 e 1,0mg L-1). Para o enraizamento, brotações com 2cm de altura foram transferidas para meios MS/2 suplementado com 1,0; 5,0; e 10,0mg L-1 de IBA ou ANA e cultivadas por 5, 10 e 30 dias, sendo em seguida subcultivadas em MS/2 por mais trinta dias e só então avaliadas quanto à formação de raízes. Na aclimatização e enraizamento ex vitro, foram utilizados substratos Plantmax®, areia e solo individualmente ou em combinações (1:1) de areia/Plantmax®; areia/solo; Plantmax®/solo. Para o estabelecimento do Banco de Germoplasma, brotações com 3,5cm foram transferidas para meio MS/2 suplementado com 2% de sacarose + 4% de manitol ou sorbitol; 2% de sacarose + 4% de manitol ou sorbitol + 2mg L-1 de pantotenato de cálcio; 2% de sacarose + 4% de manitol ou sorbitol + 2mg L-1 de espermidina. A porcentagem de germinação in vitro foi baixa, 33%, 4% e 2% das sementes coletadas em Araxá, Tapira e Sacramento, respectivamente. O meio MS/2 sem adição de citocinina promoveu a proliferação de brotos (4,0 por gema), elongação (5,2cm), número de gemas (8,6) e reduziu vitrificação (4%). Em relação aos substratos testados, as plântulas se desenvolveram melhor no Plantmax®, sendo que 40% das plântulas sobreviveram e a maioria apresentou formação de raízes. Plântulas cultivadas por três meses em meio de cultura MS/2 + 2% de sacarose + 4% de manitol + 2mg L-1 de pantotenato de cálcio, sob condições de Banco de Germoplasma, apresentaram 40% de sobrevivência. Root extracts of Macrosyphonia velame an Apocynaceae native of Brazilian Cerrado, known as white velame have been popularly used as depurative and anti-syphilitic agent. The aim of the present research was to develop a micropropagation protocol for the in vitro conservation of M. velame in a germplasm bank. Seeds of velame collected in Sacramento, Tapira and Araxá, MG, Brazil, were used as initial explants. Nodal segments from axenic plantlets were inoculated on MS/2 medium supplemented with different concentrations (0.25, 5.0 and 1.0mg L-1) of BAP; kinetin; 2iP or TDZ. For in vitro rooting , plantlets (2cm high) were inoculated on MS/2 medium supplemented with IBA or NAA (1.0, 5.0, and 10.0mg L-1), maintained for 5, 10 and 30 days and sub-cultured to MS/2 medium for an additional thirty days before evaluating rooting. For acclimatization and ex vitro rooting plantlets were transplanted into Styrofoam boxes containing either Plantmax®, sand and soil one by one or in combinations (1:1) of sand/Plantmax®; sand/soil; Plantmax®/soil. For the in vitro conservation of M. velame in germplasm bank plantlets (3.5cm high) were inoculated on MS/2 medium supplemented with either 2% sucrose + 4% of mannitol or sorbitol; 2% sucrose + 4% mannitol or sorbitol + 2mg L-1 calcium pantothenate; 2% of sucrose + 4% of mannitol or sorbitol + 2mg L-1 spermidine. The proportion of seed germination was considered low, 33%, 4% and 2% for seeds collected in Araxá, Tapira and Sacramento respectively. Explants cultured on MS/2 medium without addition of cytokinin showed enhanced height (5.2cm), increased number of buds (8.6), proliferation of 4 shoots per bud and minimal (4%) proportion of vitrification. Plantlets acclimatized ex vitro developed better in Plantmax® substrate, most plantlets presented root formation and survival reached 40%. M. velame plantlets cultured for three months on MS/2 added with 2% sucrose + 4% mannitol + 2mg L-1 of calcium pantothenate, under germoplasma bank conditions presented 40% of survival.

Submitted by Guilherme Lemeszenski (guilherme@nead.unesp.br) on 2013-08-22T19:03:39Z No. of bitstreams: 1 S1413-70542010000600018.pdf: 79757 bytes, checksum: d0011e3ab6e80bb3cfe297ad12c96c21 (MD5) Made available in DSpace on 2013-08-22T19:03:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 S1413-70542010000600018.pdf: 79757 bytes, checksum: d0011e3ab6e80bb3cfe297ad12c96c21 (MD5) Previous issue date: 2010-12-01 Made available in DSpace on 2013-09-30T20:05:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S1413-70542010000600018.pdf: 79757 bytes, checksum: d0011e3ab6e80bb3cfe297ad12c96c21 (MD5) S1413-70542010000600018.pdf.txt: 22217 bytes, checksum: dee3ed001e72933712f7433b4debc1d4 (MD5) Previous issue date: 2010-12-01 Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-20T13:21:30Z No. of bitstreams: 2 S1413-70542010000600018.pdf: 79757 bytes, checksum: d0011e3ab6e80bb3cfe297ad12c96c21 (MD5) S1413-70542010000600018.pdf.txt: 22217 bytes, checksum: dee3ed001e72933712f7433b4debc1d4 (MD5) Made available in DSpace on 2014-05-20T13:21:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S1413-70542010000600018.pdf: 79757 bytes, checksum: d0011e3ab6e80bb3cfe297ad12c96c21 (MD5) S1413-70542010000600018.pdf.txt: 22217 bytes, checksum: dee3ed001e72933712f7433b4debc1d4 (MD5) Previous issue date: 2010-12-01 A pesquisa da composição do meio de cultura mais adequado à espécie vegetal e ao tipo de explante empregado é o fator de maior relevância da cultura de tecidos. O cultivo de ápice caulinar com recuperação da planta matriz é uma técnica de grande impacto para a propagação de plantas in vitro, regeneração de plantas livres de vírus, conservação de germoplasma e modificação genética. Objetivou-se, neste trabalho, avaliar composições do meio de cultivo para organogênese direta in vitro a partir de ápices caulinares pertencentes à população FCA-UNESP-PB de mamoneira (Ricinus communis L.), com vistas à propagação clonal de genótipos elite. Foram testadas quatro formulações: MS básico (T1), MS modificado 1 (T2), MS modificado 2 (T3) e WPM (T4), em delineamento experimental inteiramente casualizado, com 20 repetições em cada tratamento, sendo a repetição 1 ápice caulinar/frasco. O T3 apresentou-se superior e diferiu significativamente dos outros tratamentos apresentando 35% dos ápices caulinares diferenciados e desenvolvidos; seguiu-se o T2 com 10% e os tratamentos T1 e T4 não apresentaram diferenciação de tecidos. Os resultados permitiram concluir que os balanceamentos de sais minerais nos meios de cultura avaliados, especialmente a relação NO3 / NH4 e ausência de FeSO4.7H2O, indicaram grande influência no desenvolvimento de ápices caulinares de mamoneira. The research of the culture medium composition suitable for plant species and the type of explant to be used is the most significant factor in plant tissue culture. The culture of stem tips with plant donor recovery is a technique of great impact for the in vitro plant production, regeneration of virus-free plants, germoplasm conservation and genetic modification. The objective of this study was to evaluate culture media composition in vitro on direct organogenesis of the FCA-UNESP-PB population of castor bean (Ricinus communis L.), from stem tips for clonal propagation of elite genotypes. Four formulations were tested: basic MS (T1), modified MS 1 (T2), modified MS 2 (T3) and WPM (T4) in a completely randomized experimental design with 20 replicates pertreatment with 1stem tip/flask. The treatment T3was superior, and differed significantly from the other treatments, with 35% of stem tips developed, followed by 10% in T2. T1 and T4 showed no plant tissue differentiation. The results allowed to conclude that the balance of mineral salts and culture media evaluated especially the rate NO3 / NH4 and the absence of FeSO4.7H2O showed nigh influence on the development of stem tips of castor bean. Universidade Estadual Paulista Faculdade de Ciências Agronômicas Universidade Estadual Paulista Faculdade de Ciências Agronômicas

