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Trametes versicolor is a wood-inhabiting agaricomycete known for its ability to cause strong white-rot decay on hardwood and for its high tolerance of phenolic compounds. The goal of the present work was to gain insights into the molecular biology and biochemistry of the heme-including class II and dye-decolorizing peroxidases secreted by this fungus. Proteomic analysis of the secretome of T. versicolor BRFM 1218 grown on oak wood revealed a set of 200 secreted proteins, among which were the dye-decolorizing peroxidase Tv DyP1 and the versatile peroxidase Tv VP2. Both peroxidases were heterologously produced in Escherichia coli , biochemically characterized, and tested for the ability to oxidize complex substrates. Both peroxidases were found to be active against several substrates under acidic conditions, and Tv DyP1 was very stable over a relatively large pH range of 2.0 to 6.0, while Tv VP2 was more stable at pH 5.0 to 6.0 only. The thermostability of both enzymes was also tested, and Tv DyP1 was globally found to be more stable than Tv VP2. After 180 min of incubation at temperatures ranging from 30 to 50°C, the activity of Tv VP2 drastically decreased, with 10 to 30% of the initial activity retained. Under the same conditions, Tv DyP1 retained 20 to 80% of its enzyme activity. The two proteins were catalytically characterized, and Tv VP2 was shown to accept a wider range of reducing substrates than Tv DyP1. Furthermore, both enzymes were found to be active against two flavonoids, quercetin and catechin, found in oak wood, with Tv VP2 displaying more rapid oxidation of the two compounds. They were tested for the ability to decolorize five industrial dyes, and Tv VP2 presented a greater ability to oxidize and decolorize the dye substrates than Tv DyP1. IMPORTANCE Trametes versicolor is a wood-inhabiting agaricomycete known for its ability to cause strong white-rot decay on hardwood and for its high tolerance of phenolic compounds. Among white-rot fungi, the basidiomycete T. versicolor has been extensively studied for its ability to degrade wood, specifically lignin, thanks to an extracellular oxidative enzymatic system. The corresponding oxidative system was previously studied in several works for classical lignin and manganese peroxidases, and in this study, two new components of the oxidative system of T. versicolor , one dye-decolorizing peroxidase and one versatile peroxidase, were biochemically characterized in depth and compared to other fungal peroxidases.

Rphq2 , a minor gene for partial resistance to Puccinia hordei , was physically mapped in a 188 kbp introgression with suppressed recombination between haplotypes of rphq2 and Rphq2 barley cultivars. Partial and non-host resistances to rust fungi in barley (Hordeum vulgare) may be based on pathogen-associated molecular pattern (PAMP)-triggered immunity. Understanding partial resistance may help to understand non-host resistance, and vice versa. We constructed two non-gridded BAC libraries from cultivar Vada and line SusPtrit. Vada is immune to non-adapted Puccinia rust fungi, and partially resistant to P. hordei. SusPtrit is susceptible to several non-adapted rust fungi, and has been used for mapping QTLs for non-host and partial resistance. The BAC libraries help to identify genes determining the natural variation for partial and non-host resistances of barley to rust fungi. A major-effect QTL, Rphq2, for partial resistance to P. hordei was mapped in a complete Vada and an incomplete SusPtrit contig. The physical distance between the markers flanking Rphq2 was 195 Kbp in Vada and at least 226 Kbp in SusPtrit. This marker interval was predicted to contain 12 genes in either accession, of which only five genes were in common. The haplotypes represented by Vada and SusPtrit were found in 57 and 43 %, respectively, of a 194 barley accessions panel. The lack of homology between the two haplotypes probably explains the suppression of recombination in the Rphq2 area and limit further genetic resolution in fine mapping. The possible candidate genes for Rphq2 encode peroxidases, kinases and a member of seven-in-absentia protein family. This result suggests that Rphq2 does not belong to the NB-LRR gene family and does not resemble any of the partial resistance genes cloned previously.

Introduction. Mature green vanilla pods accumulate 4-O-(3-methoxy-benzaldehyde)-β- D-glucoside (glucovanillin), which, upon hydrolysis by an endogenous β-glucosidase, liberates vanillin, the major aroma component of vanilla. Little is known on the spatial distribution of aroma-generating phenolics, and the enzymes responsible for their liberation (β-glucosidase) and oxidation (peroxidase). We report here quantitative data with respect to these three components in relation to the anatomy of the pod. Furthermore, the spatial progression of oxidation is shown. Materials and methods. Mature green vanilla pods were analyzed for their contents of phenolics (HPLC), and β-glucosidase and per- oxidase activities by spectrophotometric techniques using p-nitrophenyl glucoside and vanillin as sub- strates, respectively. Lipids were examined under fluorescence microscopy after Nile red staining. Oxidation development was observed on transverse slices of pods. Results and discussion. Phenolics, and β-glucosidase and peroxidase activities showed gradients of increasing-decreasing concentrations from the stem to the blossom end of pods. The β-glucosidase activity is distributed in between the pla- centae, mesocarp, and trichomes in a ( 7/2/1 ) proportion while that of peroxidase shows a (38 / 1) ratio inthe mesocarp and placentae, and was absent from trichomes. Oxidation begins from the blossom end in the placentae, progressively invading the mesocarp and moving towards the stem end. Con- clusion. The green mature vanilla pod is spatially heterogeneous for its phenolics, and β-glucosidase and peroxidase activities, its placentae playing an important role in the liberation of vanillin and its sub- sequent oxidation. France / Vanilla planifolia / Orchidaceae / vanilla / β-glucosidase / peroxidase / glucovanillin / vanillin / lipids / oxidation / gradient / mesocarp / placentae / trichomes / xylem

