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Submitted by Mayana Karoline Fontes (mayana.fontes@unesp.br) on 2022-03-07T21:42:23Z No. of bitstreams: 1 TESE DOUTORADO_MAYANA KAROLINE FONTES_Final.pdf: 4179445 bytes, checksum: 0746e518f95eea86aa553050b4d18be4 (MD5) Approved for entry into archive by Maria da Conceição Gomes da Silva (conceicao.gomes@unesp.br) on 2022-03-13T02:51:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fontes_mk_dr_svic_par.pdf: 474578 bytes, checksum: 5af7389b66469a14c81b5fc7d335a567 (MD5) Made available in DSpace on 2022-03-13T02:51:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fontes_mk_dr_svic_par.pdf: 474578 bytes, checksum: 5af7389b66469a14c81b5fc7d335a567 (MD5) Previous issue date: 2022-01-31 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Os esgotos urbanos representam uma importante fonte de poluição em ecossistemas marinhos, devido, principalmente, ao aumento populacional em regiões metropolitanas costeiras e à ineficiência dos processos de coleta, tratamento e disposição de efluentes domésticos. Entre as principais substâncias que podem ser encontradas nos efluentes estão os produtos farmacêuticos, de cuidados pessoais e drogas ilícitas, tais como a cocaína, que é considerada como um sério problema de saúde pública. Os emissários submarinos representam o principal mecanismo de liberação de contaminantes de preocupação emergente (como as drogas ilícitas) no ambiente marinho. Estudos anteriores identificaram a presença de cocaína (COC) em água superficial continental e costeira, bem como efeitos biológicos em concentrações ambientalmente relevantes. Dessa forma, o presente trabalho tem como objetivo a realização de uma avaliação do risco ambiental de cocaína em ambientes costeiros através de uma metodologia escalonada que contemple a quantificação em matrizes ambientais na Baía de Santos (água superficial, sedimento e mexilhões) e ensaios ecotoxicológicos empregando como modelos o mexilhão Perna perna e o peixe Anguilla anguilla. Os mexilhões foram expostos a duas diferentes concentrações de cocaína (200 ng.l-1 e 2000 ng.l-1), a um controle de água do mar e um controle de solvente, por 168h. Ao todo, foram 21 mexilhões divididos em 2 aquários por tratamento. Após os períodos de exposição (48h, 96h e 168h), 7 mexilhões eram aleatoriamente retirados dos aquários e submetidos à avaliação de citotoxicidade (pelo ensaio do Tempo de Retenção do Vermelho Neutro) e posteriormente eram excisados para retirada de tecidos (músculo adutor, glândula digestiva, brânquia e gônadas) para análise de biomarcadores (dopamina- DOPA; 5-hydroxytryptamine- 5-HT – serotonina; acetilcholinesterase- AChE; monoamina oxidase- MAO; ciclooxigenase- COX; transporte mitocrondrial de elétrons- MET; lipidios totais- TLP; 7-ethoxiresorufin O-deetilase – EROD; dibenzilfluoresceina dealkilase – DBF; glutationa S-transferase – GST; glutationa peroxidase – GPX; DNA danos em DNA; e peroxidação lipídica – LPO). A capacidade da cocaína bioacumular nos mexilhões também foi verificada. Além disso, peixes (Anguilla anguilla) também foram expostos à cocaína (20 ng.l−1) para investigar potenciais danos histopatológicos, imunohistoquímicos (3β-hidroxisteroide dehidrogenase- 3β-HSD; 17β- hidroxisteroid dehidrogenase- 17β-HSD type 3; e P450 aromatase) e endócrinos (hormonônio folículo estimulante- FHS; hormônio luteinizante- LH and cortisol) da cocaína em vertebrados. Os resultados demonstram que a cocaína foi encontrada na Baía de Santos em concentrações variando de 1.91 – 203.6 ng.l−1, sendo as maiores concentrações detectadas na primavera/verão, período que coincide com o aumento populacional na Baixada Santista devido ao início da alta temporada. No sedimento, as concentrações quantificadas variaram de 0.94 – 46.85 ng.g−1. A cocaína também foi detectada no tecido de mexilhões coletados na Baía em concentrações variando de 0.914-4.58 μg·kg−1 (peso úmido). O fator de bioacumulação calculado variou de 163 – 1454 l·kg−1. Quanto às vias metabólicas investigadas, foram observadas alterações nas atividades de EROD e DBF, além de GST e GPx, indicando comprometimento na metabolização e resposta antioxidante. A exposição à cocaína provocou citotoxicidade nos mexilhões, que foi observada pela reduzida estabilidade da membrana lisossomica dos hemócitos, além do aumento significativo de peroxidação lipídica e danos em DNA. A cocaína aumentou os níveis de