Realizou-se um estudo para avaliar o efeito de fontes de luz na micropropagação de morangueiro, com níveis crescentes de BAP no meio de cultivo. Para tanto, inocularam-se gemas de brotações da cultivar 'Sabrosa' em meio MS com 30g L-1 de sacarose, 100mg L-1 de mio-inositol, 7g L-1 de ágar e BAP (0; 0,3; 0,6; 0,9; e 1,5mg L-1), em pH 5,8. Os explantes foram cultivados a 25+2°C, com 16 horas de fotoperíodo e luminosidade de 20µmol m-2 s-1, esta última fornecida por diferentes fontes de luz (LED azul-EDEB 3LA1, LED verde-EDET 3LA1, LED vermelho-EDER 3LA3, lâmpada fluorescente Growlux e lâmpada fluorescente branca). Os tratamentos foram dispostos em delineamento inteiramente ao acaso em um fatorial 5x5 (concentrações de BAP x fontes de luz), com seis repetições. O experimento foi repetido em três subcultivos sucessivos de 35 dias cada. Nestes avaliaram-se o número de brotações por explante e a altura das brotações. Ao final do terceiro subcultivo, determinaram-se, ainda, as concentrações de carotenoides e de clorofilas a e b, independentemente do nível de BAP. Maior número de brotações por explante foi obtido sob LEDs vermelhos e verdes. Concentrações de BAP no meio de cultura entre 0,82 e 1,22mg L-1, dependendo da fonte de luz, proporcionaram maior multiplicação in vitro de brotações. Sob todas as fontes de luz foram obtidas brotações de maior comprimento em meio isento de BAP. Brotações cultivadas sob LEDs vermelhos apresentaram maior quantidade de pigmentos fotossintéticos, enquanto aquelas sob LEDs verdes e lâmpadas Growlux apresentaram a menor. The objective of this research was to evaluate the effect of different sources of light in strawberry micropropagation, under increasing levels of BAP in culture medium. 'Sabrosa' shoots were inoculated in MS medium supplemented with 30g L-1 sucrose, 100mg L-1 myo-inositol, 7 agar g L-1 and BAP (0; 0.3; 0.6; 0.9; e 1.5mg L-1), pH 5.8. The explants were cultivated at 25+2°C, 16 hours photoperiod and 20µmol m-2 s-1. The luminosity was supplied by different sources of light (blue-EDEB 3LA1 LED, green-EDET 3LA1 LED, red-EDER 3LA3 LED, Growlux fluorescent lamp and white fluorescent lamp). The experimental design was a factorial entirely randomized (5 concentrations of BAP x 5 light sources) with six replications. The experiment was repeated in three successive subcultures of 35 days each, being evaluated the shoot number per explant and shoot height. The carotenoids and chlorophyll a and b determinations were carried out after the third subculture, independently of BAP concentration. Shoot number per explant was higher under red and green LEDs. BAP concentrations between 0.82 and 1.22mg L-1 in culture medium showed higher multiplication rate depending on the light source. Shoot length was highest in culture medium without BAP under all light sources. Shoots cultivated under red LEDs showed higher concentration of photosynthetic pigments, while those under green LEDs and Growlux light bulbs showed the lowest.

Em função da dificuldade de propagação de Passiflora setacea DC., técnicas de cultura de tecidos tornam-se alternativas viáveis. Objetivou-se estudar a germinação in vitro e determinar o melhor meio de cultivo na sua micropropagação. O presente trabalho constou de duas etapas, na primeira as sementes (sem escarificação, escarificadas na extremidade ou na parte mediana) na foram colocadas em % MS e 30 g L-1 de sacarose, distribuído em tubos de ensaio e suplementado com zero, 20 ou 40 mg L-1 de GA3. O pH do meio foi ajustado para 5,8 antes da adição de 6,0 mg L-1 de ágar. Após a inoculação das sementes nos meios de cultura, elas foram mantidas em sala de crescimento com luminosidade de 35 µmol.m-2.s-1, temperatura de 26 ± 1ºC e fotoperíodo de 16 horas. Assim que germinaram, as plântulas foram transferidas para tubos contendo meio MS, onde constituíram um segundo experimento, a fim de se testarem meios combinados com concentrações de sacarose. O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado, em esquema fatorial 3 x 3, quatro repetições e 15 sementes por parcela no primeiro experimento e 4 x 4, com quatro repetições e 3 plantas por parcela no segundo experimento. Melhores resultados na micropropagação foram obtidos em meio de cultivo MSM, associado a 28,51 e 28,74 g L-1 de sacarose. Maior índice de velocidade de germinação foi verificado com uso de 20 mg L-1 de GA3, associado à escarificação na ponta da semente.

A propagação in vitro da bananeira possibilita produzir, em larga escala, mudas livres de doenças em curto espaço de tempo. Para otimizar o processo de micropropagação, pode-se modificar a metodologia de produção das mudas, levando-se em conta também a manutenção da qualidade. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do volume do frasco e da consistência do meio de cultura na taxa de multiplicação e no desenvolvimento de mudas de bananeira 'Maçã', propagadas in vitro. A partir de ápices caulinares, foram realizados quatro subcultivos (S2, S3, S4 e S5) em meio MS modificado com metade da concentração dos macronutrientes, acrescido de 30g L-1 de sacarose e 2,5mg L-1 de BAP (6 benzilaminopurina), em tratamento fatorial 2x2: dois tipos de meio de cultivo (semissólido por adição de 1,6g L-1 de Phytagel™ e líquido estacionário) e frascos de dois volumes (250 e 500mL). As plântulas foram induzidas ao enraizamento in vitro e aclimatizadas em estufas, em bandejas de 72 células, e posteriormente cultivadas em sacos de polipropileno de 17x18cm. O cultivo meio líquido em frasco de 500mL pode ser adotado com sucesso para multiplicação de mudas de banana 'Maçã', tendo sido observada maior taxa de multiplicação (25,27 brotos/frasco), melhor adaptação no início da aclimatização e desempenho similar aos demais tratamentos após 60 dias de cultivo em sacos de polipropileno.