Diplôme : Dr. d'Université; Le lin est une angiosperme annuelle dicotylédone connue pour ses fibres cellulosiques longues aux propriétés remarquables. Ces fibres se distinguent des cellules du bois par leur faible teneur en lignine et la distribution de ce polymère au sein des couches pariétales formant la fibre. Afin de mieux comprendre les facteurs contrôlant le taux de lignine dans les différents tissus de lin, nous avons entrepris une étude détaillée de la lignification au moyen d?approches microscopiques et biochimiques. Dans un premier temps, nos travaux ont souligné des similarités (lignine gaïacyle, liaisons condensées, détection du motif dibenzodioxocine et de la coniférine) entre la lignine de lin et celle des conifères. Une approche biochimique a montré que l?activité oxydasique majeure dépendrait des peroxydases. La partielle purification et des caractérisations initiales (électrophorèses natives, IEF, affinité de substrat) des peroxydases pariétales ont mis en évidence des différences importantes entre les isoformes du xylème, et celles des tissus externes (riches en fibres) de la tige. L?utilisation du chlorure de cérium a permis de préciser la distribution subcellulaire de l?H2O2 (catalyseur de polymérisation) dans la tige du lin au stade floraison. Dans les fibres longues, l?H2O2 n?a pu être détecté que dans la région médiane de la tige. En revanche l?H2O2 était présente dans toutes les cellules du xylème examinées. Des observations en ESEM et en microscopie confocale suggèrent que les fibres longues de lin forment un réseau dense qui limite la pénétration de protéines. L?ensemble de ces résultats souligne les différences entre le xylème et fibres longues pouvant expliquer en partie la faible lignification des fibres externes.. The angiosperm flax is an annual dicotyledon grown for its cellulose-rich bast fibres that show interesting properties. These fibres are characterized by a low lignin level in the different layers of the fibre cell wall that distinguishes them from xylem cells. In order to obtain a better understanding of the factors controlling lignin levels in different flax stem tissues we have undertaken a detailed study of lignification using microscopic and biochemical approaches. Initial results underlined similarities (guaiacyl lignin, condensed bonds, presence of dibenzodioxocine and coniferin) between flax lignin and that of conifers. A biochemical approach showed that the major oxidase activity was provided by peroxidases. Partial purification and initial characterization (native electrophoresis, IEF, substrate affinities) of cell wall peroxidases indicated important differences between the isoforms present in xylem and outer (fibre-rich) stem tissues. The use of cesium chloride allowed us to determine the cellular locations of H2O2 (polymerisation catalyst) in flax stems at the flowering stage. In bast fibres, H2O2 was only detected in the median region of the stem. In contrast H2O2 was observed in all xylem cells examined. Observation by ESEM and confocal microscopy suggested that the cell walls of flax bast fibres form a dense network that limits protein penetration. Altogether, these results highlight a number of differences between flax xylem and bast fibres that could partially explain the low lignification of the external bast fibres

International audience; The role of the ‘peroxidase-oxidase’ reaction (catalytic formation of H2O2 by O2 activation), now well-known but seldom discussed, is recalled with respect to biochemical studies on lignin polymerisation and emphasis on the physico-chemical mechanisms of pattern formation and of molecular organisation during the synthesis of lignin model compounds (DHP). The corresponding processes of supramolecular assembly involving oligolignols interactions are related to more fundamental kinetic and thermodynamic mechanisms of cooperative inter- and intra-molecular binding reactions of polymer ligands, through interfacial- and template-constrained polymerisation. Finally, viewing synthetic and natural lignified structures as ‘open systems far from equilibrium’, typically self-organized by nucleation processes and by the formation of ‘dissipative structures’, as previously illustrated in this journal (Cellulose Chem. Technol., 2005, 39, pp. 341-367), the so-called ‘random’ process of lignification is tentatively described in terms of intra- and intermolecular cooperative non-covalent and covalent ‘binding’ and of hydrophobic ‘solvatation’. Here, the somehow controversial word ‘random’ refers to the pre-existence of elementary (i.e. atomic, molecular and polymer) structured building-blocks and to the absence of pre-formed systemic (i.e. supramolecular assemblies) organization.

