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A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose classificada como doença tropical negligenciada, atualmente não prevenível e transmitida por vetor artrópode. É um crescente problema global de saúde pública uma vez que as atuais medidas de controle baseadas, entre outras coisas, no diagnóstico e eliminação do reservatório canino, não têm sido capazes de reduzir a transmissão e a expansão territorial da doença. A presença de cães em área urbana, domiciliados ou comunitários, pode aumentar o risco para humanos, uma vez que cães são os principais reservatórios do parasita no ciclo urbano. A utilização de coleiras impregnadas com deltametrina a 4% em cães soronegativos, diagnosticados em inquéritos sorológicos caninos em área de transmissão, pode ser uma estratégia eficaz no controle da LV. Nesta pesquisa foi analisada a efetividade de uma estratégia alternativa de controle da doença fundamentada na substituição da eutanásia pela aplicação de coleira impregnada com deltametrina nos cães sororreagentes, identificados em inquéritos feitos em áreas de transmissão. A nova medida de controle, aqui denominada encoleiramento estratégico, foi empregada pelo Centro de Controle de Zoonoses de Bauru, SP entre os anos de 2018 e 2019. A avaliação da efetividade dessa estratégia foi feita por meio de uma análise prospectiva, comparando-se a incidência da presença de anticorpos anti-leishmania identificada pelos testes diagnósticos oficiais (TR-DPP e ELISA), entre os cães de dois bairros do município de Bauru, SP, sendo um deles onde se praticou a eutanásia de cães sororreagentes e outro somente, o aqui denominado, encoleiramento estratégico. Foram avaliados resultados de testes sorológicos aplicados em amostras de soro coletadas da totalidade dos cães dos dois bairros, em três tempos consecutivos, com intervalos de cerca de 200 dias entre eles. As comparações das incidências foram feitas entre as coortes, nos três tempos distintos, e dentro de cada coorte, nos mesmos tempos. A comparação entre as taxas de incidência de reatividade sorológica nos dois bairros durante o período do estudo mostrou que a medida de encoleiramento estratégico foi 4 vezes mais efetiva que a eutanásia na redução da soropositividade dos cães. Os resultados deste estudo mostram que o encoleiramento estratégico apresenta-se como uma medida promissora para ser empregada no controle da LV em cães de áreas endêmicas, em especial por prescindir de eutanásia dos animais infectados, um procedimento controverso e de impacto negativo na sociedade. Visceral leishmaniasis (VL) is a zoonosis classified as a neglected tropical disease, currently not preventable and transmitted by an arthropod vector. VL is a growing global public health problem because current control measures, based on diagnosis and elimination of the source of infection, among other things, have not been able to reduce the transmission and territorial expansion of the disease. The presence of domiciled, semi-domiciled or stray dogs in urban areas can increase the risk for humans, because dogs are the main reservoir of the parasite in the urban cycle. Recent studies have shown that the use of 4% deltamethrin-impregnated collars in seronegative dogs diagnosed in canine serological surveys carried out in the transmission area can be an effective strategy in the control of VL, however, in these studies the controversial euthanasia of positive dogs was part of the measures of control evaluated. In this study, an alternative strategy to control the disease was analyzed, based on replacing euthanasia with the application of a collar impregnated with deltamethrin in seroreactive dogs identified in surveys carried out in areas of transmission. The new strategy, here called strategical collaring, was employed by the Center for Zoonosis Control (CZC) in the municipality of Bauru, SP throughout 2018 and 2019. The evaluation of the effectiveness of this strategy was carried out through a prospective analysis, in order to compare the incidence of antibodies identified by official diagnostic tests (TR-DPP and ELISA) among dogs from two districts of the city of Bauru SP, one of them where the euthanasia of infected dogs was practiced as a method of VL control and the other, the strategical collaring. Results of serological tests applied to serum samples collected from all the dogs in the two neighborhoods were evaluated, in three consecutive times, with intervals of about 200 days between them. Comparisons of incidences were made between cohorts at three different times and within each cohort at the same times. The comparison between the incidence rates of serological reactivity in the two neighborhoods during the study period showed that the strategical collaring measure was up to 4 times more effective than euthanasia in reducing the seropositivity of dogs. The results of this study show that reverse collaring is a promising measure to be used in the control of VL in dogs in endemic areas, especially as it does not require euthanasia of infected animals, a controversial procedure with a negative impact on society.