Este trabalho teve como objetivo aplicar técnicas de cultura de tecidos em diferentes híbridos de dendezeiro (Elaeis guineensis Jacq.) para a conversão in vitro de embriões zigóticos em plântulas para produção de mudasviáveis para serem disponibilizadas no Estado do Pará. O experimento foi realizado na Embrapa Amazônia Oriental, Belém-PA. A metodologia foi a aplicação de práticas assépticas de isolamento embrionário, cultura de embriões, conversão em plântulas e aclimatação destas. Dezessete híbridos foram submetidos a desinfestação e assepsia, com posterior inoculação nos meios de cultura MS, ½ MS, Y3 e ½ Y3. Os frascos inoculados foram dispostos em sala de cultivo sob fotoperíodo de 16 h luz dia-1, com intensidade luminosa de 25 μmol s-1 e temperatura de 25±3 °C. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado em fatorial 3 x 4. Após avaliação da germinação e crescimento dos embriões, quanto à oxidação os genótipos CN 470, nos tratamentos MS e 1/2 Y3 não apresentaram oxidação, e esta apresentou-se mais adequada para o desenvolvimento do comprimento de raiz. Quanto ao genótipo indicado para a conversão de embriões zigóticos de híbridos de dendezeiro em plântulas viáveis à aclimatização, em extrato de vermiculita e solução nutritiva, o CN 514 em meio Y3 foi o mais viável. Aos três meses foi possível a conversão de embriões de híbridos de dendezeiro até a formação de plântulas.

Experimentos de transformação genética requerem protocolos ajustados de indução de calogenese e regeneração de plantas, sendo poucos os genótipos de milho tropical com a capacidade de induzir e regenerar plantas férteis e que possuem protocolos bem definidos. No presente trabalho, avaliou-se a capacidade de formação de calos embriogênicos e regeneração de plantas de nove linhagens de milho selecionadas para alta qualidade proteica (quality protein maize/QPM) e adaptadas ao clima tropical. Milhos de alta qualidade protéica são importantes para a alimentação de animais monogástricos, devido ao aumento da quantidade de alguns aminioacidos essenciais, necessários a sua dieta. Basicamente, foram utilizados meios de cultura similares àqueles propostos por Chu et al. (1975), porém, diferentes concentrações de dicamba (15 ou 30 mM), l-prolina (6 ou 25 mM) e nitrato de prata (0 ou 88 mM) foram testadas. Os calos formados foram classificados como dos tipos I e II. As maiores porcentagens de formação de calos embriogênicos foram obtidas no meio suplementado com 30 mM de dicamba, 25 mM de l-Prolina e 88 mM de nitrato de prata, em que obtiveram-se 100% de formação de calos do tipo II, com a linhagem HGZ-A18. Os calos formados pela linhagem HGZ-A18 foram transferidos para magentaTM, com quatro diferentes tipos de meios, sendo que 71,4% dos calos regeneraram plantas quando se utilizou o meio contendo sais N6 suplementado com 1,0 mg.L-1 de BAB o 0,5 mg.L-1 de AIB.

As espécies florestais possuem grande importância econômica, pois oferecem diversos produtos fundamentais para a sociedade. Técnicas de melhoramento podem aumentar a produtividade das florestas plantadas, oferecer características desejadas à indústria e reduzir impactos ambientais. No entanto, a baixa variabilidade existente em espécies florestais de crescimento rápido, o longo período para os ciclos reprodutivos e as dificuldades encontradas para a realização de cruzamentos controlados podem inviabilizar tais procedimentos. O objetivo deste trabalho foi realizar uma revisão sobre a contribuição do Melhoramento Genético em espécies perenes, relatando técnicas convencionais e dando especial ênfase à biotecnologia. A cultura de tecidos, a utilização de marcadores moleculares e a transformação genética oferecem soluções únicas para o melhoramento florestal. As principais características que vêm sendo melhoradas estão ligadas à produção de biomassa, alteração na composição de lignina, resistência a pragas, tolerância a herbicidas, macho-esterilidade e fitorremediação. Contribuições significativas para a indústria e o ambiente têm sido alcançadas por meio dessas técnicas. Forest species have great economic importance due to the wide range of important products offered to society. Techniques improvement can increase the productivity of planted forests, providing the desired characteristics to industry, as well as, reducing environmental impacts. However, the low variability existing in fast-growing species, the long reproductive cycles period and the difficulties encountered when conducting controlled crossings may prevent such procedures. The aim of this research was to carry out a review on the contribution of genetic improvement in perennial species. Conventional techniques with special emphasis on biotechnology were reported. The tissue culture, the use of molecular markers and genetic transformation offer unique solutions to forestry improvement. The major features that have been improved are linked to production of biomass, changes in the composition of lignin, resistance to pests, tolerance to herbicides, male-sterility and phytoremediation. Significant contributions to industry and environment have been achieved through these techniques.

Foram realizados dois experimentos com o objetivo de estudar os efeitos de fontes de nitrogênio, polpa de banana e ágar no desenvolvimento in vitro de orquídea Cattleya loddigesii. O primeiro experimento constituiu-se de NH4NO3 (0; 25; 50; 75 e 100% da formulação de 330 mg L-1) e KNO3 (0; 25; 50 e 100% da formulação de 380 mg L-1) acrescidas ao meio MS. No segundo experimento, os tratamentos consistiram de concentrações de ágar (0; 2; 4; 6 e 8 g L-1), no meio de cultura Knudson C, acrescido de polpa de banana nanica (0; 50; 100; 150 e 200 g L-1) em todas as combinações possíveis. Após a inoculação as culturas foram mantidas em sala de crescimento com irradiância em torno de 35 μmol m-2 s-1, temperatura de 25±1ºC e fotoperíodo de 16 horas, por 90 dias. Com base no peso da matéria fresca das plântulas, número de raízes, comprimento da parte aérea e comprimento da maior raiz, a adição de 17,5 a 41,16% da formulação original de NH4NO3 ao meio MS proporcionou melhor desenvolvimento in vitro em plântulas de Cattleya loddigesii. Maior número de folhas foi obtido com a adição ao meio MS de 100% da formulação original de NH4NO3 e 50% de KNO3. A multiplicação in vitro de plântulas de orquídea Cattleya loddigesii é viável em meio Knudson C líquido com a utilização de 128,42 g L-1 de polpa de banana nanica. Two experiments were carried out in order to evaluate the effects of nitrogen sources, banana pulp and agar on Cattleya loddigesii seedlings development in vitro. In the first experiment were tested NH4NO3 at 0; 25; 50; 75 and 100% (330 mg L-1 formulation) and KNO3 0; 25; 50 and 100% (380 mg L-1 formulation) added to MS medium. The second experiment consisted of different agar concentrations (0; 2; 4; 6 and 8 g L-1), banana nanica pulp (0; 50; 100; 150 and 200 g L-1) in all the possible combinations added to Knudson C medium. After inoculation the plantlets were maintained in growth room with irradiancy around 35 μmol m-2 s-1, 25±1ºC temperature and 16-hour photoperiod for 90 days. The NH4NO3 formulation added to culture medium at 17,5 to 41,16% provides best development of Cattleya loddigesii plantlets based on plantlets fresh mass, number of roots, largest root length and aerial part length. Larger number of leaves was obtained at 100% of the original formulation of NH4NO3 and 50% of KNO3 in MS medium. The best results for in vitro multiplication of Cattleya loddigesii orchid seedlings occurred in liquid Knudson C medium with 128,42 g L-1 banana nanica pulp.

