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La ganadería bovina es una de las actividades más importante en Colombia y especialmente en el departamento de Córdoba, desde el punto de vista económico, social y cultura, y representa una de las principales fuentes de suministro de alimentos. En el desarrollo de esta actividad se generan varios subproductos, como la bilis, que no presentan una disposición final adecuada y que además podrían ser aprovechados. La bilis está compuesta por diversas sustancias, donde se destacan los ácidos biliares, que han despertado interés debido a sus importantes propiedades biológicas y farmacológicas. En este trabajo de investigación, se extrajeron los ácidos biliares presentes en la bilis del ganado (Bos taurus), la cual fue suministrada por FRIGOCER-EXPOCOL S.A.S (Cereté – Córdoba), para su identificación química fueron derivatizados como sus ésteres metílicos y analizados mediante Cromatografía de Gases acoplada a Espectrometría de Masas (CG-EM). Adicionalmente, a los ácidos biliares extraídos se le evaluó su actividad bactericida frente a Staphylococcus aureus y Pseudomona aeruginosa por el método de microdilución, empleando concentraciones entre 4000 μg/mL – 250 μg/mL. El potencial antioxidante fue evaluado frente al radical DPPH a una concentración de 100 μg/mL. Los resultados mostraron la presencia de 3 ácidos biliares mayoritarios, los ácidos cólicos, ácido desoxicólico y ácido 7alfa-hidroxi-3-oxo-colan-24-oico, representando más del 50% de la mezcla total de estos ácidos. La inhibición del crecimiento bacteriano se alcanzó en su totalidad con los dos microorganismos evaluados, aún a la concentración más baja utilizada (250 μg/mL). La actividad antioxidante de los ácidos biliares frente al radical DPPH fue muy baja, presentándose un porcentaje de inhibición de 8.9% a la concentración utilizada. Los ácidos biliares son agentes con pocos reportes sobre el estudio químico y el potencial bactericida y antioxidante en nuestro territorito, con este estudio se pretende dar una mejor disposición final a los subproductos del sacrificio del ganado bovino generado en nuestro departamento, y abrir la puerta a futuras investigaciones sobre el aprovechamiento de estos productos considerados de desecho 1. Introducción..........................................................................................................................................................................................................................................................................................................3 2. Objetivos............................................................................................................................................................................................................................................................................................................5 2.1. Objetivo General........................................................................................................................................................................................................................................................................................5 2.2. Objetivos Específicos ............................................................................................................................................................................................................................................................................5 3. Marco Teórico.................................................................................................................................................................................................................................................................................................6 3.1. Actividad Ganadera en el Mundo..................................................................................................................................................................................................................................................6 3.2. Sector Ganadero en Colombia........................................................................................................................................................................................................................................................7 3.2.1. Actividad ganadera en departamento de Córdoba......................................................................................................................................................................................................8 3.3. Generalidades del Ganado Bovino (Bos taurus).................................................................................................................................................................................................................8 3.4. Bilis de Ganado Vacuno....................................................................................................................................................................................................................................................................10 3.4.1. Ácidos biliares........................................................................................................................................................................................................................................................................................12 3.4.2. Metabolismo de los Ácidos Biliares.......................................................................................................................................................................................................................................14 3.5. Funciones Fisiológicas de los Ácidos Biliares......................................................................................................................................................................................................................15 3.6. Actividad Antioxidante.......................................................................................................................................................................................................................................................................16 3.7. Actividad Antimicrobiana ................................................................................................................................................................................................................................................................17 4. Materiales y Metodología.....................................................................................................................................................................................................................................................................19 4.1. Etapa de Muestreo.................................................................................................................................................................................................................................................................................19 4.1.1. Área de recolección............................................................................................................................................................................................................................................................................19 4.1.2. Recolección de material biológico........................................................................................................................................................................................................................................20 4.2. Etapa de Laboratorio .........................................................................................................................................................................................................................................................................20 4.2.1. Materiales, Reactivos y equipos...............................................................................................................................................................................................................................................20 4.2.2. Extracción de ácidos biliares......................................................................................................................................................................................................................................................21 