Search

LA BIOLOGIA DELLA RIPRODUZIONE ANCHE IN AUSILIO PER IL PUBBLICO MINISTERO E. CARRA Dipartimento di Scienze e Tecnologie Biologiche Chimiche e Farmaceutiche (STEBICEF), Università di Palermo; elena.carra@unipa.it Su incarico dell’Autorità Giudiziaria si è proceduto all’inventario del contenuto di fusti per la crioconservazione di gameti ed embrioni, ad analisi genetica su embrione umano degenerato ed alla ricostruzione del percorso dei gameti di pazienti sottoposti a procreazione medicalmente assistita (PMA) presso 4 centri di biologia della riproduzione (BDR) per evidenziare eventuali irregolarità significative ai sensi della normativa vigente. Trattasi delle prime indagini commissionate sul territorio Nazionale che vedono impegnato il biologo forense in uno dei settori di frontiera della medicina della riproduzione. Con il pronunciamento della Consulta nel maggio 2009 l’impianto della L.nr.40/2004 non è cambiato. Si possono creare embrioni solo a fini di procreazione e restano i divieti alla loro crioconservazione, soppressione ed alla selezione a fini eugenetici. Dopo censimento del contenuto dei fusti criogenici si imponeva che venisse definito, anche, il numero atteso di ovociti e/o embrioni criopreservati: si realizzavano programmi informatici per bonificare tutte le tabelle dell’anagrafica clienti acquisite in file di Access allo scopo di ottenere una Tabella Anagrafica che individuasse, tra i vari databases dei Centri BDR, quello ad essi corrispondente ed aggiornato alla data del sequestro. Si evidenziavano difformità. L’analisi genetica era condotta su embrione umano criopreservato e scongelato compromesso in maniera irreversibile nello sviluppo per accertarne la riconducibilità a specifica coppia di coniugi. Tramite microscopia venivano individuati alcuni particolati, al punto che la presenza dell’embrione - all’interno della paillette - veniva posta in discussione. Preliminarmente, ci si era avvalsi di modello biologico animale per valutare fino a che punto il livello di degenerazione cellulare ne potesse impedire il riconoscimento, tuttavia, non poteva essere escluso che il contenuto della paillette fosse costituito da ovocita degenerato; la dimostrazione di ciò -semplice in linea teorica- era vanificata dalla degradazione cellulare associata all’esiguo contenuto del DNA (1 ovocita) rappresentando la condizione sperimentale idonea alla genesi di profili allelici instabili. La modalità adottata per il recupero del contenuto della paillette ha contribuito al successo delle analisi molecolari. L’analisi a campione su schede biologiche, cartelle cliniche, registri IVF, ecc.. unita all’informatizzazione di singoli riscontri per tipologia di scheda (data pick up, donna, uomo, ovociti totali, tecnica, ovociti maturi, seme, embrioni, ovociti scartati, embrioni scartati, ovociti congelati, embrioni congelati, embrioni trasferiti, medico, biologo, analisi, note) ha consentito quella ricostruzione di percorso commissionata evidenziando il modus operandi dei sanitari in violazione degli artt.13 e 14 L. nr. 40/2004 cit..