Visceral leishmaniasis (VL), caused by the protozoan parasite Leishmania (Leishmania) infantum and transmitted to humans and reservoir hosts by female sandflies, represents a serious public health problem due to its continuous expansion to new areas and urban centers. In São Paulo (SP) state, Brazil, VL has a distinct temporal-geographic pattern dispersion, first appeared in the northwestern (NWSP) region, spreading in a southeastern (SESP) direction over time. The epidemiology and ecology of the disease in a particular region are determined by characteristics of the parasite, vertebrate hosts and invertebrate vectors species. Domestic dogs are widely considered to be the main reservoir of the parasite, that leads to the canine visceral leishmaniasis (CVL), which usually precedes human cases. The objectives of this doctoral thesis were to improve the cytopathological methods for direct diagnosis of CVL and to analyze the pathological and molecular fundamentals of host-parasite interactions from different eco-epidemiological scenarios in SP state, Brazil. In a first instance, we performed cytopathological methods as smear cytology (SC), liquidbased cytology (LBC), cell block (CB) and immunocytochemistry (ICC) in popliteal lymph nodes samples of dogs naturally infected with L. infantum to improve the CVL diagnosis. We showed that SC was the most accurate morphological diagnostic method (45.0%). Besides, LBC reduced the number of unsatisfactory cases (low sampled cell number), allowed excellent cellular preservation and the application of ancillary techniques, such as CB and ICC. CB-ICC alone or associated with SC demonstrated significantly higher sensitivity (70.00% and 72.00%, respectively) when compared to the SC alone (34.00%). CB-ICC showed to be more effective in the detection of infected animals with mild clinical signs and a promising tool to improve diagnosis of CVL and may be applied in routine epidemiological screening. Subsequently, lymph nodes samples of dogs naturally infected with L. infantum from NWSP and SESP of SP state were subject to a series of histopathology and immunohistochemistry (IHC) analysis to describe microscope lesions, parasite load, and cytokine profile. We evidenced differences between the two eco-epidemiologic scenarios of CVL in SP state. In SESP region, a marked subcapsular inflammatory infiltration and histiocytosis were noted in the popliteal lymph node tissues, while significantly higher parasite burden (p = 0.0004) and IHC scores of IL-1ββ (p = 0.0275) and IL-4 (0.0327) were observed in animals from NWSP area. A final study proposed the characterization of the parasite genotype in dogs naturally infected with L. infantum from SESP and NWSP areas. The deletion genotype of L. infatum on LinJ.31.2380 locus was predominantly identified in the SESP, with a frequency of 44.44%, while the non-deletion genotype was observed in 35.19% of the samples (p = 0.01945) from the NWSP area. Eight (14.81%) and three (5.56%) samples from NWSP demonstrated a third, mixed profile for the deleted site, representing heterozygosity equivalent and non-equivalent, respectively. This study showed no statistical difference among the specific genotype, the clinical status and the parasite load in the popliteal lymph node samples of the dogs. Differences in genetic profile of L. infantum population and in the host immune response associated with higher parasite burden in dogs can also contribute to explain the distinct eco-epidemiological patterns of VL in specific geographic regions of SP state, which requires the development of early/accurate diagnosis, better control and surveillance strategies to improve both public and animal health. A leishmaniose visceral (LV), causada pelo parasita protozoário Leishmania (Leishmania) infantum e transmitida para humanos e hospedeiros por fêmeas de flebotomíneos, representa um grave problema de saúde pública devido à sua contínua expansão para novas áreas e centros urbanos. No estado de São Paulo (SP), a VL apresenta um padrão de dispersão temporal e geográfica distinta, surgindo inicialmente na região noroeste (NWSP), e espalhando-se no sentido sudeste (SESP) ao longo do tempo. A epidemiologia e ecologia da doença em uma determinada região são determinadas pelas características das espécies parasitas, hospedeiros vertebrados e vetores invertebrados. Cães domésticos são amplamente considerados como o principal reservatório do parasita, que leva à leishmaniose visceral canina (LVC), a qual geralmente precede os casos humanos. Os objetivos desta tese de doutorado foram aprimorar as técnicas citopatológicas para o diagnóstico direto da LVC e analisar os fundamentos patológicos e moleculares das interações parasitohospedeiro advindos de diferentes cenários eco-epidemiológicos no Estado de São Paulo. Em um primeiro momento, realizamos exames citopatológicos como a citológica convencional (CC), a citologia de base líquida (CBL), o emblocado celular (EC) e a imunocitoquímica (ICC) em amostras de linfonodos poplíteos de cães naturalmente infectados com L. infantum para o aprimoramento diagnóstico da LVC. Nós demonstramos que CC foi o método diagnóstico morfológico mais preciso (45,0%). Além disso, a CBL reduziu o número de casos insatisfatórios (baixo número de células amostradas), permitiu excelente preservação celular e a aplicação de técnicas complementares, como EB e ICC. O EB-ICC sozinho ou associado ao CC demonstrou sensibilidade significativamente maior (70,00% e 72,00%, respectivamente) quando comparado ao CC isolado (34,00%). O EB-ICC mostrou-se mais eficaz na detecção de animais infectados com sinais clínicos leves e uma ferramenta promissora para melhorar o diagnóstico de LVC, podendo ser aplicado na triagem epidemiológica de rotina. Posteriormente, amostras de linfonodos de cães naturalmente infectados com L. infantum do NWSP e SESP do Estado de SP foram submetidos a uma série de análises histopatológicas e imuno-histoquímicas (IHQ) para descrever lesões microscópicas, carga parasitária e perfil de citocinas. Evidenciamos diferenças entre os dois cenários eco-epidemiológicos da CVL no Estado de SP. Na região SESP, um acentuado infiltrado inflamatório subcapsular e histiocitose foram notados nos tecidos dos linfonodos poplíteos, enquanto uma carga significativamente maior de parasitas (p = 0,0004) e dos escores IHC de IL-1ββ (p = 0,0275) e IL-4 (0,0327) foram observados em animais da área do NWSP. Um estudo final propôs a caracterização do genótipo do parasito em cães naturalmente infectados com L. infantum das áreas SESP e NWSP. O genótipo com deleção no loco LinJ.31.2380 de L. infatum foi predominantemente identificado no SESP, com uma frequência de 44,44%, enquanto o genótipo de não-deleção foi observado em 35,19% das amostras (p = 0,01945) da área da NWSP. Oito (14.81%) e três (5.56%) amostras do NWSP demonstraram um terceiro perfil misto para o sítio deletado, representando heterozigosidade equivalente e não equivalente, respectivamente. Este estudo não mostrou diferença estatística entre o genótipo específico, o estado clínico e a carga parasitária nas amostras de linfonodo poplíteo dos cães. Diferenças no perfil genético da população de L. infantum e na resposta imune do hospedeiro associada a maior carga parasitária em cães também podem contribuir para explicar os distintos padrões eco-epidemiológicos da LV em regiões geográficas específicas do Estado de SP, o que requer o desenvolvimento precoce diagnóstico preciso, melhor controle e estratégias de vigilância para aprimorar a saúde pública e animal.