4.2.3. Obtención de ésteres metílicos de ácidos biliares.....................................................................................................................................................................................................23 4.2.4. Caracterización química..............................................................................................................................................................................................................................................................23 4.2.5. Evaluación de la actividad antioxidante...........................................................................................................................................................................................................................24 4.2.5.1. Método de radical DPPH• (2,2-difenil-1-picrilhidrazil)............................................................................................................................................................................................24 4.2.6. Evaluación de la actividad bactericida...............................................................................................................................................................................................................................25 4.2.6.1. Método por microdilución.......................................................................................................................................................................................................................................................26 4.3. Análisis Estadístico..............................................................................................................................................................................................................................................................................26 5. Resultados y Discusión de Resultados......................................................................................................................................................................................................................................27 5.1. Obtención de los Extractos de Ácidos Biliares...................................................................................................................................................................................................................27 5.2. Análisis Químico....................................................................................................................................................................................................................................................................................29 5.2.1. Pruebas químicas preliminares................................................................................................................................................................................................................................................29 5.2.2. Elucidación estructural de los compuestos mayoritarios presentes la mezcla de ácidos biliares.............................................................................................31 5.2.2.1. Identificación de compuestos mayoritarios obtenidos del extracto de bilis bovina por el método de extracción por solvente.......................31 5.2.2.2. Identificación de compuestos mayoritarios obtenidos del extracto de bilis bovina por el método de extracción por SPE...............................37 5.3. Evaluación de la Actividad Antioxidante..............................................................................................................................................................................................................................43 5.4. Evaluación de la Actividad Bactericida.................................................................................................................................................................................................................................44 6. Conclusiones...............................................................................................................................................................................................................................................................................................47 7. Bibliografía....................................................................................................................................................................................................................................................................................................48 8. Anexos..............................................................................................................................................................................................................................................................................................................57 Pregrado Químico(a) Trabajos de Investigación y/o Extensión

Entre los diferentes enfoques para controlar la carga microbiana en los sistemas alimentarios se encuentra la adición de compuestos antimicrobianos naturales como aceites esenciales, extractos de plantas o bacteriocinas. Generalmente está considerado que un determinado compuesto es biocida cuando a una cierta concentración es capaz de reducir en al menos 3 unidades logarítmicas la carga inicial de microrganismo. Nos debemos preguntar por tanto, ¿cómo podría saber si una molécula es biocida? Si te encuentras en esa situación, lo que necesitas determinar es la concentración mínima bactericida de ese compuesto. Para ayudarte a enfrentarte a este problema, en el presente artículo docente podrás revisar el concepto de concentración mínima bactericida (CMB) y las diferentes opciones que tienes para determinarla., El presente artículo docente es una guía para la determinación de la actividad bactericida de un antimicrobiano de origen natural. Tanto si estás realizando una práctica de laboratorio, un TFG, TFM, tesis doctoral o un trabajo de I+D para una industria, piensa en las condiciones de aplicación de tu antimicrobiano y partir de aquí lee con detenimiento el documento, tratando de trasladar la teoría a tu caso práctico.

SUMMARY Purpose: We present a new Colombian product researched and developed by Seven Scientific Foundation, which has been very useful for the removal of the carious tissue in patients who have used this innovative product. Methods: We used a chemical-mechanical removal of dental caries. This product is made with 10% papain which is the active principle and works as a debriding agent, as well as being a bacteriostatic, bactericidal and anti-inflammatory agent; and also contain dragon's blood (Croton lechleri) sap which is an effective as analgesic/anti-inflammatory and especially as a healing agent. In this article, we present a case study of a patient, whose dental carious tissue was removed, using the dental new product. Description of the case report: In this article, we present a case study of a patient, whose dental carious tissue has been removed, using the new dental product, therefore this innovative technique of removal of the atraumatic carious tissue. Conclusions: This method is useful as it is a minimally invasive technique, without requiring the use of local anesthesia, or the additional use of dental instruments. It is used in the Colombian population of all ages and does not generate side effects in people who have used it so far. RESUMEN Propósito: se investigó y desarrolló un nuevo producto dental el cual ha sido muy útil para la remoción del tejido carioso en los pacientes colombianos que han utilizado este innovador producto para la remoción químico-mecánica de las caries dentales. Métodos: Este producto está hecho a base de papaína al 10 % el cual es el principio activo y funciona como un agente debridante lo cual cicatriza el tejido removido, además de ser un agente bacteriostático, bactericida y antiinflamatorio. Descripción de reporte de caso: en este artículo se presenta un estudio de caso de un paciente al cual se le removió el tejido carioso dental. Conclusiones: Por lo tanto, esta técnica innovadora de remoción del tejido carioso atraumático resulta útil por ser una técnica mínimamente invasiva, sin requerir el uso de anestesia local al tejido afectado ni el uso adicional de instrumentos dentales. Se utiliza en la población colombiana de todas las edades y no genera efectos colaterales en las personas que lo han utilizado hasta el momento.