Impacts of mild and severe water constraints were investigated on leaf protein content and activities of superoxide dismutase (SOD), catalase and peroxidase in young cuttings of two Populus deltoides × nigra clones, 'Luisa_Avanzo' and 'Dorskamp', known to differ in their level of drought tolerance. Expanding and mature leaves were analyzed separately. The effect of water deficit on enzymatic antioxidant system depended on both clone and leaf development stage. For 'Dorskamp', which presents an higher drought tolerance than 'Luisa_Avanzo', activities of SOD and catalase increased in response to the severe water deficit in mature leaves only. For 'Luisa_Avanzo', peroxidase activity increased in response to the mild water deficit in expanding leaves merely. For both clones, three different SOD isoforms, Mn-SOD, Fe-SOD and Cu/Zn-SOD were detected in various amounts depending on drought intensity., Impact de la sécheresse et du stade de développement des feuilles sur les systèmes antioxydants enzymatiques de deux clones de Populus deltoides × nigra. L'impact de sécheresses modérée et sévère sur le contenu en protéines des feuilles et sur les activités de la dismutase de superoxyde (SOD), de la catalase et de la peroxydase a été étudié chez de jeunes boutures de deux clones de Populus deltoides × nigra, 'Luisa_Avanzo' et 'Dorskamp', connus pour présenter des niveaux différents de tolérance au déficit hydrique. Les feuilles en croissance et matures ont été analysées séparément. La réponse à la sécheresse des systèmes de protection enzymatiques était différente selon le clone et le stade de développement des feuilles étudiées. Pour le clone 'Dorskamp', réputé plus tolérant que 'Luisa_Avanzo' à la sécheresse, les activités de la SOD et de la catalase augmentaient dans les feuilles matures en réponse à un déficit hydrique sévère. Pour le clone 'Luisa_Avanzo', l'activité de la peroxydase augmentait essentiellement dans les feuilles en croissance en réponse à une sécheresse modérée. Pour les deux clones, trois isoformes différentes de la SOD, la Mn-SOD, la Fe-SOD et la Cu/Zn-SOD ont été détectées en quantités variables chez les deux clones en fonction de l'intensité de la contrainte hydrique.

Non disponible/Not available, La fonction principale de la myéloperoxydase (MPO) est la peroxydation de molécules. Cette activité est à l'origine du rôle bactéricide attribué à cette protéine. Cependant, les récentes données bibliographiques relatives à sa présence dans la plupart des tissus où siège un processus inflammatoire notamment dans le parenchyme cérébral où elle constitue un marqueur de l'infiltration des neutrophiles après un accident vasculaire cérébral (AVC), placent la MPO au centre des pathologies liées au vieillissement. Elle a été impliquée dans l'athérosclérose et la maladie d'Alzheimer (MA) par son pouvoir oxydant puissant, mais également par son polymorphisme G-463A, caractérisé par une expression différentielle du gène. Dans ce travail, nous nous sommes intéressés à la MPO en tant que marqueur de ces pathologies ainsi qu'à la régulation de son activité par des molécules d'intérêt thérapeutique. Au sein d'une population saine, nous avons montré que la consommation de tabac, la prise d'oestrestrogènes, l'âge et le nombre de globules blancs sont les principaux facteurs influençant la concentration sérique en MPO jusqu'ici très peu documentés. Par ailleurs, les variations génétiques étudiées n'ont qu'un faible effet sur le taux. Dans un second temps, l'influence de son polymorphisme dans deux situations pathologiques a été étudiée. Nous avons démontré d'une part, que le polymorphisme G-463A était associé à la MA chez les femmes et d'autre part, que ce même polymorphisme, ainsi que celui découvert récemment (G-129A), étaient associés au pronostic fonctionnel de l'AVC et à l'étendue de l'infarctus. Enfin, une étude in vitro effectuée dans un modèle cellulaire, nous a permis de montrer qu'une statine, une molécule pharmacologique aux propriétés hypocholestérolémiantes mais aussi anti-inflammatoires, diminuait l'activité enzymatique de la MPO. L'ensemble de ces résultats souligne l'importance de la MPO dans les pathologies non-infectieuses et son utilisation potentielle en tant que marqueur de pathologies liées au vieillissement. La MPO pourrait constituer une cible pharmacologique dans les pathologies cardiovasculaires et neurodégénératives et ouvre de nouvelles perspectives dans l'élaboration de stratégies thérapeutiques originales.

