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Orientador: Gilberto de Nucci Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Os efeitos vasculares da endotelina-1 (ET-1) , da sarafotoxina 6b (S6b) e o IRL-1620 foram investigados em leito arterial hepático isolado de cão antes e durante a infusão de inibidores da ciclo-oxigenase e da óxido nítrico sintetase (indometacina e L-NAME, respectivamente). Administrações de noradrenalina (NA) foram usadas como agente vasoconstritor controle em nossos experimentos. Após a retirada cirúrgica do órgão, a veia cava (porções abdominal e supra-diafragmática), veia porta e artéria hepática foram canuladas. O órgão foi perfundido através da artéria hepática e da veia porta com solução nutritiva de .Krebs oxigenada e aqueci da a 37oC. Injeções em bolus de ET-1 (0.4-400 pmol), S6b (0.4-400 pmol), IRL-1620 (40-1200 pmol) e NA (5-500 nmol) foram feitas através da artéria hepática e as respostas da prepa~ação foram registradas em polígrafo. A administrações de ET -1 e S6b nduziram uma resposta vasoconstritora dependente da dose e de longa duração, acompanhadas de liberação significativa de prostaciclina (PGI2). A infusão de indometacina (5,6 J.!M) neste sistema tendeu a aumentar, porém não significativamente, as respostas vasculares induzidas por estes agonistas. A subseqüente infusão de L-NAME (10 J.!M), potenciou a resposta vasoconstritora induzida tanto pela ET-1 quando pela S6b (P

Orientadora: Profa. Maria Fernanda de Paula Werner Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa : Curitiba, 19/12/2020 Inclui referências Resumo: A úlcera gástrica é um problema de saúde pública mundial, caracterizada por extensas lesões na mucosa do estômago e/ou esôfago que podem se estender por todas as camadas do órgão, causando sérias complicações como sangramentos e perfurações que requerem hospitalização do paciente e intervenção cirúrgica. Como principais causas da úlcera gástrica temos o uso de anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs), que diminuem a produção de muco-bicarbonato gastroprotetor, e a infecção pela bactéria Helicobacter pylori. Além da erradicação da H. pylori, o tratamento convencional visa a inibição da produção de ácido clorídrico pelo uso dos inibidores da bomba de prótons (e.g. omeprazol), ou de antagonistas de receptores H2 da histamina (e.g. ranitidina). Contudo, estudos demonstram que a inibição da secreção ácida gástrica está associada ao aumento do risco de desenvolvimento de diversas doenças como osteoporose, infecções intestinais e até doença renal crônica. Além da secreção ácida gástrica, a ulcerogênese é um processo complexo que também envolve o fluxo sanguíneo. Os sistemas endotelinérgico e da via do óxido nítrico modulam a microcirculação bem como a inflamação e o estresse oxidativo na mucosa gástrica. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito gastroprotetor e cicatrizante de drogas vasoativas, mais especificamente da bosentana e da sildenafila, em modelos de úlcera gástrica aguda e crônica. A administração oral de bosentana (antagonista dual de receptores ETA e ETB) e da sildenafila (inibidor da fosfodiesterase 5), isoladas ou em associação foram investigadas no modelo de úlcera aguda induzida por isquemia-reperfusão. O efeito cicatrizante da monoterapia com a bosentana foi investigada no modelo de úlcera crônica induzida por ácido acético. Por fim, o modelo de ligadura do piloro foi utilizado para investigar o efeito da bosentana na secreção ácida gástrica. Na úlcera aguda por IR, o pré-tratamento com bosentana, sildenafila ou a associação de baixas doses de ambos reduziram a área ulcerada, impediram a depleção de muco e das defesas antioxidantes no tecido gástrico. Complementarmente, esse pré-tratamento reduziu a infiltração de neutrófilos, importante marcador de inflamação tecidual. No modelo de úlcera crônica induzida por ácido acético foi constatado um aumento na expressão de receptores ETA e ETB na área ulcerada dos animais do grupo veículo comparado com animais naïve. O tratamento com a bosentana por cinco dias acelerou a cicatrização das úlceras crônicas, aumentou o conteúdo de mucina e a proliferação de células epiteliais da mucosa gástrica, reduziu a infiltração de neutrófilos e os níveis de citocinas inflamatórias, como fator de necrose tumoral-alfa e interleucina 1 beta. Os parâmetros plasmáticos da função renal e hepática não foram alterados pelo tratamento subcrônico com a bosentana. A partir dos resultados do modelo agudo, conclui-se que o pré-tratamento com bosentana e sildenafila ou a associação de baixas doses dos fármacos exibe efeito gastroprotetor, e no modelo de úlcera crônica, o pós-tratamento com bosentana induziu a cicatrização de úlceras crônicas, sem modificar a secreção ácida gástrica. Nossos resultados reforçam a tendência mundial do reposicionamento de fármacos (uso off label), e de maneira especial este estudo demonstra que outras vias podem ser exploradas como adjuvantes no tratamento de úlceras gástricas, contornar os possíveis efeitos adversos do tratamento convencional. Abstract: Gastric ulcer is a worldwide public health problem, characterized by extensive lesions in the mucosa of the stomach and / or esophagus that can extend through all layers of the organ, causing serious complications such as bleeding and perforations that require hospitalization and