Pesquisas acerca das modificações estruturais e fisiológicas inerentes ao processo de micropropagação são fundamentais para compreender os efeitos desta técnica, desenvolver protocolos mais eficientes e, sobretudo, reduzir perdas ex vitro. O objetivo neste trabalho foi avaliar e quantificar as modificações na anatomia foliar de bananeiras provenientes de micropropagação, durante a fase de aclimatização em casa de vegetação. Para tanto, brotações axilares de bananeira cv. Japira, provenientes da multiplicação in vitro, foram enraizadas em meio MS, acrescido de ANA (1mg L-1) e ágar (6g L-1), e mantidas à temperatura de 25°C±2°C e 16 horas de irradiância a 35µmol m-2 s-1, por 35 dias. Posteriormente, as plantas foram submetidas a diferentes períodos de aclimatização (zero, 21, 42, 63, 84 e 120 dias) e avaliadas quanto à anatomia, por meio de seções transversais e paradérmicas foliares. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado. Verificou-se que as maiores alterações anatômicas ocorrem após 42 dias do transplantio ex vitro, com acentuado espessamento dos parênquimas clorofilianos e limbo foliar, bem como diferenciação da maioria dos tecidos. Quanto aos estômatos, estes estão distribuídos em ambas às faces da epiderme, com maior número na face abaxial e em folhas oriundas de primórdios foliares formados in vitro. Researches about structural and physiological modifications in different stages of the micropropagation are fundamental to understand the effects of this technology to improve protocols and to reduce losses in the acclimatization. The objective of this study was to assess and to quantify the variations in the foliar anatomy of micropropagated banana plants during the ex vitro acclimatization in greenhouse. Thus, axillary buds from in vitro multiplication of Japira cultivar, were rooted in MS medium, added of NAA (1mg L-1) and agar (6g L-1), and kept at room temperature (25°C ±2°C) under 16 hours photoperiod and irradiation of 35µmol m-2 s-1, for 35 days. Subsequently, the plants were submitted to different acclimatization periods (zero, 21, 42, 63, 84 e 120 days) being the leaf anatomy of the plants evaluated by transversal and paradermal sections. A completely randomized design was used. The largest anatomical alterations it were verified after 42 days of the transplantation to ex vitro conditions, with pronounced thickness of chlorophyllian parenchyma and leaf blade, as well, as the differentiation of the majority of foliar tissues. The stomata were distributed on both sides of the leaves, with higher number on the undersurface and on leaves formed from in vitro foliar primordia.

A micropropagação in vitro tem-se apresentado como técnica que possibilita várias metodologias que, por sua vez, contribuem com a redução no tempo, para a obtenção de novas cultivares. Objetivou-se com esse trabalho avaliar o comportamento dos genótipos BRS-Verde, BRS-200-Marrom, 6M-Mocó-Branco e BRs(-1)87 8H Branco na indução do superbrotamento em diferentes combinações de reguladores de crescimento. As sementes, para obtenção do material de partida, foram desinfectadas em solução de hipoclorito de sódio a 1% de cloro ativo por 20 min. Os brotos foram induzidos, a partir de explante de nós cotiledonares em meio básico MS, suplementado com 6-benzylaminopurine (BAP), Cinetina ( KIN) e Tiadiazuron (TDZ), isolados ou associados em diferentes concentrações. O material foi mantido por 40 dias em sala de crescimento, sob condições ambientais controladas. Utilizou-se 10 tubos de ensaio por tratamento com um explante por frasco, em um delineamento inteiramente casualizado, com arranjo fatorial de 4 x 17 (quatro genótipos x dezessete meios). Observou-se que o meio MS suplementado com BAP (2,0 mg L-1) isolado ou associado com KIN (1,0 mg L-1), promoveu maior capacidade de regeneração e altura de brotos; o meio MS suplementado com BAP (2,5 mg L-1) estimulou maior altura de brotos e o meio MS suplementado com TDZ (1,0, 0,50 e 0,25 mg L-1) afetou a capacidade de regeneração de brotos, observando-se maior formação de calos. The micropropagation in vitro has been presented as a technique that allows various methodologies which, for in turn, contribute to a reduction in the time to obtain new cultivares. The objective of this work was to evaluate the behavior of the genotypes BRS-Verde, BRS-200-Marrom, 6M-Mocó-white and BRs(-1)87-8H- white, in the induction of the multiple shoots in different combinations of growth regulators. The seeds, to obtain the initial material, were placed in a solution of 1% sodium hypochlorite of active chlorine for 20 min. The shoot had been induced, in the explant of cotiledonary nodes in MS medium basic, supplemented with 6-benzylaminopurine (BAP), Cinetina (KIN) and Tiadiazuron (TDZ), isolated or associated in different concentrations. The material was kept for 40 days in growth chamber, under controlled ambient conditions. 10 mL of medium was used for treatment with a explant for culture tube, in an entirely randomized design, with factorial arrangement of 4 x 17 (four genotypes x seventeen medium). It was observed that the MS medium supplemented with BAP (2.0 mg L-1) isolated or associated with KIN (1.0 mg L-1), promoted greater capacity of regeneration and height of sprouts; MS medium supplemented with BAP (2.5 mg L-1) stimulated greater height of sprouts and the MS medium supplemented with TDZ (1.0, 0.50 and 0.25 mg L-1) affected the capacity of regeneration of sprouts, a larger formation of calluses was observed.

