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Escherichia coli é um agente importante de infecções extraintestinais em humanos e em animais. Em aves, é responsável por grandes perdas econômicas, sendo conhecida como E. coli patogênica para aves (APEC), e causa a colibacilose, a qual inicia como infecção do trato respiratório e evolui para aerosaculite, pericardite, perihepatite e septicemia. Vários genes de virulência estão envolvidos, sendo tsh um deles. O gene tsh codifica a proteína autotransportada hemaglutinina temperatura sensível (Tsh), que tem atividade hemaglutinante e proteolítica. Tsh é sintetizada como uma proteína precursora de 140 kDa, que é clivada, em um domínio passageiro de 106 kDa (Tshs) e um beta-domínio de 33 kDa (Tshb). Em nosso trabalho observamos que a presença destas proteínas é dependente da temperatura e do meio de cultura utilizado para o crescimento bacteriano. Observamos ainda que, tanto a Tsh recombinante (140 kDa) quanto o sedimento da amostra selvagem APEC 13, que contém Tshb (33 kDa), aglutinaram eritrócitos de galinha. Tanto a Tsh recombinante (140kDa) quanto o sobrenadante da APEC 13, que contém Tshs (106 kDa), causam proteólise da mucina. O anti-Tsh do soro de galinha inibiu a hemaglutinação da APEC 13 e da recombinante E. coli BL21/pET101-tsh, e inibiu também a atividade mucinolítica da proteína Tsh. A comprovação da atividade mucinolítica da proteína Tsh, foi possível através de SDS-PAGE em géis copolimerizados com mucinas de diferentes origens. Escherichia coli is an important agent of extra-intestinal infections both in humans and animals alike. In poultry, it is responsible for significant economic loss, being known as the pathogenic avian E. coli (APEC); and it causes colibacillosis, which starts as an infection of the respiratory tract evolving to airsacculitis, pericarditis, perihepatitis and septicemia. Several virulence genes are involved, among which tsh. The tsh gene codifies the autotransporter protein temperature sensitive hemagglutinin (Tsh), which has hemagglutinating and proteolytic activities. Tsh is synthesized as 140 kDa precursor protein, whose processing results in 106 kDa passenger domain (Tshs) and 33 kDa beta-domain (Tshb). In our study, we observed that these proteins presence is dependent on temperature and on the medium utilized for bacterial growth. We also verified that both the recombinant Tsh (140 kDa) and the pellets from wild sample APEC 13, which contain Tshb (33 kDa), agglutinated chicken erythrocytes. Both the recombinant Tsh (140kDa) and the supernatants from APEC 13, which contain Tshs (106 kDa), caused proteolysis of mucin. Chicken anti-Tsh serum inhibited the hemagglutinating activity of strains APEC 13 and recombinant E. coli BL21/pET101-tsh, and it also inhibited the mucinolytic activity of Tsh protein. The proof of Tsh protein mucinolytic activity was achieved by means of SDS-PAGE in gels copolymerized with mucins from different sources.

O gênero Proteus é causador de diferentes infecções hospitalares, como: infecções no trato respiratório, feridas, olhos, nariz, garganta, pele e gastroenterite. Dentre as espécies deste gênero, Proteus mirabilis é a mais prevalente em infecções em humanos, principalmente as do trato urinário. Este trabalho objetivou investigar a ocorrência e a diversidade de P. mirabilis isolados de diversas infecções em humanos, já que há pouco conhecimento sobre a epidemiologia e o genoma deste patógeno em isolados que não são de fonte urinária. Deste modo, foram realizados 3 estudos, sendo o primeiro com análise genômica de um isolado de secreção traqueal ? Este é o primeiro estudo de isolado de secreção traqueal que foi sequenciado. A cepa Proteus mirabilis LBUELH-11 tem 3.973.423 bp e 99.13% de similaridade com Proteus mirabilis PM52260 e 99.06% com Proteus mirabilis AR0155, sugerindo pela análise filogenética que LBUELH-11 é P. mirabilis. O segundo estudo, com base em dados epidemiológicos da resistência de Proteus mirabilis e no terceiro estudo, foram analisadas 68 cepas de P. mirabilis atendidos no Hospital Universitário de Londrina. Quanto ao perfil genotípico e fenotípico, constatou-se a presença do gene hpmA em 97.05% dos isolados de origem urinária e em 100% dos isolados de outras fontes de infecção, pmfA em 97.05% dos isolados de origem urinária e 100% dos isolados de outras fontes de infecção, ucaA em 82.35% dos isolados de origem urinária e em 85.29% dos isolados de outras fontes de infecção, zapA está presente em 94.11% dos isolados de origem urinária e em 88.23% dos isolados de outras fontes de infecção, mrpA está presente em 100% dos isolados de origem urinária e em 97.05% dos isolados de outras fontes de infecção. Os genes hlyA e fimH não foram encontrados em nenhum dos isolados e os genes atfA e ureA estão presentes em 100% deles. Todos os microrganismos analisados apresentaram forte capacidade em formar biofilme. No teste de adesão, 100% dos isolados de fonte urinária foram capazes de formar adesão agregativa (AA); já nos isolados de outras fontes de infecção, 17.65% não foram aderentes (NA) e 82.35% foram capazes de formar adesão agregativa (AA). O patógeno apresentou resistência à maioria dos fármacos testados, principalmente à ceftriaxona. Portanto, pode-se inferir que houve diferenças genotípicas e fenotípicas entre os isolados de Proteus mirabilis, sejam ele de fonte urinária ou não urinária. The Proteus genus causes many different hospital infections, such as: respiratory tract infections, wounds, eyes, nose, throat, skin and gastroenteritis. Among the species of this genus, Proteus mirabilis is the most prevalent in human infections, mainly those of the urinary tract. This work aimed at investigating the occurrence and diversity of P. mirabilis isolates of many infections in humans, as little is known about the epidemiology and genome of this pathogen in isolates which are not from a urinary source. Thus, three studies were carried out, the first with the genomic analysis of an isolate of tracheal secretion ? This study is the first Brazilian isolate sequenced. Proteus mirabilis strain LBUELH-11 has 3.973.423 bp and 99.13% of similarity with Proteus mirabilis PM52260 and 99.06% with Proteus mirabilis AR0155, suggesting by phylogenomic analysis that the LBUELH-11 is a P. mirabilis. The second study was based on epidemiologic data on the resistance of Proteus mirabilis and, in the third study, 68 strains of P. mirabilis observed at Hospital Universitário de Londrina regarding the phenotypic and genotypic profiles. The presence of the gene hpmA was noted in 97.05% of the isolates of urinary origin and in 100% of the isolates from other sources of infection, pmfA in 97.05% of the isolates of urinary origin and 100% of isolates from other sources of infection, ucaA in 82.35% of the isolates of urinary origin and 85.29%% of isolates from other sources of infection, zapA being present in 94.11% of the isolates of urinary origin and in 88.23%%% of isolates from other sources of infection, mrpA being present in 100% of the isolates of urinary origin and 97.05% of isolates from other sources of infection. The genes hlyA and fimH were not found in any of the isolates and the genes atfA and ureA are present in 100% of them. All microorganisms analyzed showed a strong ability to form biofilm. In the adherence test, 100% of the isolates of urinary origin were able to form aggregative adherence (AA); among the isolates from other sources of infection, however, 17.65% were non-adherent (NA) and 82.35% were able to form aggregative adherence (AA). The pathogen showed resistance to most of the drugs tested, mainly ceftriaxone. Therefore, it may be inferred that there were genotypic and phenotypic differences among the isolates of Proteus mirabilis, both from urinary and non-urinary sources.

As infecções causadas por microrganismos resistentes aos antimicrobianos, uma preocupação mundial, são responsáveis por aumentar o tempo de internação dos pacientes afetados, elevando o custo dos tratamentos e aumentando a taxa de morbimortalidade. Os metais têm sido usados desde a antiguidade como agentes antibacterianos e apresentam diferentes propriedades e espectros de ação. Dentre os metais, a prata é um dos mais utilizados devido à sua eficiência como antimicrobiano e sua baixa toxicidade. Com o advento da nanotecnologia na área médica, as nanopartículas de prata (AgNP) passaram a ser amplamente estudadas por sua ação antimicrobiana, inclusive contra bactérias multirresistentes. Em nosso estudo, avaliamos a alteração fenotípica e genotípica em cepas de bactérias Gram-negativas contra a exposição prolongada a subdoses de nanopartículas de prata sintetizadas biologicamente (AgNPbio). AgNPbio foi sintetizada biologicamente por utilizando extrato de Fusarium oxysporum. Após exposição prolongada, foi possível observar alteração na Concentração Inibitória Mínima (CIM) em 7 cepas bacterianas. Após o ensaio de indução, 3 cepas bacterianas apresentaram alteração na sensibilidade colateral e resistência cruzada frente a antimicrobianos convencionais. Nossos resultados mostraram uma atenção necessária na exposição prolongada de AgNPbio contra cepas bacterianas. Infections caused by microorganisms resistant to antimicrobials are responsible for increasing the hospitalization length of affected patients, increasing the cost of treatments, increasing the rate of morbidity and mortality. Metals have been used since ancient times as antibacterial agents and present different properties and spectra of action. Among the metals, silver is one of the most commonly used due to its efficiency as an antimicrobial and low toxicity. With the advent of nanotechnology in the medical area, silver nanoparticles (AgNP) have become widely studied for their antimicrobial action, including against multidrug-resistant bacteria. In our study, we evaluate phenotypical and genotypical alteration in Gran negative bacterial strains against prolonged exposure to silver nanoparticles (AgNPbio) underdoses. AgNPbio was synthetized biologically by Fusarium oxysporum. After prolonged exposure, it was possible to observe alteration in Minimal Inhibitory Concentration (MIC) in 7 baterial strains. After induction bacterial assay 3 bacterial strains showed alteration in collateral sensitivity and resistance cross in conventional antimicrobials. Our results showed a necessary attention in prolonged exposure of AgNPbio against bacterial strains.

Escherichia coli produtoras de toxina Shiga (STEC) é um patógeno de veiculação alimentar com grande significância na saúde publica humana e com grandes impactos econômicos. Vários surtos de Sindrome Hemolítica Urêmica causada por STEC têm ocorrido no mundo todo, porém no Brasil essas infecções são ocasionais e não associados a surtos. As toxinas Shiga (Stx) são os principais fatores de virulência de STEC, e muitas vezes são utilizadas como antígeno para diagnóstico da presença desse patotipo. Deste modo, o objetivo desse trabalho foi produzir anticorpos IgY em galinhas poedeiras contra Stx utilizando como antígeno a subunidade B recombinante da Stx do tipo 2 (rStx2aB), e avaliar sua reatividade para uma possível aplicação em diagnósticos e imunoprofilaxia. O rendimento médio de extração de proteína total nas gemas foi de 5,2 mg por mL de gema, totalizando cerca de 41,6 mg de IgY por ovo. Uma alta titulação de anticorpos contra rStx2aB nos anticorpos IgY purificados dos ovos foi observada cerca de 35 dias após a primeira imunização, com aumento considerável após a 8° semana e mantendo-se estável até a 15° semana. Além disso, o IgY purificado anti-Stx2B pode neutralizar efetivamente a atividade citotóxica de sobrenadante da cepa STEC O157:H7 86-24 em células Vero. Nosso trabalho demonstra que a subunidade B recombinante da Stx2a representa uma boa alternativa para gerar anticorpos IgY específicos, os quais possuem um grande potencial para serem aplicados em diagnósticos e profilaxia de STEC. Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) is a foodborne pathogen with great public health and economic impacts. Several outbreaks of Hemolytic Uremic Syndrome caused by STEC have occurred worldwide, however in Brazil these infections are occasional and not outbreak associated. Shiga toxins (Stx) are the main STEC virulence factors and are often used as an antigen to this pathotype detection. Thus, the work objective was to produce IgY against Stx in laying hens using the recombinant Stx2 B subunit (rStx2aB) as antigen and evaluate its reactivity for a possible diagnostics and prophylaxis application. The average yolk protein yield after extraction was 5.2 mg per mL/yolk, approximately 41.6 mg of IgY per egg. A high specific IgY response against rStx2aB was observed about 35 days after the first immunization, increasing even more after the 8th week and remained stable until the 15th week. In addition, purified anti-Stx2aB IgY can neutralize STEC O157: H7 86-24 supernatant cytotoxic activity in Vero cells. Our work demonstrates that rStx2aB utilization represents a good alternative to specific IgY generation against Stx, which have great diagnostics and prophylaxis application potential for STEC.

Bactérias multirresistentes são um problema de saúde pública de impacto global, uma vez que há pouca ou nenhuma opção de tratamento eficaz para muitas dessas doenças infecciosas. Portanto, o desenvolvimento de novos antimicrobianos é urgentemente necessário. Nanopartículas de prata e derivados do Origanum vulgare (orégano) são potentes antimicrobianos, no entanto os primeiros apresentam características organolépticas marcantes e a emergência de resistência bacteriana à prata acontece rapidamente. Com objetivo de prevenir emergência de resistência, reduzir efeito organoléptico do orégano e desenvolver um mistura de antimicrobianos com mecanismo de ação estratégico, este estudo avaliou o efeito de quatro associações contendo nanopartículas de prata biogênicas (bioAgNP, sintetizadas com Fusarium oxysporum) e derivados do orégano (óleo essencial de orégano – OEO, carvacrol – CAR ou timol – Thy) contra bactérias Gram-positivas e negativas. As seguintes combinações foram testadas: OEO/bioAgNP, CAR/bioAgNP, Thy/bioAgNP e CAR/Thy. As concentrações inibitórias mínimas (CIMs) médias contra bactérias planctônicas e sésseis (SCIM≥95) foram, respectivamente, 0,84 e 0,59 mg/mL (OEO), 0,48 e 0,46 mg/mL (CAR), 0,47 e 0,37 mg/mL (Thy) e 92 e 115,62 μM (bioAgNP). Os derivados do orégano foram bactericidas em pelo menos 10 s, enquanto bioAgNP agiram mais rápido contra Gram-negativas (30 min) do que Gram-positivas (7 h). As combinações foram pouco hemolíticas e exibiram efeito antibacteriano aditivo contra células planctônicas, reduzindo significativamente CIM de todos os compostos e tempo de ação de bioAgNP. As associações também mostraram maior efeito antibiofilme do que os antimicrobianos isolados, pois quando combinados exibiram menor SCIM≥95; e mesmo quando não houve redução de SMIC≥95, provocaram maior redução na biomassa (cristal violeta) e atividade metabólica (MTT) dos biofilmes bacterianos. CAR/bioAgNP e Thy/bioAgNP se destacam, pois inibiram extensivamente o crescimento de biofilme pré-formado em poliestireno e superfície de vidro, interferindo com sua atividade metabólica e organização estrutural (analisada por microscopia eletrônica de varredura). Além disso, em ensaio de exposição prolongada, Thy/bioAgNP preveniu a emergência de cepas resistentes, enquanto bioAgNP sozinho perdeu a eficiência antibacteriana após 12 dias de tratamento diário. O mecanismo de ação de Thy, bioAgNP e combinação de ambos (contra Escherichia coli) envolve estresse oxidativo, uma vez que causaram aumento de espécies reativas de oxigênio (EROs) e peroxidação lipídica, dano à membrana plasmática e parede celular (protusões na superfície celular observadas por microscopia eletrônica), com consequente perda de conteúdo citoplasmático (proteínas, DNA, RNA e ATP). OEO e CAR atuaram como antioxidantes, porém afetaram a membrana e parede celular bacterianas (protrusões na superfície e extravasamento de conteúdo citoplasmático). Este estudo descreve, pela primeira vez, o mecanismo de ação antibacteriana de derivados do orégano e bioAgNP em associações que podem ser aplicadas em indústrias e ambientes clínicos e hospitalares. Multidrug-resistant bacteria have became a serious public health problem worldwide, which reduces treatment options in clinical settings. Therefore, there is urgent need for development of new antimicrobials. Silver nanoparticles and Origanum vulgare (oregano)-derived compounds exibit excellent antimicrobial activity; however these plant terpenoids present strong organoleptic characteristics and silver resistance is already reported. In order to prevent emergence of resistant strains, to reduce oregano organoleptic effect, and to develop antimicrobial mixtures with strategic action mechanism, this study evaluated two-drugs combinations composed of biogenic silver nanoparticles (bioAgNP, synthesized with Fusarium oxysporum) and oregano derivatives (oregano essential oil – OEO, carvacrol – CAR, and thymol – Thy) against Gram-positive and Gram-negative bacteria. The following four drug-associations were tested: OEO/bioAgNP, CAR/bioAgNP, Thy/bioAgNP, and CAR/Thy. The average minimum inhibitory concentrations (MICs) against planktonic and sessile bacteria (SMIC≥95) were respectively 0.84 and 0.59 mg/mL (OEO), 0.48 and 0.46 mg/mL (CAR), 0.47 and 0.37 mg/mL (Thy), and 92 and 115.62 μM (bioAgNP). Oregano derivatives showed very fast bactericidal effect (at least 10 s), while bioAgNP acted faster against Gram-negative (30 min) compared to Gram-positive (7 h). All four combinations showed low hemolytic activity and exhibited additive antibacterial effect against planktonic cells, since they significantly reduced the MIC values of all compounds and acted faster than bioAgNP individually. The associations also showed higher antibiofilm effect than antimicrobials alone, since they exhibited lower SMIC≥95 in combinations; even when reduction in SMIC≥95 did not happen, they caused greater reduction in biomass (violet crystal assay) and metabolic activity (MTT assay) of bacterial biofilms. We highlight two combinations, CAR/bioAgNP and Thy/bioAgNP, as they extensively inhibited growth of preformed biofilm in polystyrene and glass surfaces, interfering with its metabolic activity and structural organization (scanning electron microscopy data). In addition, Thy/bioAgNP long treatment prevented resistance emergence, while monotherapy with bioAgNP allowed silver-resistance development after 12 days of daily treatment. Mechanism of action of Thy, bioAgNP and the combination of both (against Escherichia coli) involves oxidative stress, since they inhanced intracellular reactive oxygen and lipid peroxidation, damage to cytoplasmic membrane and cell wall (surface protrusions observed by electron microscopy), and consequent cellular contents leakage (proteins, DNA, RNA, and ATP). OEO and CAR did not cause oxidative stress, however both affected bacterial membrane and cell wall (protrusions on surface and loss of cytoplasmic molecules). This study describes, for the first time, the antibacterial mechanism of action of mixtures containing oregano-derived compounds and bioAgNP that may be applied in industries, hospital, and clinical environments.