neurotransmissores (dopamine e serotonina) nos mexilhões em todas as concentrações testadas. Já após 168h foi observada uma redução nos níveis de AChE e COX. Além disso, foi observada um aumento nos níveis de MET e TLP em ambas as concentrações. Os peixes expostos à cocaína apresentaram um atraso no desenvolvimento e maturação dos folículos ovarianos, fato que pode comprometer a reprodução desses organismos. Isso também foi demonstrado pela menor expressão de 3β-HSD, e P450 aromatase, bem como menores níveis de FHS e LH. Os resultados indicam que concentrações ambientalmente relevantes de cocaína, mesmo na ordem de ng.l-1 são capazes de afetar negativamente a saúde dos animais marinhos a partir de perturbações no sistema reprodutivo e citogenotoxicidade. A avaliação de risco realizada apontou para quocientes situados entre os níveis moderado e alto para Baía de Santos. É preciso melhorar a estrutura de coleta e tratamento de esgoto em regiões costeiras a fim de minimizar o descarte de efluentes contaminados com drogas ilícitas em ambientes marinhos. Além disso, é importante que essas substâncias sejam incluídas em programas de monitoramento da qualidade de água, a fim de se estabelecerem parâmetros de segurança que permitam a preservação dos recursos naturais e da saúde humana. Urban sewage represents an important source of pollution to marine ecosystems, mainly due to the population growth on coastal metropolitan regions and the inefficiency of the processes of collection, treatment and disposal of domestic effluents. Pharmaceutical, persoanl care products and illicit drugs, such as cocaine, constitute some of the main substances found in domestic effluents representing serious problem to the public health. Submarine sewage outfalls represent the main source of contaminants of emerging concern (such as illicit drugs) into the marine environment. Previous studies have identified the presence of cocaine (COC) in inland and coastal surface water, as well as biological effects at environmentally relevant concentrations. The present work aimed to assess of the environmental risk of cocaine in coastal environments through a tiered approach that included the COC (and by products) quantification in environmental matrices of Santos Bay (surface water, sediment and mussels) and ecotoxicological tests using as models the mussel Perna perna and the fish Anguilla anguilla. Mussels were exposed to two different concentrations of cocaine (200 ng.l-1 and 2000 ng.l-1), a seawater control and a solvent control, for 168h. The mussels (21 specimens) were divided into 2 aquariums per treatment. After the exposure periods (48h, 96h and 168h), 7 mussels were randomly removed from the aquariums and submitted to cytotoxicity evaluation (by the Neutral Red Retention Time assay) and later they were excised for tissue removal (adductor muscle, digestive tract, gills and gonads) for the analysis of biomarkers (dopamine-DOPA; 5- hydroxytryptamine- 5-HT - serotonin; acetylcholinesterase-AChE; monoamine oxidase-MAO; cyclooxygenase-COX; mitochondrial electron transport-MET; total lipids- TLP; 7- ethoxyresorufin O-deethylase – EROD; dibenzylfluorescein dealkylase – DBF; glutathione S- transferase – GST; glutathione peroxidase – GPX; DNA damage to DNA; and lipid peroxidation – LPO). The bioaccumulation of COC in mussels soft tissues was also verified. In addition, fish (Anguilla anguilla) were also exposed to cocaine (20 ng.l−1) to investigate potential histopathological, immunohistochemical (3β-hydroxysteroid dehydrogenase-3β-HSD; 17β-hydroxysteroid dehydrogenase-17β-HSD type 3; and P450 aromatase) and endocrine (follicle stimulating hormone-FHS); luteinizing hormone- LH and cortisol) damages caused by cocaine in marine vertebrates. Cocaine was found in Santos Bay at concentrations ranging from 1.9 – 203.6 ng.l-1, with the highest concentrations detected in spring/summer, a period that coincides with the population increase in Baixada Santista due to the beginning of the warmer high season. In the sediment, the quantified concentrations ranged from 0.94 – 46.85 ng.g−1. Cocaine was also detected in the soft tissue of mussels collected in the Bay at concentrations ranging from 0.914-4.58 μg·kg−1 (wet weight). The calculated bioaccumulation factor ranged from 163 – 1454 l·kg−1. As for the metabolic pathways investigated, changes were observed in the activities of EROD and DBF, in addition to GST