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[ES] El incremento de la expectativa de vida de la población conlleva un aumento en la demanda de terapias encaminadas a corregir el deterioro de órganos y tejidos; sin embargo, las soluciones hoy en día siguen estando limitadas al trasplante de estos. La escasez de donantes y el riesgo de padecer rechazo inmunológico frente al trasplante han obligado a desarrollar alternativas terapéuticas basadas en la ingeniería tisular. Un “constructo” de ingeniería tisular incluye células, biomateriales y señales químicas o físicas reguladoras de la función celular. Por esta razón, actualmente existe una gran demanda de biomateriales para estas aplicaciones, siendo el principal requisito que deben cumplir, su carácter biocompatible. En este trabajo, utilizando una línea celular de fibroblastos de ratón, se ha estudiado la biocompatibilidad in vitro de cinco nuevos derivados del poliuretano, mediante la evaluación de su citotoxicidad y su capacidad para constituir un sustrato de adhesión celular. Para ello, por una parte, se cuantificó la proliferación celular de cultivos realizados en medio extractivo obtenido de cada uno de los materiales y, por otra, se realizaron cultivos directamente sobre muestras de los materiales y se evaluó la adhesión y proliferación celular mediante microscopía electrónica de barrido. Dos de los cinco materiales han demostrado una buena biocompatibilidad in vitro al no mostrar indicios de citotoxicidad para la línea celular utilizada, además de permitir la adhesión, migración y proliferación de las células sobre el material con gran eficacia. Este estudio abre camino a la futura evaluación de la biocompatibilidad in vivo de estos materiales y sienta las bases para su futura aplicación en ingeniería tisular y biomedicina.

[ES] En enfermedades desmielinizantes como la esclerosis múltiple los oligodendrocitos, responsables de la mielinización en el sistema nervioso central, y las vainas de mielina que rodean los axones resultan dañados, comprometiendo el correcto funcionamiento del sistema nervioso. Hay evidencia científica de que la modulación de los receptores GABAB incide en los procesos de diferenciación oligodendroglial y mielinización en ratas in vitro, lo cual pone en manifiesto la potencial relevancia de estos receptores en el desarrollo de estrategias terapéuticas para tratar enfermedades desmielinizantes. En base a esto, este Trabajo de Fin de Grado se ha centrado en estudiar el efecto sobre la diferenciación oligodendroglial y mielinización de la modulación farmacológica in vivo de los receptores GABAB con su agonista específico baclofeno y con su antagonista CGP35348 durante el desarrollo en rata. Para ello, se han tratado crías de rata desde el día postnatal 6 hasta el 21, y se han procesado durante y después del tratamiento. Tras realizarles la perfusión y procesar sus tejidos, se han realizado análisis inmunohistoquímicos usando anticuerpos específicos dirigidos a marcadores de la mielina y de diferentes etapas de maduración de los oligodendrocitos en regiones de interés del sistema nervioso central, como giro dentado y zonas de sustancia blanca (estriado y nervio óptico). Los resultados de este estudio sugieren que la activación del receptor GABAB con baclofeno in vivo estimula la mielinización, pero no tiene efecto sobre la diferenciación oligodendroglial durante el desarrollo en rata.

[EN] Review about HIV quantification and eradication strategies, current status and future advances. [ES] Revisión de estrategias de cuantificación y erradicación del VIH: situación actual y avances futuros.

[EN] Arrest peptides were employed as a technique to study the cotranslational folding of cytosolic A and B helices of the potassium channel Kv7.2. The results show the potential of arrest peptides to study cotranslational folding. In the tested conditions, the A and B helices mostly do not cotranslationally fold in the ribosome vestibule.

