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[ES] Actualmente el consumo de vegetales orgánicos presenta una tendencia creciente, debido a una mayor preocupación por el medio ambiente. Sin embargo, al no utilizar fertilizantes, herbicidas o pesticidas químicos, este tipo de cultivos puede conllevar un riesgo asociado debido a la posible presencia de ciertos organismos como las amebas de vida libre (free-living amoebae, FLA). Estos protozoos pueden actuar como reservorios de microorganismos vivos, pudiendo ser algunos de estos, patógenos humanos. Las técnicas microbiológicas convencionales como el cultivo permiten la detección de microorganismos, pero resultan poco específicas, y, en ocasiones, los organismos pueden adoptar el estado viable no cultivable (VBNC), no pudiéndose detectar mediante este método. Por ese motivo, se decidió analizar el contenido bacteriano del interior de estas FLA por medio de la técnica molecular DVC-FISH, que permite la detección de formas bacterianas viables debido a la preincubación en el medio DVC (favorece el crecimiento, pero no permite la división celular) combinándose con la técnica de hibridación fluorescente in situ (FISH) que emplea sondas fluorescentes específicas. Este método permite diferenciar el género o incluso la especie de las bacterias que se quieren identificar y además confirmar la viabilidad de estas. Se analizaron diversas muestras de vegetales y frutas orgánicas para, en primer lugar, determinar cualitativamente la presencia de FLA, y posteriormente, detectar la presencia y viabilidad de bacterias de los géneros Pseudomonas, Salmonella, Listeria y Helicobacter como parte del microbioma de las FLA aisladas de dichos vegetales y frutas orgánicas. Se procesaron un total de 35 muestras representativas de vegetales y fresas ecológicas, pertenecientes al proyecto `ECOFOOD¿. En todas las muestras se recuperaron FLA por cultivo (100%). Los resultados del DVC-FISH indicaron la presencia de células viables de Pseudomonas spp. en un 88,57% de las muestras y, de Salmonella spp. en un 2,86% de las muestras como parte del microbioma de las FLA aisladas. En cambio, no se detectó Helicobacter spp., ni Listeria monocytogenes. La presencia de ciertas bacterias internalizadas de interés para la salud pública, indica que las FLA son posibles vehículos de transmisión de patógenos, ofreciéndoles protección y favoreciendo su diseminación., [EN] Currently organic vegetables consumption presents a growing trend, due to higher concern about environment. However, as chemical fertilizers, herbicides and pesticides are not used, this type of cultivation may carry an associated risk due to the possible presence of certain organisms, such as free-living amoebae (FLA). These protozoa can act as reservoirs of alive microorganisms, some of which may be human pathogens. Conventional microbiological techniques such as culture allow the detection of microorganisms, but they result not very specific, and occasionally, organisms can adopt the viable non-culturable state (VBNC) and cannot be detected by this method. For this reason, analysing the internal content of this dangerous amoeba was decided through the molecular technique of DVC-FISH, that allows the detection of viable bacterial forms due to preincubation in DVC medium (it promotes cell growth, but it does not permit cell division) combined with the fluorescent in situ hybridization (FISH) technique that uses specific fluorescent probes. This method allows to differentiate the genus or even the bacterial specie that wants to be identified and it enables to confirm their viability. Organic vegetable and fruit samples were studied in order to firstly, qualitatively establish the presence of FLA, and subsequently, determining the presence and viability of bacteria from the genus of Pseudomonas, Salmonella, Listeria and Helicobacter as a part of isolated FLA microbiome from the organic vegetables mentioned. A total of 35 representative samples of organic vegetables and strawberries were processed from the 'ECOFOOD' project. In all samples FLA were recovered by culture (100%). Results of DVC-FISH indicated the presence of viable cells of Pseudomonas spp. in 88,57% of the samples and Salmonella spp. in 2,86% of samples as part of microbiome isolated from FLA. In contrast, neither Helicobacter spp. nor Listeria monocytogenes was detected. The presence of certain internalized bacteria of interest for public health indicates that FLA are possible vehicles for the transmission of pathogens, offering them protection and favouring their dissemination.