surgical intervention. The main causes of gastric ulcer are the use of non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs), which decrease the production of gastroprotective mucus-bicarbonate, and infection by the bacterium Helicobacter pylori. In addition to the eradication of H. pylori, conventional treatment aims to inhibit the production of hydrochloric acid by the use of proton pump inhibitors (e.g. omeprazole), or histamine H2 receptor antagonists (e.g. ranitidine). However, studies show that inhibition of gastric acid secretion is associated with an increased risk of developing several diseases such as osteoporosis, intestinal infections and even chronic kidney disease. In addition to gastric acid secretion, ulcerogenesis is a complex process that also involves blood flow. The endothelinergic and nitric oxide pathway systems modulate microcirculation as well as inflammation and oxidative stress in the gastric mucosa. Thus, the objective of this work was to evaluate the gastroprotective and healing effect of vasoactive drugs, more specifically bosentan and sildenafil, in models of acute and chronic gastric ulcers. Oral administration of bosentan (dual antagonist of ETA and ETB receptors) and sildenafil (phosphodiesterase 5 inhibitor), either alone or in combination, were investigated in the ischemia-reperfusion-induced acute ulcer model. The healing effect of bosentan monotherapy was investigated in the acetic acid-induced chronic ulcer model. Finally, the pyloric ligation model was used to investigate the effect of bosentan on gastric acid secretion. In acute IR ulcers, pretreatment with bosentan, sildenafil or the combination of low doses of both reduced the ulcerated area, prevented mucus depletion and antioxidant defenses in gastric tissue. In addition, this pre-treatment reduced the infiltration of neutrophils, an important marker of tissue inflammation. In the acetic acidinduced chronic ulcer model, an increase in the expression of ETA and ETB receptors was found in the ulcerated area of animals in the vehicle group compared with naïve animals. Treatment with bosentan for five days accelerated the healing of chronic ulcers, increased mucin content and proliferation of gastric mucosal epithelial cells, reduced neutrophil infiltration and inflammatory cytokine levels, such as alpha-tumor necrosis factor and interleukin 1 beta. Plasma parameters of renal and liver function were not altered by sub-chronic treatment with bosentan. From the results of the acute model, it is concluded that pretreatment with bosentan and sildenafil or the association of low doses of the drugs exhibits a gastroprotective effect, and in the chronic ulcer model, post-treatment with bosentan induced the healing of ulcers, without changing gastric acid secretion. Our results reinforce the worldwide trend of drug repositioning (off label use), and in a special way this study demonstrates that other routes can be explored as adjuvants in the treatment of gastric ulcers, to circumvent the possible adverse effects of conventional treatment.

Orientador: Prof. Dr. Aleksander R. Zampronio Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa : Curitiba, 30/07/2020 Inclui referências: p. 52-60 Resumo: É bem estabelecido, em dados de literatura, que os hormônios sexuais podem afetar as respostas inflamatória e imune. Mulheres geralmente demonstram ter maior reatividade imunológica quando comparadas a homens, uma vez que elas apresentam maior número circulante de linfócitos T e imunoglobulinas, são menos suscetíveis a infecções de origem bacteriana e parasitária. Porém, são as que mais sofrem de doenças relacionadas ao sistema imunológico, como doenças autoimunes e dores crônicas. As diferenças sexuais também podem afetar a resposta febril. Alguns estudos já demonstraram a influência dos hormônios sexuais sobre a resposta febril utilizando endotoxina bacteriana, denominado lipopolissacarídeo (LPS) de bactérias gram-negativas, como modelo de indução de febre em animais de laboratório. Contudo, pouco se sabe a respeito da influência hormonal sobre as respostas febris induzidas por outros padrões associados a patógenos (PAMPs), tais como o zimosan A (Zym) e o ácido poli-inosínico:policitidílico (Poli I:C) que representariam estímulos de origem fúngica e viral, respectivamente. Além disso, alguns estudos já demonstraram, em machos, que existem diferenças nas respostas febris induzidas por esses PAMPs em relação à liberação de citocinas e mediadores centrais. Entre estas diferenças, a endotelina-1 (ET-1) atua como mediador na resposta febril induzida por LPS e Zym, mas não por Poli I:C em machos. O objetivo desse estudo é investigar se os hormônios sexuais afetam a resposta febril induzida por Zym e Poli I:C e o envolvimento de ET-1 como mediador central na resposta febril induzida por LPS, Zym e Poli I:C em ratas Wistar fêmeas. Os resultados revelaram que, semelhantemente ao LPS, a resposta febril induzida por Zym (3 mg/kg, i.p.) e Poli I:C (300 ?g/kg, i.p.) é significativamente maior em fêmeas OVX quando comparadas à fêmeas falso-operadas. A suplementação estrogênica (17??