Leishmanioses são doenças classificadas pela Organização Mundial da Saúde (OMS) como negligenciadas, o que as caracterizam como aquelas que prevalecem em condições de pobreza e representam significativo entrave ao desenvolvimento por contribuírem para desigualdade. Cerca de 350 milhões de pessoas vivem sob o risco de infecção em 98 países da África, Eurásia e Américas. Acometem o homem e outros animais sob um espectro clínico amplo, que varia de discretas lesões, de cura espontânea, a quadros de comprometimento sistêmico, potencialmente fatais. A manutenção do ciclo de transmissão está inserida em um sistema biológico complexo, com a participação de mais de 20 espécies de Leishmania e uma grande variedade de reservatórios e vetores, e o diagnóstico está entre as estratégias empregadas para o controle dessas doenças. A precisa identificação das espécies envolvidas no ciclo de transmissão permite a geração de dados importantes para mapeamentos ecoepidemiológicos e para o delineamento de estratégias terapêuticas e de controle. O material genético do parasita como alvo de detecção e identificação desses organismos é descrito na literatura científica em trabalhos que abordam diversas estratégias metodológicas. Entre as técnicas mais recentes estão as análises de dissociação em alta resolução (HRM- High Resolution Melting), descrita como uma estratégia eficiente para a discriminação de polimorfismos em fragmentos específicos de DNA gerados por PCR (Polymerase Chain Reaction). O presente trabalho teve como principal objetivo padronizar um protocolo de detecção e identificação de Leishmania capaz de discriminar o maior número possível de espécies com base em polimorfismos do gene hsp70, utilizando HRM como ferramenta metodológica. Sequências nucleotídicas de hsp70 disponíveis em banco de dados e obtidas no laboratório foram analisadas in silico e regiões polimórficas foram delimitadas. Das regiões delimitadas, três foram escolhidas por conterem polimorfismos que geraram fragmentos cujas temperaturas de dissociação simuladas são distintas entre espécies ou grupo de espécies. A exploração de perfis de dissociação dos três amplicons de hsp70 obtidos por PCR em tempo real revelou diferenças que permitiram a discriminação das espécies de Leishmania responsáveis por doenças nas Américas, África e Eurásia. Os testes foram padronizados com a utilização de DNA de cepas-referência de Leishmania e então aplicados a amostras de DNA obtidas de amostras clínicas, de campo ou experimentais, como isolados, biópsias humanas frescas ou fixadas, flebotomíneos e cães naturalmente infectados e camundongos experimentalmente infectados. Os resultados obtidos por HRM foram comparados aos obtidos previamente por outras metodologias como PCR convencional, RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) ou sequenciamento, com confirmação da identidade do parasita nas amostras testadas. O protocolo descrito é relativamente barato, tecnicamente simples, passível de automatização, podendo ser uma alternativa para a detecção e identificação de Leishmania em amostras, em estudos diagnósticos e ecoepidemiológicos. According to the World Health Organization (WHO), the leishmaniases are classified as neglected diseases, since they are related to poverty and contribute to inequality. Approximately 350 million people are at risk of infection in 98 countries in Africa, Eurasia and Americas. They affect humans and other animals that, depending on the species, causes a wide spectrum of clinical manifestations, that range from discrete lesions of spontaneous healing to potentially fatal systemic disease. The maintenance of the transmission cycle is part of a complex biological system, in which there is the participation of more than 20 species of Leishmania and a large variety of reservoirs and vectors. Diagnosis is important for early control of the disease. A precise identification of the species involved in the transmission cycle allows the generation of important data for eco-epidemiological mapping and for therapeutic measures and control strategies. Several genes have been used as diagnostic targets and several molecular strategies have been used in diagnosis. High resolution melting (HRM) analysis is among the most recent techniques and it is described as an efficient strategy for discriminating polymorphisms in specific DNA fragments generated by PCR (Polymerase Chain Reaction). The main objective of this work was to standardize a protocol for detection and identification of Leishmania spp, capable of discriminating the largest possible number of species based on hsp70 gene polymorphisms through HRM methodological tool. Available nucleotide sequences of hsp70 in databases as well as the ones obtained in the laboratory were analyzed in silico and polymorphic regions were delimited. Three regions were chosen since they contained polymorphisms that generated distinct simulated dissociation temperatures among species or group of species. The analysis of dissociation profiles of the three amplicons of hsp70 obtained by real-time PCR revealed differences that allowed the discrimination of Leishmania species responsible for diseases in the Americas, Africa and Eurasia. The tests were standardized using DNA from Leishmania reference strains and then applied to DNA samples obtained from clinical or from field samples, such as isolates, fresh or fixed human biopsies, phlebotomines and dogs naturally infected, and experimentally infected mice. The results obtained by HRM were compared to those obtained previously by other methodologies such as conventional PCR, RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) or sequencing, confirming the parasite identity in the samples tested. The described protocol is relatively inexpensive, technically simple, potentially automated, and may be an alternative for the detection and identification of Leishmania in biological samples, in diagnostic and eco-epidemiological studies.

