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The HLA (Human leukocyte antigen) system is an important marker of graft survival.While the importance of HLA-A, -B, and -DR in solid-organ transplantation has been known for many years, the role of HLA-C, HLA-DQ and MICA (major histocompatibility complex MHC class I chain-related gene A) in the transplantation has recently been documented. In this study, we evaluated the allelic and haplotype frequencies of MICA; HLA-A, -B, -C, - DRB1, -DQA1 and -DQB1 in 346 patients, of different ethnicities, with chronic kidney disease (CKD), renal transplant candidates from Northern/Northwestern of Parana State, Southern Brazil. HLA and MICA typing were performed using the polymerase chain reactionsequence specific primer method (PCR-SSO), combined with the Luminex technology. The allelic frequencies of MICA and the linkage disequilibrium with HLA-B alleles were studied in the same samples. The 346 participants were classified according to ethnic group (189 caucasians, 98 mestizos, 50 blacks and 9 orientals). A total of 19 MICA, 20 HLA-A, 29 HLAB and 14 HLA-C, 13 HLA-DRB1, 6 HLA-DQA and 5 HLA-DQB1 allele groups were identified. The most frequent allele groups were MICA*008, HLA-A*02, B*35, C*07, DRB1*04, DQA1*01 and DQB1*03. Significant differences (p

Isozimas de malato desidrogenase (MDH) foram usadas como marcadores moleculares para discriminar e agrupar cladófilos de plantas de uma população clonal de cactus da espécie Opuntia ficus-indica (Cactaceae), conhecida como palma. O padrão eletroforético obtido revelou 8 isozimas MDH e 5 fenótipos eletroforéticos diferentes. A similaridade entre os cladófilos foi estimada usando o coeficiente de similaridade de Jaccard. Essa população clonal estudada foi fundada por somente um propágulo e, após 50 anos, parece ser formada por propágulos assexuais e sexuais. Uma vez que a expressão diferencial de isozimas MDH pode ter um papel significante no metabolismo das células da planta, sugerimos que os cladófilos de palma que foram agrupados com os mais altos valores de similaridade são os mais adequados para serem utilizados em procedimentos de extração industrial de compostos de interesse comercial, porque um mesmo protocolo de extração pode ser mais rapidamente e facilmente padronizado quando se utiliza material geneticamente uniforme. O padrão eletroforético das isozimas MDH pode ser usado como uma ferramenta efetiva para uma análise prévia da similaridade genética entre os cladófilos das plantas de O. ficus-indicaMalate dehydrogenase (MDH) isozymes were used as biochemical markers to discriminate and cluster cladophylls of plants of one clonal population of the prickly pear, Opuntia ficus-indica (Cactaceae). The isozyme electrophoretic patterns obtained with MDH provided 8 isozymes and 5 different electrophoretic phenotypes. Similarity in cladophylls was estimated using Jaccard’s coefficient. This clonal population studied was founded by only one propagule, and after 50 years, it is likely to have been formed by asexual and sexual propagules. Since that differential expression of MDH isozymes could play a significant role in overall plant cell metabolism, we suggest that the cladophylls of prickly pear that were clustered together showing identity or higher similarity are specially a suitable source for industrial procedures of industrial extraction of commercial interest compounds because a same extraction protocols can be most quickly and easily standardized using genetically uniform materials. Electrophoretic patterns of MDH isozymes can be used as an effective tool for previously determine the genetic similarity in the cladophylls of O. ficus-indica plants

Os antígenos HLA- A e B são glicoproteínas de superfície celular, expressos em todas as células nucleadas e responsáveis pela apresentação dos antígenos aos linfócitos T durante o desenvolvimento da resposta imune. Estes antígenos são codificados pelos genes do sistema HLA, o qual caracteriza-se por ser o sistema humano com maior polimorfismo. As especificidades HLA variam entre os diferentes grupos populacionais e étnicos. A população brasileira é decorrente de grande mistura racial. Neste trabalho, as freqüências fenotípicas, gênicas e haplotípicas das especificidades HLA- A e B foram determinadas em indivíduos brancos, saudáveis e não relacionados, das regiões de Curitiba e Norte/Noroeste do Estado do Paraná, e comparações entre a distribuição das especificidades em ambos os grupos foram realizadas. As tipificações HLA foram realizadas pela técnica de microlinfocitotoxicidade. As freqüências HLA foram características do grupo étnico caucasóide, porém miscigenação maior foi observada na população da região norte/noroesteHLA- A and HLA- B antigens are glycoproteins expressed on the surfaces of nuclear cells and responsible for presenting different antigens to T lymphocytes, during immune response. They are codified by the Major Histocompatibility Complex genes and are characterized by their high polymorphism. The HLA polymorphism level varies in different populations and ethnic groups. The Brazilian population is a result of significant racial admixture. In this paper, the antigen, gene and haplotype frequencies of HLA-A and B were analyzed in healthy and unrelated white individuals living in Curitiba and northern region of Paraná, Brazil. The HLA distribution was compared between the two groups. The HLA antigens were typed by microlymphocytotoxicity method. The predominance of the Caucasian component was observed in the distribution of HLA, however the racial admixture showed to be more significant in the northern region