- estradiol, 10 ?g/kg, 5 d, s.c.) em ratas OVX reduziu as respostas febris induzidas por Zym e Poli I:C. Ainda, a administração do antagonista de receptor ETB, BQ788 (3 pmol, 2 ?L), diminuiu a resposta febril induzida por LPS (50 ?g/kg, i.p.) somente em fêmeas com ciclo estral normal, mas não em fêmeas OVX. A injeção de BQ788 também não alterou as respostas febris induzidas por Zym e Poli I:C tanto em fêmeas falso-operadas quanto em OVX. Esses resultados sugerem que os hormônios sexuais, particularmente o estrogênio, reduzem a intensidade da febre induzida por Zym e Poli I:C, igualmente ao que também já foi relatado com a febre induzida por LPS em fêmeas. A ET-1, assim como em machos, participa como mediador na resposta febril por LPS somente em fêmeas falso-operadas, mas não na resposta febril induzida por Zym ou Poli I:C, independentemente da condição hormonal. Esses resultados reforçam a existência da influência dos hormônios sexuais femininos que possivelmente modulam a resposta febril e demonstram que a resposta febril envolve diferentes mediadores dependendo do agente patológico que a esteja causando bem como da condição hormonal do indivíduo em que ela ocorre. Palavras-chave: endotelina-1, estrogênio, diferenças sexuais, resposta imune Abstract: It is well established that sex hormones can affect the immune and inflammatory response. Women generally show greater immunological reactivity when compared to men, as they have a larger number of circulating T lymphocytes and immunoglobulins, are less vulnerable to bacterial and parasitic infections. However, they have a superior prevalence of autoimmune diseases and chronic pain. These sex differences in immune response can also affect the febrile response. Several studies have already demonstrated the influence of sex hormones on the febrile response using bacterial endotoxin, such as lipopolysaccharide (LPS) of gram-negative bacteria, as a model for inducing fever in laboratory animals. However, little is known about the hormonal influence on the febrile response induced by other pathogen-associated molecular patterns (PAMP), such as zymosan A (Zym) and polyinosinic:polycytidylic acid (Poly I:C) that would represent stimuli of fungal and viral origin, respectively. In addition, some studies have been shown, in males, that are differences in the febrile response induced by these PAMPs in relation to the release of cytokines and even central mediators. For instance, endothelin-1 (ET-1), an important central mediator of LPS- and Zym-induced fever, do not participate in the febrile response induced by Poly I:C in males. The purpose of this study was to investigate if female sex hormones affect the febrile response induced by Zym and Poly I:C and the involvement of ET-1 as a mediator on fever induced by these PAMPs in females. The results revealed that, similarly to LPS, the febrile response induced by Zym (3 mg/kg, i.p.) and Poly I:C (300 ?g/kg, i.p.) is significantly higher in ovariectomized (OVX) female rats compared to sham-operated female rats. Estrogen replacement (17??- estradiol, 10 ?g/kg, 5 d, s.c.) in OVX females reduced Zym and Poly I:Cinduced fever. In addition, the administration of the ETB receptor antagonist BQ788 (3 pmol, 2 ?L) reversed the febrile response induced by LPS (50 ?g/kg, i.p.) in cycling females but not in OVX females. BQ788 did not change the febrile response induced by Zym or Poly I:C in both cycling and OVX females. These findings suggest that female sex hormones, and particularly estrogen, reduce the intensity of fever induced by Zym and Poly I:C, similarly as described to LPS. ET-1, as well as in males, participates of the febrile response induced by LPS in cycling females but not by LPS in OVX females, but not in the febrile response induced by Zym or Poly I:C, regardless of hormonal condition. These results reinforce the influence of female sex hormones in modulating the febrile response and show that the febrile response in females can involve different mediators depending on the agent that is causing it. Keywords: endothelin-1, estrogen, sex differences, immune response

Orientador: Prof. Dr. Aleksander Roberto Zampronio Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa : Curitiba, 29/09/2020 Inclui referências: p. 74-101 Resumo: A síndrome da doença é uma resposta adaptativa que pode ser distinguida por sinais e sintomas característicos, como febre, hiperalgesia generalizada, hipolocomoção, apatia e sono. A endotelina-1 (ET-1) é produzida por estímulos inflamatórios, incluindo lipopolissacarídeo (LPS), e está envolvida na patogênese da inflamação e da dor por meio da ação dos receptores ETA e ETB. A ET-1 também induz febre por ação em receptores ETB no hipotálamo. No entanto, pouco é conhecido sobre a participação da ET-1 produzida no sistema nervoso central (SNC) nos outros fenômenos da síndrome de doença. O presente estudo investigou o papel da ET-1 nas respostas da síndrome da doença, incluindo hiperalgesia, anedonia e hipolocomoção, bem como reavaliou o envolvimento de receptores ETA na resposta febril induzida por LPS em ratos Wistar. A hiperalgesia mecânica foi avaliada com o analgesímetro eletrônico Von Frey e a hiperalgesia térmica com a placa aquecida. A administração intracerebroventricular (i.c.v.) de ET-1 induziu hiperalgesia mecânica e térmica em ratos, que foi reduzida pelo antagonista do receptor ETA BQ123 e exacerbada pelo antagonista do receptor ETB, BQ788. O tratamento dos animais com o inibidor da ciclooxigenase (COX) indometacina não alterou a hiperalgesia induzida por ET-1. A administração intraperitoneal (i.p.) de LPS induziu