O canário (Serinus canaria) é um pássaro canoro, apreciado por seu canto suave e harmonioso, belas cores e temperamento dócil. Pode ser criado como animal de estimação ou para fins comerciais. Por conta disso, movimenta um mercado lucrativo de criação e venda de animais. No entanto, doenças causadas por Escherichia coli patogênica para aves (APEC) pode comprometer a saúde dos canários e, o tratamento antimicrobiano empírico inadequado pode contribuir para à seleção de cepas resistentes. Este estudo caracterizou 21 cepas de E. coli isoladas no período de janeiro e fevereiro de 2015, de um surto em canários com colibacilose, proveniente de um criador no norte do Paraná. Foram pesquisados os genes de virulência de ExPEC (E. coli patogênica extraintestinal), DEC (E. coli diarreiogênica) e os genes de resistência a quinolonas, utilizando a técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR), assim como a classificação em grupos filogenéticos. Além disso, foi pesquisado o perfil de sensibilidade aos antimicrobianos pelo método de disco difusão, a clonalidade genética das cepas pela técnica do Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus-PCR (ERIC-PCR), a sorotipagem, o sequence type e o perfil de invasão em células de linhagem HeLa. Todas as cepas apresentaram genes de virulência característicos de ExPEC e o mesmo grupo filogenético (B1). A alta similaridade genética (95%) indica a clonalidade genética das cepas. Houve prevalência do sorotipo O117:H4 (71,4%), além do mesmo perfil de invasão em células de linhagem HeLa e o sequence type (ST224). O gene ipaH (71.4%) está associado a EIEC (E. coli enteroinvasiva), não sendo comum em ExPEC. Este é o primeiro relato de um surto clonal em canários causado por APEC, com presença do gene de virulência ipaH. Foram encontradas cepas multirresistentes aos antimicrobianos mais utilizados na medicina humana e veterinária e os genes de resistência a quinolonas (qnrS: 23.8%; qnrB: 9.52%). A multirresistência aos antimicrobianos demonstra a importância de se evitar o tratamento antimicrobiano empírico inadequado em canários. Uma vez que o conceito de One Health conecta a saúde animal a saúde humana e ambiental, a disseminação dos genes de resistência entre os microrganismos pode favorecer a falha terapêutica. The canary (Serinus canaria) is a songbird, appreciated for its soft and harmonious song, beautiful colors, and docile temperament. It can be raised as a pet or for commercial purposes. As a result, moves a lucrative business. However, diseases caused by avian pathogenic Escherichia coli (APEC) can compromise the health of canaries, and the inadequate empirical antimicrobial treatment can lead to the emergence of resistant strains. This study characterized 21 strains of E. coli isolated between January to February 2015, from an outbreak in canaries suffering a colibacillosis, from a breeder in northern Paraná. The virulence genes of ExPEC (extra-intestinal pathogenic E. coli), DEC (diarrheagenic E. coli) and quinolone resistance genes were investigated using the polymerase chain reaction (PCR) technique, as well as the classification in groups phylogenetic. In addition, the antimicrobial sensitivity profile was investigated using the disk diffusion method, the genetic clonality of the strains using the Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus-PCR (ERIC-PCR) technique, serotyping, the sequence type and the invasion profile in cells of HeLa lineage. All strains had virulence genes characteristic of ExPEC and the same phylogenetic group (B1). The high genetic similarity (95%) indicates the genetic clonality of the strains. There was a prevalence of serotype O117:H4 (71.4%), and to the same invasion profile in cells of HeLa lineage and sequence type (ST224). The ipaH gene (71.4%) is associated with EIEC (enteroinvasive E. coli), which is not common in ExPEC. This is the first report of a clonal outbreak in canaries caused by APEC, with the presence of the ipaH virulence gene. Multidrug-resistant strains were found for the most used antimicrobials in human and veterinary medicine and genes of resistance to quinolones (qnrS: 23.8%; qnrB: 9.52%). Multidrug resistance to antimicrobials demonstrates the importance of avoiding inadequate empirical antimicrobial treatment in canaries. Since the concept of One Health connects animal health to human and environmental health, the spread of resistance genes among microorganisms can favor therapeutic failure.

A infecção do trato urinário (ITU) está entre as infecções que mais acometem os seres humanos, tanto no ambiente hospitalar quanto na comunidade. Proteus mirabilis é uma das principais espécies causadoras de ITUs e, normalmente, está mais relacionada às infecções consideradas complicadas. A patogenia desta espécie está relacionada com a capacidade desta em expressar seus fatores de virulência: biofilme, adesinas, urease, proteases, sideróforos e toxinas. Neste estudo investigamos a virulência, sensibilidade aos antimicrobianos e relação clonal de 183 cepas de P. mirabilis isoladas da urina de pacientes atendidos na comunidade de Londrina – PR. Foi constatado que 100% das cepas foram positivas para os genes de virulência hpmA, ptA, zapA, mrpA, pmfA, ireA e atfA; enquanto que o gene ucaA foi positivo em 81.42%. As cepas apresentaram altas taxas de sensibilidade aos antimicrobianos avaliados e apenas uma foi ESBL positiva. Todos os microrganismos analisados apresentaram capacidade em formar biofilme: 73,22% apresentaram intensidade muito forte de formação de biofilme, enquanto que 25,68% apresentaram forte intensidade e 1,1% intensidade moderada. Com relação à clonalidade, foram encontrados 40 complexos clonais diferentes entre os isolados testados e os nossos resultados sugerem a circulação de clones de P. miabilis uropatôgenico na cidade de Londrina. É de extrema importância que dados epidemiológicos regionais sejam realizados constantemente, a fim de se avaliar a patogênese, resistência e circulação de clones de P. mirabilis uropatogênico. Urinary tract infection (UTI) is among the infections that most affect humans, both in the hospital and in the community. Proteus mirabilis is one of the main species involved in UTIs and is usually more related to infections that are considered complicated. The pathogenesis of this species is related to its ability to express its virulence factors: biofilm, adhesins, urease, proteases, siderophores and toxins. In this study we investigated virulence, antimicrobial susceptibility and clonal relationship of 183 strains isolated from the urine of patients from the community of Londrina - PR. It was found that 100% of the strains were positive for the hpmA, ptA, zapA, mrpA, pmfA, ireA and atfA genes; whereas the ucaA gene was positive in 81.42%. The strains showed high susceptibility rates to the evaluated antimicrobials and only one sample was ESBL positive. All samples tested showed capacity to form biofilm: 73.22% had very strong biofilm formation intensity, while 25.68% had strong intensity and 1.1% moderate intensity. Regarding clonality, 40 different clonal complexes were found among the tested isolates and our results suggest the circulation of clones of uropathogenic P. mirabilis in the city of Londrina. It is of utmost importance that regional epidemiological data be carried out constantly, in order to evaluate the pathogenesis, resistance and circulation of clones of uropathogenic P. mirabilis.

A contaminação de água e alimentos com bactérias fecais permanece um problema comum e persistente, impactando a saúde pública e econômica do mundo todo. Dessa forma, a água é considerada um importante meio de transmissão de enfermidades ao ser humano e animais, sendo a Escherichia coli de grande importância, especialmente o grupo de E. coli patogênica extraintestinal (ExPEC). A capacidade deste grupo de causar infecções nos homens e nos animais, está associada a presença de diferentes fatores de virulência que as caracterizam como patogênicas. Diante disso, fez-se a necessidade de realizar uma pesquisa, a fim de verificar se a água é uma fonte potencial de ExPEC, através de marcadores moleculares específicos para identificação deste grupo. Os genes de virulência de ExPEC pesquisados neste estudo foram determinados utilizando a técnica da PCR. O ensaio de aderência em células HEp-2 e biofilme foi realizado em todas as amostras que apresentaram algum gene característico de ExPEC. Das 750 amostras de água coletadas 250 (33,3%) estavam contaminadas com E. coli. Do total de 250 amostras, 75,2% apresentaram algum gene relacionado a ExPEC, sendo que 17,5% foram positivas para os fatores de virulência que caracterizam APEC (iutA, iroN, hlyF, iss e ompT). Os genes mais prevalentes foram fimH e fyuA, sendo identificados em 62,8% e 59,8% dos isolados, respectivamente. Os genes iutA e traT também apresentaram alta frequência, sendo detectados em 57,4% e 52,1% dos isolados, respectivamente. Os genes iroN, papC, papG, ompT, ibeA, iss, sitA, hlyF, cnf1 e cnf2 foram encontrados com frequência menor que 20%. O hlyA e sfa/focDE foram os genes menos prevalentes neste estudo, ambos detectados em apenas 5,3% dos isolados, seguidos pelo gene tsh (1,2%). Não foram detectados os genes afa/draBC e kpsMT K1. Na análise filogenética as amostras pesquisadas pertenceram principalmente ao filogrupo B2. Entre os padrões de adesão pesquisados em cultura de células HEP-2 o padrão agregativo foi predominante nestas amostras. No teste de formação de biofilme as amostras positivas para ExPEC foram classificadas em dois grupos com base em seus valores de absorbância: grupo 1 (OD 570 > 0,2) 142 amostras e grupo 2 (OD 570 ? 0,2) com 46 amostras. Assim, foi possível demonstrar que ExPEC são patógenos importantes na contaminação da água para consumo humano e compreender melhor as implicações que esse reservatório pode trazer para a saúde pública e por meio desses resultados melhorar a qualidade microbiológica da água. The water and food contamination with fecal bacteria remains a common and persistent issue, impacting the public health and economy all around the world. This way, the water is considered an important transmission medium of diseases to human being and animals, being of huge importance Extraintestinal Pathogenic E. coli (ExPEC). The capability of this group to cause infections in men and animals is associated with the presence of different virulence factors which characterized them as pathogenic. Accordingly, it is necessary to realize a research in order to verify if the water is a potential source of ExPEC, through specific molecular markers to identify this group. The ExPEC virulence genes searched in this study were determined using the PCR technique. Adhesion test in HEp-2 cells and biofilm were realized in positive samples for some genes of ExPEC. From the 750 water samples collected, 250 (33.3%) were contaminated with E. coli. This way, from the 250 total samples, 33 (13.2%) were positive for virulence factors that characterize APEC (iutA, iroN, hlyF, iss and ompT). The most prevalent genes were fimH and fyuA, being identified 62.8% and 59,8% of isolates, respectively. The genes iutA and traT also presented high frequency, being detected in 57.4% and 52.1% of isolates, respectively. As much iroN, papC, papG, ompT, ibeA, iss, hlyF, cnf1 and cnf2 were found with frequency lower than 20%. The hlyA, sfa/focDE were both detected in only 5.2% of the isolates, sitAin 6.2% of realized analyses, being the gene lower prevalent tsh (1.2%). It were not detected the genes afa/draBC e kpsMT K1. Among the main phylogenetic groups were predominant groups B2. Between the searched aggregative standards in cell culture HEP-2, the aggregative standards were predominant on these samples. In the biofilm formation test the samples were classified in two groups based on their values of absorbance: group 1: (OD 570 > 0,2) with 142 samples and group 2 (OD 570 ? 0,2) with 46 samples. Thus, it was possible to demonstrate that ExPEC are important pathogens on water contamination for human consumption and better understand the implications which this reservoir can bring to public health and, through these results, improve the water microbiological quality.

