Search

ilustraciones, diagramas Actualmente las razas de asnos se encuentran en grave peligro de extinción, donde se ha producido una disminución sustancial en el tamaño de la población. En Colombia se reportó que la población de asnos criollos en el país para el 2010 era de 134251 animales y para el año 2015 hubo una dramática reducción a 75072 ejemplares. Una de las consecuencias de la reducción de la población en los asnos, se ha dado por la exportación indiscriminada de pieles de asno hacia la China, para la producción de un medicamento tradicional, lo que ha conllevado a nivel mundial a una reducción considerable en la población. Dado esto, la criopreservación es una técnica que permite mantener las células a baja temperatura sin perder su viabilidad y utilidad, tiene como objetivo inhibir la actividad metabólica del semen, garantizando su vitalidad y función a través del tiempo, conservándolo indefinidamente. Sin embargo, las tasas de fertilidad con semen criopreservado en programas de inseminación artificial siguen siendo menores con respecto al semen fresco o refrigerado, esto es dado a que los procesos de congelación en el semen incluyen factores que son extremadamente nocivos para las células, que afectan seriamente la vitalidad y funcionalidad de los espermatozoides reduciendo su longevidad. Específicamente el uso de la inseminación artificial en las burras ha tenido algunas dificultades en comparación a las yeguas, debido a las diferencias anatómicas y fisiológicas en el tracto reproductivo. Después de la inseminación artificial con semen descongelado se provoca una reacción inflamatoria en el útero probablemente generado por la ausencia del plasma seminal y los crioprotectores permeables en el semen. El objetivo de esta investigación fue evaluar factores asociados con la criotoleracia, el estado redox y la capacidad fecundante del semen asnal, orientados a la conservación de los asnos (Equus asinus) criollos colombianos. Para lo anterior se propuso la evaluación de 8 alternativas en la congelación del semen con diferentes combinaciones entre crioprotectores permeables y no permeables como la dimetilformamida (DMF), sacarosa (SAC), albumina sérica bovina (BSA) y plasma seminal (PS). Para esto fueron colectados 30 eyaculados, de cada eyaculado se extrajo una proporción de plasma seminal sobre el cual fueron analizadas proteínas y enzimas. Al semen, sometido a las diferentes alternativas de criopreservación, se les realizó evaluación de la calidad seminal, capacidad antioxidante total (TAC), especies reactivas de oxigeno (ERO) y capacidad fecundante. Para el análisis estadístico se ajustaron modelos lineales generalizados (GLM) y se realizaron correlaciones y regresiones. Se encontraron asociaciones entre el contenido del plasma, la TAC y EROS sobre la calidad del semen fresco y descongelado de asnos. Así mismo, se encontró que la combinación entre DMF, BSA y PS brinda una mayor adherencia de espermatozoides a la zona pelúcida. La selección de los componentes de los diluyentes en la congelación de semen de asnos criollos colombianos, es determinante en la conservación, en el aporte antioxidante, en la mitigación de especies reactivas de oxígeno y en la capacidad fecundante. (Texto tomado de la fuente) Donkey breeds are currently in serious danger of extinction, where there has been a substantial decline in population size. In Colombia, it was reported that the population of Creole donkeys for 2010 was 134,251 animals and for the year 2015 there was a dramatic reduction to 75,072 specimens. One of the consequences of the reduction in the population of donkeys has been the indiscriminate export of donkey skins to China for the production of a traditional medicine, which has led to a considerable reduction in the population. For this reason, cryopreservation is a technique that allows cells to be kept at a low temperature without lose their viability and usefulness. Its objective is to inhibit the metabolic activity of sperm, guaranteeing its vitality and function over time, preserving it indefinitely. However, fertility rates with cryopreserved semen in artificial insemination programs continue to be lower compared to fresh or chilled semen, this is because the freezing processes in semen include factors that are extremely harmful to cells that seriously affect fertility, vitality and functionality of spermatozoa, reducing their longevity. Specifically, the use of artificial insemination in donkeys has had some difficulties compared to mares due to anatomical and physiological differences in the reproductive tract. After artificial insemination with thawed semen, it causes an inflammatory reaction in the uterus, probably caused by the absence of seminal plasma and permeable cryoprotectants in the semen. The aim of this research was to evaluate factors associated with the cryotolerance, redox status and fertilizing capacity of donkey semen, aimed at the conservation of Colombian Creole donkeys (Equus asinus). For this, the evaluation of 8 