A técnica de Polimorfismo de DNA Amplificado ao Acaso (RAPD) foi utilizada na análise de oito espécies de peixe da família Anostomidae, com a finalidade de quantificar a variabilidade genética e estimar a similaridade genética dentro e entre essas espécies. Os resultados foram comparados com dados obtidos anteriormente com isoenzimas, para a maioria das espécies analisadas. A proporção de locos polimórficos obtida, com dez primers, está acima de 40 %, exceto para Leporinus amblyhynchus. Esse é um fato importante desde que a existência de variabilidade genética é uma condição importante para a sobrevida das espécies no meio ambiente Com dendrograma obtido, através de análise comparativa, foi possível discriminar as duas espécies de Schizodon daquelas do gênero Leporinus, no entanto não foi possível separar L. obtusidens e L. elongatus. A análise de RAPD indica que essas duas espécies são genéticamante muito similares, conclusão também sustentada por dados de estudos de isoenzimasRandom Amplified Polymorphic DNA (RAPD) techniques were applied to eight Anostomidae species to analyze the genetic variability and genetic similarity within and between species. The results obtained were compared to those from isoenzyme analysis executed for many of the species studied. The proportion of polymorphic loci obtained with 10 primers was over 40%, with the exception of Leporinus amblyhynchus. This is especially important since genetic variability is a population feature both for short term fitness of the individual and for the long term survival of populations. Through subsequent analysis of dendrograms it was possible to discriminate the two Schizodon species from those of the genus Leporinus, even though it was impossible to differentiate L. obtusidens and L. elongates. RAPD analysis indicates that the two species are genetically very similar, supported too by isoenzyme data

Isoenzimas esterases foram usadas como marcadores moleculares para discriminar e agrupar sete cultivares "sem nomes" (acessos A-G) de Manihot esculenta. Os cultivares "sem nomes" de mandioca foram comparados com 25 diferentes cultivares (BG) que vêm sendo mantidos na coleção de germoplasma do Departamento de Agronomia, da Universidade Estadual de Maringá. Acetato e propionato de 4-metilumbeliferona e acetato de α–naftil, foram os substratos utilizados para a detecção e análise comparativa das isoesterases. A similaridade entre as plantas, usando o coeficiente de Jaccard, variou de 47,6% até 100%. O dendrograma produzido pela análise de agrupamento mostrou identidade entre as plantas do cultivar BG23 e as plantas do acesso D. As plantas dos acessos B e G também foram agrupadas com o cultivar BG 23, mostrando similaridade de 95% e 89%, respectivamente. As plantas dos acessos A e E foram similares às plantas BG 1, mostrando 95% e 90% de similaridade, respectivamente. As plantas do acesso F foram agrupadas com as plantas do cultivar BG 9, mostrando 94% de similaridade. O dendrograma mostrou também que a maioria dos cultivares foram agrupados com 85-90% de similaridade. Assim, concluímos que as isozimas esterases podem ser utilizadas como marcadores moleculares de genótipos de mandioca, para a caracterização dos cultivares sem nomes de M. esculentaEsterase isozymes were used as molecular markers to discriminate and cluster seven "unnamed" cultivars (accesses A-G) of M. esculenta. The "unnamed" cassava cultivars were compared to 25 different M. esculenta cultivars (cultivars BG), which have been maintained in the germplasm collection of the Agronomy Department, State University of Maringá. 4-Methylumbelliferyl acetate, 4-methylumbelliferyl propionate and α–naphthyl acetate were utilized as substrates for isoesterase detection and comparative analysis. Similarity between plants, using Jaccard’s coefficient, ranged from 47.6% to 100%. A dendrogram produced by cluster analysis showed identity between cultivar BG 23 and plants of accession D. Plants of accesses B and G were also clustered with cultivar BG 23 showing 95% and 89% similarity, respectively. Plants of accesses A and E were similar to BG 1, showing 95% and 90% similarity, respectively. Plants of accession F were clustered with cultivar BG 9, showing 94% similarity. The dendrogram also showed that most of the cultivars were clustered together with 85-90% similarity. Thus, we conclude that esterase isozymes may be used as molecular markers of cassava genotypes for the characterization of “unnamed” cultivars of M. esculenta