Escherichia coli resistente a antimicrobianos como fosfomicina, colistina, além das produtoras de beta-lactamases de espectro estendido (ESBL) e AmpC tem emergido na saúde humana. O uso não racional de antimicrobianos na avicultura contribui com a seleção de bactérias resistentes nestes ambientes, com a possibilidade de transmissão destas cepas ao homem, por meio da cadeia alimentar. Desta forma, o objetivo do nosso estudo foi realizar um monitoramento longitudinal em granjas de frango de corte no sul do Brasil, visando determinar pontos críticos durante a produção das aves para a ocorrência de E. coli multirresistente. Para isso, foram realizadas três coletas em oito granjas (três Paraná e cinco Rio Grande do Sul), em período distintos (1° dia de produção; 18° ao 22° dia; 40° dia), entre os meses de fevereiro de 2016 a março de 2018. Foram coletadas amostras de cama de aviário, suabe de cloaca, ração, água e “cascudinhos” (Alphitobius sp.). Todas E. coli isoladas foram submetidas a testes de antibiograma para verificar a susceptibilidade aos antimicrobianos e confirmar a produção de ESBL. Além disso, o método de PCR foi aplicado para investigar a presença de genes que conferem resistência aos antimicrobianos, os grupos filogenéticos e os grupos de incompatibilidade plasmidial (Inc Group). Cinquenta e oito E. coli do PR e 59 E. coli do RS foram isoladas, totalizando 117. Uma alta frequência de multirresistência foi observada entre os isolados do PR (90%) e do RS (70%). Aproximadamente, 67% foram positivas para a produção de ESBL. Por meio da análise de regressão logística foi possível verificar a razão de chances (OR) da presença de E. coli produtora de ESBL em função da origem de isolamento. E. coli produtora de ESBL tem 4.33 vezes mais chances de ser encontrada na cama de frangos e 612 vezes mais chances em cascudinhos. O gene codificando para β-lactamases do tipo ESBL predominante foi o blaCTX-M2. Referente ao tipo AmpC foram encontrados apenas o gene cit, em 13% dos isolados. O gene da colistina foi observado em apenas um isolado do RS, entretanto, cerca de 26 isolados do PR foram resistentes a fosfomicina e 19 apresentaram o gene fosA3. Surpreendentemente, foi observado que o gene fosA3 tem aproximadamente 17 vezes mais chances de estar associado ao gene blaCTX-M1, indicando que o uso de fosfomicina na produção pode co-selecionar cepas proutoras de ESBL. Este é o primerio relato da presença de E. coli abrigando o gene fosA3 isolada da produção de frangos de corte no Brasil. A fosfomicina é um importante antimicrobiano usado na clínica humana, e seu uso na avicultura é de grande preocupação à saúde pública. Nosso estudo sugere que a cama de frango e os cascudinhos são pontos críticos dentro da produção de frangos de corte e uma potencial fonte de bactérias multirresistentes. Dessa forma, estratégias de monitoramento e melhorias nas práticas de manejo devem ser elaboradas a fim de reduzir o número de bactérias multirresistentes neste ambiente. Escherichia coli resistant to antimicrobials such as fosfomycin, colistin, as well as producers of extended-spectrum beta-lactamases (ESBL) and AmpC have emerged in human health. The non-rational use of antimicrobials in poultry contributes to the selection of resistant bacteria in these environments, with the possibility of transmission of these strains to humans through the food chain. Thus, the objective of our study was to perform longitudinal monitoring in poultry farms in southern Brazil, aiming to determine critical points during poultry production for multiresistant E. coli occurrence. For this, three collections were performed in eight farms (three in Paraná and five in Rio Grande do Sul), in different periods (1st day of production; 18th to 22nd day; 40th day), between February 2016 and March 2018. Samples were collected from poultry litter, cloaca swab, feed, water and "little beetle" (Alphitobius sp.). All isolated E. coli underwent antibiogram tests to check antimicrobial susceptibility and confirm ESBL production. In addition, the PCR method was applied to investigate the presence of genes that confer resistance to antimicrobials, phylogenetic groups and plasmid incompatibility groups (Inc Group). Fifty-eight E. coli from PR and 59 E. coli from RS were isolated, totaling 117. A high frequency of multidrug resistance was observed among PR (90%) and RS (70%) isolates. Approximately 67% were positive for ESBL production. Through logistic regression analysis it was possible to verify the odds ratio (OR) of the presence of ESBL-producing E. coli as a function of the isolation source. ESBL producing E. coli were found to be 4.33 times more likely in poultry litter and 612 times more chance in little beelte. The predominant ESBL type β-lactamases coding gene was blaCTX-M2. References to the AmpC type were found only in the cit gene in 13% of isolates. The colistin gene was observed in only one RS isolate, however, about 26 PR isolates were fosfomycin resistant and 19 presented the fosA3 gene. Surprisingly, it was observed that the fosA3 gene is approximately 17 times more likely to be associated with the blaCTX-M1 gene, indicating that the use of fosfomycin in production may co-select ESBL-producing strains. This is the first report of the presence of E. coli harboring the fosA3 gene isolated from broiler production in Brazil. Fosfomycin is an important antimicrobial used in the human clinic, and its use in poultry farming is of great public health concern. Our study suggests that poultry litter and little beetle are critical points within broiler production and a potential source of multidrug resistant bacteria. Therefore, monitoring strategies and improvements in management practices should be designed to reduce the number of multidrug resistant bacteria in this environment.

A emergência de bactérias produtoras de betalactamases de espectro estendido (ESBL) e/ ou AmpC em humanos e nas carnes de origem animal tem criado uma grande preocupação quanto à possibilidade de transmissão da resistência aos antimicrobianos por meio da cadeia alimentar. O objetivo do nosso trabalho foi estudar amostras de Escherichia coli produtoras de ESBL e AmpC mediadas por plasmídios (pAmpC), isoladas da carcaça de frango e da clínica humana na cidade de Londrina, e estes foram analisados quanto ao perfil de resistência antimicrobiana, virulência e relação clonal. O primeiro estudo refere-se às amostras de E. coli produtoras de ESBL isoladas de infecção do trato urinário (ITU) e de carcaças de frango. Entre as amostras isoladas de ITU, identificamos genes de ESBL, como blaCTX-M-2, blaCTX-M-3, blaCTX-M-8, blaCTX-M-14, blaCTX-M-15 e blaCTX-M-27, enquanto que nas amostras de carcaças de frango identificamos blaCTX-M-1, blaCTX-M-2 e blaCTX-M-8. As amostras apresentaram fatores de virulência associados a E. coli patogênica aviária (APEC) (93.1% em ITUs e 71.43% em carcaças de frango) e ilhas de patogenicidade (52.4% em ITUs e 31% em carcaças de frango). Por meio do “Pulsed Field Gel Electrophoresis” (PFGE) e do “Multilocus Sequence Typing” (MLST), nossos resultados demonstraram uma alta diversidade de cepas entre ambos os grupos de amostras. O segundo estudo refere-se às amostras produtoras de pAmpC isoladas de carcaças de frango e amostras clínicas humanas. Nesse trabalho, todas as amostras apresentaram o gene blaCMY-2, e foram consideradas multirresistentes. A maioria das amostras (71.43%) estavam associadas a sequência de inserção ISEcp1. Por meio do MLST, 11 “Sequence types” foram identificados, sendo apenas o ST354 encontrado em ambos os grupos de amostras. PFGE demonstrou uma alta diversidade entre as amostras clínicas com as amostras de frango. Nossos trabalhos demonstraram uma alta diversidade bacteriana entre as amostras clínicas com as isoladas de carcaças de frango. No entanto, a presença de fatores de virulência e genes de resistência, associados a infecções humanas, nas amostras isoladas de carne de frango representam um potencial zoonótico ao homem. The emergence of extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) and/ or AmpC-producing bacteria from humans and meat of animal origin has raised great concern about the possibility of transmission of antimicrobial resistance through the food chain. The aim of our study was research ESBL- and plasmid-mediated (pAmpC)-producing Escherichia coli strains isolated from chicken carcasses and human clinic samples from Londrina, and these strains were analyzed for antimicrobial resistance and virulence profile, and relationship clonal. The first study refers to ESBL-producing E. coli strains isolated from urinary tract infection (UTI) and chicken carcasses. Among the strains isolated from UTI, we identified ESBL genes, as blaCTX-M-2, blaCTX-M-3, blaCTX-M-8, blaCTX-M-14, blaCTX-M-15 and blaCTX-M-27, while in chicken carcass we identified blaCTX-M-1, blaCTX-M-2 and blaCTX-M-8. The strains presented virulence factors associated with avian pathogenic E. coli (APEC) (93.1% in UTIs and 71.43% in chicken carcasses) and pathogenicity islands (52.4% in UTIs and 31% in chicken carcasses). Through Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) and Multilocus Sequence Typing (MLST), our results demonstrated a high diversity of strains between both strains groups. The second study refers to pAmpC-producing strains isolated from chicken carcasses and human clinical samples. In this work, all strains presented the blaCMY-2 gene and they were considered multidrug resistant. The most of the strains (71.43%) was associated with the ISEcp1 insertion sequence. Though MLST, 11 Sequence types were identified, with only ST354 found in both strains groups. PFGE demonstrated a high diversity between strains from clinical samples with chicken. Our study demonstrated a high bacterial diversity between clinical samples with chicken carcass. However, the presence of virulence factors and resistance genes associated with human infections in strains isolated from chicken meat represents a zoonotic potential to human.

Entre as bactérias multirresistentes mais importantes estão as produtoras de β-lactamase de espectro extendido (ESBL) e produtoras de carbapenemases (KPC), especialmente Escherichia coli, que leva à um aumento da mortalidade associada a essas infecções. Neste estudo foi isolado um bacteriófago denominado ph_EcoPphJ96 de amostras de camas de frango e avaliada a atividade contra cepas de E. coli produtoras de ESBL e KPC, além de enterohemorrágicas (O157:H7). Microscopia Eletrônica de Transmissão mostrou que phJ96 possui morfologia similar aos da família Podoviridae. Inicialmente, phJ96 foi capaz de infectar 11 de 24 cepas de E. coli com uma atividade lítica resultante de 45%. Após a adaptação do bacteriófago, sua atividade lítica aumento de 45% para 58%, com apenas uma passagem. A curva de crescimento mostrou o comportamento de phJ96 em contato com sua cepa hospedeira (E. coli J96) em diferentes multiplicidades de infecção. Além disso, este método também mostrou que para duas E. coli Enterohemorrágica O157:H7, a multiplicidade de infecção de 10 pôde inibir o crescimento bacteriano por 10 horas. A potencial utilização dos bacteriófagos juntamente com outras substâncias alternativas ou como parte de um coquetel de fagos, representa uma possível estratégia terapêutica contra E. coli produtora de ESBL e KPC, em razão do aumento contínuo da resistência antimicrobiana em todo o mundo. One of the most important multidrug-resistant bacteria is extended-spectrum β-lactamase-producing (ESBL) bacteria, especially Escherichia coli, which leads to an increase in the mortality associated with resulting infections. In this study we isolated a bacteriophage named ph_EcoP-phJ96 from chicken litter samples. Transmission electron microscopy showed that phJ96 had the similar morphology as those of the Podoviridae family. Initially, phJ96 was able to infect 11 out of 24 E. coli strains with a lytic activity of 45%. After bacteriophage adaptation, its lytic activity was increased from 45% to 58% with just one adaptation series. Growth curve showed phJ96’s behavior in contact with its host strain at different multiplicities of infection. Besides that, this method also showed that for two EHEC O157:H7 strains, multiplicity of infection of 10 could inhibit bacterial growth for 10 hours. The potential use of this bacteriophage together with other alternative substances or as a part of a phage cocktail represent a possible therapeutic strategy against ESBL-producing E. coli, in view of the continuing increase of antimicrobial resistance worldwide.

Proteus mirabilis é um patógeno oportunista frequentemente associado a uma variedade de infecções em humanos, no qual as do trato urinário são consideradas as mais prevalentes. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar as características genotípicas e fenotípicas dos fatores de virulência e resistência aos antimicrobianos de 34 cepas de P. mirabilis isoladas de carcaças de frango com celulite em um abatedouro no norte do estado do Paraná, Brasil, a fim de inferir um possível risco zoonótico. Das 34 cepas, duas foram escolhidas para avaliar a sua capacidade em reproduzir as lesões de celulite experimentalmente em frangos de corte, sendo uma cepa com maior quantidade de fatores de virulência (LBUEL-A33) e outra com menor quantidade (LBUEL-A34). Os genes mrpA, atfA (fímbrias) ireA (sideróforo), ptA, zapA (proteases) e hpmA (hemolisina) foram encontrados em todos os isolados, enquanto os genes pmfA e ucaA (fímbrias) foram encontrados em 33 (97,6%) e 17 (50%) cepas respectivamente. Todas as cepas expressaram adesão agregativa em células HEp-2 e formaram biofime. Das 34 cepas, 28 (82,35%) exibiram efeito citotóxico em células Vero. Em relação ao perfil de resistência, 25 (78,13%) cepas foram consideradas multirresistentes. A presença de genes blaESBL e blaampC conferindo resistência aos ?-lactâmicos e qnr às quinolonas também foram detectados nos isolados após a presunção no teste fenotípico, no qual 7 (21,88%) isolados continham o grupo CTX-M-2, 11 (34,38 %) continham grupo CIT e 19 (59,38%) continham qnrD. Tanto a cepa LBUEL-A33 quanto a LBUEL-A34 desenvolveram lesões de celulite em 24 horas pós-inoculação, no qual o grau das lesões foi estatisticamente similar ao grau das lesões causadas pelo controle positivo (p< 0,05), uma Escherichia coli Patogênica de Aves (APEC 046). Microscopicamente, tanto a cepa LBUEL-A33 quanto a APEC 046 ocasionaram lesões similares, caracterizadas pela presença de infiltrado inflamatório e necrose da derme e das fíbras musculares. Conclui-se com o presente trabalho que P. mirabilis isolados de carcaças de frango com lesões de celulite representam um risco zoonótico, pois possuem uma diversidade de fatores de virulência e resistência aos antimicrobianos, bem como a capacidade de desenvolver lesões de celulite em frangos de corte. Proteus mirabilis is an opportunistic pathogen often associated with a variety of human infections, in which urinary tract infections are considered to be the most prevalent. In this context, the present study had the objective of evaluating the genotypic and phenotypic characteristics of the virulence and antimicrobial resistance factors of 34 P. mirabilis strains isolated from chicken carcasses with cellulitis in a slaughterhouse in the north of the state of Paraná, Brazil, in order to assess a possible zoonotic risk. Of the 34 strains, two were chosen to evaluate their ability to reproduce cellulite lesions experimentally in broiler chickens, being a strain with the highest number of virulence factors (LBUEL-A33) and another with a lower number (LBUEL-A34). The mrpA, atfA (fimbriae) ireA (siderophore), ptA, zapA (proteases) and hpmA (hemolysin) genes were found in all isolates, while the pmfA and ucaA genes (fimbriae) were found in 33 (97.6% and 17 (50%) strains respectively. All strains expressed aggregative adhesion on HEp-2 cells and formed biofime. Of the 34 strains, 28 (82.35%) exhibited cytotoxic effect in Vero cells. Regarding the resistance profile, 25 (78.13%) strains were considered multiresistant. The presence of blaESBL and blaampC genes conferring resistance to ?-lactams and quinolones was also detected in the isolates after the presumption in the phenotypic test, in which 7 (21.88%) isolates contained the CTX-M-2, 11 (34.38%) contained CIT group and 19 (59.38%) contained qnrD. Both strains LBUEL-A33 and LBUEL-A34 developed cellulite lesions within 24 hours after inoculation, in which the degree of lesions was statistically similar to the degree of lesions caused by the positive control (p