alternatives in semen freezing was carried out with different combinations between permeable and non-permeable cryoprotectants such as dimethylformamide (DMF), sucrose (SAC), bovine serum albumin (BSA) and seminal plasma (PS). Thirty (30) ejaculates were collected, from each ejaculate Contenido XIX a proportion of seminal plasma was extracted, from which proteins and enzymes were analyzed. The semen with different cryopreservation alternatives, was evaluated for seminal quality, total antioxidant capacity (TAC), reactive oxygen species (ROS) and fertilizing capacity. For statistical analysis, generalized linear models (GLM) were fitted and correlations and regressions were performed. Associations were found between plasma content, TAC and EROS on the quality of fresh and thawed donkey semen. In addition, it was found that the combination of DMF, BSA and PS provides greater adherence of sperm to the zona pellucida. The selection of the components of the extenders in the freezing of semen of Colombian Creole donkeys, is decisive in its conservation, in the antioxidant contribution, in the mitigation of reactive oxygen species and in its fertilizing capacity. Doctorado Doctor en Biotecnología Biotecnología de la Reproducción Animal Área curricular Biotecnología

The aim of this study was to evaluate the effect of the sexual behaviour process of copulation with castrated males (G1) on ovulation induction, contrasting with the same effect of vasectomized males (G2) and the effect of the application of seminal plasma (G3) in utero in 45 alpacas with preovulatory follicle ≥7 mm in diameter, randomly distributed (n=15) in each experimental group. The occurrence of ovulation was estimated on day 4 post-copula by sexual receptivity (acceptance or rejection) to the male and verified on days 7 and 11 with the detection of a corpus luteum (CL) by transrectal ultrasound. In G1, seminal plasma secretion was determined on days -1, 1, 17 and 21 after castration. The phases of sexual behaviour in the controlled mating were similar between G1 and G2. On day 4 post mating a female from G1 had ovulated. On day 7, the ovulation rate determined by the presence of the CL and sexual receptivity was higher (p, El presente estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto del proceso del comportamiento sexual de la cópula con machos castrados (G1) en la inducción de la ovulación, comparando con el mismo efecto de machos vasectomizados (G2) y el efecto de la aplicación de plasma seminal (G3) en el útero en 45 alpacas con folículo preovulatorio ≥7 mm de diámetro, distribuidas (n=15) al azar en cada grupo experimental. La ocurrencia de ovulación se estimó el día 4 poscópula mediante receptividad sexual (aceptación o rechazo) al macho y verificada el día 7 y 11 con la detección del cuerpo lúteo (CL) vía ecografía transrectal. En G1, se determinó la secreción de plasma seminal los días -1, 15, 17 y 21 de la castración. Las fases del comportamiento sexual en el empadre controlado fueron similares entre G1 y G2. El día 4 poscópula una hembra de G1 había ovulado. En el día 7, la tasa de ovulación determinada por la presencia de cuerpo lúteo y receptividad sexual fue mayor (p

RESUMEN El presente estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto del proceso del comporta- miento sexual de la cópula con machos castrados (G1) en la inducción de la ovulación, comparando con el mismo efecto de machos vasectomizados (G2) y el efecto de la aplicación de plasma seminal (G3) en el útero en 45 alpacas con folículo preovulatorio >7 mm de diámetro, distribuidas (n=15) al azar en cada grupo experimental. La ocurrencia de ovulación se estimó el día 4 pos-cópula mediante receptividad sexual (aceptación o rechazo) al macho y verificada el día 7 y 11 con la detección del cuerpo lúteo (CL) vía ecografía transrectal. En G1, se determinó la secreción de plasma seminal los días -1, 15, 17 y 21 de la castración. Las fases del comportamiento sexual en el empadre controlado fueron similares entre G1 y G2. El día 4 poscópula una hembra de G1 había ovulado. En el día 7, la tasa de ovulación determinada por la presencia de cuerpo lúteo y receptividad sexual fue mayor (p7 mm in diameter, randomly distributed (n=15) in each experimental group. The occurrence of ovulation was estimated on day 4 post-copula by sexual receptivity (acceptance or rejection) to the male and verified on days 7 and 11 with the detection of a corpus luteum (CL) by transrectal ultrasound. In G1, seminal plasma secretion was determined on days -1, 1, 17 and 21 after castration. The phases of sexual behaviour in the controlled mating were similar between G1 and G2. On day 4 post mating a female from G1 had ovulated. On day 7, the ovulation rate determined by the presence of the CL and sexual receptivity was higher (p