hiperalgesia mecânica e térmica nos animais. Tanto o BQ123 quanto o BQ788 aboliram essa hiperalgesia mecânica, mas a resposta térmica foi apenas parcialmente bloqueada. Para se avaliar se este comportamento nociceptivo depende da ativação dos receptores de ET-1 no hipotálamo foi feito o tratamento com os antagonistas diretamente nesta região. O bloqueio dos receptores ETA no hipotálamo também aboliu a hiperalgesia mecânica induzida pelo LPS, e o antagonista do receptor ETB não influenciou essa resposta. Além da hiperalgesia, a administração i.p. de LPS também induziu anedonia, refletida na menor preferência pela sacarose e redução da atividade locomotora no teste do campo aberto. Ambos os antagonistas restauraram a atividade locomotora, mas apenas o BQ788 reverteu a redução da preferência pela sacarose. Concomitantemente a estas respostas, diferentes doses de LPS induziu febre nos animais. A administração do LPS (10 ou 200 ?g/kg, i.p.) produziu febre nos ratos. O pré-tratamento (30 min antes) ou o pós-tratamento (2 h após a administração de LPS) dos animais com o antagonista ETA BQ123 não alterou a resposta febril induzida por baixas doses de LPS corroborando os resultados anteriores. No entanto, o póstratamento dos animais com este antagonista, reduziu a febre induzida por alta dose de LPS. Esses resultados indicam que ET-1 e os receptores ETA e ETB estão envolvidos em várias respostas relacionadas à síndrome da doença, incluindo hiperalgesia mecânica e térmica induzida tanto pela ET-1 quanto pelo LPS. Outros comportamentos ligados à infecção como a anedonia e hipolocomoção além da febre induzidas por LPS também envolvem a participação deste peptídeo. Além disso, os receptores ETA participam da resposta febril induzida por altas doses de LPS, provavelmente em uma fase mais tardia da resposta. Palavras chave: Endotelina-1, endotoxina, hiperalgesia, anedonia, receptores de endotelina. Abstract: The sickness syndrome is an adaptive response that can be distinguished by characteristic signs and symptoms, such as fever, generalized hyperalgesia, hypolocomotion, apathy and sleep. Endothelin-1 (ET-1) is produced by inflammatory stimuli, including lipopolysaccharide (LPS), and is involved in the pathogenesis of inflammation and pain through the action of ETA and ETB receptors. ET-1 also induces fever by action at ETB receptors in the hypothalamus. However, little is known about the participation of ET-1 produced in the central nervous system in other phenomena of the sickness syndrome. The present study investigated the role of ET-1 in the responses of the sickness syndrome, including hyperalgesia, anhedonia and hypolocomotion, as well as re-evaluated the involvement of ETA receptors in the febrile response induced by LPS in Wistar rats. Mechanical hyperalgesia was assessed with the Von Frey electronic analgesiometer and thermal hyperalgesia in the hot plate. Intracerebroventricular (i.c.v.) administration of ET-1 induced mechanical and thermal hyperalgesia in rats, which was reduced by the ETA receptor antagonist BQ123 and exacerbated by the ETB receptor antagonist, BQ788. The treatment of animals with the cyclooxygenase inhibitor (COX) indomethacin did not alter ET-1-induced hyperalgesia. Intraperitoneal (i.p.) administration of LPS induced mechanical and thermal hyperalgesia in animals. Both BQ123 and BQ788 abolished this mechanical hyperalgesia, but the thermal response was only partially blocked. To assess whether this nociceptive behavior depends on the activation of ET-1 receptors in the hypothalamus, treatment with antagonists was carried out directly in this region. Blocking of ETA receptors in the hypothalamus also abolished LPS-induced mechanical hyperalgesia, and the ETB receptor antagonist did not influence this response. In addition to hyperalgesia, i.p. injection of LPS also induced anhedonia, reflected in the lower preference for sucrose and reduced locomotor activity in the open field test. Both antagonists restored locomotor activity, but only BQ788 reversed the reduction in preference for sucrose. Concomitantly with these responses, different doses of LPS induced fever in the animals. Administration of LPS (10 or 200 ?g / kg, i.p.) produced fever in the rats. The pre-treatment (30 min befoere) or the posttreatment (2 h after the injection of LPS) of the animals with the antagonist ETA BQ123 did not alter the febrile response induced by the low dose of LPS corroborating the previous results. However, the post-treatment of the animals with this antagonist, reduced the fever caused by the higher doses of LPS tested. These results indicate that ET-1 and the ETA and ETB receptors are involved in several responses related to the sickness syndrome, including mechanical and thermal hyperalgesia induced by both ET-1 and LPS. Other behaviors linked to infection such as anhedonia and hypolocomotion in addition to fever induced by LPS also involve the participation of this peptide. Moreover, ETA receptors participate in the febrile response induced by high doses of LPS, probably in a later phase of this response. Keywords: Endothelin-1, endotoxin, hyperalgesia, anhedonia, endothelin receptors.