Este trabalho teve como objetivo ajustar a concentração de macronutrientes, micronutrientes e vitaminas do meio de cultura Murashige & Tucker (MT), de modo a permitir a germinação de embriões imaturos, menores que 3 mm, de tangerineira 'Cleópatra'. As sementes foram obtidas a partir de frutos com 4 a 5 meses após a antese, cujos embriões não germinam nos meios de cultura atualmente indicados para citros. Inicialmente, os embriões foram cultivados em meio de cultura básico contendo sacarose e ágar, seguindo uma seqüência de etapas, procedendo-se a ajustes da concentração normal dos macronutrientes (1/1, ½ e ¼), micronutrientes (1/1, ½, ¼ e 1/1, 3/2, 2/1) e vitaminas (2/1, 1/1 e ½) do meio MT. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, em um esquema fatorial 3 (concentrações do MT) x 4 (comprimentos de embriões), com 10 repetições. As variáveis, porcentagem de germinação de embriões, porcentagem de plântulas normais e comprimentos dessas plântulas foram avaliadas 30 dias após a inoculação dos embriões em meio de cultura. Os melhores resultados foram obtidos utilizando-se de metade da concentração normal de macronutrientes, não havendo necessidade de alterar as concentrações de micronutrientes e vitaminas. The objective of the present work was to adjust the macronutrient, micronutrient and vitamin concentrations of the Murashige & Tucker (MT) culture medium in order to promote the germination of ´Cleopatra´ Tangerine immature embryos, smaller than 3 mm. Seeds from fruits, 4 to 5 months after anthesis, in which the embryos do not germinate in recently indicated culture media for citrus, were used. Initially, the embryos were cultivated in basic culture medium containing sucrose and agar, followed by a sequence of steps, carrying out the adjustments of the normal concentration of macronutrients (1/1, ½ and ¼), micronutrients (1/1, ½, ¼ and 1/1, 3/2, 2/1) and vitamins (2/1, 1/1 e ½) of the MT medium. The experimental design was completely randomized in factorial scheme 3 (concentrations of MT) x 4 (embryo size), with 10 repetitions. The following variables were evaluated thirty days after embryo inoculation in culture medium: percentage of germination, percentage of normal plantlets and plantlet length. The best results were obtained using half the normal concentration of macronutrients, whereas the concentrations of micronutrients and vitamins remained unaltered.

A violeta-africana (Saintpaulia ionantha Wendl.) é uma espécie cultivada como ornamental pela beleza de suas flores e folhagem. A Benzilaminopurina (BAP) pode ser utilizada na multiplicação in vitro dessa espécie, no entanto, inexistem informações mais detalhadas sobre as respostas obtidas sobre a multiplicação, em uma faixa ampla de concentrações. Objetivou-se com este trabalho determinar o efeito do BAP na multiplicação in vitro de violeta-africana. Foram utilizados, como explantes, tufos de brotações das cultivares Optimara Miki, Optimara Maki e Optimara Akemi, com tamanhos entre 0,8 e 2,0 cm. Empregou-se o meio MS, com concentrações de nutrientes minerais e vitaminas reduzidas à metade, suplementado com mio-inositol (100mg L-1), sacarose (30 g L-1) e ágar (7 g L-1). Os tratamentos utilizados foram: 0,0; 0,44; 1,78; 3,08 e 4,44 mM de BAP. O pH do meio foi ajustado para 5,8 antes da esterilização. O material vegetal permaneceu em temperatura de 24 ± 2 ºC, fotoperíodo de 14 horas e densidade de fluxo luminoso de 40 mmol c4m-2 s-1. As avaliações do número total de brotações e do número e altura de brotações maiores que 3 mm foram realizadas aos 46 dias. A adição de BAP ao meio de cultura foi essencial para a multiplicação das culturas. As respostas aos tratamentos variaram entre os genótipos utilizados. Maiores resultados de número total de brotações e número de brotações superiores que três milímetros foram observados em concentrações de BAP situadas entre 1,78 e 4,44 mM. A altura das brotações decresceu com a utilização de BAP. African-Violet (Saintpaulia ionantha Wendl.) is an ornamental plant widely cultivated, because of its beautiful foliage and flowers. Benzylaminopurine (BAP) can be used to violet multiplication, but there weren't information about results with several concentrations. The aim of this work was to determine the effect of different concentrations of BAP on the multiplication of violet cultures. One utilized, as explants, shoot clusters of cultivars Optimara Miki, Optimara Maki e Optimara Akemfrom, with height from 0,8 to 2,0 cm. One utilized MS medium, with half concentration of mineral nutrients and vitamins, suplementated with myo-inositol (100 mg L-1), sucrose (30 g L-1) and agar (7 g L-1). The treatments applied were: 0.0, 0.44, 1.78, 3,08 e 4,44 mM of BAP. The pH of the medium was adjusted to 5,8 before sterilization. Cultures remained at 24 ± 2 ºC, photoperiod of 14 hours and 40 mmol cm-2 s-1 of light density flux. Total shoot number and number and height of shoots with more than three millimeters were evaluated at 46 days. Addition of BAP to the culture medium was essential to multiplication of cultures. Responses of treatments varied between cultivars. Best results of total shoot number and number shoots with more than three millimeters were found with concentrations between 1.78 e 4.44 mM. The height of shoots decreased with the addition of BAP.

A escolha adequada do meio de cultura é um fator relevante para a micropropagação, devido ao importante papel dos componentes minerais no processo de regeneração. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito dos meios de cultura MS/2, NN, WPM, QL e C2D, no cultivo inicial, a partir de segmentos nodais e em três subcultivos do porta-enxerto de videira "VR043-43". O delineamento experimental foi em blocos casualizados com quatro repetições. Os meios de cultura não tiveram efeito significativo sobre o número de brotações por explante no cultivo inicial e nos subcultivos. No primeiro subcultivo, os melhores resultados para o número de microestacas por explante inicial foram encontrados com os meios de cultura MS/2, QL e C2D, e, no segundo subcultivo, não houve diferenças estatísticas entre os tratamentos. A altura das brotações no cultivo inicial, no primeiro e no segundo subcultivos aumentou com o meio de cultura QL. No primeiro subcultivo, 83,3% das brotações enraizaram no meio de cultura QL. Para o cultivo inicial do porta-enxerto de videira "VR043-43" in vitro, a partir de segmentos nodais e para a multiplicação das microestacas, o meio de cultura QL apresenta-se adequado para o desenvolvimento das brotações. The right choice of the culture medium is an important factor for micropropagation mainly because of the mineral component role during the regeneration process. This research was aimed at evaluating the effect of the MS/2, NN, WPM, QL and C2D culture medium on the establishment of nodal segments and multiplication of grapevine rootstock 'VR043-43'. The data was analyzed according to a randomized complete block design with four replications. The culture medium had no significant effect on the number of shoots per explant in the initial culture and subcultures. For the first subculture, the best number of microcuttings per initial explant was obtained using the MS/2, QL and C2D culture medium. For the second subculture no statistical differences were observed between treatments. Shoot height in the initial, first and second subcultures increased with QL culture medium. For the first subculture, 83.3% of rooting was found on shoots growing in the QL culture medium. The best results of shoot development for the initial culture of the grapevine rootstock of 'VR043-43' in vitro using nodal segments and its microcuttings multiplication were obtained with the QL culture medium.