A alta prevalência de infecções pelo vírus herpes simplex (HSV) e a emergência de cepas resistentes ao aciclovir têm estimulado a pesquisa e o desenvolvimento de novos agentes antivirais. Neste contexto, os produtos naturais representam uma excelente fonte de descoberta de compostos bioativos com grande diversidade estrutural e química, capazes de apresentar múltiplos mecanismos de ação e, em geral, com baixa toxicidade. A mangiferina é uma xantona glicosilada encontrada em muitas espécies de plantas, entre elas a mangueira (Mangifera indica). Adenanthera pavonina é uma árvore nativa da África e da Ásia, introduzida no Brasil para reflorestamento e indústria madeireira. Ambas são tradicionalmente utilizadas para o tratamento de muitas doenças e possuem diversas atividades farmacológicas descritas cientificamente, inclusive atividade antiviral. O objetivo deste estudo foi investigar a atividade anti-HSV-1 da mangiferina e do polissacarídeo sulfatado de A. pavonina (SPAp), bem como, desenvolver formulações tópicas contendo estes compostos. Duas cepas virais foram utilizadas, uma resistente (AR-29) e outra sensível (KOS) ao aciclovir. A citotoxicidade dos compostos foi avaliada pelo método colorimétrico de brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-5-difeniltetrazólio, em células Vero. A atividade antiviral, in vitro, foi previamente realizada por ensaio de redução de plaque, utilizando diferentes protocolos de tratamento, tais como, tempo 0 h, virucida e inibição da adsorção para mangiferina e simultâneo para SPAp. A inibição da síntese da proteína ICP4 pela mangiferina também foi avaliada pelo ensaio de imunofluorescência. As formulações tópicas foram desenvolvidas, contendo 0,7% (p/p) de mangiferina e 0,5% (p/p) de SPAp. A atividade antiviral, in vivo, foi realizada em camundongos Balb/c infectados por escarificação da pele e tratados com estas formulações, quatro horas após a infecção, em intervalos de aproximadamente três horas, exceto a noite, durante oito a dez dias. A análise histológica da pele dos animais também foi realizada. As concentrações citotóxicas de 50% (CC50) foram acima de 500 μg/mL para mangiferina e de 47,81 μg/mL para SPAp. As concentrações inibitórias 50% (CI50) para mangiferina foram de 2,9 μg/mL (Índice de seletividade - IS > 172,4) e 3,5 μg/mL (IS > 142,8), para as cepas AR-29 e KOS, respectivamente. A mangiferina inibiu principalmente a cepa AR-29, por contato direto com o vírus, mas também foi capaz de interferir nos processos de adsorção e síntese de proteínas. As CI50 encontradas para SPAp foram de 0,54 μg/mL (IS = 88,5) e 0,49 μg/mL (IS = 97,5), para as cepas AR-29 e KOS, respectivamente. No ensaio antiviral, in vivo, os animais tratados com as formulações contendo mangiferina e SPAp apresentaram um atraso no desenvolvimento e na progressão das lesões de pele em comparação ao grupo controle. Portanto, estas formulações exibiram atividade anti-herpética promissora, com ênfase na potencialidade da mangiferina no controle da infecção pela cepa AR-29, resistente ao aciclovir. The high prevalence of herpes simplex virus (HSV) infections and the emergence of resistant strains to acyclovir have stimulated the search and development of new antiviral agents. In this context, the natural products represent an excellent source of discovery of bioactive compounds with great structural and chemical diversity, capable of presenting multiple mechanisms of action and, in general, with low toxicity. Mangiferin is a glycosylated xanthone found in many plant species, among them the mango tree (Mangifera indica). Adenanthera pavonina is a native tree of Africa and Asia, introduced in Brazil for reforestation and wood industry. Both are traditionally used for the treatment of many diseases and have several pharmacological activities described scientifically, including antiviral activity. The aim of this study was to investigate the anti-HSV-1 activity of mangiferin and sulfated polysaccharide of A. pavonina (SPAp), as well as, to develop topical formulations containing these compounds. Two viral strains were used, one resistant (AR-29) and another sensitive (KOS) to acyclovir. The cytotoxicity of the compounds was evaluated by the colorimetric assay (dimethyl-thiazolyl-diphenyltetrazolium bromide), in Vero cells. The in vitro antiviral activity was previously performed by plaque reduction assay, using different treatment protocols, such as, time 0 h, virucidal and inhibition of adsorption for mangiferin and simultaneous for SPAp. Inhibition of ICP4 protein synthesis by mangiferin was also evaluated by the immunofluorescence assay. Topical formulations were developed containing 0.7% (w/w) mangiferin and 0.5% (w/w) SPAp. The in vivo antiviral activity was performed in Balb/c mice infected by skin scarification and treated with these formulations, four hours after infection, at approximately three hour intervals, except at night, for eight to ten days. Histological analysis of the skin of animals was also performed. The cytotoxic concentrations 50% (CC50) were above 500 μg/mL for mangiferin and of 47.81 μg/mL for SPAp. The inhibitory concentrations 50% (IC50) for mangiferin were 2.9 μg/mL (Selectivity index - SI > 172.4) and 3.5 μg/mL (SI > 142.8), for strains AR-29 and KOS, respectively. Mangiferin inhibited mainly the AR-29 strain, by direct contat with the virus, but was also able of interfering in the processes of adsorption and protein synthesis. The IC50 found for SPAp were 0.54 μg/mL (SI = 88.5) and 0.49 μg/mL (SI = 97.5) for the AR-29 and KOS strains, respectively. In the in vivo antiviral assay, the animals treated with the formulations containing mangiferin and SPAp presented a delay in the development and progression of skin lesions in comparison to control group. Therefore, these formulations exhibited promising anti-herpetic activity, with emphasis in the potentiality of mangiferin in the control of infection by strain AR-29, aciclovir resistant.

Candida spp. são leveduras comensais que em situações de imunossupressão podem causar desde infecções superficiais até quadros sistêmicos graves. O fluconazol age inibindo a via de biossíntese do ergosterol e é considerado o fármaco de escolha para o tratamento de candidíases, entretanto, a frequente seleção de cepas dose-dependentes ou resistentes é uma limitação que necessita ainda ser superada. Nesse sentido, estudos de compostos obtidos a partir de plantas apresentam-se promissores devido à sua ampla disponibilidade e fácil acesso. Poincianella pluviosa são leguminosas amplamente distribuídas na Caatinga e detentoras de inúmeras propriedades terapêuticas, como atividade anti-inflamatória e antioxidante. Tendo em vista a urgência na busca de novas substâncias antimicrobianas, atrelada à necessidade de redução da probabilidade de seleção de cepas resistentes, esse trabalho teve como objetivo avaliar o potencial antifúngico do extrato da casca de P. pluviosa (sibipiruna), isolado e em combinação com fluconazol, sobre células planctônicas e sésseis de diferentes espécies de Candida spp. Inicialmente, os perfis de sensibilidade de diferentes frações do extrato foram determinados para as células planctônicas de 5 cepas ATCC e 16 isolados clínicos obtidos a partir de múltiplos sítios anatômicos. A concentração inibitória mínima foi determinada pelo teste de microdiluição em caldo e variou entre 1000 μg/mL para o extrato bruto e entre 1000 μg/mL for the crude extract and

Os animais são os principais reservatórios de patógenos zoonóticos, muitos destes albergando não somente genes de virulência, mas também genes que conferem resistência aos beta-lactâmicos como os codificadores de beta-lactamases de espectro estendido (ESBL). Tanto patógenos produtores de ESBLs como outros antimicrobianos como colistina e fosfomicina vem sendo detectados em humanos, e ultimamente, estudos relatam cada vez mais frequentes na população bacteriana circulante em animais de produção. Isso pode indicar que essas enzimas não são menos prevalentes em outros animais do que em humanos, mas que elas podem não ter sido amplamente procuradas na microbiota animal. Por isso, o objetivo deste estudo foi analisar a distribuição da resistência aos antimicrobianos (ESBL, fosfomicina e colistina), e a distribuição dos fatores de virulência (FV) em E. coliisoladas de 98 carcaças de frango comercializadas no sul do Brasil, e assim avaliar seu risco zoonótico. Um total de 409 amostras de E. coli foram isoladas e submetidas à detecção de genes que codificam FV descritos em E. coli patogênica extraintestinal (ExPEC). O teste de suscetibilidade antimicrobiana foi realizado por difusão em ágar, e a caracterização genotípica pela reação em cadeia da polimerase (PCR). As amostras apresentaram resistência a múltiplas drogas (MDR), além da presença de isolados produtores de ESBL (29%), colistina (0,7%) e a fosfomicina (0,7%). As maiores prevalências de FV foram observadas nos isolados pertencentes aos grupos CTX-M quando comparadas as demais linhagens sensíveis ou mesmo nas amostras com outros tipos de resistência, sendo que 58% dos isolados produtores de ESBL possuiam três a cinco genes de virulência. Além disso, observou-se que E. coli produtoras de ESBL têm 2,18 vezes mais chances de apresentar três a cinco genes de virulência do que as não produtoras de ESBL. Outro dado importante encontrado neste estudo foi a conjugação bem-sucedida de E. coli produtora de ESBL isolada de carcaça de frango com um isolado receptor (E. coli J53), sugerindo que os determinantes genéticos que codificam as enzimas CTX-M podem ter se originado de isolados bacterianos animais e poderiam ser transmitidos para a microbiota humana através da cadeia alimentar. Assim, a carne de frango pode abrigar E. coli MDR, contendo tanto genes de resistência quanto de virulência, o que se torna um problema de saúde pública. Animals are the main reservoir of zoonotic pathogens, and the detection of extended-spectrum ?-lactamases (ESBL) among Escherichia coli isolates has increased greatly in recent years. Both ESBLs-producing and others antimicrobials such as colistin and fosfomycin have been detected in humans, and recent studies have reported them more and more frequently in the bacterial population circulating in producing animals. This may indicate that these enzymes are no less prevalent in others animals than in humans, but they may not have been widely sought. Therefore, the aim of this study was to analyze the distribution of resistant genes (ESBL-producing, fosfomycin and colistin) and virulence factors (VF), in E. coli isolated from 98 chicken carcasses commercialized in southern Brazil to evaluate their zoonotic risk. A total of 409 E. coli strains were isolated and genes encoding VF described in extraintestinal pathogenic E. coli (ExPEC) were detected. The antimicrobial susceptibility test was also performed by diffusion in agar and molecular characterization by the polymerase chain reaction (PCR). The samples showed multidrug resistance (MDR), besides the presence of ESBL-producing isolates, resistance to colistin and fosfomycin. The highest prevalence of VF were observed in the isolates belonging to the CTX-M groups when compared to the others sensitive strains or even in the samples with other types of resistance, whereas 58% of ESBL-producing harbored three to five virulence genes. In addition, ESBL-producing E. coli were found to be 2.18 times more likely to present three to five virulence genes than non-ESBLs. Another important finding in this study was the successful conjugation of ESBL-producing E. coli isolated from chicken carcass with a receptor bacteria (E. coli J53), suggesting that the genetic determinants encoding the CTX-M enzymes may have originated from animal bacterial isolates and could be transmitted to humans microbiota through the food chain. Thus, chicken meat can carry MDR E. coli, containing both resistance and virulence genes, which becomes a public health problem.

Bactérias multirresistentes representam um grande problema que desafiam a saúde pública em encontrar estratégias utilizando os antimicrobianos atuais disponíveis no mercado para combater estas infecções. Por outro lado, o desenvolvimento de novos fármacos não ocorre no mesmo ritmo dos mecanismos de resistência desenvolvidos pelas bactérias. A resistência aos antimicrobianos não é apenas um problema da área clínica. No setor de alimentos diversos patógenos humanos vêm adquirindo resistência aos desinfetantes utilizados na indústria alimentícia. Sendo assim, pesquisadores buscam por novas substâncias antimicrobianas que podem auxiliar no tratamento das infecções multirresistentes pelo desenvolvimento de alternativas aos antibióticos e aos desinfetantes disponíveis. Os produtos naturais e a associação de compostos tornaram-se um importante campo de pesquisa para descoberta de novos antimicrobianos. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a atividade antibacteriana de nanopartículas de prata biologicamente sintetizada pelo fungo Fusarium oxysporum em associação ao eugenol. Eugenol e bio-AgNP demonstraram efeito bactericida, com concentração inibitória mínima (MIC) entre 0.12 a 2% (v/v) e 39.4 a 630 ?M, respectivamente; e todos os isolados clínicos de Staphylococcus aureus meticilina resistente (MRSA) analisados foram sensíveis aos compostos. Para a curva de crescimento e morte, eugenol agiu em menos de 2 h, enquanto as nanopartículas levaram de 0.5 a 1 h para eliminar totalmente as bactérias Gram-negativas e 24 h para as Gram-positivas. O efeito sinérgico ou aditivo foi observado quando os compostos foram combinados, com redução dos valores de MIC, para ½ MIC, 1/3 MIC ou até mesmo ¼ MIC, o que melhorou o tempo de ação da bio-AgNP comparado ao uso em isolado. A Microscopia Eletrônica de Varredura demonstrou alterações morfológicas celulares após os tratamentos com os compostos em isolado ou em combinação. No ensaio de biofilme, a combinação dos compostos reduziu em 5-log o número de células. As bio-AgNP associadas ao eugenol, composto derivado do óleo de cravo, são alternativas antimicrobianas que neste estudo demonstraram um importante papel contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, incluindo também cepas multirresistentes, além de atuar contra o biofilme formado por estas bactérias. Sendo assim, podem ser uma estratégia alternativa para o controle de infecções, e apresentam um potencial não somente na área clínica/hospitalar, mas também aplicação na indústria. Multidrug resistant bacteria are a major public health challenge in finding strategies using the current antibiotics available in the market to fight these infections. On the other hand, the development of new drugs does not occur in the same rhythm as the resistance mechanisms developed by bacteria. Antimicrobial resistance is not only a clinical problem. In the food sector, several human pathogens have been acquiring resistance to disinfectants used in the food industry. Therefore, researchers are looking for new antimicrobial that can effort in the control of multidrug resistant infections, developing alternatives to the available antibiotics and disinfectants. Natural products and the association of compounds have become an important field of research for discovery new antimicrobials. The aim of this research was to evaluate the antibacterial activity of eugenol in association of silver nanoparticles biologically synthesized by a fungal Fusarium oxysporum. Eugenol and bio-AgNP showed bactericidal effect against all strains tested; with minimal inhibitory concentrations (MIC), ranging from 0.12 to 2% (v/v) and 39.4 to 630 ?M respectively and all clinical isolates of methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) analyzed were sensitive to the compounds. Time-kill curves showed eugenol acted in less than 2 h, while the metallic nanoparticles took 0.5 h to 1 h to eliminate Gram-negative bacteria and 24 h to kill Gram-positive bacteria. A synergistic or additive effect was observed when the compounds were combined, which improved the time of action compared to bio-AgNP used alone and MIC reduction was to ½, 1/3 or ¼ MIC. Scanning Electron Microscopy (SEM) showed related morphological alterations in cells exposed to the compounds isolated or in combination. Biofilm lethality assay were able to reduce in 5-log cells the biofilm-formed. The bio-AgNP associated with eugenol, a compound derived from clove oil, are antimicrobial alternatives that in this study demonstrated an important role against Gram-positive and Gram-negative bacteria, also including multidrug resistant strains, besides acting against the biofilm formed by these bacteria. Thus, they may be an alternative for the control of infections, not only in the clinical or hospital area, but also in the industry.

Doenças transmitidas pela água são originadas em sua maioria por contato com patógenos entéricos, sendo o grupo das Escherichia coli diarreiogênica (DEC) um importante agente de infecções gastrointestinais em adultos e crianças. Assim, esse estudo teve como objetivo avaliar a qualidade microbiológica e físico-química de 58 amostras de água in natura para consumo, coletadas de poços rasos e minas em um assentamento rural na região sul do Brasil. Os isolados de E. coli foram caracterizados genotipicamente dentro dos patotipos de DEC, pela investigação de genes de virulência (eae, bpfA, stx1, stx2, Lt, St-Ia, St-Ib, ipaH, aaiA, aaiC, aatA e aggR), pela técnica da PCR e caracterizados fenotipicamente quanto a formação de biofilme e adesão em células HEp-2. Todas as amostras apresentaram contaminação por coliformes totais e 36 (62,1%) por E. coli. Foram identificadas DEC em 6,89% das amostras de água que apresentaram E. coli: três (5,17%) ETEC e uma (1,72%) EAEC. Em células HEp-2, EAEC apresentou adesão agregativa e as três cepas de ETEC apresentaram diferentes padrões de adesão: adesão difusa, adesão agregativa e adesão não definida. Todas as DEC foram formadoras de biofilme. Dois isolados de ETEC apresentaram resistência a ampicilina e tetraciclina, uma ETEC, a aminoglicosídeos. EAEC foi sensível a todos os antibióticos testados. De acordo com a filogenia, todas as ETEC foram classificadas no filogrupo B1 e a EAEC no filogrupo E. Os sorotipos encontrados em nosso estudo foram: EAEC O24:H21e ETEC OR:H21, O17:H46 e O6:H12. As análises físico-químicas mostraram que todas as amostras estavam dentro dos parâmetros normais de flúor e 13 (22,4%) apresentaram resultados acima do padrão permitido de turbidez. A presença de E. coli e DEC nas amostras de água analisadas indica a necessidade de adoção de medidas que evitem a contaminação da água fornecida à população do assentamento rural analisado, evitando assim, a transmissão de doenças. Water-borne diseases are mostly caused by contamination with enteric pathogens, and bacteria in the diarrheagenic Escherichia coli (DEC) group are important agents of gastrointestinal disease in adults and children. The aim of this study was to evaluate the microbiological and physicochemical quality of 58 in natura water samples collected from shallow wells and mines in a rural settlement in southern Brazil. E. coli isolates were characterized genotypically according to DEC pathotypes by investigating virulence genes (eae, bpfA, stx1, stx2, Lt, St-Ib, St-Ib, ipaH, aaiA, aaiC, aatA, and aggR) by PCR. Antibiotic resistance, biofilm formation, and adherence in HEp-2 cells were also characterized. All water samples presented contamination with total coliforms, and 36 (62.1%) with E. coli. DEC was identified in 6.89% of the water samples with E. coli: three (5.17%) with enterotoxigenic E. coli (ETEC), and one (1.72%) with enteroaggregative E. coli (EAEC). Regarding adherence patterns, EAEC showed aggregative adherence, whereas various ETEC strains presented diffuse, aggregative, and non-defined adherence. All DEC strains were biofilm forming. Concerning antibiotic resistance, two isolates of ETEC showed resistance to ampicillin and tetracycline, and one isolate showed resistance to aminoglycosides. The EAEC isolate was sensitive to all antibiotics tested. Based on the phylogeny, all ETEC isolates were classified into phylogenetic group B1, whereas the EAEC isolated clustered with the E phylogenetic group. The serotypes identified in our study were EAEC O24:H21 and ETEC: ONT:H21, O17:H46, and O6:H12. The physical-chemical analysis showed that all water samples were within normal fluorine parameters; however, measured turbidity was above the permitted standard in 13 (22.4%) samples. The presence of E. coli and DEC in water samples indicates the need to take action to prevent contamination of water resources accessed by people in this rural settlement to prevent the transmission of diseases.