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2019. Desde 1970, a cisplatina é um quimioterápico muito utilizado para o tratamento de diversos tipos de tumores sólidos. No entanto, um dos efeitos colaterais mais limitantes deste fármaco é o aparecimento de neuropatias periféricas, que acometem cerca de metade dos pacientes submetidos a tratamento com ele. A patofisiologia deste tipo de dor causada por cisplatina ainda é bem pouco conhecida e de difícil manejo clínico. Por outro lado, alguns trabalhos demonstram o envolvimento do sistema das endotelinas em diversos tipos de neuropatia, mas sua participação na mediação de neuropatias associadas à quimioterapia ainda é desconhecida. O presente estudo teve como objetivo maior verificar se as endotelinas estão implicadas na manutenção da neuropatia induzida por cisplatina em camundongos. Verificou-se que injeções semanais de Cisplatina, na dose de 3 mg/kg (i.p.) por 4 semanas, causavam hiperalgesia mecânica de longa duração tanto na pata posterior quanto na face dos animais tratados. A resposta hiperalgésica mecânica dos animais tratados com cisplatina não foi modificada pelo tratamento neonatal com capsaicina. Drogas de referência para controle de dor e inflamação, tais como morfina, dexametasona, indometacina e celecoxibe reverteram parcialmente a hiperalgesia mecânica na pata e na face dos animais na primeira e na segunda semana após o início do tratamento com cisplatina, mas não foram efetivos na quarta semana. A gabapentina, um dos fármacos de referência para controle de dores neuropáticas, foi efetivo em reverter a hiperalgesia em ambas as regiões e em todos os períodos avaliados. O tratamento com antagonistas peptídicos seletivos para receptores ET A (BQ-123) e ET B (BQ-788) foram efetivos em reverter a hiperalgesia mecânica da face em todos os períodos avaliados, mas o mesmo não aconteceu na pata posterior, cuja hiperalgesia só foi reduzida por estes fármacos na primeira semana após o início do tratamento com cisplatina. Ensaios de RT-PCR quantitativo detectaram aumentos significativos de RNAm para receptores ET A e ET B no gânglio trigeminal dos camundongos após 2 e 4 semanas de tratamento com o quimioterápico. Também foram observados aumentos na expressão protéica de receptores ET B (mas não ET A ) em imunoensaios de Western Blot no gânglio trigeminal, bem como de ambos os receptores em ensaios de imunofluorescência com gânglios de raízes dorsais lombares obtidos de animais após 2 e 4 semanas de tratamento com cisplatina. Este conjunto de resultados implica o sistema das endotelinas na manifestação da hiperalgesia mecânica associada à neuropatia promovida pelo tratamento prolongado com cisplatina em camundongos. O sistema das endotelinas pode vir a constituir um alvo atrativo para manejo terapêutico da neuropatia causada por este quimioterápico. Abstract: Since 1970, cisplatin has been widely used as a chemotherapeutic drug to treat various types of solid tumors. One of the most limiting side effects of this drug is the occurrence of peripheral neuropathy, which affects about half of the patients and is poorly responsive to currently available analgesics. Currently, the pathophysiology of cisplatin-induced neuropathic pain is still incompletely understood, which hampers its effective clinical management. On the other hand, some studies have implicated the endothelin system in various types of neuropathy, but evidence for the participation of endothelins in mediating chemotherapy-associated neuropathies is lacking. Thus, the present study aimed to examine if endothelins are implicated in the maintenance of cisplatin- induced neuropathy in mice. It was found that weekly injections of cisplatin (3 mg/kg per week, i.p.) for 4 weeks caused long-lasting mechanical hyperalgesia in both the hind paw and forehead. Neonatal capsaicin treatment failed to modify the development of mechanical hyperalgesia in response to cisplatin. Acute treatment with the reference analgesic and/or anti-inflammatory drugs morphine, indomethacin, celecoxib and dexamethasone transiently and partially reversed paw and forehead mechanical hyperalgesia when injected at 1 or 2 weeks after initiating cisplatin treatment, but were effective at 4 weeks. In contrast, gabapentin, a reference drug to control neuropathic pain, was effective in reversing hyperalgesia in both regions in all 3 examined periods. Treatment with peptidergic antagonists selective for ET A (BQ-123) and ET B (BQ-788) receptors effectively reversed mechanical hyperalgesia in the forehead at 1, 2 or 4 weeks after starting cisplatin treatment, but hind paw hyperalgesia was only attenuated by these drugs after the first week. Quantitative RT-PCR assays detected significant increases in mRNA for ET A and ET B receptors in trigeminal ganglia collected at 2 and 4 weeks of cisplatin treatment. At 2 and 4 weeks of treatment with cisplatin, an increase in ET B (but not ET A ) receptor protein expression was observed in trigeminal ganglia by Western blot immunoassay of the trigeminal ganglion, as well as of both receptors in lumbar dorsal root ganglia by immunofluorescence assays. Altogether, the results obtained show that prolonged treatment of mice with cisplatin activates the endothelin system to sustain neuropathic mechanical hyperalgesia of the forehead, but not of the hind paw, where endothelins seem to be involved only during the initial, non- neuropathic, sensory changes. The endothelin system could be an attractive target for therapeutic management of chemotherapy-induced craniofacial neuropathy.