PMA E BIOLOGIA FORENSE IN AUSILIO DEL PUBBLICO MINISTERO Carra E., Di Natale M.V. Dipartimento di Scienze Tecnologie Molecolari Biomolecolari (STEMBIO)– Università di Palermo Edifio 16, viale delle Scienze.– elena.carra@unipa.it Nell’ambito di attività svolta su incarico dell’Autorità Giudiziaria si è proceduto all’inventario del contenuto di fusti per la crioconservazione di gameti ed embrioni sottoposti a sequestro e custoditi presso i locali di quattro centri di biologia della riproduzione per “verificarne la rispondenza alle registrazioni cartacee ed informatiche acquisite agli atti”. Si rendeva, altresì, necessaria analisi genetica su materiale biologico, costituito da embrione umano degenerato e la ricostruzione del percorso dei gameti e/o embrioni dei pazienti che avevano ricevuto trattamenti di riproduzione medicalmente assistita per “evidenziare eventuali irregolarità significative ai sensi della normativa vigente in materia di PMA”. Trattasi delle prime indagini commissionate sul territorio Nazionale che vedono impegnato il biologo forense in uno dei settori di frontiera della medicina legata alle nuove tecnologie. Con il pronunciamento della Consulta nel maggio 2009, infatti, l’impianto della L. nr. 40/2004 non è cambiato. Si possono creare embrioni solo a fini di procreazione e restano i divieti alla loro crioconservazione, soppressione e alla selezione a fini eugenetici. Il numero di embrioni da creare resta quello “strettamente necessario” e sarà il medico a stabilire caso per caso, quel numero “strettamente necessario”. Rimangono eccezioni alla crioconservazione, con una maggiore attenzione alla tutela della salute della donna. Mediante annotazione del numero dei canestri, dei jonc, delle paillettes e delle indicazioni riportate è stato eseguito il censimento del contenuto dei fusti criogenici (ovociti, seme, embrioni); tuttavia, la vastità della documentazione in sequestro imponeva di definire correttamente il numero di gameti e degli embrioni criopreservati per le specifiche coppie di pazienti. Venivano realizzati programmi per interventi di bonifica su tutte le tabelle dell’anagrafica clienti acquisite in file di Access per ottenere una Tabella Anagrafica per individuare, tra i vari databases dei Centri BDR, quello ad essi corrispondente ed aggiornato alla data del sequestro. Si è poi proceduto ad un 2° censimento dei fusti criogenici predisponendo, a verifica, modulistica per tutto il materiale criopreservato. Si evidenziavano difformità. L’analisi genetica era condotta su embrione umano criopreservato e crioscongelato compromesso in maniera irreversibile nello sviluppo, acquisito al sequestro all’interno di paillette. Alla microscopia non veniva individuato alcun embrione all’interno del capillare, ma la modalità adottata per il recupero del contenuto di esso ha contribuito al successo delle analisi molecolari. Preliminarmente, però, ci si avvaleva di modello biologico animale per valutare fino a che punto il livello di degenerazione cellulare ne potesse impedire il riconoscimento alla microscopia. L’analisi a campione su schede biologiche, cartelle cliniche, registri IVF, ecc.. unita all’informatizzazione di singoli riscontri per tipologia di scheda (data pick up, donna, uomo, ovociti totali, tecnica, ovociti maturi, seme, embrioni, ovociti scartati, embrioni scartati, ovociti congelati, embrioni congelati, embrioni trasferiti, medico, biologo, analisi, note) ha consentito quella ricostruzione di percorso commissionata evidenziando il modus operandi dei sanitari in violazione degli artt.13 e 14 L. nr. 40/2004 cit..

This study focuses on the diagnostic of seven species of mite belonging to the family of Phytoseiidae; very important biocontrol agents of phytophagous mites. However, they are morphologically very similar and specific diagnostic is very difficult in fact using the traditional identification methods it is uncertain to identify a species especially when Authors use different characters, very often not stable in the time. In the 60’s M.me Athias-Henriot took into consideration the insemination apparatus that is considered a stable character in the time. According to her, the shape of this apparatus could be considered a major criterion for genus distinction. The aim of the present study is to establish, using molecular investigation, which theories is more correct. DNA were extracted from specimens preserved on a glass slide by three different methods, the organic (phenol-chloroform) Method, the Chelex® 100 extraction procedure and the DNA extraction by a DNneasy Tissue Kit. Phenol-chloroform extraction takes a relatively long period of time (5-6 days), but it produces consistent results. The modified Chelex technique involves less time and work (only 2 hours) and doesn’t require toxic organic solvents, the Qiagen kit did not allow extraction from mites mounted on glass slide 20 years ago. Molecular result (12S rRNA and RAPD-PCR) showed a clear difference between the species.

MITOCHONDRIAL DNA DELETIONS AND MALE INFERTILITY Salerno Barbara, Gerardi Eliana and Elena Carra Dipartimento di Biologia Cellulare e dello Sviluppo,Università di Palermo Viale delle Scienze, Palermo, Italy; In men, oligozoospermia, asthenozoospermia, teratozoospermia and azoospermia are the main causes of infertility. The present research is aimed to investigate if mtDNA deletions can cause sperm defects in idiopathic astenozoospermic patients with different sperm motility and sperm concentration. The aim of this investigation was to test the hypothesis that whole sperm samples with lower levels of motility would have a higher incidence of spermatozoa with deletions in mitochondrial genome. We were able to evidence mtDNA when the DNA was amplified from the non motile fraction from semen samples or whether DNA from whole sperm samples was employed long PCR. In conclusion this study have demonstrated that the use of LPCR clearly indicated mtDNA in patients OAT also with small amount of whole seminal samples. A further indication is that the ND5 and ND6 mtDNA region were preferentially associated to deletions with poor quality semen characteristic.