Com o presente trabalho objetivou-se avaliar a influência de concentrações de sacarose e a idade fisiológica da semente na germinação in vitro de embriões zigóticos de murmuru. Frutos em dois estágios de desenvolvimento coletados de plantas do campo tiveram os embriões excisados, desinfestados e inoculados em meio de cultura de MS com 75% das concentrações de sais, suplementado com 2,5 g.L-1 de ácido giberélico e diferentes concentrações de sacarose: 15, 30 e 45 g.L-1. Em sala de crescimento, o material foi mantido por 30 dias no escuro, sendo transferido em seguida para condições luminosas de 30 me.m-2.s-1, temperatura de 25±2ºC e fotoperíodo de 16 horas para completo desenvolvimento. O delineamento estatístico utilizado foi inteiramente casualizado em arranjo fatorial 2 x 3, com seis repetições e cinco embriões por parcela. Após 30 dias foi avaliada a porcentagem de germinação e altura das plântulas. Verificou-se que embriões provenientes de frutos imaturos apresentaram maior porcentagem de germinação, sendo a concentração de 30 g.L-1 de sacarosea que proporcionou os melhores resultados dentre as demais testadas. Embriões provenientes de frutos maduros apresentaram altura de plântulas significativamente maior aos imaturos e também para essa variável, a concentração de 30 g.L-1 de sacarose foi a que proporcionou os melhores resultados.

A diferenciação e o desenvolvimento de embriões somáticos foram observados em 15 genótipos de batata-doce a partir de explantes de ápices caulinares com um ou dois primórdios foliares. A embriogênese foi induzida utilizando o meio composto de sais minerais MS e vitaminas, 3% de sacarose, 0,2% de phytagel, suplementado com 2,4-D (0,0; 0,5; 1,0 e 2,0 mg/L). As culturas foram mantidas no escuro à temperatura de 27ºC. A adição de 2,4-D foi necessária para a indução de calo embriogênico nos genótipos '92', '94', '184', '188', '319', '370', '374', '442', '449', '5491, '594', '645', 'PI3138463', 'White Star' e 'Jewel'. Os clones '169', '202', '605', '633' e '643' não responderam à indução de calo embriogênico. Os calos embriogênicos apresentaram a coloração amarelo claro, textura compacta e granular, enquanto que os calos não embriogênicos apresentaram coloração hialina e consistência friável. Os calos formaram-se na região periférica dos explantes. Nas condições estabelecidas, melhor produção de calo embriogênico foi obtida com 2,0 mg/L de 2,4-D. A transferência desses calos para meio sem 2,4-D favoreceu o desenvolvimento dos embriões para os estádios cordiforme, torpedo e cotiledonar. The differentiation and development of somatic embryos were observed in 15 genotypes of sweet potato using shoot tip explants with one or two leaf primordia. Somatic embryogenesis was induced using MS media and vitamins, 3% sucrose, 0,2% phytagel, supplemented with 2,4-D (0,0; 0,5; 1,0 and 2,0 mg/L). The cultures were maintained in the dark at 27ºC. The addition of 2,4-D was necessary for embryogenic callus induction in the genotypes '92', '94', '184', '188', '319', '370', '374', '442', '449', '549', '594', '645', 'PI3138463', 'White Star' and 'Jewel'. Clones '169', '202', '605', '633' and '643' did not respond to embryogenic callus induction. Embryogenic callus showed a yellow and opaque color, compact and granular texture. Nonembryogenic callus was translucent in color and friable. Calluses were originated at the periphery of explants. In the established conditions better formation of embryogenic calluses was obtained with 2,0 mg/L of 2,4-D. The transfer of embryogenic callus to 2,4-D free medium allowed embryo development to heart, torpedo and cotiledonary stages.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência da enxertia in vitro na propagação de dois clones híbridos de Eucalyptus urophylla e E. grandis. Foram utilizados porta-enxertos juvenis obtidos de sementes de E. grandis e E. urophylla germinadas in vitro. As plantas enxertadas apresentaram pegamento de até 93% aos 50 dias de idade para as combinações de enxerto e porta-enxerto. Quanto ao crescimento em altura, verificaram-se melhores resultados em relação ao porta-enxerto E. urophylla. A análise histológica das plantas enxertadas comprovou a eficiência do processo de cicatrização do calo formado na região de conexão, seguida da reconstituição vascular.

In vitro organogenesis of passion fruit was studied by the induction of adventitious buds from leaf discs in culture media supplemented with benzyladenine (BAP) or thidiazuron (TDZ). To minimize adverse effects of ethylene accumulation on shoot development, silver nitrate (AgNO3) was added to the induction media. Both BAP (0; 2.2; 4.4; 6.6 µmol L-1) and TDZ (0; 1.1; 2.2; 3.4 µmol L-1) were effective in promoting shoot development. Although no significant differences were detected using AgNO3 (23.5 µmol L-1), buds grown in AgNO3-supplemented media were more vigorous. The number of explants with buds obtained using TDZ and AgNO3-supplemented media (5.6) were higher than those obtained using BAP and AgNO3 (3.0). MSM + giberrellic acid (GA3), MSM + coconut water, and ½ MSM culture media were tested for shoot bud elongation, incubated in flasks covered with either non-vented or vented lids. Best results were obtained by culturing buds in MSM + coconut water media in flasks covered with vented lids. Plantlets transferred to MSM + indol butyric acid (IBA) media rooted in a 30-day period. Passion fruit organogenesis was enhanced by using TDZ and AgNO3 for bud induction. Transferring the buds to MSM + coconut water media and incubating in flasks with vented lids favored shoot elongation and plantlet development. A organogênese in vitro de maracujá foi estudada pela indução de gemas adventícias em discos de folha cultivados em meio de cultura suplementado com benziladenina (BAP) ou thidiazuron (TDZ). Nitrato de prata (AgNO3) foi adicionado ao meio de cultura de indução de gemas adventícias para minimizar o efeito do acúmulo de etileno no desenvolvimento dos brotos. Tanto BAP (0; 2,2; 4,4; 6,6 µmol L-1) como TDZ (0; 1,1; 2,2; 3,4 µmol L-1) foram eficientes em promover o desenvolvimento de brotos. Embora diferenças significativas no uso de AgNO3 (23,5 µmol L-1) não tenham sido detectadas, gemas adventícias desenvolvidas em meio de cultura suplementado com AgNO3 eram mais vigorosas. O número de explantes com gemas obtidos no meio de cultura suplementado com TDZ e AgNO3 (5,6) foi maior do que aquele obtido com BAP e AgNO3 (3,0). Os meios de cultura MSM + ácido giberélico (GA3), MSM + água de coco ou ½ MSM foram utilizados para o alongamento dos brotos, os quais foram incubados em frascos com tampas ventiladas ou tampas normais. Os melhores resultados foram obtidos cultivando-se as gemas adventícias no meio de cultura MSM + água de coco em frascos com tampas ventiladas. As plântulas transferidas para meio de cultura MSM + ácido indol butírico enraizaram num período de 30 dias. A organogênese in vitro de maracujazeiro foi otimizada utilizando-se TDZ + AgNO3 para a indução de gemas adventícias. A transferência das gemas para meio de cultura MSM + água de coco e a incubação em frascos com tampas ventiladas favoreceu o alongamento e o desenvolvimento de plântulas.