[EN] Exploratory Data Analysis (EDA): explore the database from an univariate perspective to analyse the distribution of the data. Shed light on the nephrolithiasis process by studying it from a multivariate, interdisciplinary perspective, analysing the properties and characteristics of the variables collectively together with their importance through PCA. Calculate and interpret the correlations and interactions between every variable and grouped in clusters. Use the correlations and interactions among variables to train an AI-based model for the clinical diagnosis and prevention of urolithiasis that can be implemented in hospitals and primary attention clinics. Make the AI-based model capable of predicting the probability that a problem patient has kidney stones and predict which type

[ES] Se estudia la potencial implicación del sitio de unión a PIP2 situado entre las hélices A y B del dominio C-terminal del canal de potasio Kv7.2 en el proceso de cambio conformacional mediado por la calmodulina.

[ES] La capacidad de reconocimiento específico y unión al ADN del sistema CRISPR/Cas9 ofrece posibilidades sin precedentes en el campo de la biología sintética de plantas. Las modificaciones de la proteína Cas9 o su guía de ARN permiten la expansión del rango de actividades de Cas9, desde su actividad de nucleasa original hasta otras actividades relacionadas con la unión al ADN, como la activación/represión transcripcional. Esto abre la posibilidad de crear circuitos de regulación que permitan controlar la expresión génica con mayor precisión. El objetivo de este trabajo consiste en el diseño y la evaluación de nuevos factores de transcripción programables basados en el sistema CRISPR/Cas9. Para optimizar el sistema CRISPR/Cas9 como herramienta se empleó una versión catalíticamente inactiva de la endonucleasa Cas9 (dead Cas9 o dCas9) a la que se unieron mediante dos estrategias distintas una serie de dominios de activación transcripcional. Una de las estrategias empleadas, denominada dCas9-SAM o “sinergia de mediadores de activación” consistió en la modificación del ARN guía mediante la incorporación de aptámeros que son reconocidos por la proteína de la cubierta del virus MS2 fusionada a dominios de activación. Como segunda aproximación, se utilizó la estrategia dCas9-Suntag que consiste en la adición de un péptido en el extremo C-terminal, que contiene varias repeticiones de un epítopo que es reconocido por un anticuerpo fusionado a un dominio activador. El estudio de la activación transcripcional se ha llevado a cabo en Nicotiana benthamiana utilizando como diana de activación el promotor de la dihidroflavonol reductasa de Solanum lycopersicum, que es un promotor de actividad baja pero inducible por factores de transcripción endógenos tipo MYB. De las dos estrategias evaluadas en este estudio se obtuvieron mayores niveles de expresión con la estrategia dCas9-SAM, alcanzando tasas de activación de más de 20 veces sobre los valores de referencia del promotor no activado. [EN} The specific DNA recognition and binding capacity of the CRISPR/Cas9 system offers unprecedented possibilities in the field of Plant Synthetic Biology. Modifications of Cas9 or its guide RNA allow the expansion of Cas9 activities, from the original nuclease function to other activities related to DNA binding, such as transcriptional activation or repression. This opens the possibility of creating regulatory circuits that allow controlling genetic expression with greater precision. The aim of this work consists on the design and evaluation of new programmable transcriptional activators based on the CRISPR/Cas9 system. In order to optimise the CRISPR/Cas9 system as a tool for transcriptional regulation a catalytically inactive version of the Cas9 endonuclease (dead Cas9 or dCas9) was used, to which a series of transcriptional activation domains were bound by two different strategies. One of the strategies, dCas9-SAM (Synergistic activation mediator) is based on the incorporation of aptamers to the gRNA scaffold, to which viral coat proteins fused to activator domains will bind. A second approach was dCas9-Suntag. This strategy consists on the addition of a C-terminal peptide, which contains several repeats of an epitope that is recognized by antibodies fused to transcriptional regulator domains. The study of transcriptional activation has been carried out in Nicotiana benthamiana, targeting the dihydroflavonol reductase promoter of Solanum lycopersicum, which is a weak promoter, inducible by endogenous MYB-like transcriptional factors. As a result of this study it was found that the dCas9-SAM strategy results in higher levels of expression, reaching increases in transcription rates of more than 20 fold as compared with the reference values of the non-activated promoter.