A resposta inflamatória pode exacerbar o processo lesivo após desordens neurais agudas como no acidente vascular encefálico. Alternativas de se obter uma diminuição na resposta inflamatória no acidente celular encefálico vem sendo amplamente estudada com o uso de compostos fitoterápicos, nesta hipótese o cipó pucá (Cissus verticillata), uma planta medicinal amazônica popularmente utilizada como anti-inflamatório e anti-hipoglicêmico vem sendo utilizada pela medicina popular no tratamento de doenças agudas inflamatórias. Entretanto, não existem investigações sobre os possíveis efeitos anti-inflamatórios e neuroprotetores do extrato da planta em modelos experimentais de desordens neurais agudas. Neste estudo, investigou-se os efeitos anti-inflamatórios e neuroprotetores do extrato da planta por extração supercrítica em ratos adultos submetidos a lesão aguda induzida por endotelina-1 (ET-1) no córtex motor. Dois grupos experimentais foram delineados: O primeiro com animais do grupo controle com um tempo de sobrevida de vinte e quatro horas e de sete dias (Grupo N= 3 para cada tempo de sobrevida), submetidos a isquemia focal com ET-1, porém injetados apenas solução salina e tween 5% via intraperitoneal (i.p), e o segundo grupo de animais tratados com doses de 100 mg/Kg (i.p) de extrato da planta logo após a cirurgia com os mesmos tempos de sobrevida (Grupo N=5 para cada tempo de sobrevida). Em seguida perfundidos vinte quatro horas e sete dias após a indução da lesão isquêmica. A análise histopatológica geral foi realizada em secções coradas pela violeta de cresila e hematoxilina. Neutrófilos e macrófagos foram identificados por imunoistoquímica com anticorpos específicos (anti-MBS1 e IBA-1, respectivamente), astrócitos marcados com anticorpo anti-GFAP. Realizou-se contagem microglia/macrófagos ativados e corpos neuronais nos grupos experimentais mencionados e avaliou-se a atividade de astrócitos após a lesão. O tratamento com o extrato de Cissus verticillata induziu efeitos anti-inflamatórios e neuroprotetores nos animais tratados, bem como a diminuição da cavitação tecidual, ativação de astrócitos no centro da lesão e diminuição de infiltrado de células inflamatórias polimorfonucleares e/ou microglia/macrófago. The inflammatory response may exacerbate the damaging process after acute neural disorders such as in stroke. Alternatives to obtain a decrease in the inflammatory response in the encephalic cell accident have been widely studied with the use of herbal compounds, in this hypothesis the pucá cucó (Cissus verticillata), an Amazonian medicinal plant popularly used as anti-inflammatory and antihyperglycemic used by folk medicine in the treatment of acute inflammatory diseases. However, there are no investigations into the possible anti-inflammatory and neuroprotective effects of plant extract in experimental models of acute neural disorders. In this study, we investigated the anti-inflammatory and neuroprotective effects of plant extract by supercritical extraction in adult rats submitted to acute injury induced by endothelin-1 (ET-1) in the motor cortex. Two experimental groups were delineated: the first with animals of the control group with a survival time of twenty-four hours and seven days (Group N = 3 for each survival time), submitted to focal ischemia with ET-1, but injected 5% tween intraperitoneal (ip), and the second group of animals treated with doses of 100 mg / kg (ip) of plant extract after surgery with the same survival times (Group N = 5 for each survival time). Then perfused twenty four hours and seven days after induction of ischemic injury. General histopathological analysis was performed in sections stained by cresyl violet and hematoxylin. Neutrophils and macrophages were identified by immunohistochemistry with specific antibodies (anti-MBS1 and IBA-1, respectively), astrocytes labeled with anti-GFAP antibody. Activated microglia/ macrophages and neuronal bodies were counted in the mentioned experimental groups and the astrocyte activity after the lesion was evaluated. Treatment with Cissus verticillata extract induced anti-inflammatory and neuroprotective effects in treated animals, as well as decreased tissue cavitation, astrocyte activation at the center of the lesion and decreased infiltration of polymorphonuclear and/or microglia/ macrophage inflammatory cells. UNIFESSPA - Universidade Federal do Sul e Sudeste do Pará

Fil: Cassinotti, Luis Roberto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Fil: Bianchi, Mariana. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. Las endotelinas (ET) son moléculas con importantes funciones en procesos fisiológicos y fisiopatológicos. Sus roles fueron analizados tanto en colon normal como en el patológico, incluyendo además el estudio de los péptidos natriuréticos (NP) ANP y CNP. ET-1 es la principal isoforma en el colon distal, mientras que la ET-2 predomina en el segmento proximal. El principal receptor de endotelinas es ETB, localizado principalmente en los núcleos de células de la mucosa. El receptor ETA exhibe niveles débiles de expresión génica aunque presenta una amplia localización. Los resultados revelaron que tanto las ET como los NP exhiben una distribución que permite postular que estarían involucrados en el mantenimiento de las propiedades mecánicas de las criptas