Our research is aimed at developing one dried modular microbead, which contains a natural antimicrobial complete multienzymatic system (enzymes and substrates). The microbead activity can be controlled, and the bead can be activated when interacting with a wet surface. The lactoperoxydase system (LPS), associated with an enzymatic generator of hydrogen peroxide, has been chosen as a model. Antibacterial activity has been tested against Listeria monocytogenes and 7 alteration or contamination strains of fish products. The microbead has been produced in two steps: first, preparation and characterisation of cores containing the substrates; and second, coating of the enzymes and two regulating layers around these cores. Various concentrations of components as weil as several enzymatic models have been tested. A series of methods for microbead production has been studied and as a result the consequence of physic-chemistry studies of cores and microbeads have been carried out. Spray drying has been proved to be the most efficient method for core production. Dissolution tests and anti-Listeria activities have emphasized the importance of the regulating coating. The microbead appeared to be active against ali bacterial strains tested and the obtained formulation provided a good stabilisation of the enzymatic activity. In conclusion, this research has a double interest. First, it shows the encapsulation feasibility of LPS, which in this form can find a lot of industrial applications in food, cosmetic or chemical industries. Secondly, the microbead concept itself is also of interest because it can be easily extrapolated to any other enzymatic combinations., Cette étude a permis la mise au point d'une microbille sèche, modulable, contenant un système antimicrobien naturel, multienzymatique complet (enzymes et substrats). La microbille est à activité contrôlée, activée par le contact d'une surface humide. Le système lactoperoxydasique (LPS) associé à un générateur enzymatique de peroxyde d'hydrogène a été choisi comme modèle d'étude. L'activité antimicrobienne a été testée contre Listeria monocytogenes et contre 7 souches d'altération et de contamination des produits marins. La microbille a été produite en deux phases: la réalisation et la caractérisation des noyaux contenant les substrats puis le pelliculage des enzymes et de deux emobages de régulation autour de ces noyaux. Différentes concentrations des composés ainsi que des variantes du système multienzymatique modèle ont été testées. Plusieurs méthodes de production ont été éprouvées et le choix résulte de l'étude des propriétés physico-chimiques des noyaux et des microbilles. L'atomisation s'est révélée la méthode la plus adaptée à la production des noyaux et les études de dissolution et d'activité anti-Listeria ont mis en relief l'intérêt de l'addition d'un emobage supplémentaire de régulation. Les microbilles se sont avérées actives contre toutes les souches bactériennes testées et la formulation mise au point a permis une bonne stabilisation des activités enzymatiques. Ce travail présente donc un double intérêt. Il a tout d'abord démontré la faisabilité de l'encapsulation du LPS qui, ainsi stabilisé, peut trouver de multiples applications en industrie agroalimentaire, cosmétique ou chimique. De plus, le concept de la microbille est intéressant car il peut facilement être extrapolé à d'autres combinaisons enzymatiques.

Our research is aimed at developing one dried modular microbead, which contains a natural antimicrobial complete multienzymatic system (enzymes and substrates). The microbead activity can be controlled, and the bead can be activated when interacting with a wet surface. The lactoperoxydase system (LPS), associated with an enzymatic generator of hydrogen peroxide, has been chosen as a model. Antibacterial activity has been tested against Listeria monocytogenes and 7 alteration or contamination strains of fish products. The microbead has been produced in two steps: first, preparation and characterisation of cores containing the substrates; and second, coating of the enzymes and two regulating layers around these cores. Various concentrations of components as weil as several enzymatic models have been tested. A series of methods for microbead production has been studied and as a result the consequence of physic-chemistry studies of cores and microbeads have been carried out. Spray drying has been proved to be the most efficient method for core production. Dissolution tests and anti-Listeria activities have emphasized the importance of the regulating coating. The microbead appeared to be active against ali bacterial strains tested and the obtained formulation provided a good stabilisation of the enzymatic activity. In conclusion, this research has a double interest. First, it shows the encapsulation feasibility of LPS, which in this form can find a lot of industrial applications in food, cosmetic or chemical industries. Secondly, the microbead concept itself is also of interest because it can be easily extrapolated to any other enzymatic combinations., Cette étude a permis la mise au point d'une microbille sèche, modulable, contenant un système antimicrobien naturel, multienzymatique complet (enzymes et substrats). La microbille est à activité contrôlée, activée par le contact d'une surface humide. Le système lactoperoxydasique (LPS) associé à un générateur enzymatique de peroxyde d'hydrogène a été choisi comme modèle d'étude. L'activité antimicrobienne a été testée contre Listeria monocytogenes et contre 7 souches d'altération et de contamination des produits marins. La microbille a été produite en deux phases: la réalisation et la caractérisation des noyaux contenant les substrats puis le pelliculage des enzymes et de deux emobages de régulation autour de ces noyaux. Différentes concentrations des composés ainsi que des variantes du système multienzymatique modèle ont été testées. Plusieurs méthodes de production ont été éprouvées et le choix résulte de l'étude des propriétés physico-chimiques des noyaux et des microbilles. L'atomisation s'est révélée la méthode la plus adaptée à la production des noyaux et les études de dissolution et d'activité anti-Listeria ont mis en relief l'intérêt de l'addition d'un emobage supplémentaire de régulation. Les microbilles se sont avérées actives contre toutes les souches bactériennes testées et la formulation mise au point a permis une bonne stabilisation des activités enzymatiques. Ce travail présente donc un double intérêt. Il a tout d'abord démontré la faisabilité de l'encapsulation du LPS qui, ainsi stabilisé, peut trouver de multiples applications en industrie agroalimentaire, cosmétique ou chimique. De plus, le concept de la microbille est intéressant car il peut facilement être extrapolé à d'autres combinaisons enzymatiques.