and GPx, indicating impairment in metabolism and antioxidant response. Cocaine exposure caused cytotoxicity in mussels, which was observed by the reduced stability of the lysosomal membrane of hemocytes, and the significant increase in lipid peroxidation and DNA damage. Cocaine increased the levels of neurotransmitters (dopamine and serotonin) in mussels at all concentrations tested. After 168h, a reduction in AChE and COX levels was observed. In addition, an increase in MET and TLP levels was observed at both concentrations. Fish exposed to cocaine showed a delay in the development and maturation of ovarian follicles, a fact that can compromise the reproduction of these organisms. This was also demonstrated by lower expression of 3β-HSD, and P450 aromatase, as well as lower levels of FHS and LH. The results indicated that environmentally relevant concentrations of cocaine, even in the order of ng.l-1, are capable of negatively affecting the health of marine animals through disturbances in their reproductive system and cytogenotoxicity. The risk assessment carried out pointed to moderate to high risks in Santos Bay. It is necessary to improve the structure of sewage collection and treatment in coastal regions in order to minimize the disposal of effluents contaminated with illicit drugs in marine environments. Furthermore, it is important that these substances are included in water quality monitoring programs, in order to establish safety parameters that allow the preservation of natural resources and human health. 2016/24033-3 2019/20187-4

Submitted by Fernando Sanzi Cortez (cortezfs@hotmail.com) on 2018-10-11T18:59:36Z No. of bitstreams: 1 Tese_Cortez.pdf: 3936954 bytes, checksum: e18cc7edb5f1336507be5004e4dac112 (MD5) Rejected by Disleide Silvia Valerio Gounella null (disleide@clp.unesp.br), reason: Boa tarde. Favor fazer as seguintes alterações: - Nome do Orientador (aparece 2 vezes, tirar 1); - Colocar o nome do arquivo da tese o título do trabalho; - Colocar palavras-chaves em inglês; - Alterar o nome do Programa de Pós-graduação (ver nome na pagina da Pós-Graduação); - Colocar o abstract. Qualquer dúvida, entre em contato. abraços Disleide Silvia Valerio Gounella Bibliotecária UNESP Campus de São Vicente e-mail: disleide.valerio@unesp.br skype: disleidesilviavaleriogounella telefone: 13-3569-7154 on 2018-10-15T17:22:22Z (GMT) Submitted by Fernando Sanzi Cortez (cortezfs@hotmail.com) on 2018-10-16T14:11:23Z No. of bitstreams: 1 Estudo ecotoxicológico de contaminantes de preocupação emergente na baía de Santos, SP.pdf: 3936954 bytes, checksum: e18cc7edb5f1336507be5004e4dac112 (MD5) Rejected by Disleide Silvia Valerio Gounella null (disleide@clp.unesp.br), reason: Bom dia. Favor colocar as palavras chaves em inglês, mesmo que o termo se repita. abs. Disleide on 2018-10-17T13:39:57Z (GMT) Submitted by Fernando Sanzi Cortez (cortezfs@hotmail.com) on 2018-10-17T14:36:50Z No. of bitstreams: 1 Estudo ecotoxicológico de contaminantes de preocupação emergente na baía de Santos, SP.pdf: 3936954 bytes, checksum: e18cc7edb5f1336507be5004e4dac112 (MD5) Rejected by Disleide Silvia Valerio Gounella null (disleide@clp.unesp.br), reason: Bom dia. Recebi a informação do pessoal do Repositório de que o nome do Programa da pós graduação foi alterado. Por favor, faça a alteração, para darmos andamento. Abs. Disleide on 2018-10-31T13:51:17Z (GMT) Submitted by Fernando Sanzi Cortez (cortezfs@hotmail.com) on 2018-10-31T17:42:36Z No. of bitstreams: 1 Estudo ecotoxicológico de contaminantes de preocupação emergente na baía de Santos, SP.pdf: 3936954 bytes, checksum: e18cc7edb5f1336507be5004e4dac112 (MD5) Approved for entry into archive by Disleide Silvia Valerio Gounella null (disleide@clp.unesp.br) on 2018-11-01T12:56:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cortez_fs_dr_svic.pdf: 3936954 bytes, checksum: e18cc7edb5f1336507be5004e4dac112 (MD5) Made available in DSpace on 2018-11-01T12:56:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cortez_fs_dr_svic.pdf: 3936954 bytes, checksum: e18cc7edb5f1336507be5004e4dac112 (MD5) Previous issue date: 2018-09-14 O amplo uso de fármacos na medicina humana e veterinária tem resultado em problemas ambientais, uma vez que a ocorrência dessas substâncias em ecossistemas aquáticos têm sido demonstrada em regiões que recebem efluentes domésticos e industriais. Embora a ocorrência dessas substâncias no ambiente marinho e estuarino