The aim of this study was to evaluate the antimicrobial and antioxidant activity of the essential oil and the hydroalcoholic extract of O. vulgare. For the extraction of the oil, the hydrodistillation technique was used with a Clevenger type apparatus and the extract was obtained by the maceration process in 70% ethanol. Phytochemical tests were performed showing the chemical classes present in the extract and essential oil. The evaluation of antimicrobial activity was performed using the disk diffusion technique, using strains of Escherichia coli (ATCC 25922), Salmonella sp. (ATCC 14028) and Staphylococcus aureus (ATCC 25923). The minimum inhibitory concentration (MIC), for each of the strains, was determined using the broth microdilution technique. In the analysis of antioxidant activity, the ABTS radical discoloration technique was applied. The essential oil of O. vulgare showed activity against all tested strains, the hydroalcoholic extract inhibited the growth of E. coli and Salmonella sp, but did not show activity against S. aureus. In the results obtained by the microdilution technique S. aureus showed the highest sensitivity with a MIC value of 150 µg / mL. No activity of hydroalcoholic extracts was verified by the microdilution technique at the tested concentrations. The antioxidant activity of the extract and essential oil was evidenced, with the best results observed for the extract. El objetivo de este estudio fue evaluar la actividad antimicrobiana y antioxidante del aceite esencial y el extracto hidroalcohólico de O. vulgare. Para la extracción del aceite se utilizó la técnica de hidrodestilación con un aparato tipo Clevenger y el extracto se obtuvo mediante el proceso de maceración en etanol al 70%. Se realizaron pruebas fitoquímicas que muestran las clases químicas presentes en el extracto y el aceite esencial. La evaluación de la actividad antimicrobiana se realizó mediante la técnica de difusión en disco, utilizando cepas de Escherichia coli (ATCC 25922), Salmonella sp. (ATCC 14028) y Staphylococcus aureus (ATCC 25923). La concentración mínima inhibitoria (MIC), para cada una de las cepas, se determinó mediante la técnica de microdilución en caldo. En el análisis de la actividad antioxidante se aplicó la técnica de decoloración radical ABTS. El aceite esencial de O. vulgare mostró actividad contra todas las cepas ensayadas, el extracto hidroalcohólico inhibió el crecimiento de E. coli y Salmonella sp, pero no mostró actividad contra S. aureus. En los resultados obtenidos por la técnica de microdilución S. aureus mostró la mayor sensibilidad con un valor de CMI de 150 µg/mL. No se verificó actividad de los extractos hidroalcohólicos mediante la técnica de microdilución a las concentraciones probadas. Se evidenció la actividad antioxidante del extracto y del aceite esencial, observándose los mejores resultados para el extracto. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana e antioxidante do óleo essencial e do extrato hidroalcoólico de O. vulgare. Para a extração do óleo utilizou-se a técnica de hidrodestilação com um aparelho tipo Clevenger e o extrato foi obtido pelo processo de maceração em etanol 70%. Foram realizados testes fitoquímicos demostrando as classes químicas presente no extrato e no óleo essencial. A avaliação da atividade antimicrobiana foi realizada pela técnica de difusão de disco, sendo utilizadas as cepas de Escherichia coli (ATCC 25922), Salmonella sp. (ATCC 14028) e Staphylococcus aureus (ATCC 25923). A concentração inibitória mínima (CIM), para cada uma das cepas, foi determinada com a utilização da técnica de microdiluição em caldo. Na análise da atividade antioxidante aplicou-se a técnica de descoloração do radical ABTS. O óleo essencial de O. vulgare apresentou atividade frente a todas as cepas testadas, o extrato hidroalcoólico inibiu o crescimento de E. coli e Salmonella sp, porém não apresentou atividade frente a S. aureus. Nos resultados obtidos pela técnica de microdiluição S. aureus apresentou a maior sensibilidade com um valor da CIM de 150 mg/mL. Não foi verificada atividade dos extratos hidroalcoólicos pela técnica de microdiluição nas concentrações testadas. Foi evidenciada a atividade antioxidante do extrato e óleo essencial, sendo os melhores resultados observados para o extrato.

