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O Glifosato (GLY) foi sintetizado no ano de 1950, inicialmente com propriedades fitotóxicas e com capacidade herbicida reconhecida somente em 1970. O GLY é um organofosfato, formado por apenas uma molécula de glicina e uma de fosfonometila, denominado N-(fosfonometil) glicina, usado em todo o mundo para diminuir perdas de produtividade agrícola. O Round-up® é o herbicida a base de GLY mais conhecido no mercado. Muitos estudos demonstram a citotoxicidade de GLY e Round-up® em células de câncer. Os Glioblastomas (GBMs) são os tumores primários mais comuns no Sistema Nervoso Central (SNC), que correspondem a 16 % de todos os tumores cerebrais primários e neoplasias do SNC. GBMs são mais frequentes na população adulta, geralmente a partir dos 60 anos de idade, apresentando os piores diagnósticos, resultando em uma sobrevida muito baixa. Os principais tratamentos para esta neoplasia são ressecção cirúrgica, radioterapia e quimioterapia com Temozolamida. Mesmo utilizando estas estratégias terapêuticas, pacientes com GBM tem alta taxa de recorrência deste tumor e uma sobrevida muito baixa após 5 anos de tratamento. Dessa forma, a busca por estratégias que possam ser mais eficientes em aumentar a sobrevida ou mesmo curar este tumor são necessárias. Nesse estudo, foi avaliada a citotoxicidade do tratamento agudo (24, 48 e 72 horas) e crônico (5 dias de tratamento mais 23 dias de intervalo) do GLY e do Round-up® em linhagens de GBMs humano e de rato bem como a indução de senescência celular. Demonstramos pela primeira vez que o GLY e o Round-up® (nas concentrações de 0,0025 %, 0,005% e 0,001%) apresentaram efeitos citotóxicos em linhagens de GBMs, diminuindo a viabilidade celular, o número de células, a formação de colônias e a duplicação populacional. Não foi observado indução de senescência celular. Os resultados também apontaram que os efeitos citotóxicos foram mais pronunciados ao realizar o tratamento com Round-up® do que com o GLY. Dessa forma, este estudo indica pela primeira vez um potencial citotóxico do GLY e do Round-up, que precisa ser melhor compreendido a fim de se buscar um potencial mecanismo de ação e segurança para futuramente incluir como possível estratégia terapêutica.