de colon. Para la inducción del cáncer colorrectal murino (CCR), se utilizaron azoximetano y sulfato de sodio dextrano. Las muestras se tomaron en la cuarta, octava, decimosexta y vigésima semana. La progresión tumoral, generada principalmente en el colon distal, se observó mediante técnicas histológicas. Además, se utilizó microscopía de generación de segundo armónico, para analizar la disposición de las fibras de colágeno en la matriz extracelular. En el CRC, el hallazgo más relevante es la remisión temprana de la expresión de ET-2 en el colon distal. Aunque ET-1 no mostró modificaciones relevantes, hubo un aumento en la expresión de ETA y una disminución del receptor de depuración, ETB, que podría potenciar la actividad de ET-1. El CNP mostró aumentos sostenidos en su expresión, lo que sugiere que podría actuar contrarrestando los roles de las ET. Endothelins (ET) are molecules with important roles in physiological and pathophysiological processes. Their roles were analyzed both in normal and pathological colon. The study of the natriuretic peptides (NP) ANP and CNP, their natural antagonists, was included. ET-1 is the major isoform found in the distal colon, while ET-2 predominates in the proximal segment. The main endothelin receptor is ETB, which is mainly located in the nuclei of mucosal cells. The ETA receptor exhibits weak levels of gene expression although depicts a widespread localization. In summary, the results revealed that both ET and NP exhibit a distribution that allows postulating that they would be involved in maintaining the mechanical properties of the colon crypts. For the induction of murine colorectal cancer (CRC), azoxymethane and dextran sodium sulfate were used. Samples were taken at the fourth, eighth, sixteenth and twentieth weeks. The tumor progression, mainly generated in the distal colon, was observed by classical histological techniques. Also, second harmonic generation microscopy, was used to analyze the collagen fibers arrangement in the extracellular matrix. In the induced CRC, the ET profile exhibit differential changes in its expression levels. The most relevant finding is the early ET-2 expression remission in the distal colon. While ET-1 did not exhibit relevant modifications, there was an increase in the ETA expression and a decrease in the clearance receptor, ETB, that could enhance ET-1 activity. CNP showed sustained increases in gene expression in distal colon, suggesting that it could act counteracting the roles of ET family. Universidad Nacional de Entre Ríos Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas

Orientador: Prof. Dr. Aleksander Roberto Zampronio Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa : Curitiba, 30/11/2018 Inclui referências: p.78-95 Resumo: A sepse representa uma resposta imune desregulada à infecção, com altas taxas de mortalidade e pode progredir para choque séptico. Mostramos anteriormente que o tratamento por via oral com o antagonista do receptor canabinóide CB1, rimonabanto, reduziu as taxas de mortalidade em animais com sepse induzida por ligadura e punção do ceco (CLP). Essa melhora na taxa de sobrevida parece estar relacionada a um aumento nos níveis de arginina vasopressina (AVP) circulantes 12 h após a CLP. O presente estudo investigou os efeitos periféricos do tratamento com rimonabanto na disfunção de órgãos, parâmetros hematológicos e reatividade vascular em ratos Wistar machos com sepse induzida por CLP. Além disso, o presente estudo buscou compreender o efeito do bloqueio central do sistema endocanabinóide e do sistema endotelinérgico durante a sepse. Para este fim, avaliamos o efeito do bloqueio do receptor CB1 na taxa de sobrevida de ratos submetidos à sepse por CLP, o efeito do bloqueio do receptor CB1 e o bloqueio do receptor ETA na temperatura da cauda em ratos com sepse, o efeito da sepse nos níveis de anandamida (AEA) e 2 araquidonilglicerol (2-AG) no hipotálamo, o efeito do antagonista de receptor ETA BQ123, nos níveis de endocanabinóides (eCB) no hipotálamo em ratos sépticos e o efeito do bloqueio do receptor CB1, com AM 251 na variação da temperatura da cauda após a administração de AVP. Os resultados que avaliaram o efeito periférico do bloqueio dos receptores CB1, demonstraram que o tratamento com rimonabanto por via oral (10 mg/kg, 4 h após CLP) aboliu o aumento nos níveis plasmáticos de lactato, lactato desidrogenase (LDH), glicose e creatinina quinase MB (CK-MB) sem alterar os parâmetros hematológicos, como leucopenia e redução da contagem de plaquetas. O tratamento com rimonabanto também não alterou o aumento dos níveis de nitrato/nitrito (NOx) induzido pela sepse, mas reduziu a vasoconstrição induzida pela sepse na artéria da cauda. Ainda, o tratamento com rimonabanto também atenuou a hiperreatividade à AVP sem afetar a hiporresponsividade à fenilefrina em anéis aórticos. O bloqueio, no sistema nervoso central, dos receptores CB1 utilizando os antagonistas de receptor CB1, o rimonabanto e o AM 251 preveniram a mortalidade induzida por CLP em ratos. Além disso, a CLP promoveu uma diminuição na temperatura da cauda dos ratos, e esta diminuição foi abolida após a administração do antagonista de receptor CB1, AM251 e após a administração de antagonista de receptor ETA, BQ123. A sepse aumentou os níveis de AEA no hipotálamo 6 h após a