The body growth is one of the most important characteristics in the production of fish. It is a complex response involving nutritional, environmental, genetic and endocrine factors. Thus, two experiments were conducted in which the aim of the experiment I was to check in crossed tilapia GIFT x Thai if the polymorphism in the growth hormone (GH) is associated with performance characteristics and gene expression of the growth hormone receptor (GHR) and insulin-like growth factor - I (IGF-I), and also to check if the size of the fish can alter the expression of heat shock protein HSP70. The aim of the experiment II was to evaluate in crossed tilápia GIFT x Thai, the effect of fasting on the expression level of GHR and IGF-I and to examine whether it changes the performance characteristics and muscle growth. In experiment I, the animals were distributed in a completely randomized design in a factorial arrangement, two genotypes: GH single band (GHbs) and GH dual band (GHbd), and two weight categories: 20-35g and 40-70g. Performance characteristics were evaluated: body weight, empty weight, weight of viscera, fillet weight, length, width, fillet yield and fillet/empty carcass ratio. Fragments of caudal fin were collected for genotyping and liver and white muscle samples were collected for analysis of gene expression. It was observed that the characteristics body weight, empty weight, weight of viscera, fillet weight and length showed higher for genotype GHbd; smaller animals, weight category 20-35g, showed higher expression of HSP70 mRNA expression and no relation between GHR mRNA and IGF-I and GHbs and GHbd was observed. Thus, the change of GH may be associated with performance characteristics and the expression of the HSP70 gene may be influenced by the size of the fish. In the experiment II, fish were subjected to a fasting period of 15 days and they were evaluated on days 0 (C0), 5 (C5 and F5), 10 (C10 and F10) and 15 (C15 and F15). C0, C5, C10 and C15: animals that continued to receive food. J5, J10 and J15: fasted animals. The following measurements were obtained: body weight, empty carcass weight, length and width. Samples of liver and white muscle were collected for analysis of mRNA expression of GHR and IGF-I, and white muscle samples were collected for assessment of muscle growth with determining the smallest diameter grouped into different classes. Feed restriction reduced the average of all performance traits, and analyzing fasted tilapia and tilapia that continued receiving food, it was observed that fasting caused increased expression of the GHR hepatic at days 5 and 10, it decreased expression of IGF-I hepatic and increased expression of GHR and IGF -I in white muscle at days 5, 10 and 15. There wasn?t modification of muscle growth when fasted animals were compared with animals that were fed. Thus, the expression of GHR and IGF-I genes in the liver and in white muscle, as well as in the performance, were influenced by fasting. O crescimento corporal é uma das características mais importantes na produção de peixes. É uma resposta complexa que envolve fatores nutricionais, ambientais, genéticos e endócrinos. Deste modo, foram realizados dois experimentos no qual o objetivo do experimento I foi verificar em tilápias do cruzamento GIFT x Tailandesa, se o polimorfismo no hormônio do crescimento (GH) está associado a características de desempenho e à expressão dos genes do receptor do hormônio de crescimento (GHR) e fator de crescimento semelhante à insulina-I (IGF-I), e também verificar se o tamanho dos peixes pode alterar a expressão da proteína do choque térmico HSP70. O objetivo do experimento II foi avaliar em tilápias cruzadas GIFT x Tailandesa, o efeito do jejum sobre o nível de expressão de GHR e IGF-I e analisar se o mesmo altera características de desempenho e o crescimento muscular. No experimento I, os animais foram distribuídos em um delineamento inteiramente casualizado em esquema fatorial, dois genótipos: GH banda simples (GHbs) e GH banda dupla (GHbd), e duas categorias de peso: 20-35g e 40-70g. Características de desempenho foram avaliadas: peso corporal, peso vazio, peso de vísceras, peso do filé, comprimento, largura, rendimento de filé e relação filé/carcaça vazia. Fragmentos de nadadeira caudal foram coletados para a genotipagem e amostras de fígado e músculo branco foram coletadas para análise da expressão gênica. Observou-se que as características peso corporal, peso vazio, peso de vísceras, peso do filé e comprimento apresentaram maiores médias para o genótipo GHbd; animais menores, categoria de peso 20-35g, apresentaram maior expressão de mRNA HSP70 e nenhuma relação entre expressão de mRNA GHR e IGF-I e GHbs e GHbd foi verificada. Assim, a variação do GH pode estar associada a características de desempenho, e a expressão do gene da HSP70 pode ser influenciada pelo tamanho dos peixes. No experimento II, os peixes foram submetidos a um período de jejum de 15 dias, tendo sido avaliados nos dias 0 (C0), 5 (C5 e J5), 10 (C10 e J10) e 15 (C15 e J15). C0, C5, C10 e C15: animais que continuaram recebendo alimento. J5, J10 e J15: animais em jejum. Foram realizadas as seguintes mensurações: peso corporal, peso de carcaça vazia, comprimento e largura. Amostras de fígado e músculo branco foram coletadas para análise da expressão de mRNA GHR e IGF-I, e amostras de músculo branco foram coletadas para avaliação do crescimento muscular, com determinação do menor diâmetro agrupados em diferentes classes. A restrição alimentar reduziu as médias de todas as características de desempenho avaliadas, e analisando tilápias em jejum e tilápias que continuaram recebendo alimentação, observou-se que o jejum causou aumento da expressão de GHR hepático aos 5 e 10 dias, diminuição da expressão de IGF-I hepático e aumento da expressão de GHR e IGF-I no músculo branco aos 5, 10 e 15 dias. Não foi verificado modificação do crescimento muscular quando animais em jejum foram comparados com animais alimentados. Dessa forma, a expressão dos genes GHR e IGF-I no fígado e no músculo branco, assim como o desempenho, sofreram influência do jejum. x, 51 f