[ES] Actualmente el consumo de vegetales orgánicos presenta una tendencia creciente, debido a una mayor preocupación por el medio ambiente. Sin embargo, al no utilizar fertilizantes, herbicidas o pesticidas químicos, este tipo de cultivos puede conllevar un riesgo asociado debido a la posible presencia de ciertos organismos como las amebas de vida libre (free-living amoebae, FLA). Estos protozoos pueden actuar como reservorios de microorganismos vivos, pudiendo ser algunos de estos, patógenos humanos. Las técnicas microbiológicas convencionales como el cultivo permiten la detección de microorganismos, pero resultan poco específicas, y, en ocasiones, los organismos pueden adoptar el estado viable no cultivable (VBNC), no pudiéndose detectar mediante este método. Por ese motivo, se decidió analizar el contenido bacteriano del interior de estas FLA por medio de la técnica molecular DVC-FISH, que permite la detección de formas bacterianas viables debido a la preincubación en el medio DVC (favorece el crecimiento, pero no permite la división celular) combinándose con la técnica de hibridación fluorescente in situ (FISH) que emplea sondas fluorescentes específicas. Este método permite diferenciar el género o incluso la especie de las bacterias que se quieren identificar y además confirmar la viabilidad de estas. Se analizaron diversas muestras de vegetales y frutas orgánicas para, en primer lugar, determinar cualitativamente la presencia de FLA, y posteriormente, detectar la presencia y viabilidad de bacterias de los géneros Pseudomonas, Salmonella, Listeria y Helicobacter como parte del microbioma de las FLA aisladas de dichos vegetales y frutas orgánicas. Se procesaron un total de 35 muestras representativas de vegetales y fresas ecológicas, pertenecientes al proyecto `ECOFOOD¿. En todas las muestras se recuperaron FLA por cultivo (100%). Los resultados del DVC-FISH indicaron la presencia de células viables de Pseudomonas spp. en un 88,57% de las muestras y, de Salmonella spp. en un 2,86% de las muestras como parte del microbioma de las FLA aisladas. En cambio, no se detectó Helicobacter spp., ni Listeria monocytogenes. La presencia de ciertas bacterias internalizadas de interés para la salud pública, indica que las FLA son posibles vehículos de transmisión de patógenos, ofreciéndoles protección y favoreciendo su diseminación. [EN] Currently organic vegetables consumption presents a growing trend, due to higher concern about environment. However, as chemical fertilizers, herbicides and pesticides are not used, this type of cultivation may carry an associated risk due to the possible presence of certain organisms, such as free-living amoebae (FLA). These protozoa can act as reservoirs of alive microorganisms, some of which may be human pathogens. Conventional microbiological techniques such as culture allow the detection of microorganisms, but they result not very specific, and occasionally, organisms can adopt the viable non-culturable state (VBNC) and cannot be detected by this method. For this reason, analysing the internal content of this dangerous amoeba was decided through the molecular technique of DVC-FISH, that allows the detection of viable bacterial forms due to preincubation in DVC medium (it promotes cell growth, but it does not permit cell division) combined with the fluorescent in situ hybridization (FISH) technique that uses specific fluorescent probes. This method allows to differentiate the genus or even the bacterial specie that wants to be identified and it enables to confirm their viability. Organic vegetable and fruit samples were studied in order to firstly, qualitatively establish the presence of FLA, and subsequently, determining the presence and viability of bacteria from the genus of Pseudomonas, Salmonella, Listeria and Helicobacter as a part of isolated FLA microbiome from the organic vegetables mentioned. A total of 35 representative samples of organic vegetables and strawberries were processed from the 'ECOFOOD' project. In all samples FLA were recovered by culture (100%). Results of DVC-FISH indicated the presence of viable cells of Pseudomonas spp. in 88,57% of the samples and Salmonella spp. in 2,86% of samples as part of microbiome isolated from FLA. In contrast, neither Helicobacter spp. nor Listeria monocytogenes was detected. The presence of certain internalized bacteria of interest for public health indicates that FLA are possible vehicles for the transmission of pathogens, offering them protection and favouring their dissemination.

[ES] En los últimos años en España se ha incrementado el consumo de pescado denominado “low cost” entre los que destacan la tilapia y la panga, siendo este último la especie más habitual en los comedores escolares, la más consumida, la que está bajo sospecha y la que más mala fama tiene. Estos pescados “low cost” se caracterizan por estar criados en condiciones productivas extremas en distintas zonas de Asia; y a su vez en piscifactorías en ríos con altos índices de contaminación como el río Mekong. Además, en los últimos meses se han producido acontecimientos dónde se ha creado alarma entre la población llegando incluso a anunciarse su retirada de los lineales de las grandes cadenas de distribución alimentaria. Los consumidores cada vez son más conscientes que la presencia de estos pescados “low cost”, sobre todo de la panga, podrían poner en riesgo la calidad y la seguridad alimentaria debido a la presencia de antibióticos, metales pesados e incluso de distintas bacterias patógenas que podrían causar graves problemas de salud. En este trabajo se ha evaluado la calidad microbiológica de muestras de ambas especies para su estudio y poder determinar si existe presencia de patógenos., [EN] Recently, Spain has increased the consumption of fish known "low-cost" including tilapia and catfish, this last species most common in school canteens, the most consumed, which is under suspicion and has more notoriety. These "low-cost" fish are characterized to being bred in extreme production conditions in different parts of Asia; at the same time at fish farms in rivers with high levels of pollution as the Mekong river. In addition, in recent months there have been events which alarm has been created, among the population even to announce their retirement from the shelves of the large food retail chains. Consumers are become more aware that the presence of these “low-cost fish”, especially catfish, could put at risk the quality and food safety due to the presence of antibiotics, heavy metals and even pathogenic bacteria could cause serious health problems. In this aim, we have evaluated the microbiological quality of different samples of both species for study and determine if there is presence of pathogens., [CA] En els últims anys a Espanya s’ha incrementat el consum de peix “low cost” on destaquen la tilàpia i el panga, sent aquest últim l’espècie més habitual als menjadors escolars, la més consumida, la què es trova sota sospita i la què més mala fama té. Aquests peixos “low cost” es caracteritzen per estar criats en condicions productives extremes a distintes zones d’Àsia; i al mateix temps a piscifactories de rius amb elevats índexs de contaminació com és el riu Mekong. A més, durant els últims mesos s’han produït esdeveniments on s’ha creat alarma entre la población arribant inclús a anunciar-se la seva retirada als lineals de les grans cadenes de distribució alimentària. Els consumidors cada volta són més conscients que la presencia d’aquests peixos “low cost”, sobretot el panga, podrien posar en perill la qualitat i la seguretat alimentària a causa de la presencia d’antibiòtics, metalls pesants i inclús de diverses bacteris patògens què podrien causar greus problemas de salut. En aquest treball s’ha avaluat la qualitat microbiològica de diverses mostres d’ambdues espècies per al seu estudi i així poder determinar si existeixen presència de patògens.