[ES] La contaminación mixta por metales e hidrocarburos es una de las grandes amenazas a las que está sometido el recurso suelo y supone un desafío para la aplicación de estrategias de descontaminación. A este respecto, la fitorremediación, que tiene como objetivo reducir el contaminante del suelo y recuperar su salud a través de las plantas y su rizosfera, es una de las tecnologías de descontaminación más respetuosas con el medio ambiente. En la actualidad, nuevas tecnologías como la nanofitorremediación asistida con enmiendas pretenden aumentar la eficacia de la fitorremediación mediante, (i) la incorporación de enmiendas orgánicas para mejorar las propiedades físico-químicas y biológicas, y (ii) la aplicación de nanopartículas de hierro cerovalente (nZVI) para favorecer la degradación de los contaminantes orgánicos. En este trabajo se desarrolló un experimento de microcosmos utilizando tres especies de la familia de las Brasicáceas (Brassica napus, Brassica carinata y Brassica juncea), enmienda orgánica y nZVI para nanofitorremediar un suelo contaminado con Zn (1.500 ppm), Cu (500 ppm), Cd (50 ppm) y diésel para automóvil (6.000 ppm). El objetivo principal del estudio fue determinar la combinación de tecnologías más eficientes para la eliminación de contaminantes y/o la recuperación de la salud del suelo en base a las propiedades microbianas, actividad, biomasa y diversidad funcional. El contenido en carbonatos del suelo fue el principal factor que contribuyó a la disminución de la biodisponibilidad de los metales del suelo seguido por la materia orgánica. El contenido de diésel disminuyó durante el ensayo y su degradación fue mayor en presencia de la enmienda. Además, la incorporación de enmienda provocó una mayor biomasa y actividad microbiana en suelos contaminados; pareciendo destacar en este caso la especie B. juncea. En cuanto a la diversidad funcional microbiana, destacó significativamente la planta B. napus. Por último, las nZVI a las dosis empleadas no fueron efectivas para disminuir la biodisponibilidad de los metales y/o aumentar la degradación del diésel, aunque tampoco produjeron toxicidad sobre la comunidad microbiana del suelo. A la vista de los resultados, se recomienda una fitorremediación asistida con B. napus por ser el proceso más eficaz para la recuperación de la salud del suelo.

[ES] El objetivo del trabajo era conseguir un modelo en rata que simule los déficits de memoria y aprendizaje asociados a los pacientes de Alzheimer mediante la pérdida de neuronas colinérgicas en el prosencéfalo basal, así como un tratamiento con el antagonista cannabinoide SR141716A con el objetivo de revertir dichos déficits. Para ello se realizaron dos pruebas de comportamiento (laberinto de Barnes y evitación pasiva), donde se analizó a los animales.

[ES] La contaminación de los suelos por metales supone un peligro para la supervivencia de los organismos a todos los niveles tróficos, afectando incluso a los seres humanos. En este sentido, los bioensayos con plantas son una herramienta integradora y eficaz para la detección de potenciales efectos ecotóxicos a través de biomarcadores de fitotoxicidad. Tradicionalmente, los bioensayos se realizan a corto plazo (horas) y con metales en disolución. Sin embargo, en este trabajo se apuesta por bioensayos a medio/largo plazo (días/meses) y con suelos contaminados con vistas a una evaluación del riesgo ambiental que recoja los efectos ecológicos más relevantes bajo condiciones reales. Así, en este trabajo se evaluó la toxicidad de suelos contaminados con Cu, Zn, Cd (de forma individual y combinada) a 0, 50, 100, 200 y 300 ppm tras 15 y 30 días de exposición mediante biomarcadores biométricos (desarrollo fenológico y biomasa), bioquímicos (contenido en α-tocoferol) y génicos (expresión del gen ASN1) utilizando la planta modelo Cucumis sativus (n. com. pepino). Los resultados de este estudio resaltan la importancia de las propiedades físicas (granulometría) y químicas (contenido en materia orgánica, carbonatos y pH) del suelo ya que afectan directamente sobre la biodisponibilidad de los metales, que influye, a su vez, en el potencial efecto tóxico que éstos tienen sobre las plantas. La baja biodisponibilidad de los tres metales (