As doenças transmitidas pela água, como a diarreia causada pela Escherichia coli diarreiogênica (DEC), são um dos principais problemas de saúde pública nos países em desenvolvimento. Nesse contexto, este trabalho analisou a qualidade microbiológica de amostras de água utilizadas para consumo humano provindas de minas e poços rasos do norte do Estado do Paraná, no Brasil, além de caracterizar genotípica e fenotipicamente as cepas de DEC isoladas. Das 210 amostras estudadas, 153 (72,9%) apresentaram coliformes totais e 96 (45,7%) E. coli e dessas, 27 (28,1%) apresentavam DEC, sendo 13 (48,1%) E. coli produtora de toxina Shiga (STEC), oito (29,6%) E. coli enteroagregativa (EAEC), quatro (14,8%) E. coli enteropatogênica (EPEC), uma (3,7%) E. coli enterotoxigênica (ETEC) e uma (3,7%) E. coli enteroinvasora (EIEC). Foram encontrados 25 sorotipos diferentes e um isolado de EPEC atípica apresentou o sorotipo O44037:H7, pela primeira vez relatado no Brasil. Em relação ao filogrupo, 17 (63%) pertenciam ao B1, cinco (18,5%) ao C, três (11,1%) ao B2 e dois (7,4%) ao E. Em células HEp-2, 25 DEC (92,6%) foram aderentes e a adesão agregativa foi a mais prevalente, 20 (74%), e todas DEC formaram biofilme. As 13 cepas de STEC produziram efeito citotóxico em células Vero e quatro (14,8%) DEC foram resistentes a um dos antibióticos testados. Os resultados demostram que a água é um importante reservatório de DEC, podendo atuar como fonte de infecção para humanos e animais, e que medidas de prevenção como a proteção de minas e poços rasos e o tratamento da água devem ser adotadas, evitando assim, contaminações. The water-transmitted diseases, as gastroenteritis caused by diarrheagenic Escherichia coli (DEC), are the most important public health concern in development countries. In the context, this study analyzed the microbiological quality of water samples used to human consumption from water mines and shallow wells in the North of Parana State, Brazil, besides characterizing genotype and phenotypically the isolated DEC strains. Among 210 analyzed samples, 153 (72.9%) were contaminated by total coliforms and 96 (45.7%) by E. coli, being that 27 (28.1%) presented DEC features: the Shiga toxin-producing E. coli (STEC) gene was identified in 13 (48.1%), Enteroaggregative E. coli (EAEC) gene in eight (29.6%), EPEC Enteropathogenic E. coli (EPEC) gene in four (14,8%), Enterotoxigenic E. coli (ETEC) in one (3.7%) and Enteroinvasive E. coli (EIEC) gene in one (3.7%). It was found 25 different serotypes and one isolate of atypical EPEC presented serotype O44037: H7, for the first time reported in Brazil. In relation to phylogroup, 17 (63%) belonged to B1, 5 (18.5%) to C, 3 (11.1%) to B2 e 2 (7.4%) to E. In HEp-2 cells, 25 DEC (92.6%) were adherent and aggregative adhesion was the most prevalent, 20 (74%), and all DEC formed biofilm. The thirteen STEC strains produced cytotoxic effect in Vero cells and 4 (14.8%) of isolated DEC samples were resistent to one tested antibiotic. The results showed that the water is an important recharge of DEC, and may act as infection source to humans and animals. Prevent tools as mines and shallow wells protection and water treatment should be adopted to avoid contamination.

Escherichia coli diarreiogênica (DEC) representa um dos principais agentes causadores de diarreia em suínos. As enterites bacterianas acarretam prejuízos econômicos importantes na suinocultura brasileira, e por este motivo, o presente estudo teve como objetivo, isolar DEC de suínos, e caracterizar seus principais genes de virulência, resistência aos antimicrobianos e capacidade de adesão em células HeLa. Um total de 172 cepas de E. coli foram isoladas, a partir de 87 animais, de 10 granjas de suínos na região norte do estado do Paraná. Dessas amostras, 76% apresentaram resistência a pelo menos uma classe de antimicrobianos, tendo destaque para o Sulfametoxazol + Trimetoprima (60%), e Tetraciclina (56%). No ensaio de adesão em células HeLa, 50% das amostras apresentaram adesão do tipo localizada em células HeLa, e na Reação em Cadeia de Polimerase (PCR), 53 amostras apresentaram um ou mais genes de virulência de DEC. Dentre os patotipos encontrados, foram obtidos isolados de ETEC (11,6%), EAEC (6,9%), STEC (5,8%), EPEC (4,6%), EHEC (3,5%) e EIEC (1,2%), onde o gene de virulência mais encontrado foi STa, em 8,13% das amostras testadas. A presença de alguns patotipos como EIEC e EAEC, mesmo que minoritárias, nos chama a atenção, uma vez que esses patotipos estão em emergência em doenças humanas. Diarrheogenic Escherichia coli (DEC) represents one of the main agents causing diarrhea in pigs. As bacterial enterites, it causes significant economic depressions in Brazilian pig farms, for this reason, this study aimed to isolate DEC from pigs and to characterize their main virulence genes, antimicrobial resistance and adhesion capacity in HeLa cells. A total of 172 strains of E. coli were isolated, from 87 animals, from 10 pig farms in the northern region of the state of Paraná. Of these samples, 76% presented resistance to at least one class of antimicrobials, with emphasis on Sulfamethoxazole + Trimethoprim (60%) and Tetracycline (56%). In the HeLa cell adhesion assay, 50% of the strains showed localized adhesion. A total of 53 strains had one or more DEC virulence genes detected by PCR. Among the pathotypes isolates, were isolated ETEC (11.6%), EAEC (6.9%), STEC (5.8%), EPEC (4.6%), EHEC (3.5%) and EIEC (1.2%) and the most virulent gene founded was STa, in 8.13% of the samples tested. The presence of some pathotypes such as EIEC and EAEC, even if minority ones, draws attention to us, since these pathotypes are in emergency in human diseases.

Para estabelecer uma infecção bem-sucedida, os microrganismos desenvolveram estratégias para invadir as células do hospedeiro. Esse mecanismo de patogenicidade garante um nicho patogênico privilegiado para a multiplicação do patógeno, protegendo-o de antimicrobianos e das respostas defensivas do hospedeiro. Um dos mais importantes patógenos humano e o maior causador de infecções do trato urinário, Escherichia coli, ainda não possui seus mecanismos de invasão integralmente compreendidos. O estudo dessas estratégias é fundamental para o desenvolvimento de alternativas de prevenção e tratamento desse tipo de infecções, e para isso o primeiro passo na pesquisa é detectar se a bactéria é capaz de invadir a células hospedeira. As técnicas para a detecção de invasão bacteriana utilizadas hoje possuem desvantagens que atrasam o andamento das pesquisas, sendo laboriosas, demandando longa espera para obtenção de resultados e/ou de alto custo financeiro. Assim, esse trabalho teve como propósito apresentar uma nova forma de detecção de invasão bacteriana em células de linhagem, baseada em um método enzimático fluorogênico. O foco dessa técnica foi a detecção de invasão de E. coli a células HeLa, explorando a β-glucuronidase, enzima constitutiva específica dessa bactéria. Essa enzima faz a hidrólise do substrato chave desse trabalho, 4-metilumbeliferil-β-D-glucuronídeo (MUG), produzindo um composto fluorogênico, o 4-metilumbeliferona (4-MU). A curva de fluorescência criada através do método, analisada pelos teste estatísticos, demonstrou que a detecção de invasão pode ser feita após 5 horas de incubação com o MUG. Quando amostras de E. coli Uropatogênica e E. coli provinda de microbiota de pessoas saudáveis foram testadas, o método proposto nesse trabalho apresentou resultados mais coerentes do que os resultados obtidos por detecção de invasão por contagem de colônias, utilizado na pesquisa atualmente. A detecção pelo método enzimático fluorogênico, em comparação com outras técnicas de detecção de invasão bacteriana existentes, demonstrou ser uma alternativa mais acessível por ser menos laboriosa, com obtenção mais rápida de resultados, mais sensível. To establish a well-succeeded infection, microorganisms have developed strategies to invade host cells. This pathogenicity mechanism ensures a privileged pathogenic niche for multiplication of the microorganism, protecting it against the action of antimicrobials and host immune response. One of the most important human pathogens and the greatest cause of urinary tract infections, Escherichia coli, still do not have its invasion mechanisms fully understood. Thus, the study of these strategies is essential for developing prevention and treatment alternatives aiming this type of infection, and for that, the first step in research is to detect whether or not the bacterium is capable to invade the host cell. The techniques used today to detect bacterial invasion to cells have disadvantages, being laborious, demanding long waiting for results and/or high financial cost, which delay research progress. This work aims to present a new approach for detecting bacterial invasion to lineage cells, based on an enzymatic-fluorogenic method. The focus of this technique is the detection of E. coli invasion to HeLa cells, exploring β-glucuronidase, the specific constitutive enzyme of this bacterium. This enzyme hydrolyses the key substrate of this work, 4-methylumbelliferyl-β-D-glucuronide (MUG), producing a fluorogenic compound, 4-methylumbelliferone (4-MU). The fluorescence curve created by this method, analyzed by Tukey statistical test, demonstrated that this detection can be efficiently realized after 5 hours incubation with MUG. When testing uropathogenic E. coli and E. coli isolated form human gastrointestinal microbiota, the proposed method presented results that were more logical than the results exhibited from detection by plate counting. Detection by this enzymatic-fluorogenic method compared to other existing bacterial invasion detection techniques is less burdensome, faster, highly sensitive and an affordable alternative, due to not require high financial investment.

Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) é um patógeno causador de doenças gastrointestinais, particularmente em pacientes imunocomprometidos, resultando em significativa morbidade e mortalidade. Assim, o trabalho teve como objetivo verificar a prevalência de EAEC em pacientes hospitalizados infectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) no estado do Paraná, Brasil. EAEC foi pesquisada em 275 cepas oriundas de fezes diarreicas de 55 pacientes PVHA (pessoa vivendo com HIV/Aids) do Hospital Universitário da Universidade Estadual de Londrina, através da pesquisa de genes de virulência pela técnica da PCR, teste de aderência em células HEp-2, biofilme, sorotipagem, teste de sensibilidade a antimicrobianos e filogenia. EAEC foi detectada em 14 (25,4%) pacientes PVHA e todas as amostras apresentaram o padrão de adesão agregativo em células HEp-2 e foram classificadas em três grupos filogenéticos: A (35,7%), B1 (42,9%) e D (21,4%). Nelas ainda, foram identificados 12 sorotipos diferentes: O168:H4, O105ab:H6, O59: H19, O59:H6, O120:H25, O43:H2, O159:H?, O145:H34, O32:H14, O8:H51, O175: H28, O44:H18. Foi verificada a resistência intermediaria em três cepas (21,4%) para Cefalotina e duas (14,3%) foram resistentes para Trimetropin/Sulfametoxazol. Foram classificadas como formadoras de biofilme 13 cepas (92,9%). Ainda as EAEC identificadas foram classificadas em dois grupos: EAEC tipica quando apresentava o gene aggR (57,1%) e EAEC atipica quando não apresentava esse gene (42,9%). Destaca-se o ineditismo deste trabalho uma vez que é o primeiro no Brasil a pesquisar EAEC em pacientes PVHA com diarreia e os resultados mostraram uma alta prevalência de EAEC neste grupo. Enteroaggregative Escherichia coli (EAEC) is a pathogen that causes gastrointestinal diseases, particularly in immunocompromised patients, resulting in significant morbidity and mortality. This study aimed to verify the prevalence of EAEC in hospitalized patients infected with the human immunodeficiency virus (HIV) in the state of Paraná, Brazil. EAEC was investigated in 275 E. coli isolates from diarrheal stools from 55 PLWHA (people living with hiv/Aids) patients hospitalized in the University Hospital of the State University of Londrina. EAEC was characterized and the presence of virulence factors evaluated using by PCR, a HEp-2 cell adherence test, and assays for biofilm formation, serotyping, and sensitivity to antimicrobials, along with analysis of phylogeny. EAEC was detected in 14 (25.4%) PLWHA patients. All strains detected exhibited an aggregate adhesion pattern in HEp-2 cells and were classified into three phylogenetic groups: A (35.7%), B1 (42.9%), and D (21.4%). In addition, 12 different serotypes were identified: O168:H4, O105ab:H6, O59:H19, O59:H6, O120:H25, O43:H2, O159:H-, O145:H34, O32:H14, O175:H28, and O44:H18. Intermediate resistance for cephalothin was verified in three strains (21.4%) and two (14.3%) were resistant to trimethoprim/sulfamethoxazole. Thirteen strains (92.9%) were classified as biofilm forming agents. In addition, the EAECs were classified into two groups according to the presence of the aggR gene: EAEC typical (aggR-positive; 57.1%) and atypical EAEC (aggR-negative; 42.9%). It stands out the novelty of this work since it is the first in Brazil to research EAEC in HIV infected patients with diarrhea and the results demonstrate a high prevalence of EAEC in this group.