En el gato doméstico, no se han realizado estudios que relacionen las características bioquímicas del plasma seminal con las características morfológicas del semen felino ni con su capacidad para soportar el proceso congelación-descongelación. El objetivo del trabajo de tesis fue estudiar características morfológicas y bioquímicas del semen felino y su influencia sobre la criopreservación seminal. En el primer experimento se evaluó la relación del contenido de colesterol, triacilglicéridos y proteínas del plasma seminal con la calidad de semen y la ultraestructura espermática. Las concentraciones de colesterol y triglicéridos del plasma seminal fueron más altas en las muestras provenientes de eyaculados de buena calidad seminal (BCS) comparado con los de mala calidad seminal (MCS), mientras que la concentración de proteínas totales no mostro diferencias entre los grupos. El estudio ultramicroscópico evidenció que los eyaculados de BCS presentaron un mayor porcentaje de espermatozoides normales comparados con los de MCS; observándose en este último grupo, una mayor cantidad de anormalidades de cabeza y pieza intermedia. En el segundo experimento se estudió la relación entre el peso molecular de las proteínas del plasma seminal y la calidad de semen, identificándose mediante electroforesis cinco bandas proteicas en todas las muestras, sin embargo, el plasma seminal de BCS presentó una banda extra de 14.4 kDa. En el tercer experimento se evaluaron las características bioquímicas del plasma seminal sobre la supervivencia espermática del semen congelado, observándose que los eyaculados de BCS con mayor concentración de colesterol y triacilgliceroles, tuvieron mejor índice de congelabilidad que los de MCS. Podemos concluir que en los felinos domésticos las características bioquímicas del plasma seminal tienen influencia sobre la calidad del semen, la cantidad de espermatozoides sin alteraciones ultramicroscópicas y, la supervivencia espermática al congelado. Además, el peso molecular de las proteínas del plasma seminal está relacionado con la calidad seminal., Facultad de Ciencias Veterinarias

In Spain, as well as in the rest of Europe, livestock farming represents a substantial part of economy; thus, it is necessary to ensure an optimal breeding of the main farm animals, including swine and cattle. In order to improve the reproductive performance of the aforementioned species, it is crucial to understand which physiological processes take place after ejaculation. Upon ejaculation, semen results from mixing sperm and a fluid known as seminal plasma. During their passage throughout the female reproductive tract, sperm interact with female tissues/fluids and undergo a maturational process known as sperm capacitation, which is essential for the subsequent fertilisation of the oocyte. Taken this into account, the aim of this Dissertation was to study the role of sperm and seminal plasma proteins in the regulation of sperm capacitation, as well as how they modulate the female genital tract. To this end, three studies focused on pig sperm capacitation were conducted. The first study was centred on the involvement of plasma membrane channels, which allow the movement of molecules that modulate the transduction pathways related to sperm capacitation. The second study suggested that levels of PARK7 protein could be related to a better sperm resilience to the oxidative stress generated during capacitation. Finally, the third study found that the presence of seminal plasma during liquid storage affected the subsequent ability of sperm to elicit capacitation, delaying this process. On the other hand, a fourth study was conducted to investigate the modulation of the female tract environment by seminal plasma and/or sperm in species with intravaginal ejaculation, using the bovine as a model. In summary, both seminal plasma and intrinsic sperm proteins were observed to play a key function in the regulation of sperm capacitation. Moreover, the modulation of the female environment was reported to rely upon the ejaculate deposition site. In the case of species with intravaginal ejaculation, like cattle, the role of sperm appeared to be more relevant than that of seminal plasma. Further studies, however, are needed to determine whether intrinsic sperm proteins or those acquired from seminal plasma exert such a modulatory function. Taken collectively, one can conclude that the regulation of physiological processes taking place after ejaculation in the female reproductive tract is species-specific, and depends on each reproductive strategy. Yet, further research on the regulatory role of sperm and seminal plasma proteins is needed before improvements in the field of assisted reproduction in farm animals and humans may be implemented Tant a Espanya com a la resta d’Europa, la ramaderia representa una part substancial de l’economia i, per tant, cal assegurar la cria òptima de les principals espècies d’interès productiu (porcina i bovina). Per tal de millorar el rendiment reproductiu d’aquestes espècies, és crucial entendre els processos fisiològics que tenen lloc després de l’ejaculació. En el moment de l’ejaculació, el semen es forma com a resultat de la barreja dels espermatozoides amb un fluid