Embriões provenientes de frutos maturos de Heliconia rostrata Ruiz & Pavon foram excisados e inoculados em meio de cultura contendo os sais básicos MS, vitaminas e sacarose. A adição de sacarose foi essencial para o desenvolvimento dos embriões. Em meio desprovido de sacarose os embriões morreram em cultura. Concentrações de 1%, 2% e 3% (p/v) de sacarose favoreceram o desenvolvimento dos embriões. Concentrações de 6%, 9% e 12% (p/v) de sacarose inibiram o crescimento dos embriões. A adição de cinetina, isopentenil adenina e zeatina não favoreceram o crescimento e o desenvolvimento dos embriões. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT Embryos from mature fruits of Heliconia rostrata were excised and cultured in basal medium containing MS salts, vitamins and sucrose. Sucrose was essential for embryo development. In meclium without sucrose the embryos died in culture. Sucrose concentrations of 1%, 2% and 3% (w/v) were beneficial for embryo development. Sucrose concentrations of 6%, 9% and 12% (w/v) inhibited embryo growth. The addition of kinetin, isopentenyl adenine and zeatin did not improve embryo growth and development.

The present work reports the effect of different pH and sucrose concentrations on in vitro propagation of Nephrolepis biserrata. Fronds aseptically obtained from stolon segment culture were cultivated in MS semi-solid medium supplemented with 0, 15, 30, 45 and 60g.L-1 sucrose and pH adjusted to 3, 5, 7 and 9, in a factorial design. Frond number and length, pinnae number, raquis length and diameter, fresh and dry matter weight were measured. Inhibition of shoot and leaf regeneration was observed in all the pH treatments in the absence of sucrose. On the other hand, when sucrose was added to the medium, the shoot number increased, reaching the maximum average values of 51.25 and 38.25 shoot per explant at pH 5 and 7, respectively. Sucrose concentrations from 15 to 45g.L-1 increased leaf length and diameter and the pH 9 did not affect the dry matter weight, and was still not adequate for development of new fronds. Young sporophytes were successfully acclimated. O presente trabalho relata o efeito de diferentes valores de pH e concentrações de sacarose na propagação in vitro de Nephrolepis biserrata. Frondes obtidas assepticamente a partir do cultivo de estolões foram inoculadas em meio semi-sólido MS, suplementado com 0, 15, 30, 45 e 60g.L-1 de sacarose e pH ajustado para 3, 5, 7 e 9, em arranjo fatorial. Foram avaliados: número e comprimento das frondes, número de pinas, comprimento e diâmetro da raque e biomassa fresca e seca da parte aérea. Em geral, houve inibição da regeneração de brotos e folhas em todos os tratamentos de pH na ausência de sacarose. Por outro lado, a presença de sacarose no meio induziu 51,25 e 38,25 brotos por explante no pH 5 e 7, respectivamente. Concentrações entre 15 e 45g.L-1 de sacarose aumentaram o comprimento e o diâmetro das folhas e o pH 9 não afetou o peso foliar seco, sendo inadequado para o desenvolvimento de novas frondes. Os esporófitos jovens foram submetidos, com sucesso, ao processo de aclimatação.

A acácia-negra (Acacia mearnsii De Wild.) é uma espécie de difícil micropropagação devido à pequena capacidade de multiplicação e desenvolvimento de gemas. O presente estudo visou determinar a influência de diferentes citocininas na proliferação de gemas axilares em segmentos nodais de A. mearnsii. Plântulas germinadas in vitro forneceram explantes que foram inoculadas em meio básico B5 (GAMBORG et al., 1968). Testaram-se as citocininas: BAP (6-benzilaminopurina), BA (6-benziladenosina), 2iP (gama,gama-isopenteniladenina) e cinetina (6-furfuralamino-purina). Diferentes concentrações desses reguladores de crescimento foram empregadas: 1 mgL-1, 2 mgL-1 e 3 mgL-1. Utilizou-se o delineamento de blocos casualizados, em arranjo fatorial, com seis repetições e cinco plantas por parcela. As avaliações foram feitas aos 30 dias, através da contagem de gemas alongadas e da presença de calos. A utilização de BAP a 2 mgL-1 promoveu a maior taxa de multiplicação de gemas (3,5 brotos/explante).

O objetivo deste trabalho foi o estabelecimento de um protocolo para a embriogênese somática do caquizeiro. Como explantes, foram utilizados embriões zigóticos em diversos estádios de desenvolvimento, retirados de frutos coletados de plantas adultas a campo, a partir de quatro semanas após o pleno florescimento até 22 semanas. O meio básico para os experimentos foi o MS½NO3. O meio inicial de indução foi suplementado com 20µM de 2,4-D e 2µM de cinetina. Os calos escuros obtidos foram repicados para outro meio de indução, com concentrações 10 ou 20 µM de 2,4-D e 2 µM de cinetina. Os calos com massas pró-embriogênicas obtidos foram transferidos para meio de manutenção e multiplicação com 2 µM de cinetina e 2,4-D nas concentrações 2,5; 5,0 e 10 µM. As massas embriogênicas formadas foram transferidas para meio de maturação suplementado com 0,5 µM de AIB e as concentrações 5; 10 e 20 µM de 2-iP. Os embriões formados foram isolados em dois meios de conversão, sendo o primeiro com 5 µM de 2-iP, 5 µM de AG3 e 0,5 µM de AIB e o segundo com 0,5 µM de AG3 e BAP, nas concentrações 0; 0,25; 0,5 e 1,0 µM. Como resultados, obteve-se o padrão indireto de embriogênese somática a partir de embriões zigóticos maduros, com mais de 22 semanas de formação, quando cultivados em meio de cultura com 10 µM de 2,4-D combinado com 2 µM de cinetina. A manutenção e a multiplicação das culturas embriogênicas foram mais eficientes com 5 µM de 2,4-D, na qual os pró-embriões avançaram para o estádio globular. Na fase de maturação, as concentrações de 2-iP testadas atuaram promovendo os embriões globulares a estádios mais avançados da ontogenia como cordiforme, torpedo e cotiledonar. A suplementação do meio de cultura com 1 µM de BAP e 0,5 µM de AG3 gerou a formação de plantas mais desenvolvidas, com maior número e tamanho de folhas. The goal of this work was to develop a protocol for persimmon cloning through somatic embryogenesis. Zygotic embryos excised from fruits collected from adult plants were tested at several developmental phases. They were collected during 22 weeks after 4 weeks blossoming. The basic medium tested was MS½NO3. Initial induction medium was supplemented with 20 µM 2,4-D + 2 µM kinetin. Dark calluses obtained were transferred to induction medium, with concentrations of 10 and 20 µM 2,4-D + 2 µM kinetin. The calli with pro-embryogenic masses were transferred to a maintenance and multiplication medium, with 2 µM kinetin and 2,4-D at the concentrations of 2.5, 5.0 and 10 µM. Embryogenic masses formed were transferred to a maturation medium supplemented with 0.5 µM IBA and 5, 10 and 20 µM 2iP. Embryos formed were isolated in two conversion media, one with 5 µM 2-iP + 5 µM GA3 and 0.5 µM IBA, and another medium with 0.5 µM GA3 and BAP at 0, 0.25, 0.5 and 1.0 µM. Indirect somatic embryogenesis were obtained from mature zygotic embryos collected after 22 weeks, when cultivated in culture medium with 10 µM 2,4D combined with 2 µM kinetin. Embryos maintenance and multiplication were more efficient with 5 µM 2,4-D, in which the pro-embryos advanced to the globular embryos phase. At the maturation phase the concentrations of 2-iP tested promoted globular embryos to more advanced stages of ontogeny, such as cordiform, torpedo and cotiledonary. Supplementation of the culture medium with 1 µM BAP generated better developed plants, with highest number of leaves and size.