Two protocols of quantification of enzymatic activity in milk were finalized. The first was the measurement of lactoperoxydase (LPO) activity. The second was the measurement of[gamma]-glutamyl transpeptidase ([gamma]-GT) activity. They incorporated a clarification step of the reaction mixture that allowed a direct spectrophotometric measurement from which an appreciable time-saving. Milk heated in the range of 50 to 80°C showed that the thermo-sensitivity of LPO and [gamma]-GT renders these enzymes useful to estimate the efficiency or the severity of pasteurization. Results obtained with these protocols on various milks presented a good correlation (R[exponent 2] >= 0,97) with those obtained with reference protocols. These new protocols could be applied on cheese too. Fourier transform infrared spectroscopy was selected for the study of changes in protein spatial conformation. When heating milk at 80°C, protein b-sheet and a helix proportions decrease slightly. Proportion of turns and random coils increase. Turn proportion could serve as thermal indicator. These study will have to be confirmed by using a sufficient number of milks for which thermal historic is known., Deux protocoles de dosage d'activité de la lactoperoxydase (LPO) et de la [gamma]-glutamyl transpeptidase ([gamma]-GT) dans le lait ont été mis au point. Ils comprennent une étape de transparisation permettant une lecture spectrophotométriques directe d'où un gain de temps appréciable. Des laits chauffés entre 50 et 80°C ont montré que la LPO et la [gamma]-GT ont une thermo-sensibilité permettant leur utilisation pour l'appréciation de l'efficacité ou de la sévérité de la pasteurisation. Les résultats obtenus avec ces protocoles sur différents laits sont bien corrélés (R[exposant 2] >= 0,97) avec ceux obtenus avec des protocoles de référence. Ces nouveaux protocoles sont également applicables sur des fromages. La spectroscopie infrarouge à transformée de Fourier a été choisie pour l'étude des modifications de conformation spatiale des protéines. Lors du chauffage du lait à 80°C, les taux de feuillet b et d'hélice a diminuent légèrement. Les taux de coudes et de structures désordonnées augmentent. Les structures type coudes pourrait servir d'indicateur thermique du lait. Ces mesures réalisées devront être renouvelées sur des laits dont on connaît l'historique thermique.

Glutathione S-transferases (GST) and glutathione peroxidases, (GPX), together with glutathione reductase (GSSR) catalyse essential reactions for cell defence from toxic agents such as anticancer drugs and/or reactive oxygen species. With glutathione as the central component, this metabolic pathway is activated in most tumours and linked to resistant phenotype. Two approaches have been developed in this work. 1) An epidemiological study, on 41 patients, showed higher glutathione contents and an increase of the above-mentioned glutathione-dependent enzymes in the breast tumours, resulting in the improvement of the intracellular redox status. The numerous correlations between the components of the glutathione system observed only in non-cancerous breast suggest a highly coordinated and organised system that is disrupted in cancerous breast. The increased levels of GSH contents and its related enzymes activities are correlated with various prognostic factors linked to cell proliferation, suggesting the incidence of these inductions in resistance and tumour aggressivenessin breast cancer. 2) A molecular study was performed on human breast adenocarcinoma cell line MCF-7 sensitive or resistant to doxorubicin and/or vincristine. GST as well as GPX activities and expressions were increased according to cellular resistance levels, whereas GSSR and glutathione contents decreased. We focused on the one hand on the role of GPX, that we selectively induced with selenium, which nonetheless did not improve the antioxidative defence and, on the other hand, on GSTT2 subunit overexpressed in vincristine resistant cells and whose 5' regulatory gene region was isolated in order to further study its expression. Resistant phenotype could result from a concomitantvariation of parai lei metabolic pathways, distinct from the early adaptive response to a defined cytotoxic agent., Les glutathion 5-transférases (GST) et peroxydases (GPX) associées à la glutathion réductase (GSSR) catalysent des réactions essentielles dans la prbtection des cellules contre les molécules toxiques comme les agents anticancéreux et les espèces réactives du stress oxydant. Centrées Sur le glutathion (GSH), les voies métaboliques ainsi composées sont activées dans la plupart des tumeurs et associées au phénotype résistant. Deux approches sont développées dans ce travail. 1)Une étude épidémiologique sur 41 patientes a permis de constater l'élévation des teneurs en glutathion et l'augmentation des activités associées dans le tissu mammaire cancéreux, améliorant nettement les conditions redox intracellulaires. Les nombreuses corrélations entre les composantes du système du GSH dans le sein non malade suggèrent une organisation hautement coordonnée, mais ayant totalement disparu dans le sein cancéreux. Les niveaux de GSH et des enzymes associées sont corrélés à divers facteurs pronostiques associés à la prolifération cellulaire, suggérant l'incidence de ces inductions dans la résistance et l'agressivité du cancer mammaire. 2)Une étude moléculaire a été menée sur des lignées d'adénocarcinome mammaire humain MCF-7 sensibles ou résistantes à la doxorubicine et à la vincristine. Les niveaux d'activité et d'expression des GST et GPX sont augmentés proportionnellement au degré de résistance, alors que la GSSR et les taux de glutathion suivent une évolution inverse. Nous avons focalisé notre attention sur le rôle de la GPX que nous avons induite sélectivement par le sélénium, mais sans amélioration visible de la protection antioxydante, et sur la sous-unité GSTT2, induite dans la lignée résistante à la vincristine et dont la région 5' régulatrice du gène a été isolée en vue d'étudier son expression. Le phénotype résistant résulterait donc de la modification concomitante de voies métaboliques parallèles distincte de la réponse adaptative précoce à un cytotoxique donné.