Pilosocereus gounellei is common in Semiarid region, which is under the dominion geoecológico Caatinga biome, where it is popularly known as xiquexique. The objective of the present study was to evaluate the genetic diversity and similarity at the DNA level of P. gounellei among samples from the Piauí, Bahia e Rio Grande do Norte States. For the characterization of microsatellite markers were assessed 33 pairs of microsatellite primers developed for different species of cactaceae. Five pairs of microsatellite primers developed for Astrophytum asterias, Polaskia chichipe and Echinocactus grusonii, were selected resulting a 24.24% transferability of these primers for P. gounellei. The polymorphism to average of samples of P. gounellei was 73.05%, the evaluated loci showed 18 alleles, with an average of 3.6 alleles per locus. Seven primer pairs used amplified 703 AFLP markers, of which 700 (99.21%) were polymorphic. The percentage of polymorphic fragments ranged from 95.3% for the primer combination E-AAG/M-CTT to 100% for E-ACC/M-CAT, E-ACC/M-CAA, EAGC/M-CAG, E-ACT/M-CTA, E-ACT/M-CTA e E-AGG/M-CTG. The largest number of informative markers (126) was detected using the primer combination E-AAC/M-CTA, while the E-AAG/M-CTT combination revealed the lowest number of polymorphic fragments (48). Nei's gene diversity was 0.3064. The low value of GST (0.1353) and high amount of gene flow (3.1968) indicate that the genetic differentiation within populations of the three states is higher than among the populations of the three states. In the dendrogram based on the Jaccard similarity coefficient, the samples were divided into two groups. Our results demonstrated that AFLP markers were efficient to genetic characterization in the samples P. gounellei. SSR and AFLP techniques can be applied to estimate the genetic diversity and genetic structure this species. A espécie Pilosocereus gounellei é comum no semiárido nordestino, região sob domínio geoecológico do bioma Caatinga, onde ela é popularmente conhecida como xiquexique. O objetivo do presente trabalho foi estimar a diversidade e similaridade genética em amostras de populações de P. gounellei dos estados do Piauí, Bahia e Rio Grande do Norte, usando as técnicas de marcadores moleculares SSR e AFLP. Para a seleção de marcadores microssatélites, foram avaliados 33 pares de primers microssatélites desenvolvidos para diferentes espécies de cactáceas. Desta avaliação, foram selecionados oito loci microssatélites desenvolvidos para Astrophytum asterias, Polaskia chichipe e Echinocactus grusonii, conferindo uma transferibilidade de 24,24% destes primers para P. gounellei. O polimorfismo médio para as 17 amostras de P. gounellei foi de 73,05%; os loci avaliados apresentaram 18 alelos, com uma média de 3,6 alelos por locus. As sete combinações de primers AFLP geraram 703 fragmentos, dos quais 700 (99,21%) foram polimórficos entre as 21 amostras analisadas. A porcentagem média de loci polimórficos entre as combinações utilizadas variou de 95,3%, para a combinação E-AAG/M-CTT, a 100% para as combinações E-ACC/M-CAT, E-ACC/M-CAA, EAGC/M-CAG, E-ACT/M-CTA, E-ACT/M-CTA e E-AGG/M-CTG. O maior número de loci informativos (126) foi detectado com a combinação E-AAC/M-CTA, enquanto a combinação E-AAG/M-CTT revelou o menor número de bandas informativas (48). O baixo valor do GST (0,1353) e o alto valor de fluxo gênico (3,1968) indicam que a diferenciação gênica dentro das populações dos três estados é maior do que entre as populações dos três Estados. No dendrograma baseado no coeficiente de similaridade de Jaccard, as amostras foram distribuídas em dois grupos. O estudo demonstrou que as técnicas SSR e AFLP podem ser aplicadas para estimar a diversidade genética e verificar como as populações da referida espécie estão geneticamente estruturadas. xvi, 107 f

Sitophilus oryzae, (rice weevil), is a cosmopolitan species of India and considered a pest of great economic importance. In rice, S. oryzae infests wheat, oats, rye, barley, millet, canary seed, sunflower. This pest in one of the most visible threats to sustainable food production. This study aimed to estimate the genetic variability of S. oryzae in three populations, one from the State of Parana, other from Santa Catarina State and another one in Rio Grande do Sul State, based on isozyme electrophoresis, in order to provide subsidies to evolutionary studies and conservation of natural resources. For this, the technique of isozyme electrophoresis in starch gel was used for analysis of eight enzyme systems (AAT, ACP, GDH, GPI, IDH, MDH, ME and PGM). Ten loci and 18 alleles were detected. The average observed heterozygosity was 0.0091, 0.0100 and 0.0000 and the average expected heterozygosity was 0.0419, 0.0452 and 0.0000 for the populations of PR, SC and RS respectively. The percentage of polymorphic loci in populations was 30% of PR and SC 0% of the population not presenting the RS polymorphism. The average number of alleles per locus ranged from 1.4 to 1.0. The estimated values for genetic identify (I) between populations of SC and PR, PR and RS and between populations of SC and RS were I= 0.6892, I = 0.9983 and I = 0,6925, respectively. The Nei´s genetic distance were 0.3722, 0.3675 and 0.0017 for, differences between PR vs. SC, RS VS. SC and PR vs. RS respectively. Sitophilus oryzae, vulgarmente conhecido como gorgulho do arroz, é uma espécie cosmopolita da Índia, considerada uma praga de grande importância econômica. Além do arroz, S. oryzae infesta trigo, aveia, centeio, cevada, milho, alpiste e girassol. Esta praga é uma das ameaças mais visíveis para a produção sustentável de alimentos. Este trabalho teve como objetivo estimar a variabilidade genética de S. oryzae em três amostras, uma do estado do Paraná (PR), uma do estado de Santa Catarina (SC) e uma do estado do Rio Grande do Sul (RS), com base em eletroforese de isozimas, visando ao fornecimento de subsídios para futuros estudos evolutivos e de conservação de recursos naturais. Para isso, foi utilizada a técnica de eletroforese de isozimas em gel de amido para a análise de oito sistemas enzimáticos (AAT, ACP, GDH, GPI, IDH, MDH, ME e PGM). Foram detectados 10 locos enzimáticos e 18 alelos. A heterozigosidade média observada foi de 0,0091, 0,0100 e 0,0000 e a esperada foi de 0,0419, 0,0452 e 0,0000 para as amostras do PR, SC e RS, respectivamente, com porcentagem de locos polimórficos de 30% na amostra do PR, 30% na amostra de SC e 0% na amostra do RS. O número médio de alelos por loco variou de 1,4 a 1,0. Foram estimados também os valores para identidade genética (I): entre as amostras do PR e SC I= 0,6892, entre PR e RS I= 0,9983 e entre SC e RS I= 0,6925. Os valores da distância genética de Nei (1978) foram de 0,3722 entre as amostras de PR E SC; de 0,3675 entre RS e SC; e de 0,0017 entre as amostras de PR e RS. x, 34 f