Saccharomyces cerevisiae cells are widely employed as microbial factories for the production of bioethanol through the alcoholic fermentation. One of the main bottlenecks of the process is the formation of toxic metabolites, such as acetic acid, that can inhibit the production pathway. In order to increase the final yield, the biotechnology industry is looking for the optimal conditions to carry out the fermentation process. In this project, we studied the infrared response of S. cerevisiae cells exposed to acetic acid. In particular, we investigated whether the overexpression of MCR1 - a gene involved in the response to oxidative stress - makes the cells more resistant to the acetic acid. We found that in the exponential phase of growth cells engineered with the MCR1 seem to counteract the effects of acetic acid by decreasing membrane fluidity, mainly through the dramatic reduction of phosphatidylcholine and the increase of ergosterol. However, interestingly, in the stationary phase of growth the MCR1 gene seemed to be mainly involved in the prevention of oxidative stress due to aging.

Candida albicans onddo komentsalak sortutako infekzioen aurkako anti-Adh1 antigorputz monoklonalaren erabilera. Lan honetan antigorputzak in vitro duen eragina aztertu egiten da; hankuntzan, ezagupenean eta antifungikoekin duen efektu sinergikoa.

[ES] El presente trabajo titulado “Análisis proteómico de la oncoproteína nucleofosmina” tiene por objetivo estudiar el papel de la nucleofosmina (NPM1) en la respuesta al daño al DNA y cómo podría estar alterada su función en la leucemia mieloide aguda (AML). El método utilizado es un análisis proteómico comparativo de las variantes salvaje y mutante de la NPM1. Para el análisis, se sobreexpresan las proteínas en células HEK293T, se aíslan los complejos de NPM1 mediante el método GFP-Trap y se hace una electroforesis desnaturalizante (SDS-PAGE). Las muestras se analizan en el Servicio de Proteómica de la Universidad de País Vasco (SGIker) por medio de la técnica analítica de espectrometría de masas (MS). El listado de proteínas obtenido por MS se trató estadísticamente con el programa bioinformático Perseus. Los resultados revelan cuáles son los ligandos enriquecidos en la NPM1 salvaje y mutante. Entre aquellos enriquecidos en el mutante frente a la NPM1 salvaje destaca la proteína SKP1 implicada en proliferación celular y también se han identificado ligandos relacionados con leucemia y otros tipos de cáncer (FUS y SIRT5). Por su parte, la proteína salvaje muestra enriquecidas las polimerasas POLR1D y POLR2K que intervienen en procesos de respuesta al daño del DNA. En cuanto al papel de NPM1 en reparación se ha estudiado la interacción con APE1, proteína implicada en las vías de reparación por escisión de bases (BER). En este trabajo se destacan algunas proteínas que pudieran resultar útiles para el desarrollo de futuras tratamientos para la AML.

La enfermedad celíaca, también conocida como enteropatía sensible al gluten, es un trastorno autoinmune crónico causada por la intolerancia a la ingesta de gluten y desarrollada por personas genéticamente predispuestas cuyo único tratamiento consiste en una dieta estricta libre de gluten. El desarrollo de dicha enfermedad está relacionada con una gran variedad de genes entre los que se encuentra PTPRK. Este trabajo desarrolla un estudio de la expresión de dicho gen así como un protocolo de silenciamiento del mismo.

VIH-ren fusioa inhibitzeko gai diren antigorputzen adierazpena eta purifikazioa bakterietan. Funtzionaltasunaren analisia (ITC eta pseudobirusak erabiliz egindako neutralizazio saioak) eta optimizazioa.