Glutathione S-transferases (GST) and glutathione peroxidases, (GPX), together with glutathione reductase (GSSR) catalyse essential reactions for cell defence from toxic agents such as anticancer drugs and/or reactive oxygen species. With glutathione as the central component, this metabolic pathway is activated in most tumours and linked to resistant phenotype. Two approaches have been developed in this work. 1) An epidemiological study, on 41 patients, showed higher glutathione contents and an increase of the above-mentioned glutathione-dependent enzymes in the breast tumours, resulting in the improvement of the intracellular redox status. The numerous correlations between the components of the glutathione system observed only in non-cancerous breast suggest a highly coordinated and organised system that is disrupted in cancerous breast. The increased levels of GSH contents and its related enzymes activities are correlated with various prognostic factors linked to cell proliferation, suggesting the incidence of these inductions in resistance and tumour aggressivenessin breast cancer. 2) A molecular study was performed on human breast adenocarcinoma cell line MCF-7 sensitive or resistant to doxorubicin and/or vincristine. GST as well as GPX activities and expressions were increased according to cellular resistance levels, whereas GSSR and glutathione contents decreased. We focused on the one hand on the role of GPX, that we selectively induced with selenium, which nonetheless did not improve the antioxidative defence and, on the other hand, on GSTT2 subunit overexpressed in vincristine resistant cells and whose 5' regulatory gene region was isolated in order to further study its expression. Resistant phenotype could result from a concomitantvariation of parai lei metabolic pathways, distinct from the early adaptive response to a defined cytotoxic agent., Les glutathion 5-transférases (GST) et peroxydases (GPX) associées à la glutathion réductase (GSSR) catalysent des réactions essentielles dans la prbtection des cellules contre les molécules toxiques comme les agents anticancéreux et les espèces réactives du stress oxydant. Centrées Sur le glutathion (GSH), les voies métaboliques ainsi composées sont activées dans la plupart des tumeurs et associées au phénotype résistant. Deux approches sont développées dans ce travail. 1)Une étude épidémiologique sur 41 patientes a permis de constater l'élévation des teneurs en glutathion et l'augmentation des activités associées dans le tissu mammaire cancéreux, améliorant nettement les conditions redox intracellulaires. Les nombreuses corrélations entre les composantes du système du GSH dans le sein non malade suggèrent une organisation hautement coordonnée, mais ayant totalement disparu dans le sein cancéreux. Les niveaux de GSH et des enzymes associées sont corrélés à divers facteurs pronostiques associés à la prolifération cellulaire, suggérant l'incidence de ces inductions dans la résistance et l'agressivité du cancer mammaire. 2)Une étude moléculaire a été menée sur des lignées d'adénocarcinome mammaire humain MCF-7 sensibles ou résistantes à la doxorubicine et à la vincristine. Les niveaux d'activité et d'expression des GST et GPX sont augmentés proportionnellement au degré de résistance, alors que la GSSR et les taux de glutathion suivent une évolution inverse. Nous avons focalisé notre attention sur le rôle de la GPX que nous avons induite sélectivement par le sélénium, mais sans amélioration visible de la protection antioxydante, et sur la sous-unité GSTT2, induite dans la lignée résistante à la vincristine et dont la région 5' régulatrice du gène a été isolée en vue d'étudier son expression. Le phénotype résistant résulterait donc de la modification concomitante de voies métaboliques parallèles distincte de la réponse adaptative précoce à un cytotoxique donné.