Sequencing ofthe MRJP3, MRJP5 and MRJP8 genes from Africanized Apis mel4fera In the present study was performed the aliele sequencing ofthe Mrjp3, MrJp5 and mJp8 loci from Africanized A. mellfera selected to produce royal jelly. The genomic DNA was extracted from 20 nurse bees obtained from 7 hives producing royal jeily of the UEM?s genetic bees improvement for royaljeily production, totaling 140 samples. The Mrjp3, Mrjp5 and MrJp8 microsateilite loci were amplified using specific primers. The three loci produced a total of 16 alieles, of which 10 homozygous alieles were sequenced. The mrp3 locus had the C, D, E, F, G sequenced, the Mrj5 had the D, E, F alieles sequenced and the MrJp8 had the C and D alieles sequenced. Ali the sequenced and aiigned alleles showed high similarity with the ones previousiy described. The Mrjp3 alieles that show association with the royal jelly production are being kept in the analyzed matrixes, as the locus has great potential to be considered a molecular marker of the royal jelly production in Africanized A. mellfera. The C, D and E alleles from MrJp5 are also being selected, although their association with the production of royal jelly needs to be analyzed. The MRJP8 has no direct role in the royal jelly production its expression is being detected in the poison glandule and so, its alleles are not being selected. The maintenance of the matrixes carrying the selected alleles of MRJP3 and MRJP5 must be performed using an instrumental insemination program along with the analysis of the royal jelly production in the descending queens and of the selected molecular markers. Sequenciamento dos genes Mrj3, Mrjp5 e Mrjp8 de abelhas Á. mellfera Africanizadas No presente estudo, foi realizado o sequenciamento de alelos dos locos Mrjp3, Mrjp5 e Mrjp8 de Á meilifera Africanizadas, selecionadas para a produção de geleia real O DNA genômico foi extraido de 20 operarias nutrizes provenientes de sete colmeias produtoras de geleia real do programa de melhoramento de abelhas para produção de geleia real da UEM, totalizando 140 amostras Os locos microssatelites Mrjp3, Mrjp5 e Mrjp8 foram amplificados utilizando primers especificos Os três locos produziram um total de 16 alelos, e foram sequenciados 10 alelos em homozigose O loco Mrjp3 teve sequenciados os alelos C, D, E, F e G, o MrJpS os alelos D, E e F e o MrJp8 os alelos C e D. Todos os alelos sequenciados e alinhados, apresentaram alta similaridade com aqueles já descritos anteriormente. Os alelos da MrJp3 que apresentam associação com a produção de geleia real estão sendo mantidos nas matrizes analisadas, este loco tem grande potencial para ser considerado um marcador molecular para produção de geleia real em Á meilifera Africanizada Os alelos C D e E da Mrjp5 tambem estão sendo selecionados, contudo sua associação com a produção de geleia real precisa ser melhor analisada A MRJP8 não tem papel direto na produção de geleia real, sua expressão tem sido detectada na glândula de veneno, assim, seus alelos não estão sendo selecionados. A manutenção das matrizes com os alelos selecionados das MRJP3 e MRJP5 deve ser realizada por meio de um programa de fecundação instrumental com analise da produção de geleia real das rainhas descendentes e dos marcadores moleculares selecionados. xiii, 61 f