Los bioensayos con plantas son una herramienta indispensable para la evaluación de la toxicidad de los suelos. Gran parte de la variabilidad que dificulta su generalización y la interpretación de resultados radica en la falta de un protocolo estandarizado y común que elimine las variables asociadas a las condiciones experimentales, al germoplasma vegetal y a los bioindicadores relevantes de toxicidad que existen entre los bioensayos tradicionales con plantas. En nuestro estudio proponemos un bioensayo que permite de una forma sencilla, barata y efectiva cuantificar el efecto fitotóxico de los contaminantes en suelo y agua. La estandarización del material vegetal, las condiciones del ensayo y el análisis de imagen permiten mayor fiabilidad y una economía de tiempo y esfuerzo en estos bioensayos. En este estudio se presentan los resultados de toxicidad de Zn, Cd y Pb en disolución y suelos mineros mediante marcadores de biométricos, fisiológicos y génicos de Cucumis sativus.

Se caracterizan los complejos entre la nucleoplasmina, una chaperona nuclear, y el octámero de histonas y se ve su papel en el ensamblaje de nucleosomas.

Se ha estudiado la formación de fibras amiloides de lisozima, a pH básico. Se ha analizado también el efecto de los flavonoides, morina y quercetina, en la formación de esas fibras amiloides.

Este proyecto pretende investigar en el campo del transporte nucleocitoplásmico del conjunto de proteínas relacionado con los telómeros, y se han combinado una serie herramientas, tanto bioinformáticas como experimentales, para analizar las señales de transporte nucleocitoplásmico de dichas proteínas. Así pues, se ha identificado una secuencia con actividad en la proteína POT1. Se ha demostrado que no todos los residuos de esa secuencia tienen la misma importancia y que no solo los residuos hidrofóbicos son esenciales para la funcionalización de la señal. En torno a POT1 también se ha destacado la diferencia entre sus dos isoformas, una con NES y la otra sin ella, sugiriendo que el transporte de cada una de las isoformas se regula de forma diferente.

Some pro-environmental agricultural practices (various tillage practices, straw management, bio-fertilizer application) are tested after five years of winter wheat monoculture in order to assess their influence on soil carbon content (organic carbon – CORG, microbial biomass carbon – MBC) and the activity of C- related enzymes (celullases - CEL, invertase – INV, -glucosidase – GLU). The study is based on a three-factor field experiment in a dependent lay-out of equivalent sub-blocks (split-plot, split-block) with three repetitions. The influence of the following factors are investigated: I factor- different tillage practices (grubber after harvest tillage + grubber in autumn; simple plowing, grubber after harvest tillage; pre-sowing plowing; direct sowing of winter wheat after no-till); II factor - straw management (straw that was removed; crumbled straw that was left), III factor – bio-fertilizer (Effective Microorganisms – EM, control without EM).

[EUS] Lan honetan giltzurruneko zelula argien kartzinomako (CCRCC) zenbait jarduera peptidasiko aztertuko dira. Jarduera horiek ehun tumoralean eta horren inguruko ehun ez tumoralean neurtu eta konparatuko dira ezberdintasunak estatistikoki adierazgarriak diren edo ez aztertuz. Aktibitateen neurketak FLUOstar Optima espektrofluorimetroaz egingo dira eta ondoren, lehenago argitaratutako lanetan RF-540 espektrofluorimetroarekin lortutako emaitzekin konparatuko dira ikerlan honetan lortutakoak, teknika balioztatzeko.