A mastite bovina é uma grave enfermidade veterinária que causa grande perda para a indústria de laticínios em todo o mundo. Ela é uma das principais doenças infecciosas, e é de difícil tratamento e controle. Além disso, o surgimento de bactérias multirresistentes que causam a mastite tem complicado o seu controle. O radical livre óxido nítrico (NO) é um potente agente antimicrobiano. Assim, o objetivo deste estudo foi sintetizar partículas poliméricas doadoras de NO, e avaliar a atividade antibacteriana contra cepas de Staphylococcus aureus (MBSA) e Escherichia coli (MBEC) isoladas de mastite bovina. Quinze isolados de MBSA e quinze de MBEC foram obtidos de vacas com mastite bovina subclínica e clínica. Partículas poliméricas biocompatíveis compostas de alginato/quitosana, ou quitosana/tripolifosfato de sódio (TPP), foram sintetizadas e utilizadas para encapsular o ácido mercaptosuccínico (MSA), que é uma molécula contendo tiol. A nitrosação de grupo tiol em partículas contendo MSA formaram as partículas S- nitroso-MSA, que são doadores de NO. A cinética de liberação das partículas de S- nitroso-MSA mostrou liberação de NO constante e controlada durante várias horas. A atividade antibacteriana das partículas liberadoras de NO foi avaliada pela incubação das nanopartículas com uma cepa de MBSA multirresistente, o qual é responsável por causar mastite bovina. Ensaios de atividade anti-biofilme na formação e em biofilmes maduros foram realizados utilizando as cepas de S. aureus e as partículas poliméricas de S-nitroso-MSA liberadoras de NO. A concentração mínima inibitória das partículas de S-nitroso-MSA-alginato/quitosana contra cepas de MBSA variou de 125 a 250 µg/mL. As mesmas nanopartículas apresentaram atividade anti-biofilme nas concentrações de 250 e 500 µg/mL para as cepas de MBSA. Os resultados indicam que o uso de partículas poliméricas doadoras de NO é uma interessante alternativa para combater a resistência bacteriana no tratamento e prevenção da mastite bovina. Bovine mastitis is a serious veterinary disease that causes great loss to the dairy industry worldwide. It is a major infectious disease and is difficult to manage and control. Furthermore, emerging multidrug resistant bacteria that cause mastitis have complicated such management. The free radical nitric oxide (NO) is a potent antimicrobial agent. Thus, the aims of this study were to prepare and evaluate the antibacterial activity of nitric oxide-releasing polymeric particles against Staphylococcus aureus (MBSA) and Escherichia coli (MBEC), which were isolated from bovine mastitis. Fifteen MBSA isolates and fifteen MBEC were collected from subclinical and clinical bovine mastitis. Biocompatible polymeric particles composed of alginate/chitosan or chitosan/sodium tripolyphosphate (TPP) were prepared and used to encapsulate mercaptosuccinic acid (MSA), which is a thiol-containing molecule. Nitrosation of thiol groups of MSA-containing particles formed S-nitroso- MSA particles, which are NO donors. The NO release kinetics from the S-nitroso- MSA particles showed sustained and controlled NO release over several hours. The antibacterial activity of NO-releasing particles was evaluated by incubating the particles with an MBSA multi-resistant strain, which is responsible for bovine mastitis. Anti-biofilm activity assays on the formation and mature biofilms were performed using nitric oxide-releasing S-nitroso-MAS polymeric particles and S. aureus strains. The minimum inhibitory concentration for S-nitroso-MSA-alginate/chitosan particles against MBSA ranged from 125 ?g/mL to 250 ?g/mL. The same nanoparticles showed anti-biofilm activity at the concetrations of 250 e 500 µg/mL against MBSA strains. The results indicate that NO-releasing polymeric particles are an interesting approach to combating bacteria resistance in bovine mastitis treatment and prevention.

O queijo artesanal é amplamente consumido no Brasil, no entanto por, em sua maioria, ser fabricado com leite cru, pode estar contaminado com bactérias patogênicas. A presença de fungos e bactérias é um problema para o setor industrial, visto que pode ocasionar defeitos nos queijos, e levar a consideráveis perdas econômicas. Neste estudo, avaliamos a presença de Escherichia coli e Staphylococcus aureus em queijos artesanais oriundos de diferentes estados do Brasil e, posteriormente, analisamos a atividade antimicrobiana do óleo essencial de orégano (OEO), e da associação de méis de Scaptotrigona bipunctata Lepeletier 1836 (HSB) e de Apis mellifera Latreille africanizada (HAM), no controle de microrganismos contaminantes de queijos durante o processo de maturação. A partir de 147 amostras de queijos, foram identificados 25 isolados de S. aureus (10 amostras de queijo) e 39 de E. coli (29 amostras de queijos). Entre esses isolados, destacamos a presença de um isolado de E. coli enteropatogênica atípica (aEPEC), e dois isolados de E. coli patogênica extraintestinais (ExPEC). Um novo sorotipo (O64474:H8) de E. coli foi detectado em um desses queijos, sendo o primeiro relato no Brasil. Um dos isolados de E. coli mostrou resistência a três importantes antimicrobianos (tetraciclina, ampicilina e ácido nalidíxico), e um isolado de S. aureus apresentou resistência a cinco antimicrobianos (ampicilina, estreptomicina, cefoxitina, penicilina e ciprofloxacina. Alguns desses isolados de E. coli e S. aureus foram utilizados como bactérias contaminantes dos queijos contendo antimicrobianos naturais (OEO ou méis). Fungos filamentos (Aspergillus sp., Fusarium sp. e Penicillium sp.) também foram utilizados para contaminar os queijos produzidos e maturados por 30 dias, seguindo diferentes tratamentos. O OEO a 0,02 % (v/v) demonstrou alta atividade antibacteriana e antifúngica, reduzindo as populações bacterianas à zero até o sexto dia de maturação, e inibindo a germinação dos esporos fúngicos. Já a combinação dos méis (HSB 5% e HAM 25%, v/v) também apresentou atividade antibacteriana, reduzindo a população de E. coli e S. aureus a zero após 15 e 6 dias, respectivamente, bem como a germinação dos fungos. A utilização desses antimicrobianos naturais foi muito eficiente para os microrganismos testados durante a maturação, e o OEO assim como a combinação de méis pode ser uma interessante alternativa para os antimicrobianos convencionais (nisina e natamicina) contra importantes patógenos, como o novo sorogrupo de E. coli isolado nesses queijos artesanais. Raw milk cheese is widely consumed in Brazil, however, because most of it is made with raw milk, it may be contaminated with pathogenic bacteria. The presence of fungi and bacteria is a problem for the industry as well, since they can cause defects in cheeses, besides economic losses. In this study, we evaluated the presence of Escherichia coli and Staphylococcus aureus in raw milk cheeses from different Brazilian states, and after we evaluated the antimicrobial activity of the essential oil of oregano (OEO), and the association of honeys of Scaptotrigona bipunctata Lepeletier 1836 (HSB) and Apis mellifera Latreille africanized (HAM), in the control of poisoning microorganisms from cheeses during maturation process. From 147 cheese samples, 25 isolates of S. aureus (from 10 cheese samples) and 39 of E. coli (from 29 cheese samples) were identified. Among these isolates, we highlight the presence of one atypical enteropathogenic (aEPEC) isolate, and two extraintestinal pathogenic E. coli (ExPEC) isolates. A new E. coli serotype (O64474:H8) was detected on one of those cheeses, as the first report in Brazil. One E. coli isolate was resistant to three important antimicrobials (tetracycline, ampicillin and nalidixic acid), and one S. aureus isolate showed resistance to five antimicrobials (ampicillin, streptomycin, cefoxitin, penicillin and ciprofloxacin). Some of these E. coli and S. aureus isolates were used as contaminants of the cheeses with natural antimicrobials (OEO and honeys). Filamentous fungi (Aspergillus sp., Fusarium sp. And Penicillium sp.) were also used to contaminate cheeses produced and matured for 30 days, following different treatments. The OEO 0.02% (v/v) showed high antibacterial and antifungal activity, reducing the bacterial populations to zero until the sixth day of maturation, and inhibition of fungal spores germination. The combination of honeys (HSB 5% and HAM 25%, v/v) also showed antibacterial activity, reducing the population of E. coli and S. aureus to zero after 15 and 6 days, respectively, as well as germination of the fungi. The use of these antimicrobials was very efficient for the microorganisms tested during maturation, and the OEO and the combination of these honeys can be a interesting alternative for the conventional antimicrobials (nisin and natamycin) against importante pathogens as the new E. coli serotype found in these raw milk cheeses.

Isolados de Escherichia coli uropatogênica podem possuir fatores específicos de virulência como adesinas, proteases, toxinas, sistemas de captura de ferro e fatores protetores contra o sistema imunológico, proporcionando maior capacidade de adaptação a novos ambientes e colonização, tornando-se o principal agente etiológico das infecções do trato urinário. A relação entre a resistência aos antimicrobianos e a virulência em cepas de E. coli, tem sido documentada, sugerindo uma associação genética importante. O objetivo deste estudo foi comparar a frequência dos principais fatores de virulência em UPEC sensíveis e multirresistentes aos antimicrobianos. Foram estudadas 50 cepas de E. coli multirresistentes (UPEC MDR), 50 cepas UPEC sensíveis aos antimicrobianas (UPEC não-MDR) e 52 amostras de E. coli de microbiota de origem fecal. A pesquisa dos principais genes de virulência foi feita por reação em cadeia da polimerase. Foram investigados 15 genes de virulência, nas cepas UPEC MDR, os genes mais prevalentes foram: iutA (70,0%), traT (58,0%), fyuA (44,0%), tsh (42,0%) e papC (32,0%). Os genes de vrulencia mais prevalentes nas cepas UPEC não-MDR foram traT (68,0%), fyuA (68,0%), kpsII (58,0%), hlyA (58,0%), iutA (40,0%). Em cepas de E. coli comensais foram detectados os genes cvaA (55,8%), fyuA (48,08%) e traT (32,7%). Observou-se que as ilhas de patogenicidade estavam mais presentes na UPEC MDR, e que os isolados patogênicos pertenciam principalmente ao grupo filogenético B2, diferente das cepas comensais pertencentes aos grupos B1 e A. Os resultados dos testes fenotípicos mostraram maior capacidade de invasão (34%) nos isolados patogênicos em relação aos isolados comensais (8%) além disso UPEC MDR é um forte produtor de biofilme em comparação com UPEC não-MDR e E. coli comensal. Estudos que correlacionam resistência e virulência favorecem uma melhor compreensão da patogênese desses microrganismos. Por conseguinte, estes dados confirmam que as amostras de UPEC multiresistentes podem ser mais virulentas do que as cepas UPEC não-MDR e E. coli comensais, alertando para o perigo da disseminação destas cepas e reforçando a importância da caracterização da resistência e virulência da UPEC. Isolates of uropathogenic Escherichia coli may have specific virulence factors such as adhesins, proteases, toxins, iron capture systems and protective factors against the immune system, providing greater adaptability to new environments and colonization, becoming the main etiological agent of urinary tract infections. The relationship between antimicrobial resistance and virulence in E. coli strains has been documented, suggesting an important genetic association. The objective of this study was to compare the frequency of the main virulence factors in susceptible and multiresistant UPEC to antimicrobials. Fifty strains of multiresistant E. coli (UPEC MDR), 50 antimicrobial susceptible strains (UPEC non-MDR) and 52 E. coli samples of fecal microbiota were studied. The main virulence genes were investigated by polymerase chain reaction. The most prevalent genes were: iutA (70.0%), traT (58.0%), fyuA (44.0%), tsh (42.0%) and PapC (32.0%). The most prevalent virulence genes in the non-MDR UPEC strains were traT (68.0%), fyuA (68.0%), kpsII (58.0%), hlyA (58.0%), iutA %). In E. coli strains the cvaA (55.8%), fyuA (48.08%) and traT (32.7%) genes were detected. It was observed that the pathogenicity islands were more present in the UPEC MDR, and that the pathogenic isolates belonged mainly to phylogenetic group B2, different from the commensal strains belonging to groups B1 and A. The results of the phenotypic tests showed a greater capacity of invasion (34%) in pathogenic isolates compared to commensal isolates (8%) in addition UPEC MDR is a strong producer of biofilm compared to UPEC non-MDR and E. coli commensal. Studies that correlate resistance and virulence favor a better understanding of the pathogenesis of these microorganisms. Therefore, these data confirm that multi-resistant UPEC samples may be more virulent than non-MDR UPE and E. coli commensal strains, alerting to the danger of dissemination of these strains and reinforcing the importance of the UPEC resistance and virulence characterization.

O leite bovino é um alimento rico em nutrientes consumido mundialmente, e é utilizado como matéria-prima para produção de diversos produtos lácteos com o envolvimento de microrganismos, dentre eles as bactérias ácido láticas (LAB), que são as principais utilizadas. Esses alimentos são submetidos à diversas etapas de fabricação, onde sofrem a interferência de contaminantes biológicos, incluindo Escherichia coli e Staphylococcus aureus, afetando a qualidade do alimento. Esses microrganismos são importantes contaminantes, devido sua capacidade de causar infecções e intoxicações no homem. O objetivo deste estudo foi padronizar um sistema de Reação em Cadeia da Polimerase – multiplex (multiplex-PCR) para detecção de Escherichia coli diarreiogênica (DEC) em leite bovino, e avaliar a ação antibacteriana do óleo essencial de orégano (OEO) e de três tipos de méis (Scaptotrigona postica – SP, Scaptotrigona bipunctata - SB e Apis mellifera - Apis) contra LAB, E. coli e S. aureus. Para a padronização da multiplex-PCR foram utilizados os iniciadores stx2 e elt para detecçao de E. coli produtora de Shiga-toxina (STEC) e E. coli enterotoxigênica (ETEC), respectivamente. As quantidades celulares testadas foram 101 a 109 UFC mL-1 de leite “Ultra-High-Temperature” (UHT) e leite pasteurizado, ambos desnatados. O sistema de multiplex-PCR utilizado demonstrou detecção de E. coli a 109 UFC mL-1, tanto para o leite UHT quanto para o leite pasteurizado. Esses resultados indicam que a multiplex-PCR pode ser utilizada para detecção de E. coli dirreiogênica no leite, porém em uma concentração bacteriana acima de 109 UFC mL-1. Para avaliar a ação antibacteriana do OEO e dos méis, foram determinadas a concentração inibitória mínima (MIC), a concentração bactericida mínima (MBC) e atividade antibacteriana das bacteriocinas produzidas por LAB. Os testes realizados para os compostos naturais demonstraram importante atividade antibacteriana do OEO e dos méis SP e SB. Foi possível notar que o OEO apresenta uma ação antibacteriana mais potente que os méis. No entanto, essa ação antibacteriana é similar para as LAB e para os microrganismos patogênicos, indicando que o uso desses compostos em produtos lácteos fermentados deve ser controlada. Não foi possível detectar a MIC do mel Apis. Não foi possivel determinar a atividade antibacteriana das bacteriocinas. Dessa forma, o uso de OEO e méis de abelhas indígenas sem ferrão (SP e SB) são interessantes como antimicrobianos naturais para solucionar as contaminações microbianas no leite. Bovine milk is a food rich in nutrients consumed worldwide, and is used as raw material for the production of various dairy products with the involvement of microorganisms, among them lactic acid bacteria (LAB), which are the main ones used. These foods are subjected to several stages of manufacture, where they suffer the interference of biological contaminants, including Escherichia coli and Staphylococcus aureus, affecting the quality of the food. These microorganisms are important contaminants due to their ability to cause infections and poisoning in humans. The objective of this study was to standardize a Polymerase Chain Reaction – multiplex (multiplex-PCR) system for the detection of diarrheogenic Escherichia coli (DEC) in bovine milk and to evaluate the antibacterial action of oregano essential oil (OEO) and three types of honey (Scaptotrigona postica - SP, Scaptotrigona bipunctata - SB and Apis mellifera - Apis) against LAB, E. coli and S. aureus. For the standardization of the multiplex-PCR primers stx2 and elt were used for the detection of E. coli producing Shiga-toxin (STEC) and E. coli enterotoxigenic (ETEC), respectively. The cellular amounts tested were 101 to 109 UFC mL -1 of Ultra-High-Temperature (UHT) milk and pasteurized milk, both skimmed. The multiplex-PCR system showed detection of E. coli at 109 CFU mL-1 for both UHT and pasteurized milk. These results indicate that the multiplex-PCR can be used for detection of DEC in milk, but at a bacterial concentration above 109 CFU mL-1. To evaluate the antibacterial action of OEO and honeys, the minimum inhibitory concentration (MIC), the minimum bactericidal concentration (MBC) and the antibacterial activity of the bacteriocins produced by LAB were determined. The tests performed for the natural compounds demonstrated important antibacterial activity of OEO and of the SP and SB honey. It was possible to note that OEO has a more potent antibacterial action than honey. However, this antibacterial action is similar for LAB and for pathogenic microorganisms, indicating that the use of these compounds in fermented dairy products should be controlled. It was not possible to detect the MIC of honey Apis. It was not possible to determine the antibacterial activity of bacteriocins. Thus, the use of OEO and bee honeys without sting (SP and SB) are interesting as natural antimicrobials to solve microbial contaminations in milk.