The knowledge of the genetic and phenotypic variability among different accessions of guava is important for supporting improvement programs of this specie in northern Rio de Janeiro state, which needs new cultivars able to generate income for local farmers. This work aimed to evaluate the genetic divergence among six cultivars and 19 accessions of guava via RAPD molecular markers and morphological characteristics. One hundred and seventeen polymorphic markers were obtained from 28 primers. The results showed a partial agreement between the methods of studied groupings, with the formation of 12 groups. The accessions ‘Vita 3’and ‘6’ were the most divergent, showing genetic distance of 0.663. The comparative analysis of groupings showed that RAPD markers and morphological descriptors were effective in discriminating the accessions and to show potential genetic variability useful in genetic improvement programs. O conhecimento da variabilidade genética e fenotípica entre diferentes acessos de goiabeiras é importante para se apoiar programas de melhoramento dessa espécie na região Norte Fluminense que carece de novas culturas capazes de gerar renda aos produtores locais. O objetivo deste trabalho foi avaliar a divergência genética entre seis cultivares e 19 acessos de goiabeiras, por meio de marcadores moleculares RAPD e características morfoagronômicas. Foram obtidas 117 marcas polimórficas, utilizando-se 28 iniciadores. Os resultados mostraram uma concordância parcial entre os métodos de agrupamentos estudados, com a formação de 12 grupos. O acesso Vita 3 e o acesso 6 foram os mais divergentes, apresentando distância genética de 0,663. A análise comparativa dos agrupamentos revelou que os marcadores RAPD e os descritores morfológicos foram eficientes para discriminação dos acessos e que houve variabilidade genética potencial para uso em Programa de Melhoramento Genético.

The DGAT1 gene is a candidate gene involved in fat content in milk and due to its physiological function, this gene is of great interest for dairy cattle improvement. This gene presents a VNTR region with little information, but it suggests that the polymorphism in this region may be related to variations in production. This study analyzed DNA samples from 72 dairy cattle using blood samples taken from tail vein of animals. The genotype and gene frequency of VNTR polymorphism in the DGAT1 gene was obtained directly after PCR amplification. It was found four alleles present in homozygous and heterozygous, whose frequencies were: allele 1 (with three repetitions) of 4%, allele 2 (with four repetitions) of 50%, allele 3 (with five repetitions) of 40% and allele 4 (with six repetitions) of 6%. It was verified the Hardy-Weinberg equilibrium by Chi-square test concluding that the population was not in balance. Most studies on DGAT1 are made in cattle due to its higher representation in milk production. However, goats and sheep also have a production of milk in the market. Using the primers designed previously for the bovine species, the amplified fragments of the promoter region of DGAT1 gene were compared in cattle, goats and sheep. The extraction of genomic DNA was made from blood samples. The primers designed were not efficient, because although the region expected amplified with fragments between 700 and 800 base pairs in the three species, a small percentage of the individuals had any result, which probably occurred due to the high nucleotide variation in the region of annealing primers. There were found a VNTR polymorphism in the promoter region of the DGAT1 gene in Alpine and Saanen breeds. O gene DGAT1 é um gene candidato envolvido com o conteúdo de gordura no leite e em razão de sua função fisiológica, esse gene é de grande interesse para o melhoramento dos rebanhos leiteiros. Este gene apresenta uma região com VNTR com poucas informações, mas sugere que o polimorfismo nesta região possa estar relacionado à variação na produção. Neste estudo foram analisadas amostras de DNA de 72 bovinos leiteiros através de amostras de sangue retiradas da veia caudal dos animais. A freqüência genotípica e gênica para o polimorfismo VNTR do gene DGAT1, foram obtidas diretamente após amplificação por PCR. Foram encontrados quatro alelos, presentes em homozigose e heterozigose, cujas frequências foram: alelo 1 (com três repetições) de 4%, alelo 2 (com quatro repetições) de 50%, alelo 3 (com cinco repetições) de 40% e alelo 4 (com seis repetições) de 6%. Foi verificado o equilíbrio de Hardy-Weinberg através do teste de Qui-quadrado concluindo que a população não se encontrava em equilíbrio. A maior parte dos estudos sobre DGAT1 é feita em bovinos por causa de sua maior representatividade na produção leiteira. Entretanto, caprinos e ovinos também apresentam uma produção de leite considerável no mercado. Utilizando-se de primers previamente desenhados para a espécie bovina, foram comparados os fragmentos amplificados da região promotora do gene DGAT1 em bovinos, caprinos e ovinos. A extração do DNA genômico foi feita a partir de amostras de sangue. Os primers desenhados se mostraram pouco eficientes, apesar de amplificar na região esperada com fragmentos entre 700 e 800 pares de base nas três espécies, uma pequena porcentagem dos indivíduos amostrados apresentou qualquer resultado, que provavelmente ocorreu pela alta variação nucleotídica na região de anelamento dos primers. Foi encontrado um 2 polimorfismo de VNTR na região promotora do gene DGAT1 nas raças Alpina e Saanen. viii, 34 f