anomenat plasma seminal. Durant el seu pas pel tracte reproductor femení, els espermatozoides interactuen amb aquest i pateixen un procés de maduració anomenat capacitació espermàtica, el qual és imprescindible per a poder fecundar l’oòcit. Així doncs, la finalitat d’aquesta Tesi Doctoral va ser estudiar el paper de les proteïnes de l’espermatozoide i del plasma seminal sobre la regulació de la capacitació espermàtica així com en la interacció amb el tracte femení. Amb aquest objectiu, es van realitzar tres estudis focalitzats en el procés de capacitació en l’espècie porcina. El primer dels estudis va destacar la implicació dels canals que es troben a la membrana de l’espermatozoide, els quals permeten l’entrada i sortida de molècules que poden tenir un efecte sobre les vies que regulen els canvis moleculars que es produeixen durant la capacitació. El segon estudi va suggerir que els nivells de la proteïna PARK7 poden estar relacionats amb una major tolerància a la situació d’estrès oxidatiu que pateix l’espermatozoide durant el procés de capacitació. Finalment, el tercer estudi va concloure que la presència de plasma seminal durant la conservació del semen (refrigeració) afecta a la posterior capacitació espermàtica, retardant aquest procés. Per altra banda, es va realitzar un quart estudi que va investigar la modulació de l’ambient del tracte femení per part del plasma seminal i/o l’espermatozoide en espècies amb ejaculació vaginal, utilitzant el boví com espècie model. En resum, pel que fa a la regulació de la capacitació, tant les proteïnes intrínseques de l’espermatozoide com el plasma seminal tenen un paper crucial en aquest procés. En canvi, la modulació de l’ambient del tracte femení sembla dependre del lloc de deposició de l’ejaculació. En el cas de les espècies amb ejaculació vaginal, el paper de l’espermatozoide resulta ser més rellevant que el del plasma seminal. Tot i això, són necessaris més estudis per tal de determinar si son les proteïnes intrínseques de l’espermatozoide o les adquirides del plasma seminal les que realitzen aquesta funció de modulació. En conjunt, es pot concloure que la modulació dels processos fisiològics que tenen lloc després de l’ejaculació, al tracte femení, depenen de l’estratègia reproductiva de cada espècie, i que la recerca futura centrada en la seva regulació per part de les proteïnes espermàtiques i del plasma seminal és crucial a l’hora d’aplicar millores en el camp de la reproducció assistida animal y humana Programa de Doctorat en Tecnologia

The aim of this study was to determine by SDS PAGE the protein profile of the seminal plasma of Romosinuano (ROMO) and Costeño con Cuernos (CCC) bulls and their relationship with sperm quality parameters in fresh and thawed semen. Three ejaculates per bull were collected by electro-ejaculate from 10 ROMO and 10 CCC sires. Viability (VF), mass motility (MMF), individual rapid progressive motility (MIRPF) and sperm concentration (CE) were determined in fresh semen. Seminal plasma (PS) was obtained by double centrifugation. Individual motility of rapid progressives (MIRPPC), progressivity (PRPC), rapid progressives (RPPC) and medium progressive (MPPC) were determined in thawed semen, in both cases using the CASA computerized analysis system. Additionally, viability (VPC) and membrane integrity were determined by the hypoosmotic test. Proteins were separated by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS PAGE). The data was analyzed by Student’s T test and the presence of proteins by Chi square. The relationship between proteins and seminal quality parameters using Pearson’s correlation test and principal components of forward regression. In fresh semen, differences (p, El objetivo del estudio fue determinar mediante SDS PAGE el perfil de proteínas del plasma seminal de toros criollos Romosinuano (ROMO) y Costeño con Cuernos (CCC) y su relación con los parámetros de calidad espermática en semen fresco y descongelado. Se colectaron tres eyaculados por toro mediante electro-eyaculación de 10 reproductores ROMO y 10 CCC. En semen fresco se determinó viabilidad (VF), motilidad masal (MMF), motilidad individual rápida progresiva (MIRPF) y concentración espermática (CE). El plasma seminal (PS) se obtuvo mediante doble centrifugación. En el semen descongelado se determinó motilidad individual de rápidos progresivos (MIRPPC), progresividad (PRPC), rápidos progresivos (RPPC) y medios progresivos (MPPC), en ambos casos usando el sistema de análisis computarizado CASA. Adicionalmente se determinó la viabilidad (VPC), e integridad de la membrana mediante el test hipoosmótico. Las proteínas se separaron por electroforesis en geles de poliacrilamida (SDS PAGE). Los datos se analizaron mediante prueba de T de student y la presencia de proteínas por Chi cuadrado. La relación entre las proteínas y los parámetros de calidad seminal mediante la prueba de correlación de Pearson y componentes principales de regresión hacia adelante. En semen fresco se evidenciaron diferencias (p