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Serum samples (n: 110) from blood donors and high risk individuals from Cordoba, Argentina with indeterminate HIV-1 and HTLV-I/II Wb profiles were studied for specific antibodies to HTLV-I/II and HIV-1 by indirect immunofluorescence assay (IFA) and for the presence or absence of HIV-1 and HTLV-I/II specific bands by Wb. This study was carried out in order to characterize their putative reactions with HIV-1 and HTLV-I/II proteins and to resolve the retrovirus infection status of these individuals. Results indicated that blood donors sera displaying indeterminate HIV-1 or HTLV-I/II Wb patterns were not immunoreactive to HTLV-I/II and HIV-1 on IFA. However, a high rate of indeterminate HIV-1 and HTLV-I/II Wb samples from high risk individuals had positive HTLV-I/II and HIV-1 IFA results respectively. Our study supports the growing evidence that HTLV-HIV indeterminate seroreactivity in low risk population is due to a cross reaction against nonviral antigens, and in high risk populations the indeterminate samples show serological cross-recognition between HIV-1 proteins and HTLV-I/II proteins on Wb. These results point out the necessity to investigate the HTLV-I/II reactivity in indeterminate HIV-1 samples and viceversa in order to confirm the diagnosis. Finally, this study shows the potential usefulness of IFA in elucidating the status of HIV-1 and HTLV-I/II infection of individuals with indeterminate Wb profiles, thus enabling resolution of retrovirus infection status.Amostras de soro sangüíneo (n: 110) de indivíduos de comportamento de risco e doadores de sangue da cidade de Córdoba, na Argentina, com perfis de reactividade para HIV-1 e HTLV-I/II indeterminada por Western blot (Wb), foram estudadas para anticorpos específicos contra HTLV-I/II e HIV-1 por meio do Ensaio de Imunofluorescência Indireta (IFI). Este estudo foi realizado para caracterizar as reações putativas com proteínas HIV-1 e HTLV-I/II e resolver o estado da infecção por retrovírus destes indivíduos. Os resultados mostram que os soros dos doadores sangüíneos que apresentam padrões indeterminados para HTLV-I/II e HIV-1 no Wb não são reagentes contra HTLV-I/II e HIV-1 por IFI. Mas, um alto índice de amostras de individuos com alto risco com resultado indeterminado no Wb para HIV-1 e HTLV-I/II apresentaram resultados positivos para HTLV-I/II e HIV-1 por IFI, respectivamente. Nosso estudo sugere que a reatividade indeterminada para HTLV-HIV na população de baixo risco deve-se a uma reação cruzada contra antígenos não virais; e que na população de alto risco as amostras indeterminadas apresentam reação cruzada entre as proteínas HIV-1 e HTLV-I/II no Wb. Estes resultados indicam que se faz preciso pesquisar a reatividade de HTLV-I/II nas amostras indeterminadas de HIV-1 e vice-versa, para confirmar o diagnóstico. Por último, este trabalho mostra a utilidade potencial da IFI para determinar o estado de infecção HIV-1 e HTLV-I/II dos indivíduos com perfis indeterminados por Wb, permitindo assim, a resolução do estado real de infecção por retrovírus.