Blood red cell antigens are proteins linked to carbohydrates or lipids and are mainly expressed on red blood cells surface. The genes codify these antigens showing polymorphism that are mainly originated by point mutations, mainly the single nucleotide polymorphism (SNPs). The knowledge of Blood red cell antigens is essential for transfusion practice, since the antibody development against these antigens may lead to severe hemolytic situations, especially in hemoglobinopathy patients or any other diseases that depend on periodical transfusions. Classical hemaglutination is the mainly used technique in the detection of the different erythrocytic groups; however it presents some limitations, making it necessary the implementation of some other protocols to aid in the detection of these groups. Molecular biology may be a significant alternative in determining the antigenic profile and help in clarifying the molecular mechanisms involved in the diverse blood groups variables. Some genotyping protocols are already defined and validated for Brazilian population, however, it is necessary that some studies be done in the distinct Brazilian population. The aim of this study was to implement the molecular biology technique to investigate the polymorphism of some blood group genes in blood and bone marrow donors and polytransfused patients from the Northwest of Paraná, Southern Brazil and evaluate this population's genes polymorphism. Antígenos de grupos sanguíneos são proteínas que estão ligadas a carboidratos ou a lipídeos e são expressas, principalmente, na superfície de hemácias. Os genes que codificam esses antígenos apresentam polimorfismos que são originados predominantemente por mutações de ponto, principalmente os polimorfismos de um único nucleotídeo (SNPs). O conhecimento da variabilidade dos antígenos de grupos sanguíneos é essencial na prática transfusional, uma vez que o desenvolvimento de anticorpos contra esses antígenos pode levar a quadros hemolíticos graves, principalmente em casos de pacientes portadores de hemoglobinopatias ou outras doenças que requerem transfusões sangüíneas periódicas. A hemaglutimação clássica é a principal técnica utilizada na detecção dos diferentes grupos eritrocitrários, contudo, apresenta limitações tornando necessária a implementação de outros protocolos para auxiliarem na detecção desses grupos. A biologia molecular pode ser uma alternativa importante na determinação do perfil antigênico e auxiliar no esclarecimento dos mecanismos moleculares envolvidos com as diversas variantes de grupos sanguíneos. Alguns protocolos de genotipagem de grupos sanguíneos já estão bem estabelecidos e validados na população brasileira, contudo, torna-se ainda necessário a realização de estudos em diferentes regiões do Brasil. A proposta desse estudo é implementar a técnica de biologia molecular para investigar o polimorfismo de alguns genes de grupos sanguíneos em doadores voluntários de sangue e medula óssea e pacientes politransfundidos do Noroeste do Paraná, região Sul do Brasil e avaliar o polimorfismo desses genes nessa população. 56 f

The cultivation of Rhamdia spp, also known as jundiá, it has increased in south of Brazil, because its induced reproduction shows good results and high fecundation rates in repopulation programs. The genetic monitoring of stocks involved in these projects is essential to minimize the genetic changes that may occur as a result of inbreeding, genetic drift and adaptation to cultivation conditions. This study aimed to evaluate the genetic variability in species of Rhamdia spp used in stocking programs of rivers in the state of Paraná through isoenzymatic markers. It was collected 30 individuals of each species, R. branneri, Rhamdia quelen, and R. voulezi in two tanks of fish culture in the state of Paraná. The electrophoresis analysis of 11 systems, among the three species analyzed, it was detected 19 loci, with 60% of polymorphic loci. The values of heterozygosity observed and expected were much above average for fish (0.05). The value of Sewall Wright's FIS showed that in the average of the three species there is an excess of homozygotes in relation to the expected by the Hardy-Weinberg equilibrium. The data suggest that although the species are reproducing in captivity, they still have a high genetic variability. O cultivo de Rhamdia spp, também conhecido como Jundiá, tem aumentado muito no sul do Brasil, pois sua reprodução induzida apresenta bons resultados e altas taxas de fecundação em programas de repovoamento. O monitoramento genético dos estoques envolvidos nestes projetos é essencial para minimizar as mudanças genéticas que podem ocorrer em consequência de endogamia, deriva genética e adaptações a condições de cultivo. Este trabalho teve por objetivo avaliar a variabilidade genética em espécies de Rhamdia spp utilizadas em programas de repovoamento de rios do estado do Paraná através de marcadores isoenzimáticos. Foram coletados 30 indivíduos de cada espécie, R. branneri, R. quelen e R. voulezi, em dois tanques de pisciculturas do estado do Paraná. A análise de eletroforese de 11 sistemas, das três espécies analisadas, detectou 19 loci, com 60% de loci polimórficos. Os valores de heterozigosidade observada e esperada se mostraram muito acima da média para peixes (0,05). O valor de FIS de Sewall Wright mostrou que na média das três espécies há um excesso de homozigotos em relação ao esperado pelo equilíbrio de Hardy-Weinberg. Os dados sugerem que embora as espécies estejam se reproduzindo em cativeiro elas ainda apresentam uma alta variabilidade genética. ix, 66 f

Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) techniques were applied to eight Anostomidae species to analyze the genetic variability and genetic similarity within and between species. The results obtained were compared to those from isoenzyme analysis executed for many of the species studied. The proportion of polymorphic loci obtained with 10 primers was over 40%, with the exception of Leporinus amblyhynchus. This is especially important since genetic variability is a population feature both for short term fitness of the individual and for the long term survival of populations. Through subsequent analysis of dendrograms it was possible to discriminate the two Schizodon species from those of the genus Leporinus, even though it was impossible to differentiate L. obtusidens and L. elongates. RAPD analysis indicates that the two species are genetically very similar, supported too by isoenzyme data A técnica de Polimorfismo de DNA Amplificado ao Acaso (RAPD) foi utilizada na análise de oito espécies de peixe da família Anostomidae, com a finalidade de quantificar a variabilidade genética e estimar a similaridade genética dentro e entre essas espécies. Os resultados foram comparados com dados obtidos anteriormente com isoenzimas, para a maioria das espécies analisadas. A proporção de locos polimórficos obtida, com dez primers, está acima de 40 %, exceto para Leporinus amblyhynchus. Esse é um fato importante desde que a existência de variabilidade genética é uma condição importante para a sobrevida das espécies no meio ambiente Com dendrograma obtido, através de análise comparativa, foi possível discriminar as duas espécies de Schizodon daquelas do gênero Leporinus, no entanto não foi possível separar L. obtusidens e L. elongatus. A análise de RAPD indica que essas duas espécies são genéticamante muito similares, conclusão também sustentada por dados de estudos de isoenzimas