tenha sido amplamente observada, há poucos estudos que abordem a avaliação dos efeitos nocivos em organismos não-alvos, principalmente de áreas tropicais. Dada a importância de conhecer as concentrações ambientais de fármacos em zonas costeiras e estimar os efeitos biológicos adversos em organismos marinhos, o presente estudo visou identificar e quantificar por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas (LC/MS/MS) os fármacos losartan, fluoxetina, metformina, 17 -etinilestradiol, amoxicilina e o antimicrobiano triclosan em amostras de água coletadas na Baía de Santos (SP); avaliar as respostas metabólicas (fases I (etoxiresorufina-O- desetilase/ EROD; dibenzilfluoresceína/ DBF) e II (glutationa-S-transferase/ GST)) do processo de biotransformação; a atividade antioxidante (glutationa peroxidase/ GPx) e estimar os efeitos subletais (lipoperoxidação (LPO), dano em DNA, colinesterase (ChE) e estabilidade da membrana lisossomal (EML)) associados à exposição a essas substâncias (48 e 96 horas), nos tecidos brânquia, glândula digestiva e hemolinfa do molusco bivalve Perna perna. Com o antimicrobiano triclosan foi realizada uma avaliação de risco ambiental empregando dados de toxicidade com invertebrados marinhos. Todos os fármacos estudados foram detectados em amostras de água do mar da baía de Santos, com exceção do 17 -etinilestradiol e da amoxicilina. A investigação dos processos metabólicos envolvidos na biotransformação desses fármacos demonstraram, em geral, alterações na atividade de CYP 450 like proteins, GST e em alguns casos da atividade da GPx nas brânquias. Dentre os biomarcadores de efeito (LPO, DNA, ChE e EML), ocorreram variações de acordo com os fármacos estudados, porém a estabilidade da membrana lisossomal foi o método mais responsivo. A avaliação de risco ambiental realizada com o triclosan apontou risco variando de baixo a alto em função dos parâmetros empregados. Os resultados obtidos no presente estudo apontam para o risco relacionado à introdução de fármacos em zonas costeiras via efluente doméstico, e poderão contribuir com futuras regulamentações sobre o tema. The widespread use of drugs in human and veterinary medicine has resulted in environmental problems, as the occurrence of these substances in aquatic ecosystems has been demonstrated in regions receiving domestic and industrial effluents. Although the occurrence of these substances in the marine and estuarine environment has been widely observed, there are few studies that approach the evaluation of harmful effects in non-target organisms, mainly in tropical areass. Given the importance of knowing the environmental concentrations of pharmaceuticals in coastal zones and the adverse biological effects on organisms of these regions, the present study aimed to identify and quantify by mass spectrometry (LC/MS/MS) the pharmaceuticals losartan, fluoxetine, metformin, 17α- ethynylestradiol, amoxicillin and the antimicrobial triclosan in marine water samples collected in Santos Bay, evaluate the metabolic responses (phases I (ethoxyresorufin-O-deethylase/EROD, dibenzylfluorescein/DBF) and II (glutathione S-transferase/GST), antioxidant activity (glutathione peroxidase/GPx) and estimate sub-lethal effects (lipoperoxidation (LPO), DNA damage, cholinesterase (ChE) and lysosomal membrane stability (VN)) associated with the exposure to these substances (48 and 96 hours), in the gill tissues (BR), digestive gland (GD) and hemolymph of the marine bivalve Perna perna. With the antimicrobial triclosan, an environmental risk assessment was performed using marine invertebrate toxicity data. All pharmaceuticals compounds were detected in seawater samples, except for the hormone and the antibiotic. The investigation of the metabolic processes involved in the biotransformation of these drugs showed, in general, changes in the activity of CYP 450 like proteins, GST and in some cases of GPx activity in the gills. Among the biomarkers of effect, there were variations according to the drugs studied, but the stability of the lysosomal membrane was the most responsive method. The environmental risk assessment performed with triclosan indicated a risk ranging from low to high depending on the endpoints. The results obtained in the present study point to the risk related to the introduction of drugs in coastal zones through domestic effluent, and may contribute to future regulations on the subject.