[ES] El agua es un recurso indispensable para la vida y, ante los problemas de escasez, la depuración y reutilización de aguas residuales es una de las principales soluciones. Los procesos de depuración de aguas residuales no son capaces de garantizar la total eliminación de ciertos microorganismos patógenos que suponen un grave riesgo para la salud humana, como Helicobacter pylori causantes de úlcera y cáncer gástrico, o Legionella pneumophila causante de neumonías severas. Los procesos habituales de tratamiento terciario para la desinfección son suficientes para eliminar estas bacterias, pero la presencia en las aguas de amebas de vida libre puede suponer un reservorio y una forma de protección para estos microorganismos por su resistencia a los tratamientos de desinfección habituales (cloración o radiación ultra violeta) a los que son sometidas las aguas tratadas. En este Trabajo Fin de Máster se evaluó la presencia de amebas de vida libre como indicador de la efectividad del proceso de depuración, de los tratamientos terciarios de desinfección habituales en las EDAR, y de la cloración en las aguas potables para eliminar estos patógenos. Para ello se han estudiado diferentes muestras de aguas residuales tratadas y aguas de abastecimiento, se ha investigado la presencia de amebas de vida libre y su relación con el tratamiento biológico. Para la identificación de H. pylori y L. pneumophila en el interior de las FLA, se utilizó el método rápido de identificación de bacterias viables patógenas de transmisión hídrica DVC-FISH., [CA] L'aigua és un recurs indispensable per a la vida i, davant dels problemes d'escassetat, la depuració i reutilització d'aigües residuals és una de les principals solucions. Els processos de depuració d'aigües residuals no són capaços de garantir la total eliminació de certs microorganismes patògens que suposen un greu risc per a la salut humana, com Helicobacter pylori causants d'úlcera i càncer gàstric, o Legionella pneumophila causant de pneumònies severes. Els processos habituals de tractament terciari per a la desinfecció són suficients per a eliminar estos bacteris, però la presència en les aigües d'amebes de vida lliure pot suposar un reservori i una forma de protecció per a estos microorganismes per la seua resistència als tractaments de desinfecció habituals (cloració o radiació ultra violeta) als que són sotmeses les aigües tractades. En este Treball Fi de Màster es va avaluar la presència d'amebes de vida lliure com a indicador de l'efectivitat del procés de depuració, dels tractaments terciaris de desinfecció habituals en les EDAR, i de la cloració en les aigües potables per a eliminar estos patògens. Per a això s'han estudiat diferents mostres d'aigües residuals tractades i aigües d'abastiment, s'ha investigat la presència d'amebes de vida lliure i la seua relació amb el tractament biològic. Per a la identificació de H. pylori i L. pneumophila en l'interior de les FLA, es va utilitzar el mètode ràpid d'identificació de bacteris viables patògenes de transmissió hídrica DVC-FISH., [EN] The water is an essential resource for life on planet Earth. And when it comes about shortage problems, re-use of treated water becomes one of the main solutions. The conventional wasted water treatment process is not capable of guarantee the complete removal of certain pathogens which could be a serious risk for human health. Such as Helicobacter pylori that causes ulcer and gastric cancer, or Legionella pneumophila which causes severe pneumonia. The actual treatment for disinfection could remove bacterial load, but the presence in the water of Free Living Amoeba may be a reservoir and a protection way for this microorganisms due to the resistance to usual disinfection treatments, such as chloration and ultraviolet radiation. In this thesis it was evaluated the presence of free Living Amoebas as depuration process effectiveness indicator, also for the chloration treatment. In order to this, different wasted water and supply water samples were studied. The presence of Free Living Amoebas and their relation with the biological treatment was investigated. DVC-FISH method was used for the FLA's inner H. pylori and L. pneumophila identification.