A produção brasileira de carne de frango destaca-se no cenário do agronegócio. Em decorrência do sistema intensivo de produção, os aspectos sanitários são um desafio ao setor. O uso de antimicrobianos na produção tem levado a seleção de bactérias resistentes. Escherichia coli faz parte da microbiota normal de mamíferos e aves, porém algumas cepas podem causar doenças em humanos e animais dependendo de seu perfil de virulência. Escherichia coli patogênica para aves (APEC) é agente da colibacilose, doença que acarreta altas perdas econômicas para indústria avícola. Este trabalho teve como objetivo a investigação de um surto de colibacilose aviária. Foram selecionadas 60 amostras bacterianas, sendo 14 APECs isoladas de frangos de corte acometidos por colibacilose, 15 amostras de E. coli pertencentes à microbiota intestinal de frangos saudáveis, 22 provindas da cama de aviário e nove amostras do galpão de criação. Foram analisados quanto ao perfil de resistência aos antimicrobianos e os testes de susceptibilidade mostraram alta frequência de resistência a quase todos os compostos testados, com 67% das amostras multirresistentes. Uma exceção foram as fluorquinolonas, onde 98.4% das amostras permaneceram sensíveis. Das 60 amostras, 47 eram E. coli produtoras de ESBL. O grupo de genes do tipo CTX-M-1 foi o mais frequente encontrado associado com o fenótipo ESBL, e somente uma amostra (1.6%) pertencente à cama de frango apresentou positividade para o gene mcr-1. A classificação filogenética mostrou que os grupos D e A foram predominantes e entre os genes de virulência, o gene iutA foi o prevalente (71.6%). A clonalidade entre as amostras foi investigada por meio de Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus Sequences (ERIC- PCR), mostrando que as amostras foram agrupadas em quatro grupos clonais, com alta variabilidade genética entre elas. Estes resultados mostram que as aves e o ambiente de criação podem ser possíveis reservatórios de genes de virulência e resistência, com possibilidade de transferência genética entre micro-organismos durante a produção, e consequentemente risco zoonótico, sendo de grande importância na avicultura à elaboração de programas de monitoramento da presença desses genes e o uso racional de antimicrobianos para minimizar o aparecimento de doenças e a disseminação de cepas multirresistentes. The Brazilian chicken meat production stands out in the agribusiness scenario. Because of the intensive production system, the health aspects are a challenge to the sector. The use of antimicrobials in chicken production has led to the selection of resistant bacteria. Escherichia coli are part of the normal mammalian and avian microbiota and can cause diseases in both humans and animals depending on their virulence profile. Bird pathogenic Escherichia coli (APEC) is an agent of colibacillosis, a disease that causes high economic losses to the poultry industry. The aim of this study was to investigate the profiles of antimicrobial resistance, virulence genes and verify the clonality of E. coli strains. To this, were available sixty bacterial isolates, being fourteen APEC isolates from chickens affected by colibacillosis, fifteen E. coli isolates from the microbiota of healthy broiler chickens, twenty-two from the poultry litter and nine isolates from the poultry house. These were analyzed for the verify the antimicrobial resistance profile, including extended-spectrum beta-lactamases (ESBLs) phenotype and the resistance to colistin (gene mcr-1), phylogenetic classification, beta-lactams resistance genes and the presence of virulence genes, and also the clonality between the strains through Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus Sequences (ERIC-PCR). Phylogenetic classification showed that groups D and A were more frequents and among virulence genes, the iutA gene was the most prevalent (71.6%). Antimicrobial susceptibility testing showed a high frequency of resistance to almost all compounds tested, with 67% of the isolates multiresistant. An exception was the fluoroquinolones, where 98.4% of the isolates remained sensitive. Among the sixty strains, 47 (78.3%) isolates were E. coli- producing ESBL. The group of CTX-M-1 type genes was the most frequently found associated with the ESBL phenotype, and just one sample (1.6%) of poultry litter showed positivity for mcr-1 gene. The ERIC-PCR analysis showed that the isolates were group into four clonal groups, showing low clonality between them. These results shows that avian and the breeding environment may be possible reservoirs of virulence and resistance genes, with the possibility of genetic transfer between microorganisms during production and consequently zoonotic risk, being of great importance in the poultry production the development of programs that monitor the presence of these genes and apply the rational use of antimicrobials to minimize the onset of diseases and the spread of multiresistant strains.

Os probióticos são microrganismos vivos que quando administrados em quantidades adequadas conferem benefícios para a saúde do hospedeiro, impedindo a colonização e invasão de patógenos no intestino. Lactobacillus é um dos principais agentes probióticos utilizados na prevenção de infecções e na restauração da microbiota intestinal. Salmonella enterica sorovariedade Typhimurium é um importante agente causador de infecção intestinal de origem alimentar. O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade protetora do Lactobacillus rhamnosus produtor de exopolissacarídeos (EPS) contra a invasão in vitro e in vivo por S. Typhimurium. Para isso foi realizada a pesquisa de bacteriocinas, ensaios de adesão e invasão celular in vitro. Para o teste de desafio em camundongos BALB/c, realizou-se análise histopatológica e microbiológica do fígado, baço, placas de Peyer e íleo. Os resultados mostraram que os lactobacilos foram capazes de produzir compostos antimicrobianos contra S. Typhimurium. Estes lactobacilos inibiram a adesão e invasão de S. Typhimurium em células HeLa e HEp-2, respectivamente. O ensaio de desafio no modelo murino mostrou uma diminuição da translocação do patógeno para o baço e fígado de camundongos tratados com probiótico, bem como a proteção no tecido intestinal íleo de camundongos (análise histopatológica). Esses resultados mostraram que os ensaios in vitro são interessantes para avaliação prévia de candidatos a probióticos. Probiotics are live microorganisms that when administered in suitable amounts confer benefits to the host's health, preventing colonization and invasion of pathogens in the intestine. Lactobacillus is one of the main probiotic agents used in the prevention of infections and in the restoration of the intestinal microbiota. Salmonella enterica serovar Typhimurium is an important agent causing food-borne intestinal infection. The aim of this study was to evaluate the protective capacity of the exopolyssaccharide- producing Lactobacillus rhamnosus (EPS) against invasion in vitro and in vivo by S.Typhimurium. The bacteriocins research, in vitro cell adhesion and invasion assays were carried out. For the challenge in BALB/c mice, histopathological and microbiological analysis of the liver, spleen, Peyer's patches and ileus were performed. The results showed that lactobacilli were able to produce antimicrobial compound against S. Typhimurium. These lactobacilli inhibited the adhesion and invasion of Salmonella in HeLa and HEp-2 cells, respectively. The challenge assay in the murine model showed a decrease the pathogen translocation in the spleen and liver from mice treated with probiotic as well as protection of ileus intestinal tissue from mice lactobacilli-treated (histopathological analysis). These results showed that in vitro assays are of interest for prior evaluation of probiotic applicants.

A criptococose é uma doença infecciosa fúngica potencialmente fatal, cosmopolita, que acomete mamíferos domésticos, animais silvestres e o homem; os sintomas clínicos podem variar de infecção pulmonar assintomática à doença disseminada e meningite. A criptococose é causada por leveduras do gênero Cryptococcus, pertencentes aos complexos C. gattii sensu lato (s.l.) e C. neoformans sensu lato (s.l.). Esta enfermidade constitui-se em uma das principais causas de morbidade e mortalidade de indivíduos imunocomprometidos, principalmente aqueles portadores de HIV/AIDS. Entretanto, esses patógenos também são agentes oportunistas importantes em pacientes com câncer e naqueles que se submetem às terapias imunossupressoras, procedimentos médicos invasivos ou utilizam antibióticos de amplo espectro. Além disso, relatos de criptococoses em indivíduos imunocompetentes têm emergido mundialmente. Embora não seja um fator de virulência clássico, a capacidade de formar biofilme tem contribuído consideravelmente na virulência de muitas espécies de fungos, sendo relacionado com a persistência de infecções e diminuição da sensibilidade aos agentes antimicrobianos. Apesar da importância de C. gattii s.l na perspectiva clínica, o conhecimento sobre os mecanismos envolvidos na formação de biofilme por este complexo é escasso. Diante disso, este trabalho teve como objetivo determinar a capacidade de formação de biofilme por C. gattii s.l., a caracterização fenotípica e a identificação de possíveis genes envolvidos no seu desenvolvimento. A capacidade de formação do biofilme foi avaliada em superfície de poliestireno a 37 ºC por 48 horas em isolados clínicos e ambientais de C. gattii s.l., e a biomassa foi determinada por coloração com cristal violeta. A cinética do desenvolvimento do biofilme foi determinada em superfície de poliestireno e vidro nos tempos de 6, 12, 48, 72 e 96 horas por C. gattii ATCC 24065, determinada pela quantificação da biomassa e da atividade metabólica, por cristal violeta e redução do XTT, respectivamente. A estrutura do biofilme foi determinada por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e microscopia de varredura confocal a laser (MVCL). Para a identificação de genes envolvidos na formação do biofilme, C. gattii ATCC 24065 foi incubado a 37 ºC por 48 horas, e utilizado para obtenção do RNA para determinar o perfil transcricional durante o desenvolvimento do biofilme por sequenciamento de RNA (RNA-seq). Nossos resultados mostraram que C. gattii s.l apresenta a capacidade de formar biofilme em diferentes superfícies; além disso, a cinética da formação apresentou um aumento exponencial da biomassa entre os tempos de incubação de 24 e 96 horas, enquanto que a atividade metabólica teve o seu aumento entre 24 e 72 horas. Os resultados de MEV mostraram que entre 0 e 12 horas as células leveduriformes encontraram-se aderidas à superfície, com aumento gradativo de densidade celular; em 24 horas houve o início da formação de matriz exopolissacarídica (EPS); e em 96 horas o biofilme apresentou-se como agregado celular embebidos na EPS. Imagens de MCLV, em 72 horas de incubação, mostraram o biofilme como uma monocamada de 8 micrômetros de espessura, composto por células metabolicamente ativas envoltas pela EPS. A avaliação do perfil transcricional, após o tratamento estatístico, mostrou um total de 321 genes diferencialmente expressos durante a formação do biofilme. Destes, 98 genes apresentaram-se como hiperexpressos, enquanto 223 estavam subexpresso. Dos 98 genes, com expressão aumentada, após análise das possíveis funções, 38 corresponderam a proteínas não caracterizadas, 35 corresponderam a proteínas ribossomais e proteínas componentes da estrutura do ribossomo e 25 corresponderam a proteínas caracterizadas. Sendo assim, nossos resultados mostraram que, além da capacidade de formar biofilme, o complexo C. gattii s.l. apresenta um aparato de regulação consistente, indicando centenas de genes envolvidos no desenvolvimento desta estrutura. Cryptococcosis is a fungal disease, potentially fatal, that affect domestic mammals, wild animals and humans. Clinical symptoms diverge from asymptomatic infection to disseminated lung disease, and meningitis. Cryptococcosis is caused by encapsulated yeast of Cryptococcus genus, belonging to complex C. gattii sensu lato (s.l.) and C. neoformans sensu lato (s.l.). This disease is one of the main causes of morbidity and mortality in immunocompromised individuals, particularly those with HIV / AIDS. However, these pathogens are also important opportunistic agents in cancer patients and those submitted to immunosuppressant therapies, invasive medical procedures or use broad-spectrum antibiotics. In addition, reports of cryptococcosis in immunocompetent individuals have emerged worldwide. The ability to form biofilm has contributed considerably to virulence in many species of fungi, associated with persistent infections, and sensitivity reduction of antimicrobial agents. Despite the clinical importance of C. gattii s.l., knowledge about the mechanisms involved in biofilm formation by this complex is scarce. Thus, this study aimed to determine the ability of C. gattii s.l. to form biofilm, phenotypic characterization and identification of involved genes in its development. The ability of biofilm formation by environmental and clinical isolates of C. gattii s.l. was evaluated in polystyrene surface at 37 ° C for 48 hours, and biomass was determined by Crystal Violet staining. The kinetics of biofilm development was determined in polystyrene and glass surfaces at times of 6, 12, 48, 72 and 96 hours by C. gattii ATCC 24065, determined by biomass quantification and metabolic activity, by crystal violet staining and XTT reduction, respectively. The biofilm structure was determined by scanning electron microscopy (SEM) and confocal laser scanning microscopy (CLSM). To identify genes involved in biofilm formation, C. gattii ATCC 24065 was incubated at 37 ° C for 48 hours and used to obtain the RNA to determine the transcriptional profile during biofilm development by RNA sequencing (RNA-seq). Our results showed that C. gattii s.l. has the ability to form biofilms on different surfaces. In addition, the kinetics of biofilm formation showed an exponential biomass between 24 and 96 hours of incubation, whereas the metabolic activity had its increase between 24 and 72 hours. SEM results showed that between 0 and 12 hours, the yeast cells were found adhered to the surface with a gradual increase in cell density; 24 hours t was observed the beginning of exopolysaccharide (EPS) matrix formation; and within 96 hours the biofilm presented itself as a cell aggregated embedded in EPS. CLSM images, in 72 hours of incubation, showed biofilm as a monolayer of 8 micrometers thick, composed of metabolically active cells surrounded by EPS. The evaluation of transcriptional profile, after statistical analysis, showed a total of 321 differentially gene expressed during biofilm formation. Of these, 98 genes were presented as overexpressed, while 223 were underexpressed. Of the 98 genes with increased expression, after possible functions analysis, 38 corresponded to uncharacterized proteins, 35 corresponded to ribosomal proteins and structural components of the ribosome and 25 corresponded to characterized proteins. Thus, our results showed that, in addition to ability to form biofilms, the C. gattii s.l. complex presents a consistent control apparatus, indicating hundreds of genes involved in the structural developing of biofilm.

Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) têm sido um patógeno comumente associado a pacientes HIV positivos, viajantes e presente em surtos alimentares, contudo sua pesquisa em fontes de água ainda é bastante escassa. Diante disso, o presente trabalho teve por objetivo investigar e caracterizar o patotipo EAEC em 750 isolados de E. coli oriundos de 250 amostras de água destinadas ao consumo não tratadas e coletadas de 21 municípios na região Norte do estado do Paraná entre os meses de janeiro de 2012 a dezembro de 2014. No teste de adesão, 84% dos isolados foram classificados como EAEC por apresentarem o padrão de aderência agregativo (AA) nas células HEp-2. Dos quatro genes de diagnóstico pesquisados (aatA, aggR, aaiA and aaiC), apenas o aaiC foi encontrado em 7,2% dos isolados. No teste deformação de biofilme, 72,4% dos isolados apresentaram formação de biofilme e destes 95,6% pertenciam ao patotipo EAEC. Os 18 isolados positivos ao aaiC foram também testados para oito genes de virulência associados com EAEC, resistência a antimicrobianos e análise filogenética. Apenas três genes de virulência astA (72,2%), shf (22,2%) e pic (5,6%) foram detectados. Resistência foi verificada apenas para os antibióticos ampicilina (38,9%) e cefalotina (11,1%). Na análise filogenética, os filogrupos B1(61,1%) e A (22,2%) foram os mais prevalentes. Os resultados encontrados mostras que a água para consumo é um importante reservatório para EAEC em nosso meio ambiente. O teste de adesão em células epiteliais ainda é de grande importância na identificação deste patotipo e a pesquisa de novos marcadores para de detectar EAEC é necessária. Além disso, a presença de diferentes perfis de virulência e características fenotípicas em cepas EAEC é de grande preocupação para a saúde pública, principalmente por estas cepas poderem ser transmitidas diretamente para humanos, animais e alimentos. Enteroaggregative Escherichia coli (EAEC) is a pathogen commonly associated with HIV-positive patients, travelers and present in food poisoning outbreaks, but it has not been greatly researched in water sources. Therefore, the present work aimed to investigate and characterize the EAEC pathotype in 750 E. coli isolates from 250 samples of drinking water untreated collected from 21 municipalities in north of Paraná State between January 2012 and December 2014. In the adhesion test, 84% of the isolates were classified as EAEC for presenting the aggregative adherence (AA) pattern in HEp-2 cells. Of the four diagnostic genes researched (aatA, aggR, aaiA and aaiC), only aaiC was found in 7.2% isolates. In the biofilm formation test 72.4% isolates presented biofilm formation and of these 95.6% belonged to EAEC pathotype. The 18 aaiC positive isolates were tested for eight virulence genes associated with EAEC, antimicrobial resistance and phylogenetic analysis. Only the virulence genes astA (72,2%), shf (22,2%) and pic (5,6%) were detected. Resistance was verified only for the antibiotics ampicillin (38,9%) and cephalothin (11,1%). In phylogenetic analysis, the phylogroups B1(61.1%) and A (22.2%) were the most prevalent. The results found show that drinking water is an important reservoir for EAEC in our environment. The adhesion test on epithelial cells is still of great importance in identifying this pathotype and the research of new molecular markers to detect EAEC is necessary. In addition, the presence of different virulence profiles and phenotypic characteristics in EAEC strain is of great concern for public health, mainly because these strains may be transmitted directly to humans, animals and foods.