Esterase isozymes were used as molecular markers to discriminate and cluster seven "unnamed" cultivars (accesses A-G) of M. esculenta. The "unnamed" cassava cultivars were compared to 25 different M. esculenta cultivars (cultivars BG), which have been maintained in the germplasm collection of the Agronomy Department, State University of Maringá. 4-Methylumbelliferyl acetate, 4-methylumbelliferyl propionate and α–naphthyl acetate were utilized as substrates for isoesterase detection and comparative analysis. Similarity between plants, using Jaccard’s coefficient, ranged from 47.6% to 100%. A dendrogram produced by cluster analysis showed identity between cultivar BG 23 and plants of accession D. Plants of accesses B and G were also clustered with cultivar BG 23 showing 95% and 89% similarity, respectively. Plants of accesses A and E were similar to BG 1, showing 95% and 90% similarity, respectively. Plants of accession F were clustered with cultivar BG 9, showing 94% similarity. The dendrogram also showed that most of the cultivars were clustered together with 85-90% similarity. Thus, we conclude that esterase isozymes may be used as molecular markers of cassava genotypes for the characterization of “unnamed” cultivars of M. esculenta Isoenzimas esterases foram usadas como marcadores moleculares para discriminar e agrupar sete cultivares "sem nomes" (acessos A-G) de Manihot esculenta. Os cultivares "sem nomes" de mandioca foram comparados com 25 diferentes cultivares (BG) que vêm sendo mantidos na coleção de germoplasma do Departamento de Agronomia, da Universidade Estadual de Maringá. Acetato e propionato de 4-metilumbeliferona e acetato de α–naftil, foram os substratos utilizados para a detecção e análise comparativa das isoesterases. A similaridade entre as plantas, usando o coeficiente de Jaccard, variou de 47,6% até 100%. O dendrograma produzido pela análise de agrupamento mostrou identidade entre as plantas do cultivar BG23 e as plantas do acesso D. As plantas dos acessos B e G também foram agrupadas com o cultivar BG 23, mostrando similaridade de 95% e 89%, respectivamente. As plantas dos acessos A e E foram similares às plantas BG 1, mostrando 95% e 90% de similaridade, respectivamente. As plantas do acesso F foram agrupadas com as plantas do cultivar BG 9, mostrando 94% de similaridade. O dendrograma mostrou também que a maioria dos cultivares foram agrupados com 85-90% de similaridade. Assim, concluímos que as isozimas esterases podem ser utilizadas como marcadores moleculares de genótipos de mandioca, para a caracterização dos cultivares sem nomes de M. esculenta

Malate dehydrogenase (MDH) isozymes were used as biochemical markers to discriminate and cluster cladophylls of plants of one clonal population of the prickly pear, Opuntia ficus-indica (Cactaceae). The isozyme electrophoretic patterns obtained with MDH provided 8 isozymes and 5 different electrophoretic phenotypes. Similarity in cladophylls was estimated using Jaccard’s coefficient. This clonal population studied was founded by only one propagule, and after 50 years, it is likely to have been formed by asexual and sexual propagules. Since that differential expression of MDH isozymes could play a significant role in overall plant cell metabolism, we suggest that the cladophylls of prickly pear that were clustered together showing identity or higher similarity are specially a suitable source for industrial procedures of industrial extraction of commercial interest compounds because a same extraction protocols can be most quickly and easily standardized using genetically uniform materials. Electrophoretic patterns of MDH isozymes can be used as an effective tool for previously determine the genetic similarity in the cladophylls of O. ficus-indica plants Isozimas de malato desidrogenase (MDH) foram usadas como marcadores moleculares para discriminar e agrupar cladófilos de plantas de uma população clonal de cactus da espécie Opuntia ficus-indica (Cactaceae), conhecida como palma. O padrão eletroforético obtido revelou 8 isozimas MDH e 5 fenótipos eletroforéticos diferentes. A similaridade entre os cladófilos foi estimada usando o coeficiente de similaridade de Jaccard. Essa população clonal estudada foi fundada por somente um propágulo e, após 50 anos, parece ser formada por propágulos assexuais e sexuais. Uma vez que a expressão diferencial de isozimas MDH pode ter um papel significante no metabolismo das células da planta, sugerimos que os cladófilos de palma que foram agrupados com os mais altos valores de similaridade são os mais adequados para serem utilizados em procedimentos de extração industrial de compostos de interesse comercial, porque um mesmo protocolo de extração pode ser mais rapidamente e facilmente padronizado quando se utiliza material geneticamente uniforme. O padrão eletroforético das isozimas MDH pode ser usado como uma ferramenta efetiva para uma análise prévia da similaridade genética entre os cladófilos das plantas de O. ficus-indica