Introdução: A leishmaniose visceral (LV) é um importante problema de saúde pública no Brasil, com cerca 3000 mil casos notificados anualmente. Nos últimos anos, a LV tem ampliado sua distribuição em vários estados do país, associada principalmente aos processos socioambientais, antrópicos e migratórios. A LV é causada pela infecção com Leishmania infantum chagasi, transmitida, principalmente, por Lutzomyia longipalpis (Diptera: Psychodidae). Este flebotomíneo apresenta ampla distribuição nas Américas, todavia, evidências sugerem que se constitui em um complexo de espécies crípticas. A dinâmica de transmissão da LV é modulada por fatores ecológicos locais que influenciam a interação entre populações do patógeno, do vetor e dos hospedeiros vertebrados. Portanto, o estudo das variáveis associadas a esta interação pode contribuir para elucidar aspectos dos elos epidemiológicos e contribuir para a tomada de decisões em saúde pública. Objetivo: Avaliar parâmetros relacionados à capacidade vetorial da população de Lu. longipalpis presente em área urbana do município de Panorama, estado de São Paulo. Métodos: Foram realizadas capturas mensais durante 48 meses para avaliar a distribuição espaço-temporal de Lu. longipalpis e investigar a circulação de Le. i. chagasi. Também foram realizados os seguintes experimentos com o vetor: captura-marcação-soltura-recaptura para estimar a sobrevida da população e a duração do seu ciclo gonotrófico, a atratividade dos hospedeiros mais frequentes em áreas urbanas, a proporção de repasto em cão, infecção experimental e competência vetorial. Resultados: Observou-se que no município de Panorama, Lu. longipalpis apresentou as frequências mais elevadas na estação chuvosa (entre outubro e março), maior densidade em áreas com presença de vegetação e criação de animais domésticos, locais aonde também foi demonstrada a circulação natural de espécimes de Lu. longipalpis infectados com Le. i. chagasi. Além disto, foi corroborado que a população de Lu. longipalpis apresentou hábito hematofágico eclético, altas taxas de sobrevivência e que foi competente para transmitir o agente da LV. Nos experimentos de laboratório foi evidenciada a heterogeneidade na infecção de fêmeas de Lu. longipalpis desafiadas a se alimentarem em cães comprovadamente infectados por L. i. chagasi e o rápido desenvolvimento do parasita neste vetor natural. Conclusões. As observações do presente estudo corroboram a capacidade vetora de Lu. longipalpis para transmitir a Le. i. chagasi e ressaltam a importância da espécie na transmissão do agente etiológico da LV. Ações de manejo ambiental, educação e promoção à saúde são recomendadas às autoridades municipais para diminuir o risco potencial de infecção na população humana e canina, considerando-se o elevado potencial vetor de Lu. longipalpis e a presença de condições que favorecem a interação dos componentes da tríade epidemiológica da LV. Introduction: Visceral leishmaniasis (VL) is an important public health problem in Brazil, where annually about 3000 cases are notified. In the later years VL has spread through some states, associated mainly to environmental, anthropic and migratory process. Visceral leishmaniasis is caused by the infection with Leishmania infantum chagasi transmitted by the sand fly species Lutzomyia longipalpis (Diptera: Psychodidae). This species have a broad distribution in the Americas, however, there are evidences suggesting that it constitutes a cryptic species complex. The VL transmission dynamic is modulated by focal ecological factors that influence the pathogen-vector-host interactions. Thus, the analyses of variables associated to this interaction could contributes to elucidate the epidemiological links and to the public health decision-making. Objective: To evaluate parameters related to the vectorial capacity