[EN] Z. japonica know as Zoysiagrass has been cultivated in China, Japan and Korea for centuries. 11 different species have been found to be part of Zoysiagrass but when it comes to commercial varieties Zoysia japonica Steud and Zoysia matrella (L.) Merr are mostly used in the United States for turfgrass purposes. Zoysiagrass has a relatively high heat and drought tolerance and has disease resistance. However, it could use more cold tolerance for colder weather places in the United States. Over the years, zoysiagrass cultivars have been improved using conventional breeding methods such as hybridization, clonal selection and mutagenesis. Subsequently, a better understanding of genetic diversity in Zoysiagrass would help improve breeding efforts. The purpose of this study is to analyze levels of genetic diversity at gene and population levels in 39 Zoysia cultivars (Zoysia spp. Willd.). 23 primer SSR markers were used to determine whether allelic diversity among these cultivars has change over a century of modern plant breeding. In this study, Zoysiagrass varieties analyzed were released between 1910 and 2016 and most of the samples were from North Carolina State University. The DNA was extracted from Zoysia cultivars and amplified with SSR markers using PCR. Then, the DNA was separated by size in polyacrylamide gel electrophoresis. Finally, all the results were analyzed. We evaluated genetic diversity at population level and conclude that allelic diversity declined during the 1990s but recovered during the 2000s. Our study demonstrates that the influence of science based plant breeding in Zoysiagrass has not been very successful because allelic diversity has decreased after reaching the peak in 2000s. In the future, the levels of genetic diversity should increase through future germplasm collections and the inclusion of less Zoysia species to create new hybrids. Additionally, SSR has proved to be useful to detect molecular variation in Zoysiagrass cultivars.

Lan honetan Ekialdeko Kantauri itsasoko itsas-bakterioak isolatu, karakterizatu eta interes bioteknologikoa duten aktibitate entzimatikoen produkzio-gaitasuna analizatu da. Amilasa, zelulasa, kaseinasa, DNAsa eta fosfatasa entzimen aktibitateak detektatu dira, hain zuzen ere.

La importancia que están tomando las especies emergentes de hongos patógenos L. prolificans, S. apiospermumy S.aurantiacum, junto con el alto grado de virulencia que presentan, hace imprescindible un estudio exhaustivo de sus respectivos inmunomas con objeto de identificar los antígenos más importantes de cada una de ellas. Estos antígenos pueden ser útiles como dianas terapéuticas o diagnósticas, constituyendo una herramienta básica para la búsqueda de métodos novedosos de diagnóstico rápido y fiable, así como para el desarrollo de tratamientos alternativos a los antifúngicos actualmente disponibles, los cuales resultan en muchas ocasiones ineficaces

Laburpena: Ikerlan hau itsasoaren kutsaduran zentratzen da, itsasoak arriskutsuak eta kaltegarriak diren substantziak jasotzen dituelako, bai ibaietako ekarpenarengatik, baita zuzeneko karguetatik. Organismo behale gisa ostrak erabiliko dira, izaki iragazleak izanik elikagaien irenstearen ondorioz medio urtsutik kutsatzaileak metatzen dituztelako eta gainera, ingurugiroan dauden mailen gainetik kontzentratzen dituztelako. Ostretan zilarra (Ag) eta kobrea (Cu) bezalako metalen eragina aztertuko da, horretarako, metalen aurreko esposizio biomarkatzaileak erabiliko dira. Besteak beste, autometalografia erabiliko da metalen mailak eta banaketa ostren ehunetan neurtzeko eta metalotioneinen mailak ere neurtuko dira. Ostrek metalekiko izan duten esposizio denborak 0, 6, 7, 13 eta 14 egunetakoak izan dira, bai itsasoko eta bai estuarioko uretan mantenduz. Emaitzak ikusita behatu da estuarioko laginek, normalean, metal kontzentrazio baxuagoak aurkezten dituztela, eta zenbait kasutan kontrolek metalen pean jarritako laginak baino metal kontzentrazio handiagoak erakutsi dituzte aste bat igaro eta gero. Bigarren astean, metal mailen jaitsiera bat behatu da. Beste alde batetik, metalotioneinetan neurtutako indukzio mailak oso baxuak izan dira. Metalen distribuzioa ehun desberdinetan aldez aurretik beste molusku batzuetan deskribatutakoen oso antzekoa izan da ostretan.