Not available, Ce travail a pour objectif d'adapter à la détection et à la caractérisation d'autoanticorps, la technique d'immunonephelemetrie sur supports microparticulaires. Le but est d'affiner le pouvoir discriminant de cette technique jusqu'à l'identification de la spécificité épitopique des anticorps décelés. Un premier groupe d'applications porte sur la détection des autoanticorps anti-thyroglobuline humaine. Un test de détection de ces autoanticorps anti-domaine antigénique deux de la molécule de thyroglobuline, a été développé. Il est basé sur l'aptitude des autoanticorps à inhiber les systèmes agglutinants thyroglobuline-anticorps monoclonaux anti-thyroglobuline ont ainsi été détectés et quantifiés chez tous les patients atteints de thyroïdite d'Hashimoto et dans plus du trois-quarts des patients présentant une maladie de basedow non traitée. Les résultats obtenus se comparent favorablement à ceux de l'immunofluorescence indirecte et de l'hemagglutination passive. Le système mis au point peut aussi se prêter au dosage de la thyroglobuline sérique par inhibition. La détection des autoanticorps anti-thyroperoxydase humaine est calquée dans son principe sur le protocole mis au point pour les anticorps anti-thyroglobuline. Ce test confirme la polyclonalité des autoanticorps anti-thyroperoxydase et leur réactivité préférentielle envers les épitopes localisés sur les domaines antigéniques a et b de la molécule de thyroperoxydase, épitopes impliques dans les maladies thyroïdiennes auto-immunes. Ces mêmes spécificités sont observées chez les patients atteints de thyroïdite d'Hashimoto et de maladie de basedow. Les données immunonephelemetriques sont en accord avec les résultats des autres moyens d'investigation et avec les autres éléments des dossiers cliniques

Not available, Ce travail a pour objectif d'adapter à la détection et à la caractérisation d'autoanticorps, la technique d'immunonephelemetrie sur supports microparticulaires. Le but est d'affiner le pouvoir discriminant de cette technique jusqu'à l'identification de la spécificité épitopique des anticorps décelés. Un premier groupe d'applications porte sur la détection des autoanticorps anti-thyroglobuline humaine. Un test de détection de ces autoanticorps anti-domaine antigénique deux de la molécule de thyroglobuline, a été développé. Il est basé sur l'aptitude des autoanticorps à inhiber les systèmes agglutinants thyroglobuline-anticorps monoclonaux anti-thyroglobuline ont ainsi été détectés et quantifiés chez tous les patients atteints de thyroïdite d'Hashimoto et dans plus du trois-quarts des patients présentant une maladie de basedow non traitée. Les résultats obtenus se comparent favorablement à ceux de l'immunofluorescence indirecte et de l'hemagglutination passive. Le système mis au point peut aussi se prêter au dosage de la thyroglobuline sérique par inhibition. La détection des autoanticorps anti-thyroperoxydase humaine est calquée dans son principe sur le protocole mis au point pour les anticorps anti-thyroglobuline. Ce test confirme la polyclonalité des autoanticorps anti-thyroperoxydase et leur réactivité préférentielle envers les épitopes localisés sur les domaines antigéniques a et b de la molécule de thyroperoxydase, épitopes impliques dans les maladies thyroïdiennes auto-immunes. Ces mêmes spécificités sont observées chez les patients atteints de thyroïdite d'Hashimoto et de maladie de basedow. Les données immunonephelemetriques sont en accord avec les résultats des autres moyens d'investigation et avec les autres éléments des dossiers cliniques

Not available, Le mixabel, produit issu de l'alcoolisation d'un extrait de mirabelles, subit un brunissement intense et indésirable au cours de sa conservation. Le but de ce travail est d'expliquer ce phénomène. Dans un premier temps, la polyphenoloxydase et la peroxydase de la mirabelle ont été purifiées par chromatographie d'interactions hydrophobes et par chromatographie d'affinité, puis caractérisées. Nous avons montré que l'extrait de mirabelles, obtenu par traitement thermique, servant à l'élaboration du mixabel est dépourvu d'activités oxydasiques. Le brunissement chimique du mixabel est fortement influencé par l'oxygène, la température, la lumière et le fer endogène. Nous avons montré que les phénols participaient peu au brunissement; seules les catéchines sont oxydées durant la conservation du mixabel. Le processus oxydatique de brunissement du mixabel est essentiellement du à la dégradation des sucres réducteurs et à l'oxydation de leurs produits de dégradation en pigments bruns

Not available, Le mixabel, produit issu de l'alcoolisation d'un extrait de mirabelles, subit un brunissement intense et indésirable au cours de sa conservation. Le but de ce travail est d'expliquer ce phénomène. Dans un premier temps, la polyphenoloxydase et la peroxydase de la mirabelle ont été purifiées par chromatographie d'interactions hydrophobes et par chromatographie d'affinité, puis caractérisées. Nous avons montré que l'extrait de mirabelles, obtenu par traitement thermique, servant à l'élaboration du mixabel est dépourvu d'activités oxydasiques. Le brunissement chimique du mixabel est fortement influencé par l'oxygène, la température, la lumière et le fer endogène. Nous avons montré que les phénols participaient peu au brunissement; seules les catéchines sont oxydées durant la conservation du mixabel. Le processus oxydatique de brunissement du mixabel est essentiellement du à la dégradation des sucres réducteurs et à l'oxydation de leurs produits de dégradation en pigments bruns

Afin de caractériser les chromosomes du génome Mv d’Aegilops ventricosa, des marqueurs biochimiques enzymatiques (β amylases et peroxydases) ont été étudiés chez différentes espèces d’Aegilops (fig. 3) et chez des lignées d’addition blé - Aegilops ventricosa. En ce qui concerne les β amylases, la plupart des lignées d’addition analysées possèdent un zymogramme correspondant à celui du blé tendre utilisé. Cependant des types de zymogramme particuliers (types VIII à X) sont observés chez quelques lignées (tabl. 1 et 2, fig. 1). Dans le cas des peroxydases, la majorité des lignées d’addition ont également le zymogramme caractéristique du blé tendre utilisé. Par ailleurs, les lignées ayant plutôt un diagramme typique d’Aegilops ventricosa ou de l’amphiploïde ne possèdent pas de chromosomes additionnels (tabl. 3, fig. 4). Une analyse plus approfondie des différents types enzymatiques observés (pour les deux enzymes) à partir de matériel bien défini chromosomiquement révèle une hétérogénéité structurale de ces lignées plutôt qu’un marquage chromosomique (fig. 2)., The association of biochemical markers with Mv genome was investigated through the use of enzymes (β amylases and peroxidases) in different Aegilops species (fig. 3) and in wheat-Aegilops ventricosa addition lines. For β amylases, most of the addition lines had soft wheat-type enzyme patterns ; but distinct patterns (types VIII to X), rather specific of Aegilops ventricosa types, could be found in a small number of lines (table 1 and 2, fig. 1). In the case of peroxidases, most of the addition lines showed wheat-type patterns. Lines showing instead a ventricosa or an amphiploid type of pattern did not possess additional chromosomes (table 3, fig. 4). An extensive analysis of the different types for the two enzyme patterns from chromosomically well defined material indicated structural heterogeneity rather than chromosomal characterization (fig. 2).

National audience; Nine heterozygous clones and 17 homozygous lines or clones of Asparagus officinalis L. have been characterized by the study of the isoenzymes of peroxidase and acid phosphatase present in the aerial branchlets. These isoenzymes are separated by electrofocusing in polyacrylamide gel with a pH gradient from 3.5 to 9.5. Zymograms present qualitative and quantitative variations in relation with the age of the aerial parts : only isoenzymes which are always present in the tissues studied are selected as descriptors.; Neuf clones hétérozygotes et 17 lignées ou clones homozygotes d’asperge ont pu être identifiés par l’étude des isoenzymes de la peroxydase et de la phosphatase acide présentes dans les pousses aériennes. Ces isoenzymes sont mises en évidence par électrofocalisation sur gel de polyacrylamide en gradient de pH 3,5 à 9,5. Les zymogrammes présentent des variations qualitatives et quantitatives en fonction de l’âge des rameaux d’asperge : seules les isoenzymes constamment présentes dans les tissus étudiés sont retenues comme éléments descripteurs.

Neuf clones hétérozygotes et 17 lignées ou clones homozygotes d’asperge ont pu être identifiés par l’étude des isoenzymes de la peroxydase et de la phosphatase acide présentes dans les pousses aériennes. Ces isoenzymes sont mises en évidence par électrofocalisation sur gel de polyacrylamide en gradient de pH 3,5 à 9,5. Les zymogrammes présentent des variations qualitatives et quantitatives en fonction de l’âge des rameaux d’asperge : seules les isoenzymes constamment présentes dans les tissus étudiés sont retenues comme éléments descripteurs., Nine heterozygous clones and 17 homozygous lines or clones of Asparagus officinalis L. have been characterized by the study of the isoenzymes of peroxidase and acid phosphatase present in the aerial branchlets. These isoenzymes are separated by electrofocusing in polyacrylamide gel with a pH gradient from 3.5 to 9.5. Zymograms present qualitative and quantitative variations in relation with the age of the aerial parts : only isoenzymes which are always present in the tissues studied are selected as descriptors.