Resistência bacteriana aos antimicrobianos convencionais é um sério problema clínico e de saúde pública, que desafia as decisões terapêuticas. Portanto, são extremamente necessários a pesquisa e o desenvolvimento de novos antimicrobianos com potencial para combater bactérias multirresistentes. Compostos derivados de plantas, animais ou microrganismos, substâncias em nanoescala e combinação de antimicrobianos têm sido propostos como alternativas antimicrobianas. Estudos têm mostrado que o óleo essencial de orégano (OEO) e nanopartículas (NPs) de prata apresentam potente ação antimicrobiana; no entanto, as características organolépticas marcantes deste óleo e a evolução de resistência a NPs de prata limitam suas aplicações. Com o objetivo de minimizar os fatores de limitação já descritos, esta pesquisa avaliou o efeito antibacteriano do OEO combinado a NPs de prata produzidas por Fusarium oxysporum (bio-AgNP) contra bactérias Gram positivas e negativas, incluindo cepas multirresistentes. OEO e bio-AgNP foram bactericidas para todas as cepas testadas, e as faixas de concentração inibitória mínima (CIM) foram de 0,298 − 1,193 mg/mL (0,03 − 0,12%, v/v) (OEO) e 62,5 − 250 µM (bio-AgNP). As curvas de crescimento e morte bacterianas monstraram que o OEO elimina a população em 0,17 h (10 min) e bio-AgNP em 4 h para Gram negativa e 24 h para Gram positiva. A combinação dos dois compostos resultou em efeito antibacteriano sinérgico e aditivo, reduzindo significativamente os valores de CIM de ambos compostos em comparação aos tratamentos com os antimicrobianos sozinhos. A interação entre OEO e bio-AgNP também apresentou tempo de ação reduzido quando comparado ao uso de bio-AgNP individualmente; sendo pelo menos 0,33 h (20 min) ou 7 h, para Gram negativa e positiva respectivamente. A análise da morfologia por microscopia eletrônica de varredura revelou que as células de Staphylococcus aureus que receberam os três tratamentos (OEO, bio-AgNP e combinação de ambos) apresentaram alterações morfológicas similares caracterizadas como protusões na superfície celular, e que não estavam presentes no controle bacteriano não tratado. Os tratamentos levaram à redução da densidade celular bacteriana e reduziram a quantidade de matriz exopolissacarídica comparada ao controle. Tanto o OEO como bio-AgNP apresentaram baixa atividade hemolítica, especialmente nas CIMs. O ensaio de MTT indicou que os dois agentes antimicrobianos afetaram células HEp-2. Este estudo descreve, pela primeira vez, interação sinérgica e aditiva entre OEO e bio-AgNP contra bactérias multirresistentes, como S. aureus resistente à meticilina (MRSA) e cepas produtoras de betalactamase de espectro extendido (ESBL) e carbapenemase como Escherichia coli e Acinetobacter baumannii, respectivamente. Esses resultados indicam que esta combinação pode ser uma estratégia alternativa para o controle de infecções com pouca ou nenhuma opção de tratamento, além de minimizar a seleção de cepas resistentes e ter potencial para ser aplicado em indústrias e ambientes clínicos e/ou hospitalares. Bacterial resistance to conventional antibiotics is a clinical and public health problem and have defied therapeutic decisions. Therefore, it is crucial the research and development of new drugs for controlling emergence of antibiotic-resistant strains and for killing such microorganisms. Compounds derived from plants, animals or microorganisms, nanodrugs and antimicrobial combination have been proposed as alternative antimicrobials. Studies have shown that oregano essential oil and silver nanoparticles have potent antimicrobial action; however, the stronger organoleptic characteristics of the oil and the development of resistance to these metal nanoparticles limit their applications. This research evaluated the antibacterial effect of oregano essential oil (OEO) combined with silver nanoparticles produced by Fusarium oxysporum (bio-AgNP), against Gram positive and negative bacteria, including multidrug-resistant strains. OEO and bio-AgNP showed bactericidal effect against all tested strain, with minimum inhibitory concentration (MIC) ranged from 0.298 to 1.193 mg/mL (0.03 − 0.12%, v/v) (OEO) and from 62.5 to 250 µM (bio-AgNP). Time-kill curves showed that oregano oil eliminated bacterial population at 0.17 h (10 min) of treatment and bio-AgNP at 4 h and 24 h for Gram negative and Gram positive respectively. The combination of both compounds resulted in synergistic or additive, significantly reducing the MIC values of them when compared to antimicrobials used alone; besides reduced time of action compared to bio-AgNP individually, 7 h for Gram positive and 0.33 h (20 min) for Gram negative. Analysis by scanning electron microscopy revealed that Staphylococcus aureus cells exposed to three different treatments (OEO, bio-AgNP and combination of both) had similar morphological changes which appear as protrusions on the cell surfaces and were not present on untreated bacterial control. Individual and combination treatments led to reduction of bacterial cell density and decreased exopolysaccharides matrix compared to the control. OEO and bio-AgNP showed low hemolytic activity, especially at MIC values. MTT assay indicated that the two antimicrobial agents affect HEp-2 cells. This study describes for the first time the synergistic and additive interactions between OEO and bio-AgNP against multidrug-resistant bacteria, as methicillin-resistant S. aureus (MRSA) strains and extended spectrum betalactamases (ESBL) and carbapenemases-producing Escherichia coli and Acinetobacter baumannii, respectively. These results indicate that this combination can be an alternative strategy in infection control with few or no treatment option, minimizing selection of resistant strains, and has potential for application in industrial and clinical or hospital environments.

O uso de antimicrobianos na avicultura, utilizados tanto para fins terapêuticos e profiláticos quanto como promotores de crescimento, tem levado a seleção de cepas resistentes. Escherichia coli tem sido utilizada como indicadora de resistência aos antimicrobianos e de patogenicidade na avicultura. Este trabalho teve como objetivo analisar o perfil de sensibilidade aos antimicrobianos e pesquisar genes de virulência em amostras de E. coli isoladas de carcaças de frango. Na primeira parte deste trabalho foram estudadas amostras de E. col iisoladas de carcaças de frango de granja, sendo 84 amostras isoladas em 2007 e 121 amostras isoladas em 2013. Essas amostras foram analisadas quanto a classificação filogenética, presença de genes de virulência e perfil de sensibilidade aos antimicrobianos, incluindo pesquisa de betalactamases de espectro estendido (ESBL). Entre os genes de virulência pesquisados, o gene iutA foi o mais prevalente em ambos os grupos de amostras (66.6% em 2007 e 54.5% em 2013). Em 2013 houve um aumento da frequência de resistência para a maioria dos antimicrobianos analisados, além da presença de 39 amostras de E. coli produtoras de ESBL. Na segunda parte, foram estudadas 35 amostras de E. coli isoladas de frango caipira e 121 amostras de E. coli isoladas de frango de granja, isoladas em 2013. Foram analisados quanto a classificação filogenética, genes de virulência, perfil de sensibilidade aos antimicrobianos, incluindo a pesquisa de ESBL e AmpC. Os resultados mostraram que as amostras isoladas de frango de granja apresentam um maior número de fatores de virulência pesquisados e maior frequência de resistência aos antimicrobianos. Apenas as amostras isoladas de frango de granja apresentaram E. coli produtoras de ESBL e AmpC. Diante disso, notamos um aumento na frequência de resistência aos antimicrobianos em bactérias isoladas de frangos de granja. O restrito uso de antimicrobianos na produção de frango caipira pela agricultura familiar pode estar relacionada com a baixa frequência de resistência e virulência em bactérias isoladas de carnes de frango. The use of antimicrobials in poultry, both as therapeutic and prophylactic and as growth promoters has led to selection of antimicrobial resistant strains. Escherichia coli has been used as bio-indicator of antimicrobial resistance and pathogenicity in poultry. This study was aimed the antimicrobial sensitivity profile and search of virulence genes in E. coli isolated from chicken carcasses. In the first part, were studied E. coli strains isolated from commercial conventional chicken carcasses, being 84 strains isolated in 2007 and 121 strains isolated in 2013. These strains were analyzed for phylogenetic classification, presence of virulence genes and susceptibility to antimicrobials profile, including search of extended spectrum beta-lactamases (ESBL). Among the virulence genes surveyed, the iutA gene was the most prevalent in both groups of strains (66.6% in 2007 and 54.5% in 2013). In 2013 there was an increased in the frequency of resistance to majority of antimicrobials tested, and the presence of 39 strains of ESBL-producing E. coli. In the second part, we studied 35 strains of E. coli from free-range poultry and 121 E. coli strains from conventional poultry. They were analyzed for phylogenetic classification, virulence genes, susceptibility to antimicrobials profile, including research to ESBL and AmpC. The results showed that the strains isolated from conventional poultry have a greater number of virulence factors tested and frequency of antimicrobial resistance. Only strains isolated from conventional poultry showed ESBL/AmpC-producing E. coli. Thus, we note an increase in the frequency of antimicrobial resistance of bacteria isolated from commercial conventional poultry. The restricted use of antimicrobials in free-range poultry by family farmers, may be related with the low frequency of antimicrobials resistance and virulence in bacteria isolated from chicken meat.

Escherichia coli Patogênica Extraintestinal (ExPEC) são amplamente estudadas pois, podem ser associadas com vários agentes patogênicos, tais como infecções do trato urinário, meningite neonatal e sepse. Há muitos fatores de virulência (FV) encontrados em ExPEC tais como papC, papG, ecpA, iroN, fyuA, iutA, ompT, tsh, hlyF, hlyA e iss. Esses fatores podem estar presentes em ilhas de patogenicidade (PAI), que podem codificar vários outros FV. De acordo com a classificação filogenética de Clermont, E. coli podem pertencer aos principais grupos A, B1, B2 e D. As bactérias comensais pertencem principalmente ao grupo A e ExPEC distribuem-se mais no grupo B2. Neste estudo, foi analisada a presença de FV, PAI e grupos filogenéticos de 96 amostras de E. coli isoladas de urina e sangue de pacientes do Hospital Universitário de Londrina, e estas amostras foram comparadas com 50 amostras comensais. Destacou-se o FV fyuA (65,60%) em amostras patogênicas e hlyA (54%) em amostras comensais. A comparação da distribuição de ExPEC e amostras comensais nos grupos filogenéticos mostraram que no grupo B2 tivemos mais ExPEC; por outro lado, o grupo A tinha mais amostras comensais. A distribuição das sete PAIs entre as amostras comensais e ExPEC mostrou que a PAI IV536 (44% e 67,7%) foi a mais encontrada em ambos os locais. Estes resultados mostraram que tanto a caracterização filogenética, a busca de fatores de virulência e a pesquisa de PAI contribuem na análise da patogenicidade das bactérias que causam infecções, auxiliando na compreensão da sua patogênese. Extraintestinal Pathogenic Escherichia coli (ExPEC) are widely studied because they can be associated with various pathogens such as urinary tract infections, neonatal meningitis and septicemia. There are many virulence factors (VF) found in ExPEC which are papC, papG, ecpA, iroN, fyuA, iutA, ompT, tsh, hlyF, hlyA and iss. They may be present in pathogenicity islands (PAI), which can encode several others VF. According to the phylogenetic classification, E. coli belong to the main groups A, B1, B2 or D, whereas commensal bacteria belong mainly to group A and ExPEC distribute themselves more in group B2. In this study, we analyzed the presence of VF, PAIs and phylogenetic groups of 96 ExPEC strains isolated from urine and blood of patients on the University Hospital of Londrina, and we compared with 50 commensal strains. In this study, we highlight the VF fyuA (65.60%) in pathogenic samples and hlyA (54%) in commensal samples. A comparison of the distribution of ExPEC and commensal strains in the phylogenetic groups showed that in the group B2 we had more ExPEC; on the other hand, group A had more commensal samples. The distribution of the seven PAIs between commensal strains and ExPEC strains showed that PAI IV536 (44% and 67.7%) was the most found in both sites. These results showed that both phylogenetic characterization, the search for virulence factors and PAIs research contribute in the analysis of the pathogenicity of the bacteria that cause infections, aiding in the understanding of their pathogenesis.

O surgimento de bactérias multirresistentes é um grave problema na saúde pública mundial. Staphylococcus aureus, incluindo S. aureus meticilina-resistente (MRSA), é um dos mais importantes patógenos humanos associado às infecções hospitalares e comunitárias. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antibacteriana da fração F3 (acetato de etila) obtida de Pseudomonas aeruginosa contra cepas de MRSA. Trinta cepas de MRSA isoladas no Hospital Universitário de Londrina e três cepas padrão de MRSA foram utilizadas neste estudo. As frações semi-purificadas contendo os compostos extracelulares de P. aeruginosa foram obtidas por cromatografia líquida a vácuo. A avaliação da atividade antibacteriana foi realizada através da técnica de disco-difusão em ágar, determinação da concentração inibitória mínima, curva de crescimento-viabilidade e microscopia eletrônica de varredura. A fração F3 (acetato de etila) e sua derivada F3d (diclorometano-acetato de etila) demonstraram atividade antibacteriana frente às cepas de MRSA. A fenazina-1-carboxamida foi identificada e purificada a partir da fração F3d, demonstrando uma discreta atividade antibacteriana contra MRSA, porém quando combinada com nanopartículas de prata produzidas por Fusarium oxysporum apresentou efeito sinérgico. Um composto organohalogenado também foi purificado a partir desta fração mostrando forte efeito antibacteriano. Por meio da microscopia eletrônica de varredura, alterações morfológicas na parede celular das cepas de MRSA foram observadas na presença da fração F3d. Estes resultados sugerem que compostos produzidos por P. aeruginosa podem se tornar uma boa alternativa no controle e tratamento de infecções causadas por MRSA. The emergence of multidrug-resistant bacteria is a great problem in world public health. Staphylococcus aureus, including methicillin-resistant S. aureus (MRSA) strains, is one of the most important human pathogens associated with hospital and community-acquired infections. The aim of this work was to evaluate the antibacterial activity of F3 fraction (ethyl acetate) from Pseudomonas aeruginosa-derived against MRSA strains. Thirty MRSA strains isolated from Hospital Universitário de Londrina, and three standard MRSA strains were used in this study. The semi-purified fractions containing extracellular compounds were obtained by vacuum liquid chromatography. Evaluation of antibacterial activity was performed by agar disc-diffusion technique, determination of the minimal inhibitory concentration, curve of growth-viability and scanning electron microscopy. The F3 (ethyl acetate) fraction and F3d-derived (dichloromethane-ethyl acetate) demonstrated antibacterial activity against the MRSA strains. Phenazine-1-carboxamide was identified and purified from the F3d fraction and demonstrated slight antibacterial activity against MRSA, but when combined with silver nanoparticles produced by Fusarium oxysporum showed synergic effect. Organohalogen compound was also purified from this fraction showing high antibacterial effect. Morphological alterations on cell wall of the MRSA strains with F3d fraction were showed using scanning electron microscopy. These results suggest that P. aeruginosa-produced compounds may be a good alternative control and treatment for MRSA infections.