Para evaluar los potenciales beneficios del uso de microrreactores para la síntesis continua de nanopartículas metálicas, se seleccionó la producción de plata y cobre: AgNp y CuNp respectivamente, ambos metales con actividad bactericida y con potenciales aplicaciones en remediación y control ambiental.La tesis se organiza en 5 capítulos. En el primer capítulo, a modo de introducción, se presentan los temas a tratar. Se describe de manera general a la nanotecnología y la síntesis de nanomateriales. Se detallan los diferentes métodos de preparación de nanopartículas, introduciendo específicamente los sistemas de síntesis en continuo. Se presenta bibliografía sobre la síntesis y propiedades bactericidas de AgNp y CuNp, haciendo hincapié en la importancia de la aplicación de metodologías de síntesis compatibles con el ambiente.El Capítulo 2 puntualiza las metodologías utilizadas para la síntesis de AgNp y CuNp y se especifican los microrreactores utilizados. Se describen las diferentes técnicas de caracterización aplicadas para evaluar las nanopartículas obtenidas y se presenta el protocolo para la determinación de la actividad bactericida.El Capítulo 3 se basa particularmente en el estudio de la síntesis de AgNp. A partir de búsqueda bibliográfica se presenta un protocolo de síntesis compatible con el ambiente que emplea AgNO3 como sal precursora de Ag, glucosa como agente reductor y almidón como agente estabilizante. Se realiza un estudio comparativo de las síntesis en sistema discontinuo y continuo, analizando la influencia de la temperatura y relación de reactivos en la calidad y estabilidad de las nanopartículas obtenidas.El Capítulo 4 estudia diferentes métodos de síntesis de CuNp dividido en cuatro secciones. Cada una trata un protocolo de síntesis diferente seleccionados de la bibliografía. La primera sección se basa en la síntesis de CuNp en medio orgánico (dietilenglicol) a partir de CuSO4 como sal precursora, NaH2PO2 como agente reductor y bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB) y polivinilpirrolidona (PVP) como agentes protectores. La segunda, parte de un protocolo en medio acuoso que utiliza Cu(NO3)2 como precursor, N2H4 como reductor y PVP como estabilizante. La tercera sección plantea la síntesis de CuNp empleando CuCl2 y dopamina (DOPA) como reductor y agente protector. Y finalmente, la cuarta sección plantea el un protocolo con CuCl2 y ácido ascórbico (AA) como agente reductor y protector. En los cuatro casos se abordaron distintas modificaciones con el objetivo de realizar un estudio comparativo de las síntesis en discontinuo y continuo analizando diferentes variables.En el Capítulo 5 se aplica un diseño experimental para determinar los factores más influyentes sobre la síntesis de CuNp basada en el uso de AA como agente reductor. Las diferentes experiencias del diseño seleccionado se evalúan en sistema discontinuo. Luego, con la información obtenida se lleva a cabo la síntesis de CuNp en sistema continuo con flujo segmentado y de fase continua.En el Capítulo 6 se analiza la aplicación de las AgNp y las CuNp como bactericidas contra cultivos de Escherichia coli.Finalmente, en el Capítulo 7 se resumen las conclusiones más relevantes obtenidas durante la Tesis Doctoral en Química. Fil: Giorello, Antonella. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Investigaciones en Catálisis y Petroquímica "Ing. José Miguel Parera". Universidad Nacional del Litoral. Instituto de Investigaciones en Catálisis y Petroquímica "Ing. José Miguel Parera"; Argentina

La actividad antibacteriana de los sueros de bovino y de búfalo fue evaluada in vitro de manera indirecta con dos reacciones de inmunohemólisis: (i) un ensayo de hemólisis-hemoaglutinación sobre eritrocitos no sensibilizados de conejo y (ii) un ensayo de cinética de eritrocitos no sensibilizados de conejo frente a concentraciones crecientes de suero. La actividad bactericida de los sueros fue evaluada in vitro cuantificando la reducción de desarrollo de un inóculo de Escherichia coli en medio de cultivo enriquecido con suero de ambas especies. En el ensayo de hemólisis-hemoaglutinación, la hemólisis máxima se observó hasta la dilución 1:16 del suero de ambas