of Lutzomyia longipalpis in the Panorama municipality, São Paulo state, Brazil. Methods: Monthly captures of sand flies were undertaken during 48 months to evaluate the spatial and temporal distribution of Lu. longipalpis and its natural infection with Le. i. chagasi. Experiments of capture-mark-release-recapture to estimate the population survival, the gonotrophic cycle duration and the attractiveness of the most frequent host to Lu. longipalpis were also performed. Additionally experiments to evaluate the blood feeding rate of Lu. longipalpis on dog, experimental infection and the vectorial competence were undertaken. Results: In the Panorama municipality, Lu. longipalpis presents the highest frequencies during the rainy season (October - March) with high densities in areas with vegetation near to the domiciles and with the animal husbandry. In this areas was also demonstrated the circulation of sand flies naturally infected with Le. i. chagasi. Besides, it was corroborated that Lu. longipalpis presents eclectic haematophagic habit, high survival rates and it is competent to transmit Le. i. chagasi. It was also observed the heterogeneity of the female infection rates after them take the blood meal on infected dogs and a short time to complete the extrinsic incubation period. Conclusions: the observations of this study corroborate the vectorial capacity of Lu. longipalpis and reinforce the epidemiological importance of this species in the transmission of Le. i. chagasi. Considering the high vectorial efficiency of Lu. longipalpis and the presence of conditions favoring the interaction of the VL ecological components (competent vectors, infected hosts and susceptible humans), environmental management as well as educational and health promotion measures are recommended to the municipality authorities to reduce the potential risk of human infections.

Com o objetivo de investigar a ecoepidemiologia de Leishmania spp com relação a animais silvestres e domésticos e aos flebotomíneos, desenvolveram-se estudos no período entre 2000 e 2009 em duas áreas no Estado de São Paulo (Ilhabela S 23º 48\' W 45º 20\' e Itupeva na Serra do Japi, S 23º 10\' W 47º 02\' ). Cada animal foi examinado por um ou mais dos seguintes métodos: observações clínicas, exame direto de esfregaços ou imprints de aspirados e/ou biópsias, teste rápido com antígeno rk39, intradermorreação com antígeno de L.(V.) braziliensis, inoculação in vivo e in vitro e extração de DNA para testes moleculares. Em relação aos animais silvestres foram utilizadas técnicas de captura-marcação-recaptura o que nos permitiu determinar a dinâmica de circulação de Leishmania spp. Em todas as recapturas os animais foram reexaminados. Coletas de flebotomíneos também foram realizadas nos mesmos locais e em galinheiros, utilizando-se de armadilhas luminosas, tipo Falcão modificada, aspiradores de castro, armadilha de Shannon, armadilha Disney e papéis untados com vaselina líquida. De um total de 2.714 animais silvestres capturados, 2.048 foram recapturas. Em Ilhabela verificou-se que exemplares de Proechimys iheringi e Philander opossum foram recapturados de 2 a 35 vezes e um exemplar de Philander opossum foi recapturado até 79 meses após sua captura. L. (V.) braziliensis foi observado em áreas de LTA infectando cães em Ilhabela e Itupeva, Rodentia (Proechimys iheringi de Ilhabela, Nectomys squamipes e Lutreolina crassicaudata de Itupeva) e Marsupialia (Didelphis aurita de Itupeva). L. (L.) amazonensis foi observado em áreas de LTA em P. iheringi.de Ilhabela. L.