cirurgia, mas não alterou os níveis de 2-AG, e a administração intracerebroventricular (i.c.v.) de BQ123, aboliu esse aumento. Além disso, a sepse induziu uma hiperresponsividade (vasoconstrição) da artéria caudal à injeção i.v. de AVP 24 h após a cirurgia que foi revertida pelo tratamento i.c.v. com AM 251 4 e 8 h após a CLP. Em conjunto, esses resultados sugerem que o rimonabanto reduz a disfunção de órgãos durante a sepse, e esse efeito pode estar relacionado à sinalização de AVP nos vasos sanguíneos. Este efeito pode ter contribuído para a maior taxa de sobrevida em animais sépticos tratados com agonista inverso/antagonista de receptor CB1. Além disso, é possível sugerir que o bloqueio dos receptores CB1 e ETA no sistema nervoso central (SNC), poderia ser benéfico durante a sepse e poderia representar um novo alvo para o tratamento da sepse. Palavras-chaves: Sepse. Endocanabinóides. Arginina-vasopressina. Endotelina- 1. Abstract: Sepsis is a life-threatening condition with high mortality rates that is caused by dysregulation of the host response to infection. We have previously reported that treatment by oral route with the cannabinoid CB1 receptor antagonist rimonabant reduced mortality rates in animals with sepsis that was induced by cecal ligation and puncture (CLP). This improvement in the survival rate appeared to be related to an increase in arginine vasopressin (AVP) circulating levels 12 h after CLP. The present study investigated the effects of rimonabant on organ dysfunction, hematologic parameters, and vascular reactivity in male Wistar rats with sepsis induced by CLP. In addition, the present study seeks to understand the effect of central blockade of the endocannabinoid system and endothelinergic system during sepsis. To this goal, we evaluated the effect of CB1 receptor blockade on the survival rate of rats submitted to CLP-induced sepsis, the effect of CB1 receptor blockade and ETA receptor blockade on skin temperature in rats with sepsis, the effect of sepsis in the anandamide (AEA) and 2- araquidonilglicerol (2-AG) levels of the hypothalamus and the effect of the administration of BQ123, an ETA receptor antagonist, at the levels of endocannabinoids (eCB) in the hypothalamus in septic rats and the effect of CB1 receptor antagonist, AM 251 on tail temperature variation after AVP administration. Results that evaluated the peripheral effect of CB1 receptor blockade demonstrated that the oral treatment with rimonabant (10 mg/kg, 4 h after CLP) abolished the increase in plasma levels of lactate, lactate dehydrogenase (LDH), glucose and creatinine kinase MB (CKMB) with no alterations in the hematological parameters, such as: leucopenia and reduction in platelet count. Treatment with rimonabant did not alter the increase in nitrate/ nitrite (NOx) levels induced by sepsis, but reduced vasoconstriction in the tail artery. In addition, treatment with rimonabant also attenuated hyperreactivity to AVP without affecting hyporesponsiveness to phenylephrine in aortic rings. The blockade of the CB1 receptors in the central nervous system, using the CB1 receptor antagonists rimonabant and AM 251 prevented CLPinduced mortality in rats. In addition, CLP promoted a decrease in rat skin temperature, and this decrease was abolished following administration of CB1 receptor antagonist, AM251 and following administration of ETA receptor antagonist, BQ123. Sepsis increased the levels of AEA in the hypothalamus 6 h after surgery but did not alter 2-AG levels, and intracerebroventricular (i.c.v) administration of BQ123 abolished this increase. In addition, sepsis induced hyperresponsiveness (vasoconstriction) of the tail artery to the i.v. injection of AVP 24 h after the surgery that was abolished by the i.c.v. treatment with AM 251 4 and 8 h after CLP. Taken together, these results suggest that rimonabant reduces organ dysfunction during sepsis, and this effect may be related to AVP signaling in blood vessels. This effect may have contributed to the higher survival rate in septic animals treated with CB1 receptor antagonist/inverse agonist. In addition, it is possible to suggest that the blockade of CB1 and ETA receptors in the central nervous system could be beneficial during sepsis and could represent a new target for the treatment of sepsis. Keywords: Sepsis. Endocannabinoids. Arginine vasopressin. Endotelin-1.

El objetivo del presente estudio fue cuantificar la contribución del sobrepeso en la magnitud de la lipemia posprandial en sujetos normolipídicos. Se incluyeron 33 adultos normolipídicos en dos grupos (n=20, sobrepeso y (n=13 eutróficos, 66% hombres, edad media 31,2±7,6 años). Se midió la vasodilatación mediada por flujo (VMF), la velocidad de onda de pulso (VOP), el perfil lipídico, el cociente Log TG/c-HDL, la glucosa y presión arterial tras una ingesta estándar con alto contenido de grasa (79% Kcal/grasa). Se calculó, el Z-score de riesgo cardiovascular a partir de la suma de los residuos tipificados (Z) de las variables de riesgo cardiovascular. El estado de lipemia posprandial se midió en ayuno (0 min) y a los (60, 120, 180, y 240 min) posprandiales. El valor basal de la VMF y la VOP fue de 6,9±5,9% y 7.0±0.8 m/s, respectivamente. Se identificó que la lipemia posprandial reducía la WMF en 19,2% a los 60 min (5,9±1,5%) y a los 240 min (3,7±1,2%) (p