especies. El mayor porcentaje de hemólisis se obtuvo con el suero de búfalo (84,7 ± 9,71%) respecto del suero bovino (71,0 ± 5,05%). Sin embargo no se hallaron diferencias en las diluciones de suero necesarias para obtener el 50% de la hemólisis total, siendo estas de 10,2 ± 2,48 para el suero de bovinos y de 11,8 ± 2,18 para el suero de búfalo. El suero de búfalo redujo el desarrollo bacteriano en un 69,8% respecto del 47,2% obtenido por el suero de bovino. No obstante estos resultados, se necesitarán estudios adicionales para corroborar estos hallazgos in vivo. SUMMARY. Characterization and comparison of the antibacterial activity of buffalo and bovine sera. The antibacterial activity of serum of bovine and buffaloes was evaluated in vitro indirectly by two immunohemolysis assays: (i) an unsensitized rabbit blood cells hemolysis-hemagglutination assay and (ii) and a hemolytic-kinetic of unsensitized rabbit blood cells in function of increasing serum concentrations. The serum bactericidal activity was evaluated in vitro by quantifying the reduction of the development of an Escherichia coli inoculum in a culture medium enriched with serum of both species. In the hemolysis-hemagglutination assay, the máximum haemolysis was observed until a 1:16 serum dilution for both species. The highest percentage of hemolysis was obtained with buffalo serum (84.7 ± 9.71%) with respect to bovine serum (71.0 ± 5.05%). However, no differences were found in the serum dilutions necessary to obtain 50% of the total hemolysis, being these 10.2 ± 2.48 for the serum of cattle and 11.8 ± 2.18 for the serum of buffalo. Buffalo serum reduced bacterial growth by 69.8% compared to 47.2% obtained by bovine serum. Despite these results, additional studies will be needed to corroborate these findings in vivo.

Objective. Asses the effect of supplementation with Humic substances (HS) over some innate immunity parameters (serum bactericidal activity, phagocytosis, bacterial agglutination, respiratory burst and lisozyme activity) in phase after fasting of layer hens. Materials and methods. 120 posfasting phase Hy Line Brown layer hens were taken which were distributed into four groups: The first and the second were supplemented with 0.1 and 0.2% of HS, respectively. The third group was supplemented with 0.25 mg/kg on levamisole hydrochloride and fourth group have no supplementation; during sixty days period. Blood samples were collected on 8th, 30th and 60th of experiment day. Results. The phagocytic index and respiratory burst increased significantly at day 30th in HS supplemented groups. Alike, serum bactericidal activity and lisozyme activity improved on 8 th day, nevertheless, changes were no evident latter. The bacterial agglutination was high in supplemented groups evaluated at everyone times. Conclusions. Results showed that HS behave as immunostimulant in the early phase after fasting layer hens. Objetivos. Evaluar el efecto de las sustancias húmicas (SH) sobre algunos parámetros de la inmunidad innata (actividad bactericida del suero, fagocitosis, aglutinación bacteriana, explosión respiratoria y actividad de la lisozima) en la fase posmuda de gallinas ponedoras. Materiales y métodos. Se utilizaron 120 gallinas ponedoras Hy Line Brown en la fase de posmuda, las cuales fueron divididas en cuatro grupos: Los dos primeros fueron suplementados con 0.1 y 0.2% de SH respectivamente, el tercer grupo fue suplementado con 0.25 mg/kg de Clorhidrato de levamisol y el cuarto grupo control sin suplemento; durante un período de 60 días. Las muestras sanguíneas se tomaron los días 8, 30 y 60 del experimento. Resultados. El Índice fagocítico y la explosión respiratoria se incrementaron significativamente a partir del día 30 de suplementación con SH. De la misma manera, la actividad bactericida del suero y la actividad de la lisozima aumentaron al día 8; no obstante no se evidenciaron cambios posteriores. La aglutinación bacteriana fue significativamente mayor en los grupos suplementados en todos los tiempos evaluados. Conclusiones. Los resultados demuestran que las SH se comportan como agentes inmunoestimulantes en la fase temprana de la posmuda en gallinas ponedoras Hy Line Brown.