(L.) infantum chagasi, de outra parte, foi observado em áreas de LTA em Itupeva (Akodon spp, D. 9 marsupialis). Em algumas áreas foi possível determinar ciclos concomitantes de 2 ou 3 espécies de Leishmania. A recaptura sistemática e o longo tempo de permanência nos mesmos locais de alguns espécimes indicam, de maneira inequívoca, a existência de territórios bem definidos, principalmente para Philander opossum e Proechimys iheringi de onde pode ocorrer a dispersão da leishmaniose. Ny. intermedia e Mg. migonei foram as espécies predominantes em Ilhabela, tanto em áreas florestadas quanto em galinheiros, totalizando 93,81por cento das espécies coletadas. Por outro lado, em Itupeva, Ny. neivai (33.06por cento ), Ny. whitmani (24,06por cento ) e Lu. longipalpis (20,62por cento ) foram as espécies mais abundantes no galinheiro e em áreas com mata. A presença de Lu. longipalpis requer atenção por ser o principal vetor da Leishmania infantum chagasi, no Brasil, em uma região onde foi constatada a presença de ciclo enzoótico. A infecção natural por Leishmania em animais silvestres e domésticos associada à presença de flebotomíneos vetores indica o risco potencial para infecção humana. Infecção de animais silvestres em áreas sem infecção humana ou canina pode indicar a presença ou perpetuação de ciclos do parasita During the last 9 years (2000-2009) we have studied the ecoepidemiology of Leishmania spp. in natural forested areas in São Paulo State, Brazil by the capture and release of small wild mammal, with dogs and phlebotomines. Each wild mammal were examinated by one or more of the following methods: clinical observations, direct examination of smears or imprints of aspirates and biopsies, rk39 antibody in whole blood, skin test with antigen of L. braziliensis, inoculation in vivo and in vitro and DNA extraction for molecular tests. After the tissue samples were taken the animals were marked on their ears and released at their capture site. At each recapture all the tests were repeated. Phlebotomines were also collected in the same places and in chicken hen by Shannon trap, Disney trap, Falcão modified light trap, Castro aspirator, paper greased with liquid vaselin. Of a total of 2,714 small mammals 2,048 were recaptures. Parasitaemias were not constant and in some animals infections parasites were not found when they were re-examined. Pr. Iheringi and Ph.opossum were captured from 2 to 35 different times in Ilhabela and one specimen of Philander opossum was recaptured 79 months after the first capture. In Itupeva one specimem of Didelphis albiventris was recaptured 15 times and another specimem of D. albiventris was recaptured 35 months after the capture. L. (V.) braziliensis was identified in 2 P. iheringi from Ilhabela; 1 N. squamipes, 1 Lutreolina crassicaudata and 1 D. marsupialis from Itupeva; L. (Leishmania) amazonensis in 4 P. iheringi from Ilhabela and, L.(L.)i. chagasi in 1 Akodon sp. and 2 D. marsupialis from Itupeva; Leishmania sp was identified in 2 D. albiventris, 4 Akodon sp from Itupeva and in 4 Proechimys iheringi from 11 Ilhabela. The recapture results indicate that the circulation and dissemination of Leishmania is intimately linked to animal territories. Proechimys iheringi, Philander opossum, Didelphis aurita, Didelphis albiventris e Akodon sp were the most abundant species in those areas, all of them related to enzootic cycle of Leishmania spp. In some areas it were possible to determine concomitant cycles of two or even three species. Infection of different wild animals in areas without human or canine infection says on behalf of presence and perpetuation of circulation cycles of parasite. Ny. intermedia e Mg. migonei were the predominant phlebotomines in Ilhabela, as much in forest environment as in the chicken hen with 93.81per cent of the total collected.In Itupeva, Ny neivai (33.06per cent ), Ny. whitmani (24,06per cent ) and Lu longipalpis (20,62per cent ) were the most abundant species. The presence of Lu. Longipalpis requires concern due its role as Leishmania infantum chagasi. In this region was described a enzootic cycle of this parasite