O uso de estacas de batata a partir de plantas multiplicadas in vitro pode transformar-se em técnica bastante eficiente para melhorar a taxa de multiplicação de material com alta qualidade fitossanitária. O trabalho objetivou estabelecer um protocolo para a produção de mudas pré-básicas por estaquia a partir de microestacas obtidas de plantas de batata recém aclimatizadas e oriundas da micropropagação. Em dois experimentos, foram estudados os efeitos do tipo de material propagativo (basal, mediano e apical), do tempo de exposição das microestacas (zero e um minuto) a seis diferentes concentrações de AIB (0; 250; 500; 750 e 1000 mg L-1), do período de aclimatização das plantas (15 e 30 dias) e do tipo de substrato (areia e vermiculita) na produção de mudas pré-básicas de batata. Verificou-se que microestacas das três posições apresentaram taxas de enraizamento superiores a 90% quando a coleta foi realizada em plantas de batata com 15 dias de aclimatização, seguido do tratamento de imersão rápida em solução de AIB na concentração de 500 mg L-1 e utilizando-se areia ou vermiculita como substrato. The use of cuttings from micropropagated potato plants can become an efficient technique to improve the multiplication rate of potato genotypes of high genetic quality and sanitary level. A protocol for the production of pre-basic potato material by microcuttings, obtained from plants with a short period of acclimatization, was established. The influence of cutting position (basal, medium and apical), the collection period (15 and 30 days), the immersion time (zero and one minute) in different IBA concentrations (0; 250; 500; 750 and 1000 mg L-1), and substrate types (sand and vermiculite) were analyzed in two experiments. Basal, medium and apical microcutting position presented rooting rates up to 90% when collected from 15 days acclimatization potato plants followed by treatment through fast immersion in IBA solution at 500 mg L-1 and in sand or vermiculite as substrate.

A micropropagação é uma ferramenta promissora que pode ser utilizada para propagação e preservação de muitas espécies de plantas medicinais que vêm sendo exploradas de forma indiscriminada e que estão em vias de extinção. Conduziu-se este trabalho com o objetivo de induzir o crescimento in vitro de brotações de macela, em meio de cultura MS com diferentes concentrações de GA3 (0; 0,1 e 0,5 mgL-1) e BAP (0; 1 e 2 mgL-1). Foram utilizadas brotações de macela com diâmetro médio de 1,5 cm, retiradas de plantas preestabelecidas in vitro, inoculadas em frascos contendo 40 ml do meio de cultura e mantidas em sala de crescimento com temperatura média de 26 ± 1oC, fotoperíodo de 16 h e intensidade luminosa em torno de 2000 lux fornecida por lâmpada tipo fluorescente branca fria. Utilizou-se como delineamento experimental um fatorial 3 x 3, num total de nove tratamentos com 15 explantes por tratamento. Aos 30 dias, verificou-se o maior crescimento em altura das plantas, no tratamento com 0,5 mgL-1 de GA3 na ausência de BAP. O maior número de brotações ou crescimento em diâmetro foi observado com maiores concentrações dos reguladores. Porém, na presença dos reguladores ocorreu um maior número de plantas com folhas hiperhídricas e malformadas. Micropropagation is a promising tool that can be utilized for propagation and preservation of many medicinal species that are being explored in an indiscriminated form and are under the risk of extinction. This work had as an objective to induce the growth in vitro of macela clusters in MS culture medium with different concentrations of GA3 (0, 0.1 and 0.5 mgL-1) and BAP (0, 1.0 and 2.0 mgL-1). Macela clusters or buddings with 1.5 cm of average diameter obtained from in vitro established plants were inoculated in glass containing 40ml of culture medium and keept in a growing room with light (2000 lux) supplied by cool white fluorescent lamps for 16 hours daily at 26 ± 1oC. The experiment design was 3 x 3 fatorial using a total of nine treatments with 15 explants each. On the 30th day, the highest plant was observed in the treatment with 0.5 mgL-1 GA3 in the absence of BAP. The greatest number of buddings or diameter growing was observed in the highest levels of growing regulators. However in the presence of growing regulators there was a great number of ill-shaped and vitrified leaves.

The objective of this work was to establish a protocol for the rootstock of 420-A micropropagation. The establishment of the cultures was accomplished with nodal segments, whose source of explants was the budding of woody stakes stored under refrigeration. In the initial cultivation were tested: the effect of 6-benzilaminopurine and kinetin with 0, 1, 5 and 10 µM concentrations, different culture medium (MS, NN and WPM) and dilutions of the basic medium (MS, MS/2, MS/4 and MS/8). In the alongation and multiplication steps were tested the following culture medium: MS, MS/2, NN and WPM. In the rooting were tested: the MS/2 culture medium with or without activated coal (1gL-1). In the acclimatization were tested the substrate vermiculite, Plantmax and carbonized rice hulls. The kinetin didn't present effect on the budding and the growth of the nodal segments. BAP already promoted an increase in the number of sprouts per explant. The increase in the concentration of BAP reduced the number of leaves emitted by explant and increased the vitrification symptoms, being the best results obtained with 1 µM of BAP. In the initial cultivation the MS medium culture with the normal concentration of salts allowed the largest growth of the buddings. The dilutions of the MS medium in ¼ and 1/8 showed very harmful to the development of the rootstock '420-A', being quite harmed the growth of the shoots after the first subcultivation. During the multiplication the medium MS/2 showed more appropriate. The roots happened naturally during the multiplication, being unnecessary the use of activated coal in the culture medium. The acclimatization was accomplished with success in a misty camera, being obtained high survival rates in vermiculite (95,8%) and Plantmax® (87%). It is concluded that the rootstock '420-A' can be micropropagated by initial cultivation of nodal segments in a culture medium of MS+1µM of BAP, multiplication by sectionalizing the shoots in MS/2 medium and acclimatization in vermiculite substratum or Plantmax®.