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[EN] Heart failure is a multifactorial syndrome characterized by alterations in ventricular function and cardiac chambers dilation, being a cause of increase of morbidity, mortality and health costs. Dilated and ischemic cardiomyopathies are frequent causes of this syndrome. Despite the progress in treatment of heart failure, the prognosis has not improved significantly in the last years, because of that, we need a development of novel treatment strategies, given the limited efficacy of current therapies. This syndrome can be associated to alterations in heart contraction. Endoplasmic reticulum is the major intracellular calcium storage necessary for heart contraction onset. On the other hand, ion channels regulate heart contraction and are responsible for the ion currents that determine and influence the action potential of heart muscle. In this Thesis we aimed to study, in a group of patients with heart failure, the changes existing in the structural and stress response proteins of the endoplasmic reticulum, as well as the gene expression of cardiac ion channels, relating these alterations with ventricular dysfunction of these patients. Our results showed the presence of alterations in the majority of structural and stress proteins of the endoplasmic reticulum, being the structural protein RRBP1 related to ventricular dysfunction and also to the stress protein XBP1. This evidences a specific dependency between stress and structure in this organelle and an influence of structural changes in ventricular function of patients. Additionally, we showed different expression changes of a large number of cardiac ion channels through microarrays and RNA sequencing techniques. Of these channels, down-regulation of CACNG8 related to ventricular function improvement and increased levels of KCNJ2 and KCNN3 with ventricular dysfunction in dilated cardiomyopathy. In ischemic cardiomyopathy, reduced levels of TRPM7 channel were related to a better ventricular function. Differentia, [ES] La insuficiencia cardíaca es un síndrome multifactorial que se acompaña de alteraciones en la función ventricular y dilatación de las cámaras cardíacas, siendo causa de aumento de morbilidad, mortalidad y gasto sanitario. Las miocardiopatías dilatada e isquémica son causas muy frecuentes de este síndrome. A pesar de los avances que se han producido en el tratamiento de la insuficiencia cardíaca, el pronóstico no ha mejorado significativamente en los últimos años. Es por ello, que existe una necesidad de desarrollar nuevas estrategias para su tratamiento, dada la eficacia limitada de las terapias actuales. Este síndrome puede estar asociado a alteraciones en la contracción del corazón. El retículo endoplásmico es el principal almacén de calcio intracelular necesario para el inicio del proceso de contracción del corazón. Por otro lado, los canales iónicos regulan la contracción del músculo cardíaco y son responsables de las corrientes de iones que determinan e influyen sobre el potencial de acción cardíaco. En esta Tesis nos planteamos estudiar, en un grupo de pacientes con insuficiencia cardíaca, los cambios existentes en las proteínas que conforman la estructura y participan en la respuesta a estrés del retículo endoplásmico, así como analizar la expresión génica de canales iónicos cardíacos y relacionar estas alteraciones con la disfunción ventricular de estos pacientes. Nuestros resultados muestran la presencia de alteraciones en la mayoría de proteínas estructurales y de respuesta a estrés del retículo endoplásmico, siendo RRBP1 la que presenta relaciones significativas con la disfunción cardíaca de los pacientes y también con la proteína de estrés XBP1. Ello evidencia una dependencia específica entre estructura y estrés de este orgánulo y una influencia de estas alteraciones estructurales sobre la función ventricular de los pacientes. Además, mostramos diferentes cambios de expresión en un gran número de canales iónicos cardíacos mediante microarrays y secu, [CA] La insuficiència cardíaca és una síndrome multifactorial que s'acompanya d'alteracions en la funció ventricular i dilatació de les cambres cardíaques, a més de ser causa d'augment de morbiditat, mortalitat i cost sanitari. Les miocardiopatíes dilatada i isquèmica són causes molt freqüents d'esta síndrome. A pesar dels avanços que s'han produït en el tractament de la insuficiència cardíaca, el pronòstic no ha millorat significativament en els últims anys. És per això que hi ha una necessitat de desenvolupar noves estratègies per al seu tractament, donada l'eficàcia limitada de les teràpies actuals. Esta síndrome s'associa amb alteracions en la contracció del cor. El reticle endoplàsmic és el principal magatzem de calci intracel·lular necessari per a l'inici del procés de contracció del cor. D'altra banda, els canals iònics regulen la contracció del múscul cardíac i són responsables dels corrents d'ions que determinen i influïxen sobre el potencial d'acció cardíac. En esta Tesi ens plantegarem estudiar, en un grup de pacients amb insuficiència cardíaca, els canvis existents en les proteïnes que conformen l'estructura i participen en la resposta a estrés del reticle endoplàsmic, així com analitzar l'expressió gènica de canals iònics cardíacs i relacionar estes alteracions amb la disfunció ventricular dels pacients. Els nostres resultats mostren la presència d'alteracions en la majoria de proteïnes estructurals i de resposta a estrés del reticle endoplàsmic, sent la proteína estructural RRBP1 la que presenta relacions significatives amb la disfunció cardíaca dels pacients i també amb la proteïna d'estrés XBP1. Aixó evidencia una dependència específica entre estructura i estrés d'este orgànul i una influència d'estes alteracions estructurals sobre la funció ventricular dels pacients. A més, mostrem diferents canvis d'expressió en un gran nombre de canals iònics cardíacs per mitjà de microarrays i sequenciació d'ARN. D'estos canals, trobem que els nivells reduïts de

[EN] Heart failure is a multifactorial syndrome characterized by alterations in ventricular function and cardiac chambers dilation, being a cause of increase of morbidity, mortality and health costs. Dilated and ischemic cardiomyopathies are frequent causes of this syndrome. Despite the progress in treatment of heart failure, the prognosis has not improved significantly in the last years, because of that, we need a development of novel treatment strategies, given the limited efficacy of current therapies. This syndrome can be associated to alterations in heart contraction. Endoplasmic reticulum is the major intracellular calcium storage necessary for heart contraction onset. On the other hand, ion channels regulate heart contraction and are responsible for the ion currents that determine and influence the action potential of heart muscle. In this Thesis we aimed to study, in a group of patients with heart failure, the changes existing in the structural and stress response proteins of the endoplasmic reticulum, as well as the gene expression of cardiac ion channels, relating these alterations with ventricular dysfunction of these patients. Our results showed the presence of alterations in the majority of structural and stress proteins of the endoplasmic reticulum, being the structural protein RRBP1 related to ventricular dysfunction and also to the stress protein XBP1. This evidences a specific dependency between stress and structure in this organelle and an influence of structural changes in ventricular function of patients. Additionally, we showed different expression changes of a large number of cardiac ion channels through microarrays and RNA sequencing techniques. Of these channels, down-regulation of CACNG8 related to ventricular function improvement and increased levels of KCNJ2 and KCNN3 with ventricular dysfunction in dilated cardiomyopathy. In ischemic cardiomyopathy, reduced levels of TRPM7 channel were related to a better ventricular function. Differentia, [ES] La insuficiencia cardíaca es un síndrome multifactorial que se acompaña de alteraciones en la función ventricular y dilatación de las cámaras cardíacas, siendo causa de aumento de morbilidad, mortalidad y gasto sanitario. Las miocardiopatías dilatada e isquémica son causas muy frecuentes de este síndrome. A pesar de los avances que se han producido en el tratamiento de la insuficiencia cardíaca, el pronóstico no ha mejorado significativamente en los últimos años. Es por ello, que existe una necesidad de desarrollar nuevas estrategias para su tratamiento, dada la eficacia limitada de las terapias actuales. Este síndrome puede estar asociado a alteraciones en la contracción del corazón. El retículo endoplásmico es el principal almacén de calcio intracelular necesario para el inicio del proceso de contracción del corazón. Por otro lado, los canales iónicos regulan la contracción del músculo cardíaco y son responsables de las corrientes de iones que determinan e influyen sobre el potencial de acción cardíaco. En esta Tesis nos planteamos estudiar, en un grupo de pacientes con insuficiencia cardíaca, los cambios existentes en las proteínas que conforman la estructura y participan en la respuesta a estrés del retículo endoplásmico, así como analizar la expresión génica de canales iónicos cardíacos y relacionar estas alteraciones con la disfunción ventricular de estos pacientes. Nuestros resultados muestran la presencia de alteraciones en la mayoría de proteínas estructurales y de respuesta a estrés del retículo endoplásmico, siendo RRBP1 la que presenta relaciones significativas con la disfunción cardíaca de los pacientes y también con la proteína de estrés XBP1. Ello evidencia una dependencia específica entre estructura y estrés de este orgánulo y una influencia de estas alteraciones estructurales sobre la función ventricular de los pacientes. Además, mostramos diferentes cambios de expresión en un gran número de canales iónicos cardíacos mediante microarrays y secu, [CA] La insuficiència cardíaca és una síndrome multifactorial que s'acompanya d'alteracions en la funció ventricular i dilatació de les cambres cardíaques, a més de ser causa d'augment de morbiditat, mortalitat i cost sanitari. Les miocardiopatíes dilatada i isquèmica són causes molt freqüents d'esta síndrome. A pesar dels avanços que s'han produït en el tractament de la insuficiència cardíaca, el pronòstic no ha millorat significativament en els últims anys. És per això que hi ha una necessitat de desenvolupar noves estratègies per al seu tractament, donada l'eficàcia limitada de les teràpies actuals. Esta síndrome s'associa amb alteracions en la contracció del cor. El reticle endoplàsmic és el principal magatzem de calci intracel·lular necessari per a l'inici del procés de contracció del cor. D'altra banda, els canals iònics regulen la contracció del múscul cardíac i són responsables dels corrents d'ions que determinen i influïxen sobre el potencial d'acció cardíac. En esta Tesi ens plantegarem estudiar, en un grup de pacients amb insuficiència cardíaca, els canvis existents en les proteïnes que conformen l'estructura i participen en la resposta a estrés del reticle endoplàsmic, així com analitzar l'expressió gènica de canals iònics cardíacs i relacionar estes alteracions amb la disfunció ventricular dels pacients. Els nostres resultats mostren la presència d'alteracions en la majoria de proteïnes estructurals i de resposta a estrés del reticle endoplàsmic, sent la proteína estructural RRBP1 la que presenta relacions significatives amb la disfunció cardíaca dels pacients i també amb la proteïna d'estrés XBP1. Aixó evidencia una dependència específica entre estructura i estrés d'este orgànul i una influència d'estes alteracions estructurals sobre la funció ventricular dels pacients. A més, mostrem diferents canvis d'expressió en un gran nombre de canals iònics cardíacs per mitjà de microarrays i sequenciació d'ARN. D'estos canals, trobem que els nivells reduïts de

[EN] The Charcot-Marie-Tooth (CMT) disease, a hereditary motor and sensory neuropathy, shows a wide genetic heterogeneity with more than forty genes involved. The CMT forms due to mutations in the GDAP1 gene are the most frequent variants in our population. These clinical forms also presents with a large clinical heterogeneity, so that some families have a severe clinical picture while others are asymptomatic. The GDAP1 gene codifies for an outer mitochondrial membrane protein related to fission pathway of mitochondrial dynamics. Recently, GDAP1 has also been related to calcium homeostasis, in a process known as store-operated calcium entry (SOCE). Silencing of GDAP1 produce the disruption of calcium entry related to failures in mitochondria relocation near calcium entry domains. Previous results have showed that JPH1 could be a functional modifier of GDAP1. In that way, using neuroblastoma GDAP1-silenced cells, the overexpression of JPH1 produce the recovery of the SOCE as overexpression of GDAP1 did. Surprisingly, expression of JPH1 has only been described in muscular tissues. The aim of this work is to understand how the overexpression of JPH1 could recover a mechanism that is dependent of plasma membrane and mitochondria, even when JPH1 is an endoplasmic reticulum protein. In the present work, we show how the JPH1 gene is expressed in several cell lines with non-muscular origin. Moreover, we show that JPH1 is also present in such cell lines and its expression is different as expected by mRNA levels, suggesting a traductional regulation. In other way, we show that JPH1 colocalizes with endoplasmic reticulum in neuroblastoma cells and is associated to mitochondria. Finally, the induction of endoplasmic reticulum calcium release produce the relocation of JPH1 in structures as STIM1, the activator of SOCE, does. These findings could explain the mechanism by which overexpression of JPH1 recovers SOCE in GDAP1-silenced cells., [ES] La enfermedad de Charcot-Marie-Tooth (CMT), una neuropatía hereditaria sensitivo motora, presenta una amplia heterogeneidad genética con más de cuarenta genes implicados. Las formas de CMT causadas por mutaciones en el gen GDAP1 son de las más prevalentes en nuestro país. Estas formas clínicas cursan también con una gran heterogeneidad clínica, de modo que existen desde familias con una notable afectación a familias asintomáticas. El gen GDAP1 codifica para una proteína de membrana mitocondrial externa relacionada con procesos de fisión mitocondrial. Recientemente se ha relacionado con la homeostasis de Ca2+, concretamente en el proceso conocido como entrada capacitativa de Ca2+ (SOCE, Store-Operated Calcium Entry), de modo que la ausencia de GDAP1 anula la entrada de Ca2+ por el SOCE por fallos en la relocalización de mitocondrias en los dominios en donde se produce la entrada de Ca2+. Resultados previos del laboratorio muestran la posibilidad de que la proteína JPH1 sea un modificador funcional de la enfermedad. En este sentido, utilizando células de neuroblastoma humano silenciadas para GDAP1, la sobreexpresión de JPH1 rescata el SOCE a unos niveles similares a la sobreexpresión de GDAP1. Sin embargo, JPH1 se ha descrito principalmente en músculo esquelético y su función en tejido nervioso se desconoce. El objetivo del trabajo ha sido entender como la sobrexpresión de JPH1 puede rescatar un fenómeno dependiente de membrana plasmática y mitocondrias, aún cuando la proteína JPH1 es residente de la membrana del retículo endoplásmico. En este trabajo mostramos cómo el gen JPH1 se expresa en diferentes líneas celulares tanto de origen muscular como de origen neural. Además, hemos comprobado que la proteína está presente en estas líneas celulares pero a un nivel diferente del esperado por los niveles de mRNA, lo que sugiere procesos de regulación de la expresión génica. Por otra parte, demostramos que la proteína JPH1 se encuentra colocalizando con el retículo end

[EN] The Charcot-Marie-Tooth (CMT) disease, a hereditary motor and sensory neuropathy, shows a wide genetic heterogeneity with more than forty genes involved. The CMT forms due to mutations in the GDAP1 gene are the most frequent variants in our population. These clinical forms also presents with a large clinical heterogeneity, so that some families have a severe clinical picture while others are asymptomatic. The GDAP1 gene codifies for an outer mitochondrial membrane protein related to fission pathway of mitochondrial dynamics. Recently, GDAP1 has also been related to calcium homeostasis, in a process known as store-operated calcium entry (SOCE). Silencing of GDAP1 produce the disruption of calcium entry related to failures in mitochondria relocation near calcium entry domains. Previous results have showed that JPH1 could be a functional modifier of GDAP1. In that way, using neuroblastoma GDAP1-silenced cells, the overexpression of JPH1 produce the recovery of the SOCE as overexpression of GDAP1 did. Surprisingly, expression of JPH1 has only been described in muscular tissues. The aim of this work is to understand how the overexpression of JPH1 could recover a mechanism that is dependent of plasma membrane and mitochondria, even when JPH1 is an endoplasmic reticulum protein. In the present work, we show how the JPH1 gene is expressed in several cell lines with non-muscular origin. Moreover, we show that JPH1 is also present in such cell lines and its expression is different as expected by mRNA levels, suggesting a traductional regulation. In other way, we show that JPH1 colocalizes with endoplasmic reticulum in neuroblastoma cells and is associated to mitochondria. Finally, the induction of endoplasmic reticulum calcium release produce the relocation of JPH1 in structures as STIM1, the activator of SOCE, does. These findings could explain the mechanism by which overexpression of JPH1 recovers SOCE in GDAP1-silenced cells., [ES] La enfermedad de Charcot-Marie-Tooth (CMT), una neuropatía hereditaria sensitivo motora, presenta una amplia heterogeneidad genética con más de cuarenta genes implicados. Las formas de CMT causadas por mutaciones en el gen GDAP1 son de las más prevalentes en nuestro país. Estas formas clínicas cursan también con una gran heterogeneidad clínica, de modo que existen desde familias con una notable afectación a familias asintomáticas. El gen GDAP1 codifica para una proteína de membrana mitocondrial externa relacionada con procesos de fisión mitocondrial. Recientemente se ha relacionado con la homeostasis de Ca2+, concretamente en el proceso conocido como entrada capacitativa de Ca2+ (SOCE, Store-Operated Calcium Entry), de modo que la ausencia de GDAP1 anula la entrada de Ca2+ por el SOCE por fallos en la relocalización de mitocondrias en los dominios en donde se produce la entrada de Ca2+. Resultados previos del laboratorio muestran la posibilidad de que la proteína JPH1 sea un modificador funcional de la enfermedad. En este sentido, utilizando células de neuroblastoma humano silenciadas para GDAP1, la sobreexpresión de JPH1 rescata el SOCE a unos niveles similares a la sobreexpresión de GDAP1. Sin embargo, JPH1 se ha descrito principalmente en músculo esquelético y su función en tejido nervioso se desconoce. El objetivo del trabajo ha sido entender como la sobrexpresión de JPH1 puede rescatar un fenómeno dependiente de membrana plasmática y mitocondrias, aún cuando la proteína JPH1 es residente de la membrana del retículo endoplásmico. En este trabajo mostramos cómo el gen JPH1 se expresa en diferentes líneas celulares tanto de origen muscular como de origen neural. Además, hemos comprobado que la proteína está presente en estas líneas celulares pero a un nivel diferente del esperado por los niveles de mRNA, lo que sugiere procesos de regulación de la expresión génica. Por otra parte, demostramos que la proteína JPH1 se encuentra colocalizando con el retículo end

[EN] The Charcot-Marie-Tooth (CMT) disease, a hereditary motor and sensory neuropathy, shows a wide genetic heterogeneity with more than forty genes involved. The CMT forms due to mutations in the GDAP1 gene are the most frequent variants in our population. These clinical forms also presents with a large clinical heterogeneity, so that some families have a severe clinical picture while others are asymptomatic. The GDAP1 gene codifies for an outer mitochondrial membrane protein related to fission pathway of mitochondrial dynamics. Recently, GDAP1 has also been related to calcium homeostasis, in a process known as store-operated calcium entry (SOCE). Silencing of GDAP1 produce the disruption of calcium entry related to failures in mitochondria relocation near calcium entry domains. Previous results have showed that JPH1 could be a functional modifier of GDAP1. In that way, using neuroblastoma GDAP1-silenced cells, the overexpression of JPH1 produce the recovery of the SOCE as overexpression of GDAP1 did. Surprisingly, expression of JPH1 has only been described in muscular tissues. The aim of this work is to understand how the overexpression of JPH1 could recover a mechanism that is dependent of plasma membrane and mitochondria, even when JPH1 is an endoplasmic reticulum protein. In the present work, we show how the JPH1 gene is expressed in several cell lines with non-muscular origin. Moreover, we show that JPH1 is also present in such cell lines and its expression is different as expected by mRNA levels, suggesting a traductional regulation. In other way, we show that JPH1 colocalizes with endoplasmic reticulum in neuroblastoma cells and is associated to mitochondria. Finally, the induction of endoplasmic reticulum calcium release produce the relocation of JPH1 in structures as STIM1, the activator of SOCE, does. These findings could explain the mechanism by which overexpression of JPH1 recovers SOCE in GDAP1-silenced cells., [ES] La enfermedad de Charcot-Marie-Tooth (CMT), una neuropatía hereditaria sensitivo motora, presenta una amplia heterogeneidad genética con más de cuarenta genes implicados. Las formas de CMT causadas por mutaciones en el gen GDAP1 son de las más prevalentes en nuestro país. Estas formas clínicas cursan también con una gran heterogeneidad clínica, de modo que existen desde familias con una notable afectación a familias asintomáticas. El gen GDAP1 codifica para una proteína de membrana mitocondrial externa relacionada con procesos de fisión mitocondrial. Recientemente se ha relacionado con la homeostasis de Ca2+, concretamente en el proceso conocido como entrada capacitativa de Ca2+ (SOCE, Store-Operated Calcium Entry), de modo que la ausencia de GDAP1 anula la entrada de Ca2+ por el SOCE por fallos en la relocalización de mitocondrias en los dominios en donde se produce la entrada de Ca2+. Resultados previos del laboratorio muestran la posibilidad de que la proteína JPH1 sea un modificador funcional de la enfermedad. En este sentido, utilizando células de neuroblastoma humano silenciadas para GDAP1, la sobreexpresión de JPH1 rescata el SOCE a unos niveles similares a la sobreexpresión de GDAP1. Sin embargo, JPH1 se ha descrito principalmente en músculo esquelético y su función en tejido nervioso se desconoce. El objetivo del trabajo ha sido entender como la sobrexpresión de JPH1 puede rescatar un fenómeno dependiente de membrana plasmática y mitocondrias, aún cuando la proteína JPH1 es residente de la membrana del retículo endoplásmico. En este trabajo mostramos cómo el gen JPH1 se expresa en diferentes líneas celulares tanto de origen muscular como de origen neural. Además, hemos comprobado que la proteína está presente en estas líneas celulares pero a un nivel diferente del esperado por los niveles de mRNA, lo que sugiere procesos de regulación de la expresión génica. Por otra parte, demostramos que